JPS5970622A - 肝炎に対する哺乳類宿主の免疫方法 - Google Patents
肝炎に対する哺乳類宿主の免疫方法Info
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- JPS5970622A JPS5970622A JP58157303A JP15730383A JPS5970622A JP S5970622 A JPS5970622 A JP S5970622A JP 58157303 A JP58157303 A JP 58157303A JP 15730383 A JP15730383 A JP 15730383A JP S5970622 A JPS5970622 A JP S5970622A
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- Japan
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- dimer
- vaccine
- amino acid
- toxoid
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明のＲ４
発明の分野
Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ ）感染は肝＋ｆｌｌｌ胞８
１贋を含めて急性及び慢性の肝）藏疾患全起す世界的な
公衆術生の問題である。慢性保菌者の血漿がら単離され
たＢ型肝炎表面抗原（ｌｌＢｓＡｇ ）は、ＨＢ ｓ
Ａｇのすべての血清型に共通の、生理学的に主歿な抗原
決定恭ａ及び曲のザブタイプ６°異性決定基ｄ／ｙ父は
ｗ／ｒの免役化学的特異性について広く研究されておシ
、合Ｎｌ’ １０４４７７の異なるｉｎ１清型があり、
そのうち４独が束間である。２５，０００ダルトンのウ
ィルスコードを有するＦ■Ｂ！ＩＡｇ構造蛋白のアミノ
酸配列が得られ、ａ決定基に関連したポリベゾチド配列
が明らかにされた。
１贋を含めて急性及び慢性の肝）藏疾患全起す世界的な
公衆術生の問題である。慢性保菌者の血漿がら単離され
たＢ型肝炎表面抗原（ｌｌＢｓＡｇ ）は、ＨＢ ｓ
Ａｇのすべての血清型に共通の、生理学的に主歿な抗原
決定恭ａ及び曲のザブタイプ６°異性決定基ｄ／ｙ父は
ｗ／ｒの免役化学的特異性について広く研究されておシ
、合Ｎｌ’ １０４４７７の異なるｉｎ１清型があり、
そのうち４独が束間である。２５，０００ダルトンのウ
ィルスコードを有するＦ■Ｂ！ＩＡｇ構造蛋白のアミノ
酸配列が得られ、ａ決定基に関連したポリベゾチド配列
が明らかにされた。
この集中的研究の結果として、ＨＢＶの種々の血清！Ｖ
に対して１．’Ｎｉ乳類宿主を保めする、経済的で、安
全で、有効なワクチンを製造することが望まれている。
に対して１．’Ｎｉ乳類宿主を保めする、経済的で、安
全で、有効なワクチンを製造することが望まれている。
ワクチンの開発にあたっては、毒性微生物が天然の免疫
原応答を起すのと同じように毒性微生物に著しく近似さ
せることが望まれている。
原応答を起すのと同じように毒性微生物に著しく近似さ
せることが望まれている。
同時に、感染から起る不快な症状を避けることが望まれ
る。感染の間に生じる特定の抗体に関係する決定基部位
は表面１蛋白の小部分にすぎず、その表面蛋白は決定基
部位に特異的な環境及び構造を提供する。
る。感染の間に生じる特定の抗体に関係する決定基部位
は表面１蛋白の小部分にすぎず、その表面蛋白は決定基
部位に特異的な環境及び構造を提供する。
従って、このような決定基を有する微生物にその後に感
染することから宿主を保護するワクチンとして作用させ
るため、摺主に注イｊ″′Ｊると強い免役反応を起す免
疫原を生ずるノ・ブテンと１−で作用しうる、ＬＬｊ咬
的小さい刈りゴペプチドを剰、漬できれば、色めて有益
である。用炎についｒ、は、ａ決定帖に対して特異性の
抗体を生じる免疫原反応を起して、Ｔｔ’４主をＩ（Ｂ
Ｖのずべての血に′に型に対ｌ〜て免疫することが７１
ケに重姿である。従って、ワクチンとし１使用される免
疫原の製造又は診断若しくｉｔ、受身免疫に使用する抗
体の製造に使用するか、又ｔ、Ｊ：診断分析におりる試
桑として使用することのできる新規ハブテンオリゴベノ
テドを製造できることは望まＬ７い。
染することから宿主を保護するワクチンとして作用させ
るため、摺主に注イｊ″′Ｊると強い免役反応を起す免
疫原を生ずるノ・ブテンと１−で作用しうる、ＬＬｊ咬
的小さい刈りゴペプチドを剰、漬できれば、色めて有益
である。用炎についｒ、は、ａ決定帖に対して特異性の
抗体を生じる免疫原反応を起して、Ｔｔ’４主をＩ（Ｂ
Ｖのずべての血に′に型に対ｌ〜て免疫することが７１
ケに重姿である。従って、ワクチンとし１使用される免
疫原の製造又は診断若しくｉｔ、受身免疫に使用する抗
体の製造に使用するか、又ｔ、Ｊ：診断分析におりる試
桑として使用することのできる新規ハブテンオリゴベノ
テドを製造できることは望まＬ７い。
従来技術
Ｂｈａｔｎａｇａｒら著、ＰＮＡＳ Ｕ、Ｓ、Ａ、（１
９８２） ７９ ：４４００〜４４０４にや、へ遺伝子
から決定されるＨＢｓＡｇ／ａｄｗ蛋白、ＨＢｓＡｇに
結合する抗体に対してＨＢｓＡｇと競合しうるむとのｆ
ｌＪっでいる４：Ｊｉ々の配列並ひにＨＢｓＡｇ及びそ
の決定基部位の決定の歴νｌ的発展を示す文献のリスト
が記載されている。合成ジフテリアワクチンについてｔ
よ、Ａｕｄｊｂｅｒｔら著、ＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９８
２）７９： ５０４２−５０４６も参照。
９８２） ７９ ：４４００〜４４０４にや、へ遺伝子
から決定されるＨＢｓＡｇ／ａｄｗ蛋白、ＨＢｓＡｇに
結合する抗体に対してＨＢｓＡｇと競合しうるむとのｆ
ｌＪっでいる４：Ｊｉ々の配列並ひにＨＢｓＡｇ及びそ
の決定基部位の決定の歴νｌ的発展を示す文献のリスト
が記載されている。合成ジフテリアワクチンについてｔ
よ、Ａｕｄｊｂｅｒｔら著、ＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９８
