JPS58222031A - 合成ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の分野） この発明は、合成ワクチン、宿主動物中での抗体形成に
有用な組成物、及び診断に有用な組成物に関する。さら
に詳しくは、この発明は合成ペプチドと担体とを含んで
成る合成抗原性組成物に関する。さらに詳しくは、この
発明は特に合成ペプチド用担体に関する。

（先行出願との関係） １９８１年１月９日出願に係る米国特許出願第２２３．
５５８号及び１９８１年６月１２日出願に係る米国特許
出願第２７２．８５５号において、蛋白質の抗原性及び
アレルゲン性の原因となる天然抗原又はアレルゲンの蛋
白質の部分を決定するだめの新規な系が開示されている
。さらに詳しくは、蛋白質性アレルゲン又は抗原を含有
する組成物を宿主動物に注射した際に免疫反応の原因と
なる該蛋白質性アレルゲン又は抗原の特異的なアミノ酸
配列を決定する方法が開示されでいる。

なお、前記の特許出願明細書の記載を引用によりこの明
細書に組み入れる。

しかして発明者は、特異的アミノ酸配列の決定方法のみ
ならず、抗原又はアレルゲンに存在すべきアミノ酸の正
確な数と配列を知って合成抗原又は合成アレルゲンを調
製する方法を開示する。発明者はさらに担体に担持され
７’ｃ短いポリペプチドを含んで成る若干の合成ワクテ
／を開示する。この担体は、合成ベン０チドの活性部位
に、合成抗原又は合成アレルゲンが全体として免疫系に
認識され、そして対応する抗体の形成惹起するのに十分
な大きさを与える点においで臨界的な■要件を有するど
考えられる。

ざらに詳しくは、この発明のワクチンは、生理的に計容
される担体であって、該担体の中又は上に、蛋白質抗原
又はアレルゲン中の最も大きな局所平均親水性を有する
アミノ酸配列に対応する少なくとも６個のアミノ酸の配
列を含有する合成ぺ゛・１゜ ゾナドを配置しているものを甘んで成る。前記の蛋白質
抗原又はアレルゲンの局所親水性は次のようにして決定
され、そして測定される。

Ａ０次の第１表に示すアミノ酸の相対的関係に従って、
蛋白質抗原又はアレルゲンのアミノ酸に相対的親水性値
を割り当てる。

第１表 アミノ酸　　親水性値 アルギニン　　　　　　　　　３．０ アスノ母ラギン酸　　　　　　　３．０±１グルタミン
酸　　　　　　　　　３．０±１リ　　ジ　　ン　　　
　　　　　　　　　　　　３．０セ　　リ　　７　　　
　　　　　　　　　　　　０．３アスノゼラギン　　　
　　　　　ｏ２ グルタミン　　　　　　　　　０．２ グリシン　　　　　　　　　０．０ プローリン　　　　　　　　−、５±１スレオ、ニン　
　　　　　　−０．４ アラニン　　　　　　　−０５ ヒスチジン　　　　　　　−０，５ システイン　　　　　　　−１，０ メチオニン　　　　　　　−１，３ バ　　リ　　ン　　　　　　　　　　　　　　−１．５
イソロイシン　　　　　　　−１，８ ０イシン　　　　　　　〜１８ チロシン　　　　　　　　−２３ フェニルアラニン　　　　　−２，５ トリフ０トフアン　　　　　　　−３４Ｂ、アミノ酸配
列にそって多数の部位で親水性値の局所平均を反復して
決定する。

Ｃ０この局所部位の反復平均から、局所平均親水性値が
最大となる部位を決定する。このワクチンは、蛋白質抗
原又はアレルゲンの完全なアミノ酸配列が欠けた状態で
あっても、宿主動物に導入、、□工え４．ヤ□−６−１
．− 成を促進すること、又はアレルゲンに対する感受性が低
いことにより特色ずけられる。

この発明の核心は免疫反応を惹起するのに必須の６個の
アミノ酸の配列を決定することにある。

先行する発明によれば、この決定は抗原又はアレルゲン
のアミノ酸配列についてのあらかじめ得られた知識を用
いて行われるが、もしこのアミノ酸配列が未知であれば
、まず蛋白質全体のアミノ酸配列を決定しなければなら
ない。この決定は、すでに知られているがしかし非常に
面倒な方法により行わなければならない。

蛋白質抗原又はアレルゲン全体のアミノ酸配列が得られ
れば、次の課題はこの分子にそって局部平均親水性が最
大である部位を決定することである。このだめにまず、
前記の表に従って蛋白質中の名アミノ酸に相対的親水性
値を割り当てる。次に、蛋白質の長さにそって前記の値
を反復しながら平均する。４個〜１０個の連続して連結
しているアミノ酸について平均をとれば上記の方法は部
分的に成功する（ある蛋白質については成功し他の蛋白
質については成功しない）が、局部平均を決定するに当
り、線状に連結している５個〜７個のアミノ酸、特に６
個のアミノ酸を用いるのが好ましい。蛋白質のアミノ酸
鎖の多数の部位において（１個ずつ移動しなから）局部
平均値を求める。

一旦、局所に特異的な親水性値の平均値を反復して決定
した後、最も親水性値の高い正確な部位を観察によ如決
定することができ、又はグラフ的にもしくは他の方法で
決定することができる。最も大きな平均親水性値を供す
る６個のアミノ酸が免疫反応の惹起に必須の６個のアミ
ノ酸配列であることが見出されている。言い替えれば、
この６個のアミノ酸が蛋白質のエビトーゾ（ｅｐｉｔｏ
ｐｅ）、すなわち免疫的特異性を伴って抗体に認識され
又は抗体と結合するアミノ酸配列中に存在することが見
出されている。このようなエピドーグを、最も大きな局
所平均親水性値を有するエピトープであるため、この明
細書においてはＨ−エピトープと称する。

ある蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンのＨ−エピトープ
に関与する正確なアミノ酸配列を認識することによシ、
種々の方法で合成ワクチンを製造することができる。

合成ワクチンは、Ｈ−エピトープのアミノ酸配列に対応
するアミノ酸鎖を化学的に合成することにより、又は該
エピトープを含有する蛋白質を選択的に分解することに
より、例えば酵素を用いて蛋白質を切断することにより
調製することができる。化学的合成により、又は天然蛋
白質から得たＨ−エピトーゾ含有アミノ阪鎖は、このあ
と生理的に許容される担体上に配置し、そして生成した
組成物を生理的に許容される媒体にょシ希釈する。

この組成物は、そのまま宿主動物に導入することができ
る。

重要な部位は蛋白質のＨ−エピトープを供する部分にあ
るから、この発明の方法は、既知の及び未知の、そして
同定されている又は未同定の蛋白質抗原又は蛋白質アレ
ルゲンの合成ワクチンを製造するのに有用であることが
認識されるであろう。

こうして、この発明の合成ワクチンには、単一の又は複
数の、既知の又は未知の蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲ
ンのＨ−エピトープを含有せしめることができる。合成
ワクチンには、巣−の抗原の複数のＨ−エピトープを含
有せしめることができ、又第−の抗原の１つのＨ−エピ
トープと第二の抗原又はアレルゲンの１つのＨ−工ｔト
ーｆを含有せしめることができる。実際に、合成ワクチ
ンには、所望により、最も太き寿局所平均親水性値を有
する６個のアミノ酸の配列に対応する多数のエピトープ
を含有せしめることができ、そしてこれらのエピトープ
は、広範囲の種類の抗原又はアレルゲンに由来する６個
のアミノ酸の配列に対応することができる。ワクチンは
少なくとも１個のＨ−エピトープを含有する。このＨ−
エピトープは、同−又は異なる抗原のＨ−エピトープで
ない他のエピトープ、すなわち抗原又はアレルゲンの最
大局所平均親水性値を有する部位に対応しないエピトー
プと共存することができる。

この発明の方法は、まだアミノ酸配列が報告されていな
い抗原に由来する合成ワクチンの製造に有用である。当
業者は抗原蛋白質又はアレルゲン蛋白質のアミノ酸配列
の決定方法をよく知っている。従って、Ｈ−エピトープ
の決定がこの発明の簡単な課題として残る。

合成ワクチンは任意の蛋白質抗原又はアレルゲンのＨ−
エピトープを有することができる。次の蛋白質抗原又は
アレルゲンのワクチンが特に注目される。すなわち、Ｂ
型肝炎表面抗原１組織適合抗原、インフルエンザ赤血球
凝集素、ニワトリペストウィルス赤血球凝集索、ブタフ
サアレルゲンＲａｓ及びＲａｓ、並びに次のウィルス、
すなわちワクシニアウィルス、ニスブタインパールウィ
ルス。

ポリオウィルス、風疹ウィルス、サイトメガロウィルス
、種属ウィルス、ヘルペスウィルス、シンゾレ、クスタ
イプＩ及び■ウィルス、黄熱ウィルス、及び他の多くの
ものである。

さらに、ワクチンは上記のものに代えて、又はそれに加
えて、次のいずれかの寄生生物の蛋白質のＨ−エピトー
プを有することができる。すなわち、マラリアを媒介す
る生物［Ｐ、ファルシポルム（Ｆ’ａｌｃｉｐｏｒｕｍ
）、Ｐ、オバセ（Ｑｖａ　ｃ　ｅ　）等〕、シストソミ
アシス（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａａｉａ）、オンコセ
ルカ・７］Ｚルプルス（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ　Ｖｏｌ
ｖｕｌｕａ）、及び他のライリアリアル（ｆｉｌｉａｌ
ｉａｌ）寄生生物、トリｔ４ノソームス（Ｔｒｙｐａｎ
ｏａｏｍｅｓ）、ライシュマニア（Ｌｅｌｓｈｍａｎｉ
ａ）、シャガス病（Ｃｈａｇａｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）、
アメーバ症、鉤虫、並びにこれらに類フるものである。

