JPS61241662A - アミノ酸分析装置 - Google Patents
アミノ酸分析装置Info
- Publication number
- JPS61241662A JPS61241662A JP8247685A JP8247685A JPS61241662A JP S61241662 A JPS61241662 A JP S61241662A JP 8247685 A JP8247685 A JP 8247685A JP 8247685 A JP8247685 A JP 8247685A JP S61241662 A JPS61241662 A JP S61241662A
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- JP
- Japan
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- amino acid
- buffer soln
- buffer
- ammonia
- plateau
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
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- Pathology (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、蛋白加水分解物アミノ酸を対象とするアミノ
酸分析装置に係り、特にアンモニアプラトウの影響を受
けないアミノ酸分析装置に関する。
酸分析装置に係り、特にアンモニアプラトウの影響を受
けないアミノ酸分析装置に関する。
複数の緩衝液を段階的に切換えて行なう方式のアミノ酸
分析において、１本のカラムによって分析する場合、分
析の途中で、第２図（Ａ）のｄに示すようなベースライ
ンの台形状の浮上り現象（以下アンモニアプラトウと称
する）が現われる。
分析において、１本のカラムによって分析する場合、分
析の途中で、第２図（Ａ）のｄに示すようなベースライ
ンの台形状の浮上り現象（以下アンモニアプラトウと称
する）が現われる。
この原因は、低ｐＨ域の緩衝液に含まれるアンモニア成
分が一時的にカラムで濃縮されたものが、高ｐＨ域のも
しくは高Ｎａイオン濃度の緩衝液で一度に溶出されたも
のである。このプラトウがあると、正確なピーク面積の
測定が困難となる。これを避ける一例として特公昭５５
−２４５８４号公報に述べられているように、高架橋度
のイオン交換樹脂を用いたアンモニアフィルタカラムを
用いる方法がある。
分が一時的にカラムで濃縮されたものが、高ｐＨ域のも
しくは高Ｎａイオン濃度の緩衝液で一度に溶出されたも
のである。このプラトウがあると、正確なピーク面積の
測定が困難となる。これを避ける一例として特公昭５５
−２４５８４号公報に述べられているように、高架橋度
のイオン交換樹脂を用いたアンモニアフィルタカラムを
用いる方法がある。
しかし、この方法では、高価なアンモニアフィルタカラ
ムが必要で、かつ、そのカラムを洗浄再生するために、
更に平衡化時間を要する。
ムが必要で、かつ、そのカラムを洗浄再生するために、
更に平衡化時間を要する。
本発明の目的は、アンモニアフィルタカラムを使用しな
くてもアンモニアプラトウによる妨害を避けることがで
き、よりピーク面積計算の精度をｉげ、かつ高感度な分
析を行なうことのできるアミノ酸分析装置を提供するこ
とにある。
くてもアンモニアプラトウによる妨害を避けることがで
き、よりピーク面積計算の精度をｉげ、かつ高感度な分
析を行なうことのできるアミノ酸分析装置を提供するこ
とにある。
本発明者らは、アンモニアプラトウと重なって現われる
ヒスチジンが従来の塩基性アミノ酸溶出用緩衝液よりも
高いｐＨで、かつ低いＮａイオン濃度の緩衝液を塩基性
アミノ酸溶出領域の前半に流すことによって大幅に溶出
が早まり、同時にアンモニアプラトウが後退することを
見い出した。
ヒスチジンが従来の塩基性アミノ酸溶出用緩衝液よりも
高いｐＨで、かつ低いＮａイオン濃度の緩衝液を塩基性
アミノ酸溶出領域の前半に流すことによって大幅に溶出
が早まり、同時にアンモニアプラトウが後退することを
見い出した。
このため、アンモニアプラトウは孤立化し、塩基性アミ
ノ酸成分が正確にかつ高感度に定量することができる。
ノ酸成分が正確にかつ高感度に定量することができる。
このように、本発明は複数の緩衝液を段階的またはグラ
ジェント方式に切換えて行なうアミノ酸分析装置におい
て、塩基性アミノ酸溶出領域の前半の緩衝液のｐＨが第
４緩衝液のｐＨよりも高く、かつＮａイオン濃度が低く
するものである。
ジェント方式に切換えて行なうアミノ酸分析装置におい
て、塩基性アミノ酸溶出領域の前半の緩衝液のｐＨが第
４緩衝液のｐＨよりも高く、かつＮａイオン濃度が低く
するものである。
〔発明の実施例〕
以下、本発明の実施例について説明する。
第１図は、アミノ酸分析装置の構成を示す流路系説明図
である。第１緩衝液１から第４緩衝液４および再生液５
までの中から、電磁弁シリーズ６によって１つの緩衝液
