JPS61180725A - 乳ガン細胞表面抗原に特異的なモノクロ−ナル抗体 - Google Patents
乳ガン細胞表面抗原に特異的なモノクロ−ナル抗体Info
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- JPS61180725A JPS61180725A JP60274294A JP27429485A JPS61180725A JP S61180725 A JPS61180725 A JP S61180725A JP 60274294 A JP60274294 A JP 60274294A JP 27429485 A JP27429485 A JP 27429485A JP S61180725 A JPS61180725 A JP S61180725A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はモノクローナル抗体に関し、より詳しくは乳ガ
ンｇｌ胞表面に見い出される抗原と反応するモノクロー
ナル抗体に関する。
ンｇｌ胞表面に見い出される抗原と反応するモノクロー
ナル抗体に関する。
発明の背景
抗体は医学診断上、例えば血液型の判定や生物学的実験
において長い開側用されてき次。ケーラーおよびミルス
タイン（Ｋ８ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄＭｉｌｓｔｅｉ
ｎ、 Ｕ、： Ｎａｔｕｒｅ （Ｌｏｎｄｏｎ） ２５
６゜４９５−４９７．１９７５）によって、均−且つ極
めて特異的な抗体を得ることの゛できる七ツクローナル
抗体産生技術が進歩したことに伴い、抗体の有用性は著
しく増加した。従来用いられてきたそして多くの抗原決
定基と反応する各種抗体分子の実質的には不均一な混合
物である抗体画分とは異なり、モノクローナル抗体中の
分子は全て同一でありまた一般的には単一の抗原決定基
或いは電解の極めて関連の深い抗原決定基群と反応する
。
において長い開側用されてき次。ケーラーおよびミルス
タイン（Ｋ８ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄＭｉｌｓｔｅｉ
ｎ、 Ｕ、： Ｎａｔｕｒｅ （Ｌｏｎｄｏｎ） ２５
６゜４９５−４９７．１９７５）によって、均−且つ極
めて特異的な抗体を得ることの゛できる七ツクローナル
抗体産生技術が進歩したことに伴い、抗体の有用性は著
しく増加した。従来用いられてきたそして多くの抗原決
定基と反応する各種抗体分子の実質的には不均一な混合
物である抗体画分とは異なり、モノクローナル抗体中の
分子は全て同一でありまた一般的には単一の抗原決定基
或いは電解の極めて関連の深い抗原決定基群と反応する
。
従ってモノクローナル抗体は従来の不均一な抗体画分よ
りもはるかに正確に特定物質の存在を検出する試験たり
うる。モノクローナル抗体の正確な選択性はガン細胞の
ような選択された生物学的物質に対する特に診断上の目
的で有用であるが、治療薬としても有用である。モノク
ローナル抗体は従来知られていなかった生物学的物質を
検、出し単離するために用いられてきた。
りもはるかに正確に特定物質の存在を検出する試験たり
うる。モノクローナル抗体の正確な選択性はガン細胞の
ような選択された生物学的物質に対する特に診断上の目
的で有用であるが、治療薬としても有用である。モノク
ローナル抗体は従来知られていなかった生物学的物質を
検、出し単離するために用いられてきた。
一般的に、モノクローナル抗体は生物学的標本または他
の異物をもって動物を免疫し、該動物から抗体−産生細
胞を得、この抗体−産生細胞と新生物［６株、例えば腫
瘍細胞とを細胞融合させてハイプリドーマを形成させ、
これを単離し単一クローンとして培養することによって