この発明の方法により次のウィルスのワクチンを調製す
ることができる。すなわち、伝染性エクトロメリアウイ
ルス１手痘ウィルス、単純庖疹ウィルス、伝染性牛奔気
管炎ウィルス、ウマ其肺炎ウィルス（ウマ流産ウィルス
）、ウシの悪性カタルウイルス、ネコ鼻気管炎ウィルス
、ニジスタインパール・ウィルス（伝染性単核症及び・
マーキットリン・に腫）、マレック病ウィルス、ヒツジ
肺アデノーマウイルス〔ジャグチークチ（Ｊａａｇｚｉ
ｅｋｔｅ）ウィルス〕、サイトメガロウィルス、アデノ
ウィルス群、ヒト乳頭腫ウィルス、ミンク腸炎ウィルス
、アフリカウマ病ウィルス（９の血清型）、青舌病ウィ
ルス（１２の血清型）、ニジマス類の伝染性膜Ｈニーロ
シスウイルス、ニワトリ肉腫ウィルス（種々の株）、内
臓性ニワトリ白血症ウィルス、赤芽球性ニワトリ白血症
ウィルス、骨髄芽球性ニワトリ白血症ウィルス、骨化石
症ウィルス。

ニューカッスル病ウィルス、ノにラインフルエンザウイ
ルス１．ノぞツインフルエンザウイルス２．ノセライン
フルエンザウイルス３．ノ！ラインフルエンザウイルス
４．耳下腺炎ウィルス、ターキーライゝ　”　　　　　
ルス、　ＣＡＮＡｆ）Ａ１５８　　、イヌジステンノ々
−ウィルス。

麻疹ウィルス、呼吸シンシプウムウイルス、ミクソウィ
ルス、ヒトインフルエンザウィルスのごときＡ型ウィル
スであって例えばＡｏ／ＰＲ８７３４、Ａ　ｔ／ＣＡＭ
／４６及びＡ２　／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１１５７、ニ
ワトリペストウィルス、　Ｂ／Ｉ、ｅｅ／４０のごとき
Ｂ型ウィルス、狂犬病ウィルス、東洋ウマ脳炎ウィルス
。

ベネズエラウマ脳炎ウィルス、西洋ウマ脳炎ウィルス、
黄熱ウィルス、デング熱１型ウィルス（６型と同じ）、
デング熱２型ウィルス（５型と同じ）。

デング熱３型ウィルス、デング熱４型ウィルス。

日本脳炎ウィルス、キャサヌールフオレスト（Ｋｙａａ
ｎｕｒ　Ｆｏｒｅａｔ）ウィルス、跳躍病ウィルス。

マリ−バレー（Ｍｕｒｒａｙ　Ｖａｌｌｅｙ）脳炎ウイ
／Ｌ／ス。

オムスク（Ｏｍａｋ）出血熱ウィルス（Ｉ及びｎｕ）、
セントルイス脳炎ウィルス、ヒトライノウィルス。

口Ｍ＆ウィルス、ポリオウィルス１型、腸内ウィルスポ
リ第２型、腸内ウィルスポリ第３型、モワトリ伝染性気
管支炎ウィルス、ヒト呼吸器ウィルス、−ブタ透過性胃
腸炎ウィルろ、リンフ９球脈絡髄膜炎ウィルス、ラザウ
イルス、マクポ（Ｍａｃｈｕｐｏ）ウィルス、ピヒンデ
（Ｐｉｃｈｉｎｄｅ）ウィルス、タカリペ（Ｔａｃａｒ
ｉｂｅ）ウィルス、乳頭腫ウィルスである。

同様に、合成ワクチンは、植物アレルゲンのごとき任意
の蛋白質アレルゲンのＨ−エピトープを有することがで
きる。

この発明の核心は、確実にＨ−エピトープを決定するこ
とにあるから、前に列挙した対象は限定的なものではな
く単なる例示に過ぎない。

先行発明に従って合成ワクチンを製造する場合、エピト
ープが抗体に認識されるだめの立体配置を有すること、
すなわち前記の６個のアミノ酸の配列が、アミノ酸鎖の
一部分として、その両側に少なくとも３個ずつのアミノ
酸を結合しており、これら３個の隣接アミノ酸がエピト
ープを安定化するだめの補助アミノ酸として機能し、こ
れによってワクチンが抗体により容易に認識されそして
中和されることを保証することが好ましい。

最も簡単な形態においては、先行発明は選ばれたエピト
ープの合成ペプチド残基を上に配置した生理的に許容さ
れる担体を含んで成る。この合成ペプチド残基は少なく
とも６個のアミノ酸から成る鎚長を有し、（両側の３個
のアミノ酸を考慮して）１２個のアミノ酸を有すること
が好ましく、そして同一の又は異なる抗原又はアレルゲ
ンの他のエピトープを含有する無限に長いアミノ酸又は
アミノ酸成分の鎖を有することができる。このような追
加のエピトープを伴う又は伴わない追加のアミノ酸鎖を
含まない場合、ペプチド残基は一般に５０個を超えるア
ミノ酸を有することはない。

所望のエピトープを含有する短鎖が好ましい場合には、
アミノ酸鎖は４０個より多くのアミノ酸を有さす、さら
に特定的には３０個より多くのアミノ酸を有さす、さら
に限定すれば２０個より多くのアミノ酸を有しない。ペ
プチド残基は１２〜１８アミノ酸のアミノ酸鎖を有する
ことが好ましく、１２〜１５個のアミノ酸を有すること
がさらに好ましく、特に１２個のアミノ酸を有するのが
好ましい。

発明者の先行出願において、発明者はペプチド残基用の
生理的に許容される担体として、動物性担体、植物性担
体及び鉱物性担体を含む種々の担体を開示している。特
に開示された担体には、ポリアミノ酸片、多糖類、ポリ
アミド、ビニル重合体、エステル重合体、並びに、特に
ヘモグロビン。

ヒト血清蛋白質、破傷風害を含む蛋白質類が含まれる。

ワクチンの分野において存在する問題の１つは担体に関
する。ワクチンは抗原又はアレルゲンに特異的な抗体の
みの形成を刺檄するのが好ましいから、担体は、それ自
体に対する抗体の形成を惹起すべきでない。ワクチンの
相体部分に応答する抗体又は他のなんらかの物質の生成
は、免疫系の挙動を混乱させ、副作用を惹起［−１そし
て合成抗原又はアレルゲンに対する抗体の形成と競争す
ることがある。従って、分子の担体部分が免疫系に対し
て事実上不活性であって、そして担体部分に特異的な抗
体の形成を惹起しないような合成ワクチン用担体を提供
することが望まれる。この発明の目的の１つは、ワクチ
ンが導入される生物に適合し、宿主動物により容易に代
謝され、そして注射部位又は身体の各種の器官に対して
併発症を惹起しない担体中又は担体上に配置された合成
ペプチド残基を含んで成る合成ワクチンを提供するとと
にある。

（発明の要約） この発明により、前記の特許に開示されたタイプのさら
に改良された合成抗原又は合成アレルゲンを提供する。

この合成抗原又は合成アレルゲンにおける担体は、直鎖
又は分枝鎖の、置換された又は置換されていない、そし
て飽和の又は不飽和の、少なくとも１２個の炭素原子を
有する炭化水素残基を含んで成る。さらに詳しくは、こ
の発明の担体は、アルキル基又はアルケニル基の鎖中に
少なくとも１２個の炭素原子を有する。このアルギル基
又はアルケニル基は３６個以下の炭素原子を有すること
ができるが、好ましくはＣ１２〜Ｃ２４の範囲にあるこ
とが好ましい。これらの炭化水素残基は、脂肪酸成分と
合成ペプチドの末端官能機とを比較的一般に使用されて
いる化学的方法で争に結合することによシ確保すること
ができる。し　　　　　　１か［７なから、発明者はさ
らに、脂肪酸のカル？キシル官能基を使用しないで炭化
水素残基上に合成残基を担持し、これによってカル？ニ
ル基による結合を伴わないで合成ペプチドを炭化水素残
基に接触せしめることを考慮している・ （式中、ｍは０又は１であり；Ｒは少なくとも１２個の
炭素原子を有する置換されている又は置換されていない
アルキル基又はアルケニル基であり；そして、ペプチド
は、蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲン中の局所平均親水
性値が最大であると認められるアミノ酸配列に対応する
６個のアミノ酸の配列を含有・し、そして該局所親水性
値を有する部位は次の方法、すなわち Ａ０次の第１表に示されるアミノ酸の相対的親水性値の
関係に従って蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンのアミノ
酸に相対的親水性値を割り当て、」・リイ５泊″１ 第　　　１　　　衣 アルギニン　　　　　　　　　　３・０アスパラギン酸
　　　　　　　　３０±１グルタミン酸　　　　　　　
　　３．０±１リ　　ジ　　ン　　　　　゛　　　　　
　　　　　３゛０セ　　リ　　ン　　　　　　　　　　
　　　　　　　０．３アスノＰラギン　　　　　　　　
　０．２グルタミン　　　　　　　　　　０２ グリシン　　　　　　　　　０・０ ゾロ−リン　　　　　　　　　　　−、５±１スレオニ
ン　　　　　　　　　−０，４アラニン　　　　　　　
−〇・５ ヒスチジン　　　　　　　　−０５ システイン　　　　　　　　　−１０ メチオニン　　　　　　　　　−１３ パ　　リ　　ン　　　　　　　　　　　　　　　−１，
５イソロイシン　　　　　　　　−１，８０イシン　　
　　　　　　−１，８ チロシン　　　　　　　　−２゜３ フエニルアラニン　　　　　−２，５ トリプトフアン　　　　　　　−３．４Ｂ、アミノ酸鎖
にそって多数の部位における局所平均親水性値を反復し
て決定し７、 Ｃ１これらの反復して平均値を求めた部位から最大局所
平均親水性値を有する部位を決定する、方法により決定
される、） で示され、宿主動物に導入された場合に、完全なし 蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンに対応するアミノ酸配
列を有しなくても防御免疫反応を惹起し、又はアレルゲ
ンに対する感受性を低下せしめるだめの抗体形成を刺激
する合成抗原又は合成アレルゲンを乱んで成る組成物と
して、広く記載することができる。

上記の式（１）においては、合成−ミノ″ｆ１゛の末端
アミノ基のみを反応可能な状態におき、他のすべてのア
ミノ基を保膿してカルボン酸と反応しないようにするこ
とにより、合成ペプナド成分を炭素□　。

原子舷１２個以上のアルギル基又はアルケニル基と結合
せしめることができる。そし−６１次の反応式に示すご
とく、アミン基の水素原子とカルｌキシル基のヒドロキ
シル基の縮合（脱水）により合成ペゾチドの末端アミン
基とカルボキシル基を有する成分とを反応せしめる。