２）７９： ５０４２−５０４６も参照。
発明の＋ｌ！：Ｕ安
新規ダイマーオクゴ凋プチドは、ＨＢ［ＩＡｇのａ決定
基に対してｔ１イ異性のヒト抗体と結合することができ
、抗原に重合及び／又は抗原に接合して、抗体の産生又
はワクチンとして使用される免疫原を産生ずるためのハ
プテンとして提供されるか、又はオリゴペプチド及び免
疫原は産生される抗体と一緒に診断分析に試薬として使
用される。
基に対してｔ１イ異性のヒト抗体と結合することができ
、抗原に重合及び／又は抗原に接合して、抗体の産生又
はワクチンとして使用される免疫原を産生ずるためのハ
プテンとして提供されるか、又はオリゴペプチド及び免
疫原は産生される抗体と一緒に診断分析に試薬として使
用される。
本発明によれば、ＨＢｓＡｇ ａ決定基部位に類似し、
従って、広範な用途、■えは診断に使用する試薬の製造
、抗体の産生のため使用しうる抗原の製造に使用される
新規オリゴペグテドハゾテンが提供され、前記用途にお
いて抗体は診断分析又は受身免疫用ワクチンとして使用
され、またオリゴペプチドを、ＨＢＶによる感染に対し
て保り論する免役反応を誘発させるため哺乳類宿主の許
容する抗原に重合又は接汁させることができる。
従って、広範な用途、■えは診断に使用する試薬の製造
、抗体の産生のため使用しうる抗原の製造に使用される
新規オリゴペグテドハゾテンが提供され、前記用途にお
いて抗体は診断分析又は受身免疫用ワクチンとして使用
され、またオリゴペプチドを、ＨＢＶによる感染に対し
て保り論する免役反応を誘発させるため哺乳類宿主の許
容する抗原に重合又は接汁させることができる。
本発明のオリゴペプチドは、通冨゛、少なくとも個）以
下の成分、好ましくは１８個（）！ｒ足に９個）の成分
を崩し、これらの成分はすべてアミノ酸である必聾Ｖ」
、ないが、大多数はアミノ酸であシ、通常１個以下がア
ミノ酸以外のものである。この分子は１個の対称中心を
有し、その対称中心のまわシに回帰性（ｐａｌｌｎｄｒ
ｏｍｌｃ ）である。
下の成分、好ましくは１８個（）！ｒ足に９個）の成分
を崩し、これらの成分はすべてアミノ酸である必聾Ｖ」
、ないが、大多数はアミノ酸であシ、通常１個以下がア
ミノ酸以外のものである。この分子は１個の対称中心を
有し、その対称中心のまわシに回帰性（ｐａｌｌｎｄｒ
ｏｍｌｃ ）である。
〔式中ＡＡ ＋ −５はＨＢｓＡｇのアミノ１Ｗ１４３
〜１４７と同−又は異なるアミノ酸又はこれらの位１（
Ｃの天然アミノ酸に免疫学的に近似しうるアミノ酸であ
シ、ＡＡ’及びＡＡ５は結合であってよく、ＡＡ １−
５の特殊な定義は以下に明らかにし ｚｌは結合又はＨ
ＲｓＡｇのアミノ酸１４８〜１５３又はこのようなアミ
ノ酸に免疫学的に近似しうるアミノ１！Ｉβである１〜
６ ｉｔ／ｊ ％ 、Ｕ峙６１〜２個のアミノ酸のアミ
ノｌツ連鎖であシ、好ましくは結合であり、２は水素又
はアミノ酸又はアミンＩＷ配列、特にＨＢｓＡｇのアミ
ノ酸１３４〜１３８、好ましくは水素であり、Ｂは水素
又は低級アルキル基若しくは水性媒中でポリ４ゾチドと
ペプチド結合を形成しうるエステルを形成する基である
アルコール残基である〕。詳細な基はＮ−ヒドロギシス
クシンイミド、ノ９ラーニト口フェノール及び４−ヒド
ロキシ−３−二トロベンゼンスルポンＣ９’ｃ 含ｔｒ
。
〜１４７と同−又は異なるアミノ酸又はこれらの位１（
Ｃの天然アミノ酸に免疫学的に近似しうるアミノ酸であ
シ、ＡＡ’及びＡＡ５は結合であってよく、ＡＡ １−
５の特殊な定義は以下に明らかにし ｚｌは結合又はＨ
ＲｓＡｇのアミノ酸１４８〜１５３又はこのようなアミ
ノ酸に免疫学的に近似しうるアミノ１！Ｉβである１〜
６ ｉｔ／ｊ ％ 、Ｕ峙６１〜２個のアミノ酸のアミ
ノｌツ連鎖であシ、好ましくは結合であり、２は水素又
はアミノ酸又はアミンＩＷ配列、特にＨＢｓＡｇのアミ
ノ酸１３４〜１３８、好ましくは水素であり、Ｂは水素
又は低級アルキル基若しくは水性媒中でポリ４ゾチドと
ペプチド結合を形成しうるエステルを形成する基である
アルコール残基である〕。詳細な基はＮ−ヒドロギシス
クシンイミド、ノ９ラーニト口フェノール及び４−ヒド
ロキシ−３−二トロベンゼンスルポンＣ９’ｃ 含ｔｒ
。
谷鎮におけるアミノ酸単位の３個以下、通帛２個以下、
好ましくは約１個以下は、大部分、ＨＢｓＡｇにおける
天然配列であるアミノ［ｉ １３８〜１５２とは異なる
。
好ましくは約１個以下は、大部分、ＨＢｓＡｇにおける
天然配列であるアミノ［ｉ １３８〜１５２とは異なる
。
ＡＡ’Ｕ：、大部分、中程度に物性のアミノ酸、しＵ、
ｔＪｆスレオニン、セリン、及びメチオニン、特にスレ
オニンである。ＡＡ２は【１セ性アミノ酸、１＋ｌえは
アスパラギン酸又はグルタミン酸、特にアスパラギン酸
である。ＡＡ’はα炭ＪＡ原子に水素又は炭素原子数約
１〜２個の炭化水素基を治する中１生アミノ酸、即ちグ
リシン、アラニン又はα−アミノ１．ｉｒ［あす、ＡＡ
ＪＪ、カル？キシアミド塙を有する１グ１生アミノ１′
父、即ちアスパラギン７、 ＆；ｌグルクミン、特にア
ルやラインである。ＡＡ５はシスティン、スＶ」、好ま
しくは、α炭素）６（子（し水素若しくは炭素μ４（子
数約１〜３悶の低級アルキル基を有する中住又ｔ、Ｌ疎
水性アミノｔ：’ｉ 、即ち、グリシン、゛アラニン、
α−アミノ陥１浚又はバリンである。ＡＡ５では、著し
く変動しうると思われる。
ｔＪｆスレオニン、セリン、及びメチオニン、特にスレ
オニンである。ＡＡ２は【１セ性アミノ酸、１＋ｌえは
アスパラギン酸又はグルタミン酸、特にアスパラギン酸
である。ＡＡ’はα炭ＪＡ原子に水素又は炭素原子数約
１〜２個の炭化水素基を治する中１生アミノ酸、即ちグ
リシン、アラニン又はα−アミノ１．ｉｒ［あす、ＡＡ
ＪＪ、カル？キシアミド塙を有する１グ１生アミノ１′
父、即ちアスパラギン７、 ＆；ｌグルクミン、特にア
ルやラインである。ＡＡ５はシスティン、スＶ」、好ま
しくは、α炭素）６（子（し水素若しくは炭素μ４（子
数約１〜３悶の低級アルキル基を有する中住又ｔ、Ｌ疎
水性アミノｔ：’ｉ 、即ち、グリシン、゛アラニン、
α−アミノ陥１浚又はバリンである。ＡＡ５では、著し
く変動しうると思われる。
アミノ酸は、通消、天然の１７−配置准を有する。