産生される。
の異物をもって動物を免疫し、該動物から抗体−産生細
胞を得、この抗体−産生細胞と新生物［６株、例えば腫
瘍細胞とを細胞融合させてハイプリドーマを形成させ、
これを単離し単一クローンとして培養することによって
産生される。
コノモノクローン性ハイプリドーマは生体外で培養する
こともまた宿主動物内で腫瘍として生育させることもで
きる。各抗体−産生細胞は単一かつ特異的な抗体’ｔ−
ｉｌ生するので、バイブリド０−マのモノク四−ン性培
養は各々均一な抗体画分を産生じ、この抗体画分は生体
外でハイグリドーマを培養した培養液または腫瘍に感染
させた宿主動物の腹水或いは血清から得ることができる
。
こともまた宿主動物内で腫瘍として生育させることもで
きる。各抗体−産生細胞は単一かつ特異的な抗体’ｔ−
ｉｌ生するので、バイブリド０−マのモノク四−ン性培
養は各々均一な抗体画分を産生じ、この抗体画分は生体
外でハイグリドーマを培養した培養液または腫瘍に感染
させた宿主動物の腹水或いは血清から得ることができる
。
抗体−産生細胞と新生物細胞との融合によって得られる
ハイブリドーマクローンの全てが所望する異物や抗原に
対し特異的であるとは限らない。
ハイブリドーマクローンの全てが所望する異物や抗原に
対し特異的であるとは限らない。
何故なら、多くのバイブリド９−マは接種された動物が
産生じた他の異物と反応しうる抗体をそのまま産生しう
るからである。異る細胞が産生ずる抗体は同一分子の異
る抗原決定基と反広しうろことから目的とする抗原に対
するモノクローナル抗体でさえも由来するり、ローン間
で異っているといえる。それ故、各クローンにおいて生
じる抗体或は抗体含有−培養液、血清、腹水などを得、
さらに標的とする生物学的物質との反応性や、もし認め
られるなら他物質との反応性から、そのものの特異性を
試験する必要があるといえる。各クローン由来の抗体を
特徴ずける必要性はモノクローナル抗体産生における複
雑性を増加させるが、調製が可能ならば均一抗体の多様
性は研究者にとって体細胞の構造と発育を実測するうえ
で極めて的確な手段をもたらすといえる。
産生じた他の異物と反応しうる抗体をそのまま産生しう
るからである。異る細胞が産生ずる抗体は同一分子の異
る抗原決定基と反広しうろことから目的とする抗原に対
するモノクローナル抗体でさえも由来するり、ローン間
で異っているといえる。それ故、各クローンにおいて生
じる抗体或は抗体含有−培養液、血清、腹水などを得、
さらに標的とする生物学的物質との反応性や、もし認め
られるなら他物質との反応性から、そのものの特異性を
試験する必要があるといえる。各クローン由来の抗体を
特徴ずける必要性はモノクローナル抗体産生における複
雑性を増加させるが、調製が可能ならば均一抗体の多様
性は研究者にとって体細胞の構造と発育を実測するうえ
で極めて的確な手段をもたらすといえる。
発明の要約
ヒト乳ガン細胞にム〈見い出される抗原に対して特異的
なモノクローナル抗体が産生される。マウスにヒト乳ガ
ン細胞を接種し、該接種マウスからｌＩ！臓細胞かりン
ノセ節細胞を調製し、これをマウス腫瘍細胞と融合させ
る。融合細胞の単一培養を起し、その後モノクローンか
ら得た抗体について無作為に調製した各種のヒト乳ガン
組織との反応性を試験する。目的とする性質を有する抗
体を産生ずる単一培養を選択するために、ヒト正常細胞
および他のヒト腫瘍細胞を含む他の＃１胞と抗体との反
応性を試験する。１つのハイプリドーマクローンが産生
ずる七ツクローナル抗体は乳ガン細胞表面抗原と反応し
、このモノクローナル抗体は特に乳ガンの診断に有用で
ある。また該抗体は乳ガンに対する薬剤としても有用で
ありうる。
なモノクローナル抗体が産生される。マウスにヒト乳ガ
ン細胞を接種し、該接種マウスからｌＩ！臓細胞かりン