（末端アミノ基） この反応によれば、ｍが１である式（１）の組成物が生
成する。しかしながらさらに、末端アミノ酸と結合する
ためにカルがキシル基又は類似の官能基を使用しないで
、Ｃ１２〜Ｃ６６の”アルキル基又はアルケニル基上に
合成ベゾチドを配置することも考慮される。例えば、次
の反応を考慮することができる。

（Ｂ） ば１戊ベゾチド−ＮＨ＋　Ｈａｔ−Ｒ→合成ベン０チド
ーＮ−Ｒ この場合、式（１）においてｍが０である合成ワクチン
か調製される。Ｃ１□〜Ｃ５６のアルキル基又はアルケ
ニル基に合成ペノチドを配置するだめの、前記の方法に
代る神々の方法が存在する。これらは常に、合成ベゾチ
ド成分の末端アミノ酸を介して合成ペプチドをアルキル
成分又はアルケニル成分に結合せしめる方法である。

この発明のワクチンの製造においてはＣ１□〜Ｃ２４の
脂肪酸を使用するのか好ましい。特に好ましい脂肪酸に
はパルミチンな７．ステアリン酸、ベヘン酸及び刈レイ
ン酸が含まれる。

メリフィールド同相合成法は、この発明の担体の結合に
便利な手段を提供する０で、この方法は脂肪酸に相持は
れた合成ペプチドを調製するのに望ましい方法である。

もっとも液相法を使用することも０Ｊ′能である。メリ
フィールド同相法においては、側鎖の反応性基、例えば
アミ７基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、イミダゾール
基を保護した状態でアミノ酸を相互に連結−ノ゛る。最
後のアミノ酸を結ばせしめた後、Ｎ−末端の区睦を解除
１２、そして前に概略記載したアミノ酸の結合に使用す
る方法により、脂肪酸もしくは他の適当な大きさの親脂
性置換基又はＣ１２〜Ｃ３６のアルキル基又はアルケニ
ル基を供する成分を反応せしめる。この方法は、カルボ
ジイミドを介するペゾチド（アミド）結合形成、ヒドロ
キシベンゾトリアゾールエステル付加、又は脂肪酸の対
称又は非対称無水物付加である。

・これにより、脂肪酸又はこれに類する成分がＮ−末端
に共有結合したベゾチドが生成する。次に、常用の弗化
水素酸処理により樹脂からペノチドを切υ離し、そして
必要であれば精製する。

この脂肪酸ベゾチド接合体はそれ自体で完全であり、免
疫強化のために追加の担体分子又は支持体を必要としな
い。このものは水性媒体に入れた場合に凝集し、この凝
集体は、血赤球又は大形蛋白質のごとき担体により達成
されるのと同様の強い免疫反応を惹起することができる
。この発明の担体は血赤球及び大形蛋白質のごとき相体
より適当であると信じられる。後者は、それ自体に向け
られた不所望の免疫反応を惹起する傾向があるからであ
る。すなわち、この発明の担体により、不所望の免疫反
応を惹起することかほとんどなく効果的で、しかも容易
に製造することができるワクチンが提供される。

特に好ましい反応体には、次の式 ％式％ （式中Ｒ１及びＲ２は独立に、アルキル基又は幾つかの
炭素原子の複数不飽和を包含するアルケニル基を含むア
ルケニル基を示す）で示される脂肪酸無水物が含まれる
。しかしながら、Ｒ４及びＲ２が対称飽和アルギル基で
あることか好ましい。このような脂肪酸無水物は一！！
ノチドと比較的容易に反応する。一般的に、反応は２０
℃〜３０Ｃの温度において、２〜４時間で行われる。反
応は溶剤の存在下で行う。特に好ましい越剤には、塩化
メチレン、ジメチルホルムアミド、又はジメチルスルホ
キシドが含まれる。この彼、アミド部分を介してＣ１□
〜Ｃ３６のアルキル基又はアルケニル基と結合したペプ
チドをメリフィールド樹脂から切り離し、そして、弗化
水素酸、臭化水素酸又はメタンスルホン酸のごとき強酸
と接触せしめることにより側鎖基から保護基を除去する
。

炭素数１２個以上のアルギル成分又はアルケニル成分多
数から成る炭素原子数１２個以上のアルキル基又はアル
ケニル基含有担体にペプチドを担持することができる。

すなわち、 （１１） （式中、Ｒ’、　［ｊ’、　Ｒ”及びＲ６は、それぞれ
置換されている又は置換されていない直鎖又は公社、。

鎖のＣ４２〜Ｃ３６アルキル基又はアルケニル基であシ
；Ｏ１ρ、ｑ及びｒはＯ又は１であって０゜ｐ、ｑ及び
ｒの合計がｎ　Ｖｃ等しく；ｎは２〜４であり；Ｘは３
〜５個の官能基を有する多官能基であって、その少なく
とも１個が前記末端アミ７基に結合しており、そして前
記官能基の少なくとも１個はｌｔ５　、　Ｒ４、Ｒ５又
はＲ６と結合している）で示される合成抗原又は合成ア
レルゲンを挙げることができる。

Ｘの官能基はカルボニル基及びアミド基を含む。

カルボニル基は末端アミ７基との結合に効果的であって
これによりアミド基が構成され、他方アミド基は合成ペ
プチドとＣ１□〜Ｃ６６アルキル基又はアルケニル基と
の間の効果的な連結をなす。

官能基は、通常鎖長が２〜５炭素原子でありそれ自体が
アルキル基又はアルケニル基である主鎖によって分離さ
れていてもよい。すなわち、Ｘを次の式（Ｉｌｌ）、 （式中、Ａは一端がＭに結合しており他端が合成ペプチ
ドの末端アミン基に結合している二官能基であり；Ｍは
炭素原子数２〜５個のアルキレン基又はアルケニレン基
であり：Ｂ、Ｃ，Ｄ及びＥはそれぞれ、一端がＭに結合
しており、そして他端がＣ１２〜Ｃ３６のアルキル基又
はアルケニル基に結合している二官能基であり；そして
、ｂｌｅｌｄ及びｅはそれぞれ１又は０であって、ｂ、
ｃ。

ｄ及びｅの合計は２〜４である） で示すことができる。

特に、このような構造は多数のアミン基を有するアミノ
酸により得られる。これらのアミノ基はＣ１□〜Ｃ６６
アルキル基又はアルケニル基の１つと反応することがで
きる。合成ペプチドの側鎖反応基を、例えば前記の保膜
剤により保護する。合成ペプチドの末端アミン基を多官
能基又はアミノ酸と反応せしめる。これによりペプチド
は、Ｃ１□（，６アルキル基又はアルケニル基と結合す
ることができる２個以上の活性部位を有するブリッジと
結合する。この後、ペプチド−ブリッジ中間体を０１２
〜Ｃ６６のアルキル基又はアルケニル基と反応せしめる
。

上記の具体例は、側鎖アミノ基と末端アミノ基を有する
アミノ酸によって記載することができる。

２個のアミノ基−ＮＦ２がＣ４２〜Ｃ６６アルキル基又
はアルケニル基と反応し得る状態で残る。通常、中間体
の調製においては、ペプチドの末端アミン基を、アミン
基がペプチドの側鎖の保護基よりも容易に脱離する官能
基によって保護されているアミノ酸と反応せ１７める。

このような保護基であると同時に反応性基である基には
、ｔｅｒ−ブトキシカルブニル基、トリフルオロアセチ
ル基及びフルオレニルメチルオキシカル？ニル基が含ま
れる。このような多数のアルキル基担体又はアルケニル
基担体を含有する合成抗体又は合成アレルゲンの製造方
法を、側鎖が保膿されている合成ペプチドに関して以下
に示す。

Ｈ Ｃ＝０ Ｃ（ＣＨ，）６ ｃ（ｃｕ５）３ Ｈ ２Ｏ Ｎｌ（ −０ もちろん、混合無水物は適当な反応体であるからＲは同
一でもよく、文具なっていてもよい。

上記の反応式によシ、リジンがそれぞれの官能基を連結
したことが理解できる。本質上官能基間の任意の連結を
使用することができる。もっとも合成ペプチドに対する
抗体を形成するのが目的であるから、ワクチンに毒性を
与え、又は連結基に特異的な抗体の形成を刺激しもしく
は惹起するような連結基の存在を最少にするのが好まし
い。このような連結基としては、カルキレン基又はアル
ケニレン基、すなわちアルカン又はアルケンの三官能残
基又は基が好ましい。これらのアノ（キレン基又はアル
ケニレン基は直鎖又は分枝鎖であってよく、そして２〜
６個の炭素原子を有することができる。

（具体的な態様の記載） Ｈ−エヒトーノを構成する６個のアミノ酸の配列を決定
するために、前に表に示した値よシもさらに特定された
値を蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲン中のアミノ酸に割
り当てることが望ましい。

このため次の第２表に最大局所平均親水性値を供する６
個のアミノ酸を決定するために割り当てるべき広い範囲
、好ましい範囲、及び最も好ましい範囲を示す。

第　　　２　　　表 アルギニン　　　３０　　３０　　　　３．０アスノ９
ライン酸　　３．０±１　３．０±５３．０グルタミン
−３０±１　３．０±５３，０リ　　ジ　　ン　　　　
　　　３．０　　　　　３．０　　　　　　　　　３．
０−ヒ　　　リ　　　７　　　　　　　　　　０３　　
　　　　　０．３　　　　　　　　　　　　０．３アス
ノにラギン　　　０．２　　　０．２　　　　　０．２
グルタミン　　　０．２　　０．２　　　　０．２グリ
ンン　　　０．０　　０．０　　　　０．０ノロ−リン
　　　　−、５±１　　０．０±５　　　　０．０スレ
オニン　　−０，４−０，４−０，４７う二ン　　−０
，５−０，５−０，５ヒスチジン−０，５−０，５−０
，５ ンステイン　　−１．０　　−１．０　　　　−１．０
メチオニン　　−１，３−１，３−１，３パ　　リ　　
ン　　　　　−１．５　　　−１．５　　　　　　　−
１．５イソ°イシ７−１・８　　−７．１．８　　　−
１．８０イシン　　−１，８−１，８−１，８ナロシン
　　−２，３−２，３−２，３フェニルアラニン−２，
５−２，５−２，５トリシトフアン　−３，４−３，４
−３，４これらの値は相対的なものである。これらの値
に一定の係数を乗することによって同様の結果をもたら
す異なる一組の値を得ることができる。重要な概念は、
それぞれのアミノ酸が上表に示した相対的な関連を有す
るということである。このような任意の値は、長鎖蛋白
質分子中の最大親水性を示す部分を決定するだめの便宜
的手段を得るために完成されたものである。仁の値が決
定されれば、親水性ピークに寄与する６個のアミノ酸は
谷筋に決定することができる。