が選択され、緩衝液ポンプ７によって、オートサンプラ
１０を経由し、分析カラム１１に送られる。ここで分離
した各アミノ酸は、ニンヒドリンポンプ９によって送ら
れたニンヒドリン試薬８とミキサ１２で混合し、反応コ
イル１３で反応する。ここで発色したアミノ酸は光度計
１４で連続的に検知され、クロマトグラムとなって記録
計１５に記録される。
である。第１緩衝液１から第４緩衝液４および再生液５
までの中から、電磁弁シリーズ６によって１つの緩衝液
が選択され、緩衝液ポンプ７によって、オートサンプラ
１０を経由し、分析カラム１１に送られる。ここで分離
した各アミノ酸は、ニンヒドリンポンプ９によって送ら
れたニンヒドリン試薬８とミキサ１２で混合し、反応コ
イル１３で反応する。ここで発色したアミノ酸は光度計
１４で連続的に検知され、クロマトグラムとなって記録
計１５に記録される。
以上の構成において、使用する緩衝液１〜４および再生
液５の組成、ｐＨおよびＮａイオン濃度は第１表に示す
通りである。
液５の組成、ｐＨおよびＮａイオン濃度は第１表に示す
通りである。
これ等の緩衝液を段階的に１から５まで切換えて分析し
たものが第２図（Ａ）に示すクロマトグラムである。こ
の図に示すように従来法によれば塩基性アミノ酸ａ（リ
ジン）、Ｃ（ヒスチジン）、小さいと、′その有無の判
定が困難になる。
たものが第２図（Ａ）に示すクロマトグラムである。こ
の図に示すように従来法によれば塩基性アミノ酸ａ（リ
ジン）、Ｃ（ヒスチジン）、小さいと、′その有無の判
定が困難になる。
そこで以上の欠点をなくすため、定量の必要なアミノ酸
成分であるリジンａおよびヒスチジンＣがこれらプラト
ウｄと重ならないようにプラトウの前に油出させる手段
を検討したところ、第２図（Ｂ）のクロマトグラムが得
られた。
成分であるリジンａおよびヒスチジンＣがこれらプラト
ウｄと重ならないようにプラトウの前に油出させる手段
を検討したところ、第２図（Ｂ）のクロマトグラムが得
られた。
すなわも、ヒスチジンＣは第４緩衝液のｐＨよりももつ
とｐＨを高めることによって溶出が早められるとき見い
出し、またアンモニア成分９およびアンモニアプラトウ
ｄは、第４緩衝液のＮａイオン濃度よりももつと下げる
ことによって、溶出が遅′・れる現象を亘い出したもの
である。
とｐＨを高めることによって溶出が早められるとき見い
出し、またアンモニア成分９およびアンモニアプラトウ
ｄは、第４緩衝液のＮａイオン濃度よりももつと下げる
ことによって、溶出が遅′・れる現象を亘い出したもの
である。
第３゛向に塩基性アミノ酸ａ ” ｅのピーク位置移動
の状態を示す。第３図（Ａ）は従来例を示す。
の状態を示す。第３図（Ａ）は従来例を示す。
これに対し第３図（Ｂ）は、第４緩衝液４のｐＨよりも
高いｐＨの緩衝液を塩基性アミノ酸溶出領域の前半に与
えたものである。ヒスチジン２３の溶出がきわめて早く
なっていることを示す。第３図（Ｃ）は（Ｂ）に対して
、第４緩衝液４のＮａイオン濃度よりも低い濃度の緩衝
液４′を塩基性アミノ酸溶出領域の前半に与えたもので
ある。アンモニア成分すおよびアンモニアプラトウｄの
溶出がより遅くなっていることシ示す。
高いｐＨの緩衝液を塩基性アミノ酸溶出領域の前半に与
えたものである。ヒスチジン２３の溶出がきわめて早く
なっていることを示す。第３図（Ｃ）は（Ｂ）に対して
、第４緩衝液４のＮａイオン濃度よりも低い濃度の緩衝
液４′を塩基性アミノ酸溶出領域の前半に与えたもので
ある。アンモニア成分すおよびアンモニアプラトウｄの
溶出がより遅くなっていることシ示す。
以上によりヒスチジンＣとリジンａは完全にアンモニア
プラトウｄと分離させることができる。
プラトウｄと分離させることができる。
そのクロマトグラムを第２図（Ｂ）に示す、また、ｐＨ
および、Ｎａイオン濃度の切換ステップを第４図に示す
。実線が従来例、途中の破線部分が本発明なるステップ
である。
および、Ｎａイオン濃度の切換ステップを第４図に示す
。実線が従来例、途中の破線部分が本発明なるステップ
である。
実際にこの破線部分のステップを加える方法としては、
新たに緩衝液４′をこの行程に加える方法もあるが、緩
衝液４と再生液５を７０ ： ３０の割合でグラジェン
ト混合（電磁弁の０Ｎ−ＯＦＦの時間を７０：３０の割
合で制御する。）する方法も有効である。
新たに緩衝液４′をこの行程に加える方法もあるが、緩
衝液４と再生液５を７０ ： ３０の割合でグラジェン
ト混合（電磁弁の０Ｎ−ＯＦＦの時間を７０：３０の割
合で制御する。）する方法も有効である。
本発明の実施例には次の効果がある。
■ ヒスチジンＣ、リジンａ、アルギニンｅがアンモニ
アプラトウｄと完全に切離せるので、べ定できるので、
より高感度な分析ができる。
アプラトウｄと完全に切離せるので、べ定できるので、
より高感度な分析ができる。
■ アンモニアフィルタカラムが不要である。
■ 同上の理由で１．分析カラムの再生時間、平衡化時
間をより短縮化することができる。（アンモニアフィル
タカラムも同時に再生、平衡化する必要がない。） ■ 緩衝液４′は、新たに追加しなくても、緩衝液４と
再生液５のグラジェント混合によって得ることができる