ノセ節細胞を調製し、これをマウス腫瘍細胞と融合させ
る。融合細胞の単一培養を起し、その後モノクローンか
ら得た抗体について無作為に調製した各種のヒト乳ガン
組織との反応性を試験する。目的とする性質を有する抗
体を産生ずる単一培養を選択するために、ヒト正常細胞
および他のヒト腫瘍細胞を含む他の＃１胞と抗体との反
応性を試験する。１つのハイプリドーマクローンが産生
ずる七ツクローナル抗体は乳ガン細胞表面抗原と反応し
、このモノクローナル抗体は特に乳ガンの診断に有用で
ある。また該抗体は乳ガンに対する薬剤としても有用で
ありうる。
ヒト乳ガンは現在アメリカにおける女性のガンによる死
亡の第１の原因であり、毎年１５ＱＯＯＯÅ以上の新し
い患者が乳ガンと診断されている。
亡の第１の原因であり、毎年１５ＱＯＯＯÅ以上の新し
い患者が乳ガンと診断されている。
ヒト乳ガンの組織病理学的分類は現在のところ形態的記
述のみに依存している。約８０チは浸潤性管状ガンであ
り、１０チは浸潤性小葉状ガンであり、残る１０％が＠
管内のガンを含む多様な組織学的形態からなる。しかし
炎症性ガンを除いて、大体のところ形態は診断上の予後
や治療指針の良い基準たりえないことが明らかとなって
きている。
述のみに依存している。約８０チは浸潤性管状ガンであ
り、１０チは浸潤性小葉状ガンであり、残る１０％が＠
管内のガンを含む多様な組織学的形態からなる。しかし
炎症性ガンを除いて、大体のところ形態は診断上の予後
や治療指針の良い基準たりえないことが明らかとなって
きている。
事実、病気の程ＩＪｊ（腫瘍の大きさや結節の確実性）
が臨床上の取扱いを決定してき穴。最近になって、エス
トロゲンおよびプロゲステロンリセプター決定法の出現
に伴い、悪性腫瘍乳細胞の生物学的特徴と関連づけて臨
床上の変化をもたせることが始まった。
が臨床上の取扱いを決定してき穴。最近になって、エス
トロゲンおよびプロゲステロンリセプター決定法の出現
に伴い、悪性腫瘍乳細胞の生物学的特徴と関連づけて臨
床上の変化をもたせることが始まった。
本発明によると、一般的にヒト乳ガン細胞と反応し、特
に乳細胞腫瘍表面に多く存在する細胞表面抗原と反応す
るモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマが調製
される。この抗体は試験に用いた２９の無作為に得たヒ
ト乳ガンのうち２６と反応し、正常なヒト胸部上皮細胞
、腎近位の細管、皮膚、食道および唾液腺とより弱く反
応するが、実′ぼ的には他のいずれの正常組織の細胞と
も反応せず、試験した他の悪性腫瘍組織１７のうち１３
と反応しなかつ喪。乳ガン組織は無作為に選んだのであ
るから、該抗体は他の無作為に選んだヒト乳ガン組織と
もほぼ同じ比率で反応するととが期待される。該抗体は
ヒト乳ガンに多く見られる抗原を検出するので、ヒト乳
ガンが由来する細胞系統を決定するのに有用であり、東
に乳ガンの治療に臨床的に用いうる可能性を有している
。
に乳細胞腫瘍表面に多く存在する細胞表面抗原と反応す
るモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマが調製
される。この抗体は試験に用いた２９の無作為に得たヒ
ト乳ガンのうち２６と反応し、正常なヒト胸部上皮細胞
、腎近位の細管、皮膚、食道および唾液腺とより弱く反
応するが、実′ぼ的には他のいずれの正常組織の細胞と
も反応せず、試験した他の悪性腫瘍組織１７のうち１３
と反応しなかつ喪。乳ガン組織は無作為に選んだのであ
るから、該抗体は他の無作為に選んだヒト乳ガン組織と
もほぼ同じ比率で反応するととが期待される。該抗体は
ヒト乳ガンに多く見られる抗原を検出するので、ヒト乳
ガンが由来する細胞系統を決定するのに有用であり、東
に乳ガンの治療に臨床的に用いうる可能性を有している