この発明の方法は、なんら関連のない多くの抗原につい
て最大親水性部位を構成する６個のアミノ酸の配列を決
定するのに使用することができる。

特に、Ｈ−エピトープを決定する６個のアミン酸の配列
を決定するためにＢ型肝炎表面抗原について研究を行っ
た。この抗原のアミノ酸配列は次の通りであった。

Ｌｙｅ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａａｐ−Ｇｌｙ−Ａａｎ　（
これらはＢ型肝　　　　　　　″□炎衣表面抗原１４１
〜１４６アミノ酸に対応する）。

同様にヒト組織適合抗原’ｆ（ＬＡ−８７のＨ−エビ）
　−ゾを決定するアミノ酸配合はＰｒ　ｏ　−Ａｒ　ｇ
−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　（蛋白質の４
３〜４８アミノ酸に対応する）であった。

同様に、インフルエンザ赤血球凝集抗原（Ｘ３１株）の
Ｈ−エピトープを決定するアミノ酸配列はＶａｌ−Ｇｌ
ｕ−Ａｒｇ−８’ｅｒ−Ｔ、ｙａ−Ａｌ’ａ　（蛋白質
の１０５〜１１０アミノ酸に対応する）である。

インフルエンザ赤血球凝集抗原（Ａ／ｍｅｍρｈ＋ｓ／
”　　　　　　　１０２／７２株）のＨ−エピトープ：
　Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−８ｅｒ　
：蛋白質の１４０〜１４５アミノ酸に対応。

他の２株インフルエンザ赤血球凝集抗原（ＶＥ　ｎ　ｇ
／８７８／６９、及びＡＵＮＴ／６０／６８／２９ｃ　
）のＨ−エピトープはＡ／１ｎｅｒｎｐｈ　Ｉｓ／１０
２／７２のｌ（−エピトープと同じである。

インフルエンザＡ／ＰＶ８．／３４株のノイラミニター
ゼ蛋白質のＨ−エピトープはＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
Ｐｒ。

−Ｉ、ｙＳ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓであり、蛋白質の４１３〜
４１９アミノ酸に対応する。このエピトープは２つの隣
接しそして重複した同じ親水性値を有するＨ−エピトー
プから成るため７個のアミノ酸を含有する。

すでに記載されている日本株の赤血球凝集素の場合と同
様である。

ジフテリア毒フラグメントＡのＨ−エピトープ：Ｇｌｕ
−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ　：蛋白質
の１６８〜１７３アミノ酸に対応。

トリ肉腫ウィルスｇｐ３７蛋白質のＨ−エビ）−プ：　
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−１１ｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ　：蛋白質の３７〜４３アミノ酸に対応（この場合
も２個の隣接し重複したＨ−エピトープのため７個のア
ミノ酸の配列となっている）。

トリ肉腫ウィルスｓｒｃ　ｇｅｎｅ蛋白質のＨ−エピト
−プ：　Ｌｙｓ−８ｅｒ−Ｌｙａ−Ｐｒｏ−Ｌｙａ−Ａ
ｓｐ：蛋白質の５〜１０アミノ酸に対応。

アデノウィルス２現株のＥ３／１６蛋白質（外部蛋白質
）のＨ−エピトープ：　Ｌｙａ−Ａａｐ−Ｌｙｅ−１１
ｅ　−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ　：蛋白質の４０〜４５アミノ酸
に対応。

シミアン（Ｓｉｍｉａｎ）ウィ＃ス４０ＶＰＩ蛋白質の
Ｈ−エピトープ：　Ａｓｐ−Ａａｐ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−
Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ：蛋白質の７７〜８３アミノ酸
に対応（２個の隣接［−重複したＨ−エピトープ）。

アデノウィルス２型の繊維蛋白質の知られている配列（
Ｎ−末端の８０％）のＨ−エピトープ：Ａａｎ−Ｌｙａ
−Ａｓｎ−Ａｓ　ｐ−Ａｓ　ｐ−Ｔ、ｙｓ：蛋白質の３
９３〜３９８アミノ酸に対応。

シンドビス（Ｓｉｎｄｂｉｓ）ウィルス膜糖蛋白質Ｅ１
の１ｌ−−ｒ−ビトーグ：　Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−
Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ：３２２〜３２７アミノ酸に対
応。

シンドビスウイルス膜糖蛋白質Ｅ２の■１−エピトープ
：　Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｎ
　：　３６〜４１アミノ酸に対応。

ンンドビスウイルス膜糖蛋白質Ｅ３のＨ−エビトー７°
：’Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ａｒｇ
　：　２７〜３２アミノ酸に対応。

１］蹄疫ウイルスキヤグンド蛋白ＩＲｖｐ１のＨ−エピ
トー７’　：　Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｌ
ａ−Ｇｌｕ　：　　１７９〜１８４アミノ酸に対応。□ インフルエンザ赤血球凝集抗原（日本株）には同一の親
水性値を有するＨ−エピトープを決定する２柚のアミノ
酸配列が存在する。これらは、Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ
−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　（９６〜１０　］　　アミ
ノ酸に対応）とＬｙｓ−Ｇｌｕ−Ａａｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｐ（９７〜１０２アミノ酸に対応）とである。

同様にインフルエンザ赤血球凝集抗原（ビクトリアＡ株
）のＨ−エピトープを決定するアミノ酸配列はＡａｎ−
Ａｓｐ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｅ　（１８８〜
１９３アミノ酸に対応）である。

同様に、ニワトリベストウィルス赤血球凝集抗原の同じ
値の局所平均親水性値のＨ−エピトープを決定するアミ
ノ酸配列が２種類存在する。これらは、Ｇｌｕ−Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｇｎ　（９７〜ｌ　０２
アミノ酸に対応）とＡｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−ＧＩＶ−
Ａａｎ−Ａｓｐ（９８〜１０３アミノ酸に対応）とであ
る。

ヒト絨毛性ゴナドトロピンＢサブユニット抗原のＨ−エ
ピトープ決定アミノ酸配列：Ａｒｇ−Ａｒｇ−８ｅｒ−
Ｔｂｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ　：　９４〜９９アミノ酸。

ヒトβ−２ミクログロブリン抗原の１１−エピトープ決
定アミノ酸配列：　Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙａ−
Ａｓｐ−Ｇｌｕニア３〜７８アミノ酸に対応。

ヒトミニリン塩基性蛋白質抗原のＨ−エピトープ決定ア
ミノ酸配列：　Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａａｐ−８ｅｒ−Ａｒ
ｇ−８ｅｒ　：　１５９〜１６４アミノ酸に対応。

コレラ毒Ｂ−鎖−抗原のＨ−エピトープ決定アミノ酸配
列：　Ｇｌ　ｕ−Ａｌａ−Ｌｙｅ　−Ｖａ　１−Ｇｌ　
ｕ−Ｌｙｅ　：　７９〜８４アミノ酸配列配対応。

他のＢ型肝炎表面抗原について、そのＨ−エピトープを
決定する６個のアミノ酸の配列を決定するための研究を
行った。この配列はＬｙｓ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ａｓ　ｐ
−Ｇｌｙ−Ａｓｎであｆｉ１４１〜１４６アミノ酸に対
応する。

Ｅ、コ！Ｊ（Ｃｏｌｉ）熱感受性毒のＨ−エピトープ決
定アミノ酸配列：　Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ｌｙａ−
Ａｓｐ　：　６６〜７１アミノ酸に対応。

Ｅ、コリの熱安定性素のＨ−エピトープ決定アミそれ２
６〜３１アミノ酸及び４６〜５１アミノ酸に対応する。

ブタクザアレルゲン」（ａ６のＨ−エピトープのアミノ
酸配列：　Ｑｙａ−Ｔｈｒ−Ｌｙｅ−Ａａｐ−Ｇｉｎ−
Ｌｙａ　：　８８〜９３アミノ酸に対応。

ブタクザアレルゲンＲａｓのＨ−エピトープのアミノ酸
配列：　５ｅｒ−Ｌｙａ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｙｓ−４０〜４５アミノ酸配に対応。

ストレゾトコッカスＭ蛋白質（菌株２４）は同じ値のＨ
−エピトープを２個有し、これらのアミノ酸配列はＡｒ
ｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ及びＬｙ
ａ−Ａｔ　ａ−Ａａ　ｐ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｌｙａ
であり、それぞれ５８〜６３アミノ酸及び５９〜６４ア
ミノ酸に対応する。

トリパノソマーブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ　ｂ
ｒｕｃｅｉ）変異株表面糖蛋白質１１７のＨ−エピドー
グのアミノ酸配列：　Ｌｙｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ
−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ：　５０〜５５アミノ畝。

この発明のワクチンを製造する場合には、ＩＴ−エピト
−ノを決定する６個のアミノ酸の配列の両側に少なくと
も３個ずつのアミノ酸を結合するのが好ましい。これら
３個ずつのアミノ酸は、天然蛋白質に存在するのと同じ
アミノ酸の同じ配列であってもよい。しかしながら他の
酸を使用することもできる。例えば、Ｂ型肝炎ウィルス
ワクチンにおいては、アミノ酸配列を、Ａｂ　ａ　−Ａ
ｂ　ａ　−Ｔｈ　ｒ−Ｌｙａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−Ａｖｎ−Ａｂａ−Ｔｈｒ−Ａｂａ（Ｃｙｓ残
基をＡｂａに置き替えである）とすることができる。

合成ワクチンは次のようにして製造する。

（１）　　化学合成 カルｄζキシ末端アミノ酸からアミノ末端アミノ酸に向
けてＬ−アミノ酸の適当な配列を形成し、そしてこのア
ミノ酸配列のＮ末端に脂肪酸を加えるためにメリフィー
ルド固相法を使用する。樹脂のクロロメチル基、ベンズ
ヒドリルアミン基又は他の反応性基への化学結合を介し
てポリスチレン樹脂（又は他の適当な樹脂）に結合して
いる適当なカル７Ｉ？キシ末端アミノ酸から出発して、
次の方法により１個ずつアミノ酸を結合していく。