本発明の化合物は、大ｉｓ’ｌｆ分、下記の式を有する
：〔式中Ｂは前記のものを表わす〕。記号は下記の天然
アミノ酸を示す： Ｃ−システィン、 Ｐ−プロリン、Ｔ−スレオニ
ン、 Ｄ・−アスノ４ルテート、【（−リジン、
Ｇ−グリシン、Ｎ−アスノ平ライン またＡｂａはα−アミノ酪酸で４）る。
：〔式中Ｂは前記のものを表わす〕。記号は下記の天然
アミノ酸を示す： Ｃ−システィン、 Ｐ−プロリン、Ｔ−スレオニ
ン、 Ｄ・−アスノ４ルテート、【（−リジン、
Ｇ−グリシン、Ｎ−アスノ平ライン またＡｂａはα−アミノ酪酸で４）る。
本うら明の化合物は、ワクチンとして、又は広範な用途
に使用しうる抗体のＩ・ｋ生に１）１コ用される免疫原
接合体を生ずる抗ｊホとの接合体として使用される。接
合体の目的に応じて、多数の抗原物質を使用することか
できる。第一に、抗体の産生に関する場合、一般的抗原
はウシ血（Ｒアルブミン、キーポールリンペットヘモシ
アニン、ウシガンマグロブリン、卯オパルプミン、接眼
レンズ蛋白、血清蛋白、リポ蛋白、合成蛋白等である。
に使用しうる抗体のＩ・ｋ生に１）１コ用される免疫原
接合体を生ずる抗ｊホとの接合体として使用される。接
合体の目的に応じて、多数の抗原物質を使用することか
できる。第一に、抗体の産生に関する場合、一般的抗原
はウシ血（Ｒアルブミン、キーポールリンペットヘモシ
アニン、ウシガンマグロブリン、卯オパルプミン、接眼
レンズ蛋白、血清蛋白、リポ蛋白、合成蛋白等である。
ワクチンを使用する用台、抗原を予め宿主に、自然現象
の結果として又は予防接種によって尋人しておくのが望
ましい。この抗原を使用すると、メ内原体からのハシテ
ンＴＩｂ位は、病原体に対する有効なワクチンをＭ造す
るため抗原に接合することができる。
の結果として又は予防接種によって尋人しておくのが望
ましい。この抗原を使用すると、メ内原体からのハシテ
ンＴＩｂ位は、病原体に対する有効なワクチンをＭ造す
るため抗原に接合することができる。
抗原に接合するハゲテンのぼけ広く変ｌ１ｉｊ Ｌ、平
均して分子１ｔｓｏｏ当多少なくとも１個、約１間以下
、通Ｍ分子計５０００Ｍり約１餉以下であｐ１抗原の分
子畦及び接合体の目的に応じて広く変動する。ハプテ／
と抗原との間の結合の特定の部位は広く変動し、禾ｙｉ
Ｍカルボキシル基、末端アミン、！ル（ダイマーの個々
の足に閂［７τ）又ｔ、ｒ中間官能暴である。この１１
１−位Ｉ３ｊ本’ｒｉ−Ｌ’、ｉ’ｌの限定的ファクタ
ーでＶ、なく、ペプチド結合を形成−ノるため、ＩＥ、
αの基を使用することができる。
均して分子１ｔｓｏｏ当多少なくとも１個、約１間以下
、通Ｍ分子計５０００Ｍり約１餉以下であｐ１抗原の分
子畦及び接合体の目的に応じて広く変動する。ハプテ／
と抗原との間の結合の特定の部位は広く変動し、禾ｙｉ
Ｍカルボキシル基、末端アミン、！ル（ダイマーの個々
の足に閂［７τ）又ｔ、ｒ中間官能暴である。この１１
１−位Ｉ３ｊ本’ｒｉ−Ｌ’、ｉ’ｌの限定的ファクタ
ーでＶ、なく、ペプチド結合を形成−ノるため、ＩＥ、
αの基を使用することができる。
特異的部位の結合が３．１まし、い・′）合にｔ：、ｔ
、、！ｒ’ｒ定部位でｔ占ｔｊ１ｇ化−を石ため広範な
技術がある。値］えｔ、に、オリゴペプチドを製１青す
る相合、’ｌ〒定のアミノ酸に対して選択的遮断基を便
用−することかできる。
、、！ｒ’ｒ定部位でｔ占ｔｊ１ｇ化−を石ため広範な
技術がある。値］えｔ、に、オリゴペプチドを製１青す
る相合、’ｌ〒定のアミノ酸に対して選択的遮断基を便
用−することかできる。
例えば、債脂から末端カルボキシル１１；を開裂し７だ
ときに、末端カルボキシＩｂ ＆Ｊ、’ ｉＬ／を賭し
ていて活性化されるが、内部カルボキシ基はなお保間を
れているようにアスパラギン酸基苓保護することができ
る。
ときに、末端カルボキシＩｂ ＆Ｊ、’ ｉＬ／を賭し
ていて活性化されるが、内部カルボキシ基はなお保間を
れているようにアスパラギン酸基苓保護することができ
る。
次に、カルボン酸活性化試訣、則えばカルボジイミドを
使用して末節６カルポキシル＾（で接合させるか、又は
カルづ？ジイミドを使用して活中コミ化エステルを製令
し、次いで抗原に接合させ、カルボキシル保護基を除去
することができる。また、特に抗）＠が多数のカルがキ
シル基を有する場合、トリえＶ［破傷風トキソイドの場
合に、アミン部位で接合できるように、アミンＡ（を選
択的に保設−する。多くの場合、ダイマー及び抗原を水
溶性カルボジイミドを用いて約１〜２００ ： １のモ
ル比で混合することができ、比較的にランダムな部位で
結合させることができる。ダイマーオリゴペプチドに対
するカルボジイミドのＩｊｔ ｒＪ、化学ｔｄ論的肘〜
約２０倍過剰又はそれ以上に変動することができる。
使用して末節６カルポキシル＾（で接合させるか、又は
カルづ？ジイミドを使用して活中コミ化エステルを製令
し、次いで抗原に接合させ、カルボキシル保護基を除去
することができる。また、特に抗）＠が多数のカルがキ
シル基を有する場合、トリえＶ［破傷風トキソイドの場
合に、アミン部位で接合できるように、アミンＡ（を選
択的に保設−する。多くの場合、ダイマー及び抗原を水
溶性カルボジイミドを用いて約１〜２００ ： １のモ
ル比で混合することができ、比較的にランダムな部位で
結合させることができる。ダイマーオリゴペプチドに対
するカルボジイミドのＩｊｔ ｒＪ、化学ｔｄ論的肘〜
約２０倍過剰又はそれ以上に変動することができる。
選択的遮断基を使用するオリゴペプチド合成の説明につ
いては、ノクラニイ（Ｂａｒａｎｙ）及びメリイフィー
ルド（Ｍｅｒｒｌｆ Ｉ＠ｌｄ） 著、ソリッド−フェ
イス・ペデタイド・シンセシス（Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓ
ｅＰｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎＴｈ＠５ｌｓ）、［ザ・ペプ
タイズ、アナリシス、シンセシス、バイオロジイ（Ｔｈ
ｅ Ｐｅｐｔｉ −ｄｅｓ、 Ａｎａｌｙｓｉｓ 、
５ｙｎｔｈｅｓｉｓ ＋ Ｂｉｏｌｏｇｙ） ｊ、パー
トＡ、２巷、グロス（Ｇｒｏ９ｓ）及びマイエンホーフ