。
乳ガン細胞系Ｍ Ｃｒ −７に対するモノクローナル抗
体が前出のケーラーおよびミルシュタインの手法を用い
て産生された。乳ガン細胞系ＭＣｆ’−７〔ソウル（Ｓ
ｏｕｌｅ、 ｋｌ、 Ｄ、） ら、ＪＰ４ＣＩ、５１
：１４０９〜１４１３（１９７３））を１０チウシ胎児
血清およびＮＥＡＡ（８，９■／Ｉｔ Ｌ−アラニン、
１５．０１ｑ／皇 Ｌ−アスパラギン、１３．３１Ｎｉ
／Ｉ Ｌ−アスパラギン酸、 １４．７ｍｑ／Ｉ
Ｌ−グルｐミン酸、 ７．５１ｆ／Ｉ Ｌ−／リ
ンノ。
体が前出のケーラーおよびミルシュタインの手法を用い
て産生された。乳ガン細胞系ＭＣｆ’−７〔ソウル（Ｓ
ｏｕｌｅ、 ｋｌ、 Ｄ、） ら、ＪＰ４ＣＩ、５１
：１４０９〜１４１３（１９７３））を１０チウシ胎児
血清およびＮＥＡＡ（８，９■／Ｉｔ Ｌ−アラニン、
１５．０１ｑ／皇 Ｌ−アスパラギン、１３．３１Ｎｉ
／Ｉ Ｌ−アスパラギン酸、 １４．７ｍｑ／Ｉ
Ｌ−グルｐミン酸、 ７．５１ｆ／Ｉ Ｌ−／リ
ンノ。
ｔｘ、５Ｉ１１９／ｎ ：Ｌ−プロリン、１０．５■
／皇 Ｌ−七リン）Ｉｋ含むＤＭｇＭ中で培養した。
／皇 Ｌ−七リン）Ｉｋ含むＤＭｇＭ中で培養した。
ＢＡＬＢ１０マウスに３週間毎に合計３〜４回の注射と
なるようにＭＣＦ−７細胞を１０６ 個腹腔内注射して
接種した。最終接種の３日後にマウスを殺して脾臓を摘
出した。脾臓細胞懸濁液を調製し、得られる細胞懸濁液
を無蛋白質のグルベコ−変法イーグル培地を用いて２回
遠心分離操作（８００ｘｇ）することにより洗滌した。
なるようにＭＣＦ−７細胞を１０６ 個腹腔内注射して
接種した。最終接種の３日後にマウスを殺して脾臓を摘
出した。脾臓細胞懸濁液を調製し、得られる細胞懸濁液
を無蛋白質のグルベコ−変法イーグル培地を用いて２回
遠心分離操作（８００ｘｇ）することにより洗滌した。
Ｊｐ！備より得た抗体−産生細胞は、単独にては複製す
ることがなく、培養不ｏＪ能であるから、生体内外に於
いて単独に培養５ｆ能な細胞と融合させる。
ることがなく、培養不ｏＪ能であるから、生体内外に於
いて単独に培養５ｆ能な細胞と融合させる。
この操作で得た融合ハイブリドーマの遺伝的および代謝
的過程は各々の親細胞の特徴を有しておりさらに得られ
た細胞のあるものは単独に複製する能力および抗体−産
生親細胞の特徴をもちうる。
的過程は各々の親細胞の特徴を有しておりさらに得られ
た細胞のあるものは単独に複製する能力および抗体−産
生親細胞の特徴をもちうる。
ある種の挿ＩＩＪ＃ｌ胞、特に骨髄腫細胞は、抗体−産
生細胞と好都合に融合し、ハイプリドーマを供給しうる
。この場合、腫瘍細胞並びに抗体−産生細胞は、起源細
胞の遺伝的、生化学的性質が適合し生Ｗ可能で安定なバ
イブリド°−マを産生ずる可能性を強める為にも同一動
物由来である必然性はないが同一であることが望ましい
といえる。多くの骨髄腫細胞系は特徴づけられているこ
とから、本特許明細書では、ストッカー（Ｊ、 ５ｔａ
ｃｋｏｒ） がＲｅ５ｅａｒｃｈ Ｄｉｓｃｌｏｓｕ
ｒｅ ２１７１３．１５５〜１５７（１９８２）で記述
しており、スイス、バーゼルのチオ・スタチリン（Ｔｈ
ｅｏ ５ｔａｃｈｌｉｎ）博士から恵与されたマウス由
来の非抗体−産生性骨髄腫細胞系ＦＡＩを用いてハイプ
リドーマを調製し声。
生細胞と好都合に融合し、ハイプリドーマを供給しうる
。この場合、腫瘍細胞並びに抗体−産生細胞は、起源細
胞の遺伝的、生化学的性質が適合し生Ｗ可能で安定なバ
イブリド°−マを産生ずる可能性を強める為にも同一動
物由来である必然性はないが同一であることが望ましい
といえる。多くの骨髄腫細胞系は特徴づけられているこ
とから、本特許明細書では、ストッカー（Ｊ、 ５ｔａ
ｃｋｏｒ） がＲｅ５ｅａｒｃｈ Ｄｉｓｃｌｏｓｕ
ｒｅ ２１７１３．１５５〜１５７（１９８２）で記述