（、）ペプチド化樹脂を塩化メチレンで洗浄する。

（ｂ）１ｍ化メチレレンジイソゾロピルエチルアミン（
又は他のヒンダード塩基）の５　（ｖ、’ｖ）％と共に
室温にて１０分間混合することにより中和する。

（ｃ）塩化メチレンで洗浄する。

（ｄ）合成中のペプチドのモル数の６倍量のアミノ酸又
は脂肪酸をその半分のモル量カルデジイミド（例えば、
ジシクロへキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカ
ルボジイミド）と、０℃にて１０分間結合せしめること
によりアミノ酸又は脂肪酸の対称無水物を生成せしめる
。使用するアミノ酸は、最初に、側鎖がベンジルエステ
ル（アスノ９ラギン酸及びグルタミン酸）、ベンジルエ
ーテル（セリン、スレオニン、システィン、チロシン）
、ベンジルオキシカル？ニル基（リジン）又はペプチド
合成において常用されている他の保護基により保護され
ているＮ−α−ブチル−オキシカルボニル誘導体として
使用する。脂肪酸は保鹸基を必要としない。

（、）活性化されたアミノ酸又は脂肪酸を、室温にて２
時間にわたりペプチド化樹脂と反応せしめｉ。

ることによシ合成中のペプチド鎖に新たなアミノ酸又は
脂肪酸を加える。

（ｆ）樹脂を塩化メチレンで洗浄する。

（ｇ）室温にて３０分間、塩化メチレン中３０（ｖ／ｖ
）％トリフルオロ酢酸と反応せしめることにより最も新
しく加えたアミノ酸からＮ−α−ブチルオキシカルボニ
ル基を除去スル。

（ｈ）樹脂を塩化メチレンで洗浄する。

（ｉ）所定のペプチド配列が構成されるまで（ｈ）まで
の段階を繰り返えす。脂肪酸は最後に加える。

次に、１０　（Ｖ／Ｖ）％のアニソールを含有する無水
弗化水素酸と反応せしめることにより、樹脂からペプチ
ドを切り離し、これと同時に側鎖保護基を除去する。次
に、ゲル沖過法、イオン交換法もしくは高圧液体クロマ
トグラフィー、又は他の適当な方法によりペプチドを精
製する。

ある場合には、同相樹脂を使用しないで化学合成を行う
こ゛とができ、この場合には反応はすべて溶液中で行う
。反応と最終生成物は本質上同じである。

この発明の合成ワクチンは親脂性を有するため、フロイ
ントアジ−パント（完全又は不完全）のごとき油性アジ
−パントを含有する組成物中、又は脂質顆粒中に容易に
導入することができる。ワクチンは、その親脂性のため
にアジュノマント中に長時間保留される。この長時間の
保留によって所望の免疫反応が促進される。

ペプチドの担体として２個の脂肪酸又はこれに類する成
分を使用しようとする場合には、合成ワクチンを次の方
法により製造するのが好ましい。

他端がまだメリフィールド樹脂上にあるペプチドのＮ−
末端を、リジン成分、又はジアミノアルキレン部分又は
ジアミノアルケニレン部分を有する他の適当な連結ブリ
ッジに結合せしめる。２個のアミン基を含有するリジン
は、例えば、前記のように反応体としてビスーｔｅｒｔ
−ブチルオキシカルｒニル化リジンを使用することによ
りペプチドのＮ−末端に結合せしめる。保護基を除去し
た後、α−及びε−アミノ基の両者を脂肪酸と結合せし
めることができる。このような処理により脂肪酸二置換
リジルペプチドが得られ、次にこのペプチドを弗化水素
酸を用いて樹脂から切り離す。この誘導体はフロイント
アジ−パント又は脂質顆粒により長時間保持することが
でき、そしてさらに安定な自己凝集体を得ることができ
る。

ペプチドのＣ−末端に１個（又はそれより多くの）脂肪
酸を結合せしめるため、上記の方法の簡単な変法を用い
ることができる。リジン残基を、合成の最初の段階でメ
リフィールド樹脂に結合セしめる。このリジンを異る方
法で、例えばα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ε−
９−フルオルエニルメチルオキシカルｄζニル誘導体と
して、保護し、次に２５℃にて３０分間、ピペリジン／
塩化メチレン（１：１）で処理することによりε−アミ
ノ保護基を除去する。次に脂肪酸又は他の親脂性物質を
、ペプチドのＮ−末端に脂肪酸を結合せしめる場合に使
用するのと同じ方法によって結合せしめる。この後、常
用の酸処理によシ（χ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルデ
ニルカル除去し、そして常法に従ってペプチド合成を完
結する。２個又はそれよシ多くのα−ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルがニル−ε−９−フルオルエニルメチルオキ
シカル、ＪＰニルリジンを次々と−Ｆ記のようにして使
用すれば、多数の脂肪酸により置換された複数のリジン
をＣ−末端に有す′る生成物が得られる。

上記の方法により、ペプチドのＮ−末端、ペプチドのＣ
−末端、又はペプチドの両末端に同時に１個又は複数個
の脂肪酸を有する抗原性ペプチド−脂肪酸接合体を調製
することができる。上記の例においてはリジンを使用し
たが、オルニチン、又はα−２γ−ジアミノ酪酸のごと
きアミノ酸を含む任意のジアミノ酸を使用することがで
きる。

この発明及びその実施方法をさらに詳細に説明するため
に、次に例を記載する。

例Ｉ Ｂ型肝炎抗原グリシルペゾチド（Ｈ−ペプチド）へのパ
ルミチン酸分の結合。

３部のトリフルオロ酢酸と７部の塩化メチレンから成る
最初の酸溶液を調製した。又、５部のジイソプロピルエ
チルアミンと９５部の塩化メチレンから成る塩基溶液を
調製した。出発材料としてマリフィールド樹脂を使用し
た。具体的には、樹脂１ｇ当ｐ０．３３ｍモルのグリシ
ンを含有する市販のｔａｒｔ−ブチルオキシカルがニル
化グリシル樹脂を使用した。

グリシルＨ−ペプチド樹脂。典型的なメリフィールド法
により１ｇのブチルオキシカル−ぐニル化グリシル樹脂
上にＨ−ペプチドを結合せしめた。

この構造は、Ｇｌ　ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｂａ−Ａｂ
ａ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａ＠ｐ−Ｇｌｙ
−Ａｓｎ−Ａｂａ−Ｔｈｒ−Ａｂａ−Ｇｌｙ　−樹脂で
あシ、アミノ酸側傾け、Ｔｈｒ　：ベンジルエーテル、
Ｌｙｓ　：カルがベンゾキシアミド、及びＡｓｐ　：ペ
ンジルエステルで置換されている。

この合成において、ＣＩ）ｒ−Ｇｕｙ−Ｇｕｙ配列は／
？ルミチル部分とペプチドの残余部を分離するだめのス
ペーサーとして機能するように加えた。・讐ルミチン酸
は次のようにしてＮ−末端ダリシル残基に結合せしめた
。

（リ　マリフィールド法におけるように、酸溶液で３０
分間（２５℃）処理することにょシＮ−末端ｔａｒｔ−
ブチルオキシカルボニル基を除去した。

（２）マリフィールド法の場合のように塩基溶液で１０
分間（２５℃）処理することにより新しく露出したα−
アミン基を、中和した。

（３）３当量（１？ｎモル）の無水パルミチン酸を１５
ｍＡ’の塩化メチレンに溶解し、そしてペプチド化樹脂
と反応せしめた。２時間後（２５℃）にカイゼルニンヒ
ドリン試験陰性となり反応が完結した。

（４）０℃にて１５分間弗化水素酸／アニソール（９／
１）で処理することにより、パルミチルＨ−ペプチドを
樹脂から切り離し、そしてすべての保護基を除去した。

氷酢酸、酢酸／水（５０：５０）、及び水の順で次々と
樹脂を洗浄することにより樹脂粒から７４ルミチルＨ−
ペプチドを抽出した。この洗液を集め、そして凍結乾燥
した。

（５）　　ＭｇＣｌ２によシ抽出して痕跡量のアニソー
ル及び脂質汚染物を除去することによシ粗生成物を精製
した。

（６）生成物を氷酢酸中に溶解し、次に９部の水で希釈
した。但し、前記の氷酢酸の代りにジメチルスルホキシ
ドを使用するのも好ましい。こうして、ペプチドの微粒
乳濁液が直接形成される。このことは滑液か乳光色を呈
することにより観察される。これを凍結乾燥し、そして
燐酸緩衝化した免疫用塩水に懸濁する。

例２゜ Ｂ型肝炎抗原性すジルペノテド（Ｈ−一ξプチトつへの
２個のパルミテル成分の結合。

リジルＨ−ペノチド樹脂。このペグテドをメリフィール
ド法によシ１ｇのｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル化
グリシル樹脂に結合せしめた。この構造はＬｙａ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ａｂａ−Ａｂａ−Ｔｈｒ−Ｌｙａ−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｂａ−Ｔｈｒ−
Ａｂａ−Ｇｌｙ−樹脂であシ、アミノ酸側鎖は、Ｔｈｒ
：ベンジルエーテル、Ｎ−末端Ｌｙａα及びε位：　ｔ
ｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、中央のＬｙａ　ε位
：カルｒベンゾキシアミド、及ヒＡａｐ：ベンジルエス
テルで置設されている。

次のようにしてＮ−末端リジル残基のα−及びε−アミ
ノ基に／ｅルミテン酸を結合せしめた。

（リ　メリフィールド法におけるごとく、酸溶液を用い
て３０分間（２５℃）処理することによシＮ−末端ｔａ
ｒｔ−ブチルオキシカルボニル基及びεｔｅｒｔ−プチ
ルオキシカルゲニカルを除去シた。