ァー（Ｍｅｌｅｎｈｏｆｅｒ）４＋果、アカデミツク゛
プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、＝、！−ヨ
ーク、１９８０年、１〜２８４貞：チャン（Ｃｈａｎｇ
）ら者、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ（１９８０） 、 １５巻４８５〜
４９４頁；マイエンホーファーらのｎ’＋ｆ掲文献（１
９７９）１３巻３５〜４２負参１ｋ（。
いては、ノクラニイ（Ｂａｒａｎｙ）及びメリイフィー
ルド（Ｍｅｒｒｌｆ Ｉ＠ｌｄ） 著、ソリッド−フェ
イス・ペデタイド・シンセシス（Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓ
ｅＰｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎＴｈ＠５ｌｓ）、［ザ・ペプ
タイズ、アナリシス、シンセシス、バイオロジイ（Ｔｈ
ｅ Ｐｅｐｔｉ −ｄｅｓ、 Ａｎａｌｙｓｉｓ 、
５ｙｎｔｈｅｓｉｓ ＋ Ｂｉｏｌｏｇｙ） ｊ、パー
トＡ、２巷、グロス（Ｇｒｏ９ｓ）及びマイエンホーフ
ァー（Ｍｅｌｅｎｈｏｆｅｒ）４＋果、アカデミツク゛
プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、＝、！−ヨ
ーク、１９８０年、１〜２８４貞：チャン（Ｃｈａｎｇ
）ら者、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ（１９８０） 、 １５巻４８５〜
４９４頁；マイエンホーファーらのｎ’＋ｆ掲文献（１
９７９）１３巻３５〜４２負参１ｋ（。
免疫原接合体を帛法の抗体の産生に１更用することがで
きる。一般に、免疫原接合体を神々のを椎動物、特に咄
乳類に注射するか、注躬唱画は宿主を商度兎）式にする
ようにする。次に、血液を集め、グロプリンフラクシ、
ンを単離し、混合物として使用するか、又は親和性クロ
マトグラ？イによって精製する。まだ、適切な宿主を免
疫することによって多クローン性抗体よりむしろ単クロ
ーン性抗体を製造することができ、今一や古典的なミル
スタイン−コーラ−（Ｍｌ １ ａｔｅ ｉｎ−Ｋｏｈ
ｌ ｅ ｒ ）法を使用することによってノ・ブテン
に対して特異的な単クローン性抗体を製造することがで
きる。
きる。一般に、免疫原接合体を神々のを椎動物、特に咄
乳類に注射するか、注躬唱画は宿主を商度兎）式にする
ようにする。次に、血液を集め、グロプリンフラクシ、
ンを単離し、混合物として使用するか、又は親和性クロ
マトグラ？イによって精製する。まだ、適切な宿主を免
疫することによって多クローン性抗体よりむしろ単クロ
ーン性抗体を製造することができ、今一や古典的なミル
スタイン−コーラ−（Ｍｌ １ ａｔｅ ｉｎ−Ｋｏｈ
ｌ ｅ ｒ ）法を使用することによってノ・ブテン
に対して特異的な単クローン性抗体を製造することがで
きる。
択一的に、又は抗原へのダイマーオリゴペプチドの接合
と組合せて、オリゴペプチドを少なくとも３１ψ１位を
有するオリゴマーにオリゴマー化することができ、１０
個以上の部位を有していてよい。
と組合せて、オリゴペプチドを少なくとも３１ψ１位を
有するオリゴマーにオリゴマー化することができ、１０
個以上の部位を有していてよい。
オリゴマーを免疫原として単独で又−１免疫原液合体と
併用して使用することができる。カルデジ・１ミドのよ
うな活性化ノ、（を便用することによって、便利に、オ
リゴマー及び免反原炭台体を同時に製造することができ
る。種々の成分を１ν石濃ｊＪ記に使用するのが７４２
１しく 、ｔｌ！ｌ 帛、カルボジイミド及びオリゴペ
プチドＱよ約０．１Ｍよシ多い。
併用して使用することができる。カルデジ・１ミドのよ
うな活性化ノ、（を便用することによって、便利に、オ
リゴマー及び免反原炭台体を同時に製造することができ
る。種々の成分を１ν石濃ｊＪ記に使用するのが７４２
１しく 、ｔｌ！ｌ 帛、カルボジイミド及びオリゴペ
プチドＱよ約０．１Ｍよシ多い。
本発明のハゲテンをＨＢＶの診１所分析における試薬又
は生５１学的液体中のＨＢＶＫ対する抗体として使用す
ることもできる。本・Ｊａ［すｊのハプテンを種々の標
識に接合することによって、生じる接合体をＨＢＶの検
出のため抗体と共に使用するか、又Ｉｉ標識ハプテンを
ＦＩＢｓＡｇの８決定基に対する抗体の存在を１ｆｌ１
１定するため直接使用することができる。他種の標識は
放射性核種、螢光物質、化学発光物２（、酵素、粒子、
Ｒ￥ Ｊｓ 粘質及び補助因子等を包含する。
は生５１学的液体中のＨＢＶＫ対する抗体として使用す
ることもできる。本・Ｊａ［すｊのハプテンを種々の標
識に接合することによって、生じる接合体をＨＢＶの検
出のため抗体と共に使用するか、又Ｉｉ標識ハプテンを
ＦＩＢｓＡｇの８決定基に対する抗体の存在を１ｆｌ１
１定するため直接使用することができる。他種の標識は
放射性核種、螢光物質、化学発光物２（、酵素、粒子、
Ｒ￥ Ｊｓ 粘質及び補助因子等を包含する。
ＨＢＶ又はＨＢＶに対するレセプタの検出のため本発明
のハプテンと共に使用しうる種々の試薬及びゾロトコー
ルをｉ４ｅ ｔｉｔ１４している多数の％許及び文献を
入手しうる。けりえは、米国・１ケ訂ｇ ３，６９０，
８３４号、同第３，８１７，８３７号、同第３，９３５
，０７４号、同第４，２３３，４０２月及び同第４，３
１８，９８０号明細書参照。
のハプテンと共に使用しうる種々の試薬及びゾロトコー
ルをｉ４ｅ ｔｉｔ１４している多数の％許及び文献を
入手しうる。けりえは、米国・１ケ訂ｇ ３，６９０，
８３４号、同第３，８１７，８３７号、同第３，９３５
，０７４号、同第４，２３３，４０２月及び同第４，３
１８，９８０号明細書参照。
本発明のハグテ／を畠法て＃１龜することかできる。！
侍に、オリゴペプチドの同相合成を使用して本発明のハ
プテンを製造することができる。錘りの技術の説明は、
米国特許第４，１２７，５２６月明＋Ｉ′ｌｌｌ曹；絹
５回アメリカペプチドシンポジウムの会報、槓プクイヅ
（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ
）及びメリイフィールド（八１ｅｒｒｌｆｉｅｌｄ）画
集、ジョーン・ウイリイ・アンド・ソン（Ｊｏｈｎ Ｗ
ｌｌｅｙ ＆Ｓｏｎ［＋）、ニューヨーク；ノ々ラニイ
及びメリイフィールド著、ソリッド−フェイス・−ミプ
タイド・シンセシス、［ザ・梗プタイズ、アナリシス、
シンセシス、バイオロジイ」、スベシアル・メソッズ・
イン・ぜプクイド・シンセシス（ＳｐｅｃｉａｌＭｅｔ
ｈｏｄｓ Ｉｎ Ｐｅｐｔｌｄｓ ５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ） 、 ノＲ−ト Ａ１２巻、グロス
及びマイエンホーファー編集、アカテミック・ブレス、
二、−ヨーク、１９８０年ニューヨークに兄られる。た
だ１個のシスティン基が存在する場合、緩和な１ソ化を
し！用して、列えばフェリ・ソアン化物水溶ｌ＆又Ｑ；
Ｌ空気を使用してダイマーを好適に作ることができる。
侍に、オリゴペプチドの同相合成を使用して本発明のハ
プテンを製造することができる。錘りの技術の説明は、
米国特許第４，１２７，５２６月明＋Ｉ′ｌｌｌ曹；絹
５回アメリカペプチドシンポジウムの会報、槓プクイヅ
（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ
）及びメリイフィールド（八１ｅｒｒｌｆｉｅｌｄ）画
集、ジョーン・ウイリイ・アンド・ソン（Ｊｏｈｎ Ｗ
ｌｌｅｙ ＆Ｓｏｎ［＋）、ニューヨーク；ノ々ラニイ
及びメリイフィールド著、ソリッド−フェイス・−ミプ
タイド・シンセシス、［ザ・梗プタイズ、アナリシス、
シンセシス、バイオロジイ」、スベシアル・メソッズ・
イン・ぜプクイド・シンセシス（ＳｐｅｃｉａｌＭｅｔ
ｈｏｄｓ Ｉｎ Ｐｅｐｔｌｄｓ ５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ） 、 ノＲ−ト Ａ１２巻、グロス
及びマイエンホーファー編集、アカテミック・ブレス、
二、−ヨーク、１９８０年ニューヨークに兄られる。た
だ１個のシスティン基が存在する場合、緩和な１ソ化を
し！用して、列えばフェリ・ソアン化物水溶ｌ＆又Ｑ；
Ｌ空気を使用してダイマーを好適に作ることができる。
ワクチンとしで使用する場合、免疫原接合体及び／′又
はオリゴマーの通用方法は広く変動することができる。
はオリゴマーの通用方法は広く変動することができる。
死Ａワクチンの當用の投辱ブｊ法を適用づることかでき
る。これらの方法は生理学的にｉ’ｒ ｕしうる固体基
質上又は生理学的に許容しうる分散液中での１０投与、
腸管外、注射等を含む。
る。これらの方法は生理学的にｉ’ｒ ｕしうる固体基
質上又は生理学的に許容しうる分散液中での１０投与、
腸管外、注射等を含む。
ワクチンの投与ｉｔＪは投与方法に左右され、宿主の大
きさにより変動する。ワクチンは副作用を有するとして
もそれは少ないので、宿主に障吾を与えることなく、比
１級的多扇二の投Ｊｊ、 ！ｆｊを１史用することがで
きる。通ＩＡ−，ワクチンの献６、宿主の体ｇ １ ｋ
ｙ当υ約１ ｔｔｊ９〜２０ｍ１／、通常、ワクチンに
よる免疫を白土させるため通切なキセリャー又はアジ−
パントと潜行した後、皮下又Ｃ筋内内に投与して約５μ
ｙ〜２ ｍ９である。
きさにより変動する。ワクチンは副作用を有するとして
もそれは少ないので、宿主に障吾を与えることなく、比
１級的多扇二の投Ｊｊ、 ！ｆｊを１史用することがで
きる。通ＩＡ−，ワクチンの献６、宿主の体ｇ １ ｋ
ｙ当υ約１ ｔｔｊ９〜２０ｍ１／、通常、ワクチンに
よる免疫を白土させるため通切なキセリャー又はアジ−
パントと潜行した後、皮下又Ｃ筋内内に投与して約５μ
ｙ〜２ ｍ９である。
ワクチンに対するアジュバント効果を達成づるニハ、水
敵化アルミニウ五又ｔニ一般に燐酸緩ＩＩ！■艮」井水
中の０．０５〜０．１％溶液として使用される・＞、４
ｒｌアルミニウム（ａｌｕｍ）のような檗剤、Ｃ，ｐ
ａｒｖ＋＋ｍのような７ｉ１１凶ｉ′ｌｌｌ胞又は内毎
素又はダラム陰性凶のリポ多糖類成分をΩむ０．２５％
溶該として使用される糖類の合成ポリマー〔カルボボー
ル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ） ）との７１８′物、生理学的
にｇｅｌ谷しうる油性媒体、ｔ＋＋Ｊえはモノオレイン
ｔ１！２マンニドしアラセル（Ａｒａｃｅｌ）Ａ）中の
エマルジョン又ケ」、代用冊数として使用きれるパーフ
ルオロカーボン〔フルメソル（Ｆｌｕｏｓｏｌ） −Ｄ
ＡＩの２０チ溶液を含むエマルジョンを使用する等、神
々の方法がある。
敵化アルミニウ五又ｔニ一般に燐酸緩ＩＩ！■艮」井水
中の０．０５〜０．１％溶液として使用される・＞、４
ｒｌアルミニウム（ａｌｕｍ）のような檗剤、Ｃ，ｐ
ａｒｖ＋＋ｍのような７ｉ１１凶ｉ′ｌｌｌ胞又は内毎
素又はダラム陰性凶のリポ多糖類成分をΩむ０．２５％
溶該として使用される糖類の合成ポリマー〔カルボボー
ル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ） ）との７１８′物、生理学的
にｇｅｌ谷しうる油性媒体、ｔ＋＋Ｊえはモノオレイン
ｔ１！２マンニドしアラセル（Ａｒａｃｅｌ）Ａ）中の
エマルジョン又ケ」、代用冊数として使用きれるパーフ
ルオロカーボン〔フルメソル（Ｆｌｕｏｓｏｌ） −Ｄ
ＡＩの２０チ溶液を含むエマルジョンを使用する等、神
々の方法がある。
ワクチンのため特に石川な抗原としては、予備免疫さｉ
［だ宿主に対する細菌毒素、列えば、ｚｈに抗原５００
〜１０，０００ダルトン当り１１固のオリゴペプチドを
有する破傷風トキソイド又はジフテリアトキソイドがあ
る。
［だ宿主に対する細菌毒素、列えば、ｚｈに抗原５００
〜１０，０００ダルトン当り１１固のオリゴペプチドを
有する破傷風トキソイド又はジフテリアトキソイドがあ
る。
使用されるアジ−パントの最を」５、アジ−パントの性
質に応じて広く装動し、−１を走に免疫原接合体の止ｈ
（の０．１〜１００倍、史に普通にＶよ約１〜１０倍の
間で変動する。
質に応じて広く装動し、−１を走に免疫原接合体の止ｈ
（の０．１〜１００倍、史に普通にＶよ約１〜１０倍の
間で変動する。