しており、スイス、バーゼルのチオ・スタチリン（Ｔｈ
ｅｏ ５ｔａｃｈｌｉｎ）博士から恵与されたマウス由
来の非抗体−産生性骨髄腫細胞系ＦＡＩを用いてハイプ
リドーマを調製し声。
なおここで使用しうる細胞系はＰ３Ｎ５１．Ｙ３゜５Ｐ
２１０およびその誘導体であるが、これに限定されるこ
となく他の腫瘍細胞系も含まれることを了解すべきであ
る。
２１０およびその誘導体であるが、これに限定されるこ
となく他の腫瘍細胞系も含まれることを了解すべきであ
る。
抗体を産生じない骨髄軸系を選択することは、生じたハ
イプリドーマが親牌細胞またはリンパ節細胞起源の抗体
を産生ずるのみでありうるため有利である。このことは
このような抗体を治療目的の為に１例えばｌ［ｉＧ細胞
に対する細胞毒薬剤として用いる場合に特に重要である
。かかる場合には副作用を起こしうる外来の抗体を導入
することは好ましくないからである。
イプリドーマが親牌細胞またはリンパ節細胞起源の抗体
を産生ずるのみでありうるため有利である。このことは
このような抗体を治療目的の為に１例えばｌ［ｉＧ細胞
に対する細胞毒薬剤として用いる場合に特に重要である
。かかる場合には副作用を起こしうる外来の抗体を導入
することは好ましくないからである。
骨髄唾細胞はｔｏｅウマ血清を補充したグルベコ−変法
イーグル培地で維持する。ｌＯ７個骨髄囃細胞および免
疫したマウス由来の１０” 個の細胞を融合させるため
にポリエチレングリコール１５００の４５チ（ｖ／ｖ）
溶液に再懸濁する。
イーグル培地で維持する。ｌＯ７個骨髄囃細胞および免
疫したマウス由来の１０” 個の細胞を融合させるため
にポリエチレングリコール１５００の４５チ（ｖ／ｖ）
溶液に再懸濁する。
混成した細胞はヒボキサンチンーアミノプテリンーチミ
シン（ｌｉＡ’Ｌ’）培養液中で淘汰させる。このとき
の全生育細胞がマクス脾臓由米細胞と骨髄嗟細胞の混成
の成功を示唆する。
シン（ｌｉＡ’Ｌ’）培養液中で淘汰させる。このとき
の全生育細胞がマクス脾臓由米細胞と骨髄嗟細胞の混成
の成功を示唆する。
クローン化した混成細胞は、コツトン（Ｃｏｔｔｏｎ）
らがＥｕｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ３． １３
６ （１９７３）で記述した如くに公知の組織培養法に
よって生体外で生育しうる。また別法として、その細胞
は生体内では、組織適合動物或は無胸腺のヌードマウス
体内で腫瘍として生育させうる。産生された抗体は、例
えばジェルハード（ＵｅｒｈａｒＬ） ラが−１５１
４（１９７８）で述べた公知の手法を用いて生体外培養
液や動物の血清或は腹水から回収しうる。ある場合には
、培養細胞或は＊＊細胞から直接的に抗体を得ることが
有利であ夛うる。
らがＥｕｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ３． １３
６ （１９７３）で記述した如くに公知の組織培養法に
よって生体外で生育しうる。また別法として、その細胞
は生体内では、組織適合動物或は無胸腺のヌードマウス
体内で腫瘍として生育させうる。産生された抗体は、例
えばジェルハード（ＵｅｒｈａｒＬ） ラが−１５１
４（１９７８）で述べた公知の手法を用いて生体外培養
液や動物の血清或は腹水から回収しうる。ある場合には
、培養細胞或は＊＊細胞から直接的に抗体を得ることが
有利であ夛うる。
乾燥Ｍ ＣＩ” −７、ＭＤＡ−１５７およびＤυ４４
７５（ＭＯＬ’−７１−培養した方法で培養した他の゛
乳ガン細胞系）並びにヒト包皮線維芽細胞（ＨＦｒ）細
胞系を標的細胞として用いるノ・イブリドーマ上清の最
初の特異性スクリーニングはｈｉＬＩＳＡ法を用いて行
った。Ｍ ｃ ｂｏ−７および／またはＭＤ、−１５７
のいずれかと反応するがＨｌ’ ｉｌ’ Ｍｆｉ胞とは