（２）塩基溶液により１０分間（２５℃）処理すること
により新たに露出したα及びεアミノ基を中和した。

（３）３当量（１ｍモル）の無水パルミチン酸を１５ｍ
／！のＭｅ　ＣＬ２に溶解し、そしてペゾチド化樹脂と
反応せしめた。カイゼルニンヒドリン試験による測定の
結果反応が約８０％完結した２時間後に反応を停止した
。そして同一条件下での第２の結合を行った。この結合
の後ニンヒドリン試験は陰性となり、Ｎ−末端リジル残
基のα及びεアミノ基の両方にパルミチン酸が結合した
ことが示された０ （４）生成物を樹脂から切り離し、そして例における段
階４ないし６と同様にして精製した。

家兎を用いた予備免疫試験の結果を第３光に示す。これ
らの結果は、上記の接合体は、アジ−パントが存在する
場合に最も高い力価を示すが、アジ−パント使用の有無
にかかわらず、抗−ＨｂｓＡｇ反応を惹起することを示
している。

第３表 ６５７　　　　０　　　　　　０　　　　　１．９　　
４１．５６５８　　　　　２．８　　　　７４．２　　
　　−　　　　　−６５９　　　　３．０　　　　　３
３　　５２．０　　５２．３６６１　　　　５．２　　
　　　４，５　　１１．０　　１５．１６６２　　　　
０．６　　　　　０．６　　　２．９　　　２．９第１
日と第２３日に免疫を行った。家兎應６５７〜６５９に
ハｉ酸［衝化塩水０．５ｍ１Ｋ０．５ｍｌの７０インド
完成アジ−パントを乳化したものを用い、Ａ６６１及び
６６２にはアジ−パントを含まない燐酸緩衝化塩水１　
ｍｌを使用した。それぞれの薬剤には第１日日には０．
０５１Ｑのシバルミチルビーペプチドを含有せしめ、第
２３日月には０．２’／ｌ＆を含有せしめた。力価はＡ
ｕａａｂ試験（ア、１／、）う、＋ｐクラドーズ）によ
シ測定した。１０．０を越える力価はいずれもＢ型肝炎
に対する免疫を示すものと考えられる。

（発明の効果） 上記のデータは、アルキル基又はアルケニル基担体を含
有するこの発明の合成ワクチンを宿主動物に投与した場
合、試験動物の抗体価が劇的に上昇することを示してい
る。

この発明の方法によシ、完全な蛋白質抗原又は蛋白質ア
レルゲンのアミノ酸配列を欠くことを特徴とするワクチ
ンが実現する。例えば、Ｂ型肝炎ワクチンの場合、Ｂ型
肝炎表面抗原蛋白質の他のアミノ酸配列又はウィルス中
に存在する他の蛋白質のアミノ酸配列を含有しない。生
物的に生成した成分、活性又は不活性のウィルス成分、
抗体。

デオキシリポ核酸（ＤＮＡ　）、脂質のいずれも含まず
、従って、他のワ、クチンに共通に見られるような不所
望の副作用（意図しないウィルスの感染、アレルギー反
応１発熱等）を実質上惹起しないであろうワクチンを合
成することができる。

合成ワクチンは宿主動物に導入した場合に非常に高い特
異性を有し、そして通常でない特別な反応を示す。天然
材料から調製され、そして宿主動物に導入されたワクチ
ンは通常、該ワクチン中に含まれる複数の抗原に存在す
る個々のエピトープに特異的な複数の抗体を形成するこ
とにより免疫反応を惹起するが、この発明のワクチンを
宿主に導入した場合単一特異性を有する、すなわちワク
チン上の１個の抗原部位に特異的な抗体が形成される。

すなわち、この発明のワクチンは、単一特異性抗体を含
有する免疫グロブリンを形成するのに使用することがで
きる。これらの単一特異性抗体は動物中で形成され、こ
れを、血清試験において、例えば患者から分離した病原
体の体型を同定するために使用される診断用免疫グロブ
リン源として使用することができる。

ワクチンの製造において、生理的に許容される媒体中の
ワクチンの濃度は、それに含まれるＨ−エビトープの数
とタイプに依存して変えることができる。一般に、この
発明のワクチンの活性成分は、既知のワクチン中の活性
物質の濃度よシ、低濃度で存在せしめることができる。

こ庇は、既知のワクチンにおいては、所望の免疫反応を
惹起せしめるために必要な数の抗原決定基を存在せしめ
るために高い濃度が必要なためである。もちろん、ワク
チンの濃度はワクチンごとに異る。一般にこの濃度は、
適当な免疫を行うために１投与当り５〜１００μｇ１好
ましくは２０〜５０μｇとする。特に、１投与当り０．
０１〜１００、さらに０．０１〜１０μｇで投与するこ
とも考えられる。

ワクチンは、受身赤血球凝集のごとき試験で測定する場
合、少なくとも１：１００の抗体価を供する能力を有す
るであろう。例えば肝炎Ｂ８のワクチンは、推奨される
計画に従って標準ワクチンを２回投与して免疫した４匹
以上のチン・ぐンジーにおける受身赤血球凝集（凍結し
た抗血清対照に基いて標準化したもの）によシ測定する
場合、１：１００以上のＨＢｓ抗体価を有する。抗−Ｈ
Ｂａは、チン・センターに免疫した後１年以上にわたシ
１：１０より大きな力価を保持する。ワクチンの濃度は
、所望の効果に依存して変えることができる。

ワクチンは皮下注射又は筋肉内注射により投与すること
ができる。好ましい投与方法はワクチンの特性によって
異るが、一般に筋肉内注射が適当であると信じられてい
る。投与の頻度はワクチン。

エピトープの性質及びタイプ、並びに活性成分の濃度に
依存して異なる。一般に、１箇月の間隔をおいて２回投
与し、予備免疫の後６箇月〜１年後に追加投与する。も
ちろん投与祉は投与される宿主動物の大きさに依存する
。後の投与すなわち追加投与は最初の免疫の結果として
の血中の抗体レベルに依存する。ワクチン製造に常用さ
れているアジ−パントを使用することができる。

ここで特に検討している肝炎ワクチンの場合、このワク
チンはＢ型肝炎に感染する危険のあるすべての人、特に
血液透析機の取扱者及び患者、病院職員、熱帯地方に住
んでいる者又は熱帯地方旅行者のごとき感染の危険が高
い人に推奨される。

熱帯地方に住む人、特にＢ型肝炎の発生が多いと認めら
れているアフリカ、アジア、地中海地方。

及び南アフリカに住む人の場合、これらの地方において
５歳までに生ずる傾向がある慢性保菌状態感染の獲得を
防止するだめに人生の十分に早い時期にワクチンを投与
すべきである。事実、ワクチンは予備免疫の結果として
Ｂ型肝炎感染に対してまだ保護されていないすべての人
に有用である。