多くの場合ｅこ、ワクチンを何回も投与するのか望まし
く、通常６回以下、更に普通には４回以下の予防接棹、
好ましく ｔｉ １回以上、通當少なくとも約３回の予
防接イ１６をする。予防仄棟は通量′２〜１２週間隔、
史にｗ３＋’ｉ４には３〜５週間隔で行なう。
く、通常６回以下、更に普通には４回以下の予防接棹、
好ましく ｔｉ １回以上、通當少なくとも約３回の予
防接イ１６をする。予防仄棟は通量′２〜１２週間隔、
史にｗ３＋’ｉ４には３〜５週間隔で行なう。
抗体の防６１１ルベルを保持するため、１〜５年の間隔
、連成３年の間１鞘で周期的にＪ ＪＪＩＩ刺激するの
が望ましい。免疫の経過をＨＢＶＫ対する抗体の分析に
よって追跡することができる。この分析は、オリゴヌク
レオチドダイマーを、前記のようなに用の伸識で標識す
ることによって行なうことができる。
、連成３年の間１鞘で周期的にＪ ＪＪＩＩ刺激するの
が望ましい。免疫の経過をＨＢＶＫ対する抗体の分析に
よって追跡することができる。この分析は、オリゴヌク
レオチドダイマーを、前記のようなに用の伸識で標識す
ることによって行なうことができる。
ラジオイム／アッセイは不均質分析の−し１ｊである。
オリゴヌクレオチドダイマーを表面、粒子又は容器の表
面に結合させ、結合し／こダイマーに血清試料を加え、
ダイマーに対する抗体が結合したダイマーと反応するの
に充分な時間、混合物を温１ｄすることによってラジオ
イム／アッセイを行なうことができる。次に、容器に放
射性核４．１１ｉ−標識ダイマーを加え、表向に結合し
た抗体を標識ダイマーが結合するのに充分な時間、処置
し、洗浄し、次に表向に結合した放射能を測定する。別
のグロトコールを使用することかできる。
面に結合させ、結合し／こダイマーに血清試料を加え、
ダイマーに対する抗体が結合したダイマーと反応するの
に充分な時間、混合物を温１ｄすることによってラジオ
イム／アッセイを行なうことができる。次に、容器に放
射性核４．１１ｉ−標識ダイマーを加え、表向に結合し
た抗体を標識ダイマーが結合するのに充分な時間、処置
し、洗浄し、次に表向に結合した放射能を測定する。別
のグロトコールを使用することかできる。
次に、実施レリに基づいて本発明を詳述するが、本発明
はこれに限定されるもので１１、ない。
はこれに限定されるもので１１、ない。
式：
のダイマーノナペプチド化汀゛吻を常法により製造した
。スチ、ワー）□ （Ｓｔｅｗａｒｔ）及びヤング（Ｙ
ｏｕｎｇ）著、ソリッド・フェイス・ベゾタイド・シン
セシス（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｌｇ）、カリフォルニア州すンフランシス
コのフリーマン社（Ｗ、Ｔｉ、Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ
Ｃｏ、）、１頁以下に記載されている操作を使用した
。クロロメチルｔ＋％Ｉ ＩＩ旨を固相担体として１吏
用し、ｔ−プチルオキシ力ルゲニルで作画されたアミノ
酸を段階的に添加した。オリゴ被プチドを、保藷基の除
去にも役立つ緩和なｒＩＦ処理（０，Ｉ Ｘ ｊ＋５ｉ
常の）Ｌ Ｆ Ｊ ｉｌ（）によって開裂させたしパー
トナーガー（Ｂｈａｔｎａｇａｒ）ら著（１，９８１）
ぺｆタイズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ） 、第７回アメリカベ
グチドシンポジウムの会報、リッチ（Ｒ１ｃｈ 、Ｄ、
ＩＬ ）及びグロス（Ｇｒｏｓｓ ＋ Ｅ） ＭｔＬｋ
、（イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）９７〜１ＯＱｊｉ：］。
。スチ、ワー）□ （Ｓｔｅｗａｒｔ）及びヤング（Ｙ
ｏｕｎｇ）著、ソリッド・フェイス・ベゾタイド・シン
セシス（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｌｇ）、カリフォルニア州すンフランシス
コのフリーマン社（Ｗ、Ｔｉ、Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ
Ｃｏ、）、１頁以下に記載されている操作を使用した
。クロロメチルｔ＋％Ｉ ＩＩ旨を固相担体として１吏
用し、ｔ−プチルオキシ力ルゲニルで作画されたアミノ
酸を段階的に添加した。オリゴ被プチドを、保藷基の除
去にも役立つ緩和なｒＩＦ処理（０，Ｉ Ｘ ｊ＋５ｉ
常の）Ｌ Ｆ Ｊ ｉｌ（）によって開裂させたしパー
トナーガー（Ｂｈａｔｎａｇａｒ）ら著（１，９８１）
ぺｆタイズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ） 、第７回アメリカベ
グチドシンポジウムの会報、リッチ（Ｒ１ｃｈ 、Ｄ、
ＩＬ ）及びグロス（Ｇｒｏｓｓ ＋ Ｅ） ＭｔＬｋ
、（イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）９７〜１ＯＱｊｉ：］。
操作Ｉ」１、半白！Ｉ；ｂ −Ａ ６４中でそれぞれ結
合した後、ＣＨ２Ｃ４２，２、Ｉ）ＭＦ及びｃｒｉ２ｃ
ｔ２で１１１′１次洗浄（それぞれ５回ずつ）し、１と
・Ｉ脂を膨潤させ、Ｃ１■２Ｃ１２で洗浄し、ＣＨ２Ｃ
４２： ）リフルオロ酢酸（１：１）（２Ｘ１５分）で
保護基を除去し、Ｃ１■２ＣＬ２（２Ｘ）、ジオキサン
−Ｃ１■２Ｃ１２（１： ］、５×）、ＣＨ２Ｃｌ２（
５×）及びＤＭＦ （５Ｘ ）で洗浄することを含む。
合した後、ＣＨ２Ｃ４２，２、Ｉ）ＭＦ及びｃｒｉ２ｃ
ｔ２で１１１′１次洗浄（それぞれ５回ずつ）し、１と
・Ｉ脂を膨潤させ、Ｃ１■２Ｃ１２で洗浄し、ＣＨ２Ｃ
４２： ）リフルオロ酢酸（１：１）（２Ｘ１５分）で
保護基を除去し、Ｃ１■２ＣＬ２（２Ｘ）、ジオキサン
−Ｃ１■２Ｃ１２（１： ］、５×）、ＣＨ２Ｃｌ２（
５×）及びＤＭＦ （５Ｘ ）で洗浄することを含む。
ＤＭＦ ： ）；ｔ３Ｎ （９： １ ） （２Ｘ１０
分：１×５分）を１更用し又中和し、次いでＤＩｖＩＦ
及びＣＨ２Ｃ６２で洗浄（それぞれ５回）する。
分：１×５分）を１更用し又中和し、次いでＤＩｖＩＦ
及びＣＨ２Ｃ６２で洗浄（それぞれ５回）する。