反応しないノ・イズリドーマを選択して＊２のスクリー
ニングに用いた。
７５（ＭＯＬ’−７１−培養した方法で培養した他の゛
乳ガン細胞系）並びにヒト包皮線維芽細胞（ＨＦｒ）細
胞系を標的細胞として用いるノ・イブリドーマ上清の最
初の特異性スクリーニングはｈｉＬＩＳＡ法を用いて行
った。Ｍ ｃ ｂｏ−７および／またはＭＤ、−１５７
のいずれかと反応するがＨｌ’ ｉｌ’ Ｍｆｉ胞とは
反応しないノ・イズリドーマを選択して＊２のスクリー
ニングに用いた。
選択したハイプリドーマを１０％タマ血清、Ｎｗｐ、ｈ
、１０−５Ｍメルカプトエタノールを補充したＤＭｇＭ
中で培養した。
、１０−５Ｍメルカプトエタノールを補充したＤＭｇＭ
中で培養した。
有用なバイブリド９−マクローンが産生された場合、も
はや抗体産生能のない桟々の細胞と共に培養系を拡大す
ることを避けるために抗体産生細胞系の再り讃−ン化が
一般的に有益である。ハイプリドーマは全部でないにし
ろ、各々の親細胞の遺伝物質を有していることにより、
ハイプリドーマの全特徴は明確でない。ハイプリドーマ
クローンではしばしば遺伝的異常か遺伝子欠損に由来す
るかして継代接種を繰り返すと特異抗体の再産生能およ
び／または産生能をそこなうことがある。したがって、
最初の混成実施後に、次代バイブリド−小石−ンが抗体
産生能を有するハイプリドーマとして機能するか否かを
再クローン化して確認することが重要である。再クロー
ン化とはハイブリド−マ細胞と呻瘍細飽とを融合するこ
と、例えば独立したハイプリドーマ細胞を単離し、それ
をクローン性である培養′へと拡大することを意味する
。
はや抗体産生能のない桟々の細胞と共に培養系を拡大す
ることを避けるために抗体産生細胞系の再り讃−ン化が
一般的に有益である。ハイプリドーマは全部でないにし
ろ、各々の親細胞の遺伝物質を有していることにより、
ハイプリドーマの全特徴は明確でない。ハイプリドーマ
クローンではしばしば遺伝的異常か遺伝子欠損に由来す
るかして継代接種を繰り返すと特異抗体の再産生能およ
び／または産生能をそこなうことがある。したがって、
最初の混成実施後に、次代バイブリド−小石−ンが抗体
産生能を有するハイプリドーマとして機能するか否かを
再クローン化して確認することが重要である。再クロー
ン化とはハイブリド−マ細胞と呻瘍細飽とを融合するこ
と、例えば独立したハイプリドーマ細胞を単離し、それ
をクローン性である培養′へと拡大することを意味する
。
最初１５Ａ８と命名された細胞系およびその再クローン
はヒト乳ガン細胞上に多く生じる細胞表面抗原に特異的
なモノクローナル抗体を産生ずる。
はヒト乳ガン細胞上に多く生じる細胞表面抗原に特異的
なモノクローナル抗体を産生ずる。
該１５Ａ８細胞系はメリーランド２０８５２゜ロツクヴ
イル、１２３０１ パークローン・ドライブにあるア
メリカン・ティッシュ−・カルチャー・コレクション（
ＡＴＣＵ）に寄託されておシ、受託番号１−ＩＢ−８６
５５に与えられた。
イル、１２３０１ パークローン・ドライブにあるア
メリカン・ティッシュ−・カルチャー・コレクション（
ＡＴＣＵ）に寄託されておシ、受託番号１−ＩＢ−８６
５５に与えられた。
モノクローナル抗体１５Ａ８のイソタイプはマウスエｇ
ＧＩ Ｔ Ｉ ｇ Ｇ２ ａ ＊ ＩｇＧ２ｂ、
工ｇＧ３． 工ｇＭおよび工ｇＡ に対するウ
サギ抗血清（Ｍｉ’１ｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙ 社
製）を用いるオクタ−ローニー・ゲル免疫拡散法によっ
て決定した。モノクローナル抗体１５Ａ８は工ｇＧｔ
イソタイプであると決定された。この１５Ａ８抗体は
試験したほとんど全ての乳ガン中に存在する表面抗原と
反応し、Ｌｉた全ての腺維嚢胞疾患および正常の乳房上