特許出願人 ニューヨーク　ブラッド　センター。

インコーホレイティド 特許出願代理人 弁理士　青　木　　　　朗 弁理士　西　舘　和　之 弁理士　福　本　　　　積 弁理士　山　　ｌ」　昭　之

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、少なくとも１２個の炭素原子を有する１もしくはそ
   れより多くのアルギル基もしくはアルケニル基又はその
   他の親脂性物質と結合したペプチド残基を含んで成る合
   成ワクチンであって；該ペプチド残基が蛋白質抗原又は
   蛋白質アルケニル基の局所平均親水性値が最大であると
   認められるアミノ酸配列に対応する６個のアミノ酸の配
   列を含有し；該蛋白質抗原又は蛋白質アレルケ゛ンの該
   局所平均親水性値を有する部位が次の方法、すなわちＡ
   　次の第１表に示されるアミノ酸の相対的親水性値の関
   係に従って、蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンのアミノ
   酸に相対的親水性値を割り当て、第　１　衣 アミノ酸　　　　　　　　　　　親水性値アルギニン　
   　　　　　　　　　３．０アスノ９ラギンｒ１１３．０
   士１ グルタミン酸　　　　　　　　　　３０±１リジン　　
   　　　　　　　　　　　３．０セリン　　　　　　　　
   　　　（）３ アスノ９ラギン　　　　　　　　　　０２グルタミン　
   　　　　　　　　　　０２グリシン　　　　　　　　　
   　　　０．０ゾロ−リン　　　　　　　　　　　　−、
   ５±１スレオニン　　　　　　　　　　−０，４アラニ
   ン　　　　　　　　　　−０５ ヒスチジン　　　　　　　　　　−０，５システイン　
   　　　　　　　　　−１０メチオニン　　　　　　　　
   　　−１３バリン　　　　　　　　　　−１５ インロイシン　　　　　　　　　−１８０イシン　　　
   　　　　　　　　−１，８チロシン　　　　　　　　　
   　　−２３フエニルアラニン　　　　　　−２，５トリ
   プトフアン　　　　　　　　　−３，４Ｂ　アミノ酸鎖
   にそって多数の部位における局所平均親水性値を反化し
   て決定し、 Ｃこれらの反情して平均値を求めた部位から最大局所平
   均層、水性値を有する部位を決定する、方法ＶＣより決
   定され；そし、て、該ワクチンが宿主動物ＶＣ導入され
   た場合に、元金な蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンＩＣ
   対応するアミノ酸配列を有しなくても抗原又はアレルゲ
   ンに対する抗体形成を例数することにより防御免疫反応
   全惹起することを特徴とする合成ワクチン。 ２　前記アミノ酸鎖が５０個以下のアミノＰを含有する
   特Ｍｉｔ〜求の範囲に〜１項記載のワクチン、３、　前
   記アミノ酸鎖が４０個以下のアミノ酸を含有する％許請
   求の範囲第２項Ｈｒ２載のワクチン１゜４、酊紀アミノ
   醒鎖が３０個以下のアミノ酸を含有する特許請求の範囲
   第２狽ｈＣ載のワクチン。 ５　前ｉ己アミノ醸鎖が２０１園以下のアミノ酸を詮有
   する特６１″請求の範囲第２項記載のワクチン。 ＋ｉ！］Ｉ　ＨＩニアミノ酵鎖が１８個以下のアミノ飲
   全含有する特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ７、　前記アミノ酸鎖が１４個以下のアミノ酸を含有す
   る特許請求の範囲第２項記載のワクチン。 ８　前記アミノ酸鎖が１２〜１８個のアミノ酸を含有す
   る栢自〜求の範囲第２項記載のワクチン。 ９、前記ペプチド残基が炭素原子数１２〜３６個のアル
   キル基又はアルケニル基と結合している特許請求の範囲
   第５項記載のワクチン。 】０前記ペプチド残基が炭素原子数１２〜２４個のアル
   キル基又はアルケニル基と結合している特ｉ’Ｆｒ８ｒ
   ｔ求の１１１１）、囲第５項記載のワクチン。 １１　　前記アルキル基又はアルケニルａがカル）Ｉニ
   ル基を介して前記ペプチド残基の末端アミン基と結合し
   ている特ｒ＋Ｍ求の範囲第９項ｄＣ載のワクチン。 】２、前記アルキル基又はアルケニル基が前ｆｅペゾテ
   ド残基の末端アミノ基に面接結合している特許請求の範
   囲第９項り己載のワクチン。 １３、前記ペプチド残基が親脂性物置と結合している特
   Ｗ？−六求の範囲第１項記載のワクチン０１４、内Ｆｆ
   ｉ己親脂性物買が・ンルミテン酸、ステアリ゛ン酸、ベ
   ヘン酸、オレイン酸又はミコール酸である特ｆｒ　Ｆｉ
   ＋Ｖ求の範囲第１３狽Ｂ己載のワクチン。 １５、ワクチンがＢ　２１，４肝炎ワクチンであって、
   Ｌｙｅ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ａｓｐ　−ＧＩｙ　−
   Ａｓｎなるアミノ酸配列を含有する特ｔｌｆ請求の範囲
   嬉５項記載のワクチン。 １６　前ｌ己アミノを致配列がＡｂａ　−Ａｂａ　−Ｔ
   ｈｒ　−Ｌｙｓ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ａｓｐ　−Ｇ
   ｌｙ　−Ａｇｎ　−Ａｂａ　−Ｔｈｒ　−Ａｂａなる配
   列をａ有する特許請求のｉカ４囲第１５項記載のワクチ
   ン。 １７　前記アミノ酸配列がＣｙａ　−Ｃｙｓ　−Ｔｈｒ
   　−Ｌｙａ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｙ
   　−Ａｓｎ　−Ｃｙｓ　　−Ｔｈｒ　−Ｃｙａなる配列
   を含有する特約請求の、１＋ｌ）囲第１５項Ｈ己載のワ
   クチン。 １８、Ｂ型肝炎ウィルスの他のべｌナト配列を南］７々
   いことを特徴とする特許請求の軛四紀１５項Ｂ己載のワ
   クチン 】９不活性の又は活性ム汚染ウィルスを含有しない特許
   請求の範囲第１狽ｈＣ載のワクチン、５２０生物学的Ｖ
   Ｃ生成した成分を実買上召゛有しない特Ｗ＋日〆づ求の
   胛囲第１項記載の１７クチン。 ２１　　Ｂ型肝炎抗体をも有しない特許請求の範囲第１
   ５項記載のワクチン。 ２２、１）ＮＡ又はＲＮＡを含有しない特許請求の範囲
   第１５′ｓ１４記載のワクチン。 ２３、脂質を含有せず、その他の親脂・１／ｉ成分を含
   有する特許請求の範囲Ｍ１５項記載のワクチン。 ２４、Ｐｒｏ　　−Ａｒｇ　　−Ｇｌｕ　　−Ｇｌｕ　
   　−Ｐｒｏ　　−Ａｒｇから成るアミノ酸配列を有する
   ペプチド残基を含ん、で成る特ｉ’Ｆ　ｇ）Ｊ求の範囲
   第５項記載のワクチン。 ２５、Ｖａｔ　　−Ｇｌｕ　　−Ａｒｇ　　−Ｓｅｒ　
   　−Ｌｙｓ　　−Ａｌａから成るアミノ酸配列を有する
   ペプチド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載の
   ワクチン。 ２６、Ｌｙｓ　　−Ａｒｇ　−Ｇｌｙ　　−Ｐｒｏ　　
   −Ａｓｐ　　−Ｓｅｔから成るアミノ酸配列を有するペ
   プチド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項Ｕピ載の
   ワクチン。 ２７、　Ａｒｇ　−Ａｓｎ　−Ｖａｌ　−Ｐｒｏ　−Ｇ
   ｌｙ　−ＬｙｅからＩｊＱｌるアミノ酸配列舌・有する
   ペプチド残基全台んで成る特１珀求のＷα囲第５項記載
   のワクチン。 ２８、　　Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙａ−
   Ｇｌｕ−Ｌｙａから成るアミノ酸配列を有するペプチド
   残基を含んで成る％許請求の範囲第５項記載のワクチン
   ０ ２９、　　Ｇｌｕ　−Ｔｈｒ　−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ　−
   Ａｒｇから成るアミノ酸配列を有する被ゾチド残基金含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ３０、　　Ｌｅｕ　−Ａｒｇ　−Ｇｌｕ　−１１ｅ　−
   Ｇｌｕ　−Ａｒｇ　−Ｌｅｕから成るアミノ酸配列を有
   するペプチド残基を含んで成る特ｒ１−趙求の範囲第５
   項記載のワクチン。 ３１、　　Ｌｙａ　−Ｓｅｒ　−Ｌｙｓ　−Ｐｒｏ　−
   Ｌｙｓ−Ａａｐから成るアミノ酸配列を廟するペプチド
   残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン
   。 ３２、　　Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ　−１１ｅ−Ｇｌｙ
   −Ｌｙａから成るアミノ酸配列を南するペプチド残基合
   金んで成るｔ＋！ｆ許請求の範囲第５項記載のワクチン
   。 ３３、　　Ａｓｐ　−Ａｓｐ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−
   Ａｓｐ　ニー　Ｌｙａ　−Ｇｌｕから成るアミノ酸配列
   會南するペプチド残基金倉んで成る特許請求の範囲第５
   項記載のワクチン。 ３４、　　Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａａｎ−Ａｓｐ−
   Ｌｙｓから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ３５、　　Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−
   Ｇｌｎから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基金倉
   んで成る％詐趙求の範囲第５項記載のワクチン。 ３６、　　Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−
   Ａａｎから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ３７、　　Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−８ｅｔ−
   Ａｒｇから成るアミノ酸配列を有するペゾチド残基金含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ３８、　　Ａｒｇ　−Ｍｅｔ　−Ｌｙａ　−Ａｒｇ　−
   Ａｌａ　−Ｇｌｕから成るアミノ酸配列を有するペゾチ
   ド残基金含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチ
   ン。 ３９、Ｇｌｕ−Ｌｙａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ
   ｇから成るアミ２ノ酸配列を有するペプチド残基を含ん
   で成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ４０、　　Ｌｙａ−Ｇｌｕ−Ａａｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−
   Ａｓｐから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項口１シ軟のワクチン。 ４１、　　Ａｍｎ−Ａａｐ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ａｓｐ−
   Ｌｙａから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基金倉
   んで成るＩ＋！ｆ的−請求の範囲第５項記載のワクチン
   。 ４２、　　Ｇｌｕ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ｇｌｕ　−
   Ｇｌｙ　−Ａａｎから成るアミノド夜配列を有するペプ
   チド残基を含んで成る舶ｔ１請求の範囲第５項記１敗の
   ワクチン。 ４３、　　Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−
   Ａｓｐから成るアミノ酸配列をイ〕するペプチド残基を
   含んでＲる特許請求の範囲第５項配電）４のワクチン。 ４４、　　Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ｓｅｒ　−’Ｉ’ｈｒ
   −Ｔｈｒ−Ａｓｐから成るアミノ酸配列ヲ廟するペプチ
   ド残基を含んで成るもｆｌ−請求の範囲第５項記載のワ
   クチン。 ４５、　　Ｐｒｏ　−Ｔｂｒ−Ｇｌｕ　−Ｌｙａ　−Ａ
   ｓｐ−Ｇｌｕから成るアミノ酸配列を有するペプチド残
   基を含んで成る特ｆｆ’ｔ’請求の範囲第５項記載のワ
   クチン。 ４５、　　Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−８ｅｒ−Ａｒｇ−
   ８ｅｔから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項Ｂに載のワクチン。 ４７、　　Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙａ−Ｖａｌ　−Ｇｌｕ
   −Ｌｙｓから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を