メリゴベグチドを製造しまた後、これをｔゼ脂から開裂
し、前記のようにＨＦを１吏川し、ＰＢＳに溶解するこ
とによって保護基を除去する。放Ｍすると、オリゴペプ
チドを二ｆｉｔ化し、清純・拒剤としてＰＢＳを用いて
Ｐ−２ｆル濾過を使用し、てダイマーをモノマ・−から
分目トシた。ダイマーは早く流出するフラクシ目ン中に
存在する。
し、前記のようにＨＦを１吏川し、ＰＢＳに溶解するこ
とによって保護基を除去する。放Ｍすると、オリゴペプ
チドを二ｆｉｔ化し、清純・拒剤としてＰＢＳを用いて
Ｐ−２ｆル濾過を使用し、てダイマーをモノマ・−から
分目トシた。ダイマーは早く流出するフラクシ目ン中に
存在する。
次に、ｐｎｓ１ｍｌ中でグイ″ｆ−２０〜、（九原２０
〃ｌ）及びエチルジメチルアミノプロビルカルボジイミ
ド２０ ｍノを使用して室温で１６時間に接合させるた
めにダイマーを使用し７″ｃ０次（こ、混合物をＰＢＳ
でうし分に’＋Ｍ析して低分子ｊｊ、”ｉ勿ｔ’ｔを除
去した。
〃ｌ）及びエチルジメチルアミノプロビルカルボジイミ
ド２０ ｍノを使用して室温で１６時間に接合させるた
めにダイマーを使用し７″ｃ０次（こ、混合物をＰＢＳ
でうし分に’＋Ｍ析して低分子ｊｊ、”ｉ勿ｔ’ｔを除
去した。
免役処置のため、６接合体（５０μｇ）を、第一回注射
には完全フロインドアジュノ々ントと混合し、その後の
注射用に不完全フロイン１°アジ、ノマントと混合し、
予め破１′ｇＪ風トキソイド（Ｔ、Ｔ、）で免疫（初回
抗原刺激）した７匹のウサギ（α−］〜α−７）に月３
回の間隔で助因内に注射した。コハク酸架橋′？ｉ、便
用してアミン末端を介してＴ、Ｔ。
には完全フロインドアジュノ々ントと混合し、その後の
注射用に不完全フロイン１°アジ、ノマントと混合し、
予め破１′ｇＪ風トキソイド（Ｔ、Ｔ、）で免疫（初回
抗原刺激）した７匹のウサギ（α−］〜α−７）に月３
回の間隔で助因内に注射した。コハク酸架橋′？ｉ、便
用してアミン末端を介してＴ、Ｔ。
に結合したモノマーノナペグテドで免疫した３匹のウサ
ギ（α−１〜α−３）に１免疫反応をほとんど又ｔ」、
全く生じなかった。これと対照的に、前記のよりなＴ、
Ｔ、と接合したダイマーノナーミプチドで免疫した４匹
のウサギ（α−４〜α−７）はＲＩＡ比１０を越える高
い免反原住〔フランシス（Ｆｒａｎｃｌｇ）ら著、アナ
ルス・オブ・インク−ナル蟲メディシン（Ａｎｎａｌｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ａ’１ｅｄｌｃｌｎｅ）（
１９８２） ９７巻、３６２〜３６６頁；八循ＶＲ１１
９８２年６月２５日、３１巻３１７〜３２１貝〕を示し
、このことはヒトにおける１（ＢＶ／ｇ染に対する免疫
の明白な証拠と考えられる。ＵＣウザギ（ＵＣ−１及び
ＵＣ−５）はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ） （パートナ−が−ら著、ＰＮＡＳ、 ＵＳＡ（１
９８２）７９ ：４４００〜４４０４）に結合したモノ
マーノナペプチドに対して比較的低い免疫反応を示した
。グイマーノナにデテド（カルデジイミド反応ＶＣより
ＫＬＨに結合）でＵＣ−５を高匣免疫状帖にすると、モ
ノマーノナペプチド（同相上で活性化することにょυア
ミノ末端を介してＫＬＨに結合）でＵＣ−１を歯間免疫
状態にした場合よシ良好な免疫反応が生じた。ＵＣ−５
における５４．９のＲＩＡ比は、従来、実験室で試験さ
れた■ＢｓＡｇの任意の合成ペプチドアナローブによっ
て達成されたうち最高の値である。この極めて強力な免
疫反応は、第４回免疫処置後にだけ得られた（下記の表
参照）。
ギ（α−１〜α−３）に１免疫反応をほとんど又ｔ」、
全く生じなかった。これと対照的に、前記のよりなＴ、
Ｔ、と接合したダイマーノナーミプチドで免疫した４匹
のウサギ（α−４〜α−７）はＲＩＡ比１０を越える高
い免反原住〔フランシス（Ｆｒａｎｃｌｇ）ら著、アナ
ルス・オブ・インク−ナル蟲メディシン（Ａｎｎａｌｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ａ’１ｅｄｌｃｌｎｅ）（
１９８２） ９７巻、３６２〜３６６頁；八循ＶＲ１１
９８２年６月２５日、３１巻３１７〜３２１貝〕を示し
、このことはヒトにおける１（ＢＶ／ｇ染に対する免疫
の明白な証拠と考えられる。ＵＣウザギ（ＵＣ−１及び
ＵＣ−５）はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ） （パートナ−が−ら著、ＰＮＡＳ、 ＵＳＡ（１
９８２）７９ ：４４００〜４４０４）に結合したモノ
マーノナペプチドに対して比較的低い免疫反応を示した
。グイマーノナにデテド（カルデジイミド反応ＶＣより
ＫＬＨに結合）でＵＣ−５を高匣免疫状帖にすると、モ
ノマーノナペプチド（同相上で活性化することにょυア
ミノ末端を介してＫＬＨに結合）でＵＣ−１を歯間免疫
状態にした場合よシ良好な免疫反応が生じた。ＵＣ−５
における５４．９のＲＩＡ比は、従来、実験室で試験さ
れた■ＢｓＡｇの任意の合成ペプチドアナローブによっ
て達成されたうち最高の値である。この極めて強力な免
疫反応は、第４回免疫処置後にだけ得られた（下記の表
参照）。
以下全白
＊）２．１の比単位は、鑵準アウサブ（Ａｕｓａｂ）試
験で１→注と考えられる。
験で１→注と考えられる。
＊」： 入手できない予１１ｉ＋ｉ免役Ｉ１１［清の
代わりに、Ｐ／Ｎ比の最も低いσ−７ウツギの初期後免
疫試料を使用した。
代わりに、Ｐ／Ｎ比の最も低いσ−７ウツギの初期後免
疫試料を使用した。
＊＊＊ 第４回児役ＭｆＪには、ＰＺＮ比はｌＯより
低かっノヒ。
低かっノヒ。
前記のテ゛−夕から明らかなとおシ、本発明のオリゴ−
ξグチドダイマーは、強い免疫反応を生じる哨乳翻にお
ける高度に活性な不動なワクチンを生じる。高い特異性
を南する抗体が向収率で得られ、これを次ＦＣ診断及び
治療に１史用することができる。
ξグチドダイマーは、強い免疫反応を生じる哨乳翻にお
ける高度に活性な不動なワクチンを生じる。高い特異性
を南する抗体が向収率で得られ、これを次ＦＣ診断及び
治療に１史用することができる。
従って、本発明は、合成操作によって０易に製造すると