皮とも反応する。該抗体は他の数種の正常組織と反応し
、しばしば多くの胸部由来でない腺ガンと反応する。
ＧＩ Ｔ Ｉ ｇ Ｇ２ ａ ＊ ＩｇＧ２ｂ、
工ｇＧ３． 工ｇＭおよび工ｇＡ に対するウ
サギ抗血清（Ｍｉ’１ｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙ 社
製）を用いるオクタ−ローニー・ゲル免疫拡散法によっ
て決定した。モノクローナル抗体１５Ａ８は工ｇＧｔ
イソタイプであると決定された。この１５Ａ８抗体は
試験したほとんど全ての乳ガン中に存在する表面抗原と
反応し、Ｌｉた全ての腺維嚢胞疾患および正常の乳房上
皮とも反応する。該抗体は他の数種の正常組織と反応し
、しばしば多くの胸部由来でない腺ガンと反応する。
しかし、この抗体は中皮腫とは反応しないのでこれらの
腫瘍を転移性乳ガンから区別して診断するのに適してい
る。この抗体は生体外でＭＤＡヒト乳ガン系の細胞の成
長を遅延させる。
腫瘍を転移性乳ガンから区別して診断するのに適してい
る。この抗体は生体外でＭＤＡヒト乳ガン系の細胞の成
長を遅延させる。
該モノクローナル抗体は以下の工程によって９５−以上
の均一性に精製した。即ち、ハイブリド−マ細胞 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウスに接種して腹水を得た。
の均一性に精製した。即ち、ハイブリド−マ細胞 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウスに接種して腹水を得た。
得られた腹水を１０分間、１（１０１）Ｘｇで遠心分離
することによって清澄にした。４５％硫酸アンモニウム
沈殿に続いてｔＱｏｏｏｘｇで１０分間遠心分離した。
することによって清澄にした。４５％硫酸アンモニウム
沈殿に続いてｔＱｏｏｏｘｇで１０分間遠心分離した。
沈殿物を２０ｍＭトリス０．０２％ＮａＮ ３緩衝液（
ｐｆｌ１８）１０ｄ中に再懸濁し、同じ緩衝液に透析し
、アフィ・ゲルブルーｆ）ＥＡＥ２イオン交換カラムに
付した。カラムを３ベツド容積の０．０２ ％ Ｎａ１
ｉ３ ｆ含ム２０ ｍ ” ｌ’リス（＋２３ｍＭ塩化
ナトリウム）緩衝液で洗い、抗体を塩化ナトリウムのグ
ラジェントで溶出した。２ｘｌずつの分子ｉＭを回収し
０Ｄ２８０を測定した。抗原を含有する両分を区別する
ためにヒト乳ガンに対するイムノパーオキンダーゼを使
用した。適切な画分をプールした。蛋白質濃度はロウＩ
Ｊ −（Ｌｏｕｒ７）らカＪ−Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
１９３． ２６５−２７５（１９７５年）に記載した
方法によって決定した。
ｐｆｌ１８）１０ｄ中に再懸濁し、同じ緩衝液に透析し
、アフィ・ゲルブルーｆ）ＥＡＥ２イオン交換カラムに
付した。カラムを３ベツド容積の０．０２ ％ Ｎａ１
ｉ３ ｆ含ム２０ ｍ ” ｌ’リス（＋２３ｍＭ塩化
ナトリウム）緩衝液で洗い、抗体を塩化ナトリウムのグ
ラジェントで溶出した。２ｘｌずつの分子ｉＭを回収し
０Ｄ２８０を測定した。抗原を含有する両分を区別する
ためにヒト乳ガンに対するイムノパーオキンダーゼを使
用した。適切な画分をプールした。蛋白質濃度はロウＩ
Ｊ −（Ｌｏｕｒ７）らカＪ−Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
１９３． ２６５−２７５（１９７５年）に記載した
方法によって決定した。
精製度はポリアクリルアミドゲル電気泳動によって決定
した。
した。
精製した１５八８抗体（１ｏ＋１１ｇ／ｍｊ）は１：Ｉ
Ｑｏｏｏの稀釈率でＭＣＪｌｏ−７およびｌ１ｌｉＤＡ
−１７５細胞と強く反応することが見出された。免役蛍
光像によるとこの抗体の反応形式は表面膜に反応性であ