   含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ４８、　　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
   Ａｓｎから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特￥ｅ　Ｑ求の範囲第５項記載のワクチン。 ４９、　　Ｇｌｕ　−Ａｒｇ−Ｍｅｔ　−Ｌｙｓ　−Ａ
   ｓｐ　−Ｔｈｒから成るアミノ酸配列を有するペプチド
   残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン
   。 ５０、　　Ａｓｐ　−Ｓｅｒ　−Ｓａｒ　−Ｌｙｓ−Ｇ
   ｌｕ　−Ｌｙｅから成るアミノ酸配列を有するペプチド
   残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン
   。 ５１、　　Ｓｅｒ　−Ｇｌｕ　−Ｌｙｓ−’Ｌｙ８−　
   Ｓｅｒ　−Ｇｌｕから成るアミノ酸配列を有するペプチ
   ド残ジ、）、を含んで成る特許請求の範囲第５項Ｈ［ｉ
   載のワクチン。 ５２、　　Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙａ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−
   Ｌｙｓから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ５３、　５ｅｔ−Ｌｙｓ−Ｌｙａ−Ｃｙａ−Ｇｌｙ−１
   ，ｙｓから成るアミノド・配列を有するペプチド残基を
   含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ５４．　　Ａｒｇ−Ｌｙａ−Ａｌａ−Ａａｐ　−Ｌｅｕ
   −Ｇｌｕから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を
   含んで成る特許請求の範囲第５項記Ｖのワクチン。 ５５、　　ＬｙＩＩ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ
   −Ｌｙｓから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基全
   台んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ５６、　　Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−
   Ｇｌｙから成るアミノ酸配列を有するペプチド残基を含
   んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチン。 ５７、　　Ｇｌｕ　−Ｌｅｕ−Ｖａｌ　−Ａｒｇ　−Ｌ
   ｙｅ　−Ａｒｇ−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　−Ｃｙｓ　−Ｌａ
   ｕ　−Ａｓｐ　−Ａｌａから成るアミノ酸配列奮有する
   一′−２ｆチド残基金含んで成る特許請求の範囲第５項
   記載のワクチン。 ５８、　　Ｔｈｒ−Ｖａｌ　−Ｐｈｅ−Ｌ）＋８−Ａａ
   ｐ−Ｇｌｙ−Ａａｐ　−Ｇｌｕ　−Ａｌａ　−Ｇｌｕ　
   −Ａｓｐ　−Ｐｈｅ　から成るアミノ酸配列を有するペ
   プチド残基金含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワ
   クチン。 ５９、　　Ｈｌｓ　−Ａｓｐ　−Ｐｈｅ　−Ａｒｇ　−
   Ｓａｒ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕ　−Ｉｔｓ　−Ｇｌｕ　−
   Ｈｉｓ　−Ｌｅｕ−Ｖａｌから成るアミノ酸配列を有す
   るペプチド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載
   のワクチン。 ６０、　　Ｍｅｔ−Ａｌａ−’Ｇｌｙ−Ａａｐ−Ｐｒｏ
   −Ａｒｇ−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　−Ｓｅｒ　−
   Ｌｅｕ　−Ｈｌｓから成るアミノ酸配列を有するペプチ
   ド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載のワクチ
   ン。 ６１、　　Ｉｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ　−Ａａｎ　−Ｓ
   ｅｒ−Ａｒｇ　−Ｇｌｙ　−Ｌｙｓ　−Ａｒｇ　−Ａｌ
   ａ　−Ｓｅｒ　−Ｌｙｌｌから成るアミノ酸配列を有す
   るペプチド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記載
   のワクチン。 ６２、　　Ｔｈｒ　−Ｔｈｒ　−Ｐｈｅ　−ＬｙＢ−Ａ
   ｒｇ　−Ｌｙａ　−１１ｉａ　−Ｐｈｅ　−Ａｒｇ　−
   Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ｐｒｏから成るアミノ酸配列を有
   するペプチド残基を含んで成る特許請求の範囲第５項記
   載のワクチン。 ６３、　　Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−
   Ｔｈｒ−Ｌｙｓ　−Ｇｌｕ　−Ｓｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｖ
   ａｌ　−ＩＩｓから成るアミノ酸配列を有するペプチド
   残基金倉んで成る特　　　　　。 許肋求の範囲Ｍ５項記載のワクチン。 刺１次の式（Ｉ） 以下余白 （式中、ｍはＯ又は１であり；Ｒは少々くとも１２個の
   炭素原子を有する置換されている又は置換されていない
   アルキル基又はアルケニル基であυ；そして、Ａ！７′
   ″チドは、蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲン中の局所平
   均親水性値が最大であると認められるアミノ酸配列に対
   応する６個のアミノ酸の配列を含有【７、そして該局所
   親水性値を崩する部位は次の方法、すなわち Ａ０次の第１表に示されるアミノ酸の相対的親水性値の
   関係に従って蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲンのアミノ
   酸に相対的親水性値を割り当て、以下余白 第１表 アミノ酸　　　　　　　　　親水性値 アルギニン　　　　　　　　　　３０ アスパラギン酸　　　　　　　　３．０±１グルタミン
   酸　　　　　　　　　　３０±１リシン　　　　　　　
   　　　　　　３．０セリン　　　　　　　　　　　Ｏ６
   ３ アスパラギン　　　　　　　　　０２ グルタミン　　　　　　　　　　０．２グリシン　　　
   　　　　　　　　　０・０プローリン　　　　　　　　
   　　　　−、５±１スレオニン　　　　　　　　　−０
   ，４アラニン　　　　　　　　　　−０，５ヒスチジン
   　　　　　　　　　−０５ システイン　　　　　　　　　　−１，０メチオニン　
   　　　　　　　　−１・３バリン　　　　　　　　　　
   −ｌ、５ イソロイシン　　　　　　　　　−１，８０イシン　　
   　　　　　　　　　−１８チロシン　　　　　　　　　
   　　−２・３フエニルアラニン　　　　　　−２・５ト
   リグトフアン　　　　　　　　−３′４Ｂ、アミノ酸鎖
   にそって多俄の部位に４＝−ける局所平均親水性値を反
   復して決定し７、 Ｃ０これらの反復して平均値を求めだＲ１１位から最大
   局所平均親水性値を有する部位を決定する、方法により
   決定される、） で示さ７′１、宿主動物に導入された場合に、完全な蛋
   白質抗原又は蛋白質アレルゲン中系応するアミノ酸配列
   を有しなくてもわ”１原又はアし／ルダンに対する抗体
   形成を例数することにより防御免疫反応を惹起する合成
   抗原又Ｖユアレルク゛ンを含んで成る荊１成９勿。 ６５１（が炭素原子数３６Ｕ下のアルギル基又はアルク
   −ニル基である％ｉｔ’ト紬求の範囲第６４項記載の組
   成物。 ６６、Ｒか炭素原子む１８以下のアルキル基又はアルケ
   ニル基である傷、許請求の範囲第６５項記載の組ｈ’を
   物。 ６７、Ｒが炭素原子数１２以下のアルキル基又はアルケ
   ニル基でるる特許請求の範囲第６６項記載の組成物。 ６８、　　ｍがＯである特許請求の範囲第６４項記載の
   組成物。 ６９、　　ｍが１である特許請求の範囲第６４項記載の
   組成物。 ７０、次の式（ＩＩ）、 （式中、ペプチドは、蛋白質抗原又は蛋白質アレルゲン
   中の局所平均親水性値が最大であるｊ認められるアミノ
   酸配列に対応する６個のアミノ酸の配列を含有し、そし
   て該局所親水性値を有する部位は次の方法、すなわち Ａ０次の第１表に示されるアミノ酸の相対的親水性値の
   関係に従って蛋白質抗原又は蛋白質アレルケ゛ンのアミ
   ノ酸に相対的親水性値を割り邑て、以下余白 第１赤 アルギニン　　　　　　　　　　３０ アスノ９ラギン酸　　　　　　　　　３０±１グルタミ
   ン酸　　　　　　　　　　３０±１リノン　　　　　　
   　　　　　　　３０セリン　　　　　　　　　　　０３ アスノ？ラギン　　　　　　　　　０６２グルタミン　
   　　　　　　　　　０．２グリシン　　　　　　　　　
   　　０．０ゾロ−リン　　　　　　　　　　　　−、５
   ±１スレメニン　　　　　　　　−０８４ アラニン　　　　　　　　　−０．５ ヒスチノン　　　　　　　　　−０，５システイン　　
   　　　　　　　−１，０メチオニン　　　　　　　　　
   −１，３バリン　　　　　　　　　−１，５ インロイシン　　　　　　　　−１，８） ロイシン　　　　　　　　　　　−１８ナロシン　　　
   　　　　　　　−２，３フエニルアラニン　　　　　　
   −２６５トリプトファン　　　　　　　−３４ Ｂ、アミノ敵船にそって多数の部位における局所平均親
   水性値を反へして決定［２、 Ｃ，、これらの反復［２て平均値を求めた部位から最大
   局Ｐシｉ平均親水性値を有する部位を決定する、方法よ
   如決定される、） で示され、Ｒ，Ｒ、Ｒ及びＲは、それぞれ、置換されて
   いる又は置換されていない直鎖又は分子鎖のＣ４２〜Ｃ
   ３６アルキル基又はアルケニル基であり：０Ｘｐ１ｑ及
   びｒは０又は１であって０、ｐ、ｑ及びｒの合計が！ｌ
   に等しく；ｎは２〜４であり；Ｘは３〜５個の官能基を
   有する多官能基であって、その少なくとも１個がＡｉＪ
   記末端アミン基に結合しており、そして前記官能基の少
   なくとも１個けＲ，Ｒ、Ｒ又はＲと結合している） で示される合成抗原又は合成アレルケ゛ンを含んで成る
   組成物。 ７１　Ｘがリジン、オルニチン、又けα−もしくはγ−
   ジアミノ酪酸である特許請求の範囲第７０項記４＆の合
   成ワクチン又は合成抗原。 ７２　　Ｘが末端アミノ基に払合【〜だ１個のカルクぎ
   ニル基とＲ５、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１個と
   結合した少なくとも１個のアミン基を含有する特許請求
   の範囲第７１項記載の合成ワクチン又は合成抗原。 ７３　　Ｘが次の式（ト） （式中、Ａは一端がＭに結合し７ており他端が合成ペゾ
   チｌ°の末端アミノ基に結合し２ている二官能基であり
   ：Ｍは炭素原子数２〜５個のアルキレン基又はアルグニ
   ｔ／ン基であり：Ｂ、Ｃ，Ｄ及びＥｄ、それぞれ、一端
   がＭに結合しており、そして他端がＣ４２〜Ｃ３６のア
   ルキル基又はアルケニル基ＶＣ結合している二泊能基で
   ！りｔ）”、そして、ｂ　ｌ　Ｃ１ｄ及びｅ　Ｑ：Ｊそ
   れぞれ１又は０であって、ｂ　ｌ　Ｃ１ｄ及び０の合ｂ
   １は２〜４である） でノ」＜さ１１る特１’ｉ　ｉｇ＋’（求の範囲第７２
   項記載の合成ワクチン又は合成抗原０ ７４　　少なくとも１個のアルキル基又はアルケニル部
   分が前ｈ１〕ベン°チド残基のＣ−末端カルＩＪζギシ
   ル基又は測知反応基に結合している特許請求の範囲第６
   項記載の合成ワクチン又は抗原。 ７５、脂肪酸又はその池の親脂性物質がペプチド部分の
   Ｃ−末端における１個のジアミノ酸残基の側鎖アミノ基
   に共鳴結合している特許請求の範囲第１項記社のワクチ
   ン。 ７６　　脂肪酸又はその他の親脂性物質がペプチド部分
   のＣ床端における枚数のジアミノ序・残基の側鎖アミノ
   基に共有結合している特許請求の範囲第１項Ｂ己販のワ
   クチン。 ７７鮨肪酸又はその仙の親脂性物質がさらにＮ−末端ア
   ミン基、及び／又はＮ−末端ジアミノ酸残基のｆ、ｌｌ
   　船アミノ基と共有結合している特許請求の範囲第７５
   項記載のワクチン。 ７８　　脂肪酸又はその他の親脂性物質かさらにＮ　　
   　　　　゛−末端アミノ基、及び／又は複数の１リ−末
   端ノアミノ酸残基の側鎖アミノ基に共有結合１．ている
   特許請求の範囲第６項記載のワクチン。 以　ド余１−１