とかでき、診断分析における試榮として、抗原、竹にワ
クチンとして従来使用された＃ｉ１（繭抗原に接合させ
るため、肝炎に対するワクチンとして使用するため、及
び試薬として、また、受身免疫に使用する１こめ使用す
ることもできる抗体の産生のために使用しうる、比較的
小さいオリゴペプチＰを作る前年で、便利な方法を提供
するものである。
とかでき、診断分析における試榮として、抗原、竹にワ
クチンとして従来使用された＃ｉ１（繭抗原に接合させ
るため、肝炎に対するワクチンとして使用するため、及
び試薬として、また、受身免疫に使用する１こめ使用す
ることもできる抗体の産生のために使用しうる、比較的
小さいオリゴペプチＰを作る前年で、便利な方法を提供
するものである。
以上、本発明を理解を明１咽にする目的で説明及び実施
例により詳述してきたが、特許請求の範囲内で変化、変
更を行ないうろことｋよ明らかである。
例により詳述してきたが、特許請求の範囲内で変化、変
更を行ないうろことｋよ明らかである。
特許出願人
ザ リージェンツ オツ ザ ユニパーシティオプ カ
リフォルニア 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 弁理士 西 舘 和 之 弁理士 内 １）幸 男 弁理士 山 口 昭 之 弁理士 西 山 雅 也
リフォルニア 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 弁理士 西 舘 和 之 弁理士 内 １）幸 男 弁理士 山 口 昭 之 弁理士 西 山 雅 也
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ダイマーの６鎖に１５個以下のアミノ酸を有するグ
イマーオリゴペゾテドを、免疫反応を生ずる条件下に、
咄乳類宿主に投与することから成シ、前記ダイマーの９
個の成分の配列がＢＩＪｌ肝炎表面抗原の１３９〜１４
７番のアミノ酸のアミノ酸セグメントに免疫学的に類似
しておυ、前記ダイマーが前記宿主に対する抗原に接合
していることを特徴とする肝炎に対する哺乳類宿主の免
疫方法。 ２、前記鎖のそれぞれが９個のアミノ酸成分を有し、前
記ダイマーの成分がＢ型肝炎表面抗原のアミノ酸１３９
〜１４６及びＣ−末端アミノ酸としてα−アミノ醋酸を
有し、成分かシスチンのジスルフィド結合を介して結合
されている特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、前記抗原が破傷風トキソイドであシ、前記？ｄ主が
前記破傷風トキソイドて予め免疫されている特許請求の
範囲第１項又は第２項記載の方法。 ４、前記抗原がジフテリアトキソイドであり、前記宿主
が前記ジフテリアトキソイドで予め免疫されている特ｆ
ｔ’Ｆ請求の範囲第１項又ｔｉ第２項記載の方法。 ５、前記のダイマーオリゴペゾチドを水性媒体中でカル
ボジイミドで活性化することによって前記抗原に結合さ
ぜる特ｔ′ｆ精求の範囲第１項記載の方法。 ６．６鎖に１５個以下のアミノ酸を有するダイマーオリ
ゴペゾテドを含み、前記ダイマーの各４真の成分のそれ
ぞれがＢ型肝炎表面抗原の１３９〜１４７番のアミノ酸
のアミンセグメントに免疫学的に類似しており、前記ダ
イマーが所定の宿主に対する免疫原に接合して免疫原性
接合体を生じ、前０１２免疫原住接合体が生理学的に許
容しうる媒体中に分散されていることを特徴とする特ｇ
午請求の範囲第１項記載の方法に有用なワクチン組成物
。 ７、 前記のグイマーオリゴペグチドがＢ型肝炎表向抗
原のアミノ酸１３９〜１４６のアミノ酸セグメント及び
１４７位の天然アミノｉ賀の代ゎυにＣ−末ｙ１「アミ
ノ＋’ｉ＜２とＬ７でα−アミノ陥酸から成シ、ダイマ
ーがシスチンのジスルフィ１゛粕＠にょって結合されて
いる４ｉ ｔｔ’＋’ ｆｉｎ求の範囲ｅｑ６ｔｒ−ｉ
記賊のワクチン。 ８、前記免疫原が破傷風トキソイドである特許請求の範
囲第６ ｆＪ４又ｔ、１．第７項記載のワクチン。 ９、前記免疫原がジフテリアトキソイドである％８′［
請求の範囲第６項又は第７項記載のワクチン。 ” ｆｉｔＩＭｔ タイマーが水性媒体中でカルボジイ
ミドで活性化することによって前記免疫原に接合されて
いる’ｔ、′１ｒ（Ｆ ｆ清水の範囲第６項ｄ１２載の
ワクチン。 １１、式： Ｃ式中Ｂ）ユヒドロキシル基又は水性媒体中でポリペプ
チドとアミド結合を形成するエステルを生じるヒドロキ
シル化合物の残シ（である〕の化合物。 １２、水溶性カルボジイミドによって抗原に結合された
！侍ｄ′ｆ錆求の利り同第１１項記）我の化自動を宮む
組成物。 Ｊ３、前記抗原が級偏臓）・キソイドである特＃’ｌ’
Ａｌ”Ｉ求のｉｉｑχ囲第１２項ＭＬ載の組成物。 】４．前記抗原がジフテリアトキソイドであるｔ特許請
求の範囲第１２項記載の組成物。 １５、后原体のハプテン決定部位及び破傷風トキソイド
又はジフテリアトキソイｌ゛抗原の接合体を含むワクチ
ン。 １６、前記病原体がウィルスであシ、１４’Ｊ記抗原が
破傷風トキソイドである％ Ｓ’Ｆ請求のＩ記囲第１５
項日己載のワクチン。
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| US432580 | 1982-10-04 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| JPS5970622A true JPS5970622A (ja) | 1984-04-21 |
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Family Applications (1)
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Cited By (1)
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- 1983-09-01 ES ES525284A patent/ES525284A0/es active Granted
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