ることが明らかとなった。この反応性はメタノール−酢
酸固定した後にも、減少はするが持続していた。
Ｑｏｏｏの稀釈率でＭＣＪｌｏ−７およびｌ１ｌｉＤＡ
−１７５細胞と強く反応することが見出された。免役蛍
光像によるとこの抗体の反応形式は表面膜に反応性であ
ることが明らかとなった。この反応性はメタノール−酢
酸固定した後にも、減少はするが持続していた。
新鮮な正常および悪性腫瘍組織部分はサンジエゴにある
ＵＣ８ｆ）病院およびヴエテランス（Ｖｅｔｅｒａｎｓ
）病院の外科および解剖病理学部門から得た。新鮮な凍
結組織は国立ガン研究所（ＮＣ工）の生物学的発ガン部
門から得た。モノクローナル抗体１５Ａ８の数種の組織
に対する反応性はイムノパーオキンダーゼ染色によって
決定した。
ＵＣ８ｆ）病院およびヴエテランス（Ｖｅｔｅｒａｎｓ
）病院の外科および解剖病理学部門から得た。新鮮な凍
結組織は国立ガン研究所（ＮＣ工）の生物学的発ガン部
門から得た。モノクローナル抗体１５Ａ８の数種の組織
に対する反応性はイムノパーオキンダーゼ染色によって
決定した。
組織’にティｙニー、チク（’Ｉ’１ａｓｕｅ Ｔｅｋ
） ＯＣ’Ｉ’化合物（サイエンティフィック・プロダ
クツ社製）でおおい、−７０℃で凍結した。ミクロトー
ム／クリオスグツトを用いて４μＭの厚さの凍結組織切
片を切り取り、スライドグラスにのせて一７０℃で保存
した。切片をのせたスライドを間接イムノパーオキシダ
ーゼ・アッセイによって染色した。
） ＯＣ’Ｉ’化合物（サイエンティフィック・プロダ
クツ社製）でおおい、−７０℃で凍結した。ミクロトー
ム／クリオスグツトを用いて４μＭの厚さの凍結組織切
片を切り取り、スライドグラスにのせて一７０℃で保存
した。切片をのせたスライドを間接イムノパーオキシダ
ーゼ・アッセイによって染色した。
短時間スライドをＰＢＳで水和し、次いで部分的に風乾
した。次いでモノクローナル抗体な切片上にのせ、室温
で湿気のある容器中で３０分間インキュベートした。続
いてヤギ抗マウス免疫グロブリンと結合した西洋ワサビ
ノ（−オキシダーゼ（１：１００で稀釈）を切片上にの
せた。ジアミノベンジジン（Ｏ１ｓｍｙ／１ｇ）および
０．０３−過酸化水素で呈色反応を起こさせた。細胞を
ヘマト−ルキシリンで対比染色し、水で洗滌し、１００
ｑｂエチルアルコール中で脱水し、キ７レンで処理した
後、パーマラン） （Ｐｅｒｍｏｕｎｔ） Ｋのせ、カ
バーグラフでおおい、ツアイス社の顕微鏡で観察した。
した。次いでモノクローナル抗体な切片上にのせ、室温
で湿気のある容器中で３０分間インキュベートした。続
いてヤギ抗マウス免疫グロブリンと結合した西洋ワサビ
ノ（−オキシダーゼ（１：１００で稀釈）を切片上にの
せた。ジアミノベンジジン（Ｏ１ｓｍｙ／１ｇ）および
０．０３−過酸化水素で呈色反応を起こさせた。細胞を
ヘマト−ルキシリンで対比染色し、水で洗滌し、１００
ｑｂエチルアルコール中で脱水し、キ７レンで処理した
後、パーマラン） （Ｐｅｒｍｏｕｎｔ） Ｋのせ、カ
バーグラフでおおい、ツアイス社の顕微鏡で観察した。
ヒト乳ガン細胞系および他の幀瘍組織と１５八８との反
応性を第１表に示し九。
応性を第１表に示し九。
第１表
ヒト乳ガン細胞系および他のヒト腫瘍組織九対する１５
Ａ８抗体の結合 ５Ａ８ 乳ガン ＭＣＦ−７＋ ＭＪＪＡ−１５７＋ ＤＵ４４７５ −非乳房部 ａｒｒ −ＰＡＩ
−組織（凍結） ヒト乳ガン（全体） ＋（２６／
２９）−次性浸潤性管状ガン ＋（１
４／１７）肝臓、肺網および脳に転移した 浸潤性管状ガン ＋（５１５）
腺管内乳頭性コロイド状乳ガン ＋（６／６
）面飽（コメド）ガン ＋（１／
１ ）葉状嚢帷状肉種 −（１
）乳頭小管過形成、硬化性腺疾患 ＋（２／２
）線維嚢胞性疾患 中（２／２
）線維＠仲 ＋（２／２
）＋ニイムツバ−オキシダーゼ反応