。
間をより短縮化することができる。（アンモニアフィル
タカラムも同時に再生、平衡化する必要がない。） ■ 緩衝液４′は、新たに追加しなくても、緩衝液４と
再生液５のグラジェント混合によって得ることができる
。
以上説明したように、本発明によれば、分析に必要とす
るアミノ酸成分をアンモニアプラトウと重複しないよう
にすることができる。
るアミノ酸成分をアンモニアプラトウと重複しないよう
にすることができる。
第１図はアミノ酸分析装置の構成を示す流路説明図、第
２図は従来法と本発明で得られたクロマトグラム、第３
図は塩基性アミノ酸のｐＨおよび、Ｎａイオン濃度の影
響を示すピーク位置移動を示す図、第４図はｐＨとＮａ
イオン濃度の切換ステップを図解した図である。 １・・・第１緩衝液、２・・・第２緩衝液、３・・・第
３緩衝液、４・・・第４緩衝液、５・・・再生液、６・
・・電磁弁シリーズ、７・・・緩衝液ポンプ、８・・・
ニンヒドリン試薬、９・・・ニンヒドリンポンプ、１０
・・・オートサンプラ、１１・・・分析カラム、１２・
・・ミキサ、１３・・・反応コイル、１４・・・光度計
、１５・・・記録計、１６・・・アンモニアフィルタカ
ラム。
２図は従来法と本発明で得られたクロマトグラム、第３
図は塩基性アミノ酸のｐＨおよび、Ｎａイオン濃度の影
響を示すピーク位置移動を示す図、第４図はｐＨとＮａ
イオン濃度の切換ステップを図解した図である。 １・・・第１緩衝液、２・・・第２緩衝液、３・・・第
３緩衝液、４・・・第４緩衝液、５・・・再生液、６・
・・電磁弁シリーズ、７・・・緩衝液ポンプ、８・・・
ニンヒドリン試薬、９・・・ニンヒドリンポンプ、１０
・・・オートサンプラ、１１・・・分析カラム、１２・
・・ミキサ、１３・・・反応コイル、１４・・・光度計
、１５・・・記録計、１６・・・アンモニアフィルタカ
ラム。
Claims (1)
- １、複数個の緩衝液を段階的またはグラジエント方式に
切換えて供給するアミノ酸分析装置において、塩基性ア
ミノ酸溶出領域の前半の緩衝液のｐＨが第４緩衝液のｐ
Ｈよりも高く、かつＮａイオン濃度が該第４緩衝液のＮ
ａイオン濃度よりも低くしたことを特徴とするアミノ酸
分析装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8247685A JPS61241662A (ja) | 1985-04-19 | 1985-04-19 | アミノ酸分析装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8247685A JPS61241662A (ja) | 1985-04-19 | 1985-04-19 | アミノ酸分析装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61241662A true JPS61241662A (ja) | 1986-10-27 |
Family
ID=13775565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8247685A Pending JPS61241662A (ja) | 1985-04-19 | 1985-04-19 | アミノ酸分析装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61241662A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63187153A (ja) * | 1987-01-30 | 1988-08-02 | Hitachi Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2009085747A (ja) * | 2007-09-28 | 2009-04-23 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析方法およびアミノ酸分析装置 |
-
1985
- 1985-04-19 JP JP8247685A patent/JPS61241662A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63187153A (ja) * | 1987-01-30 | 1988-08-02 | Hitachi Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP4704824B2 (ja) * | 2005-07-08 | 2011-06-22 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2009085747A (ja) * | 2007-09-28 | 2009-04-23 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析方法およびアミノ酸分析装置 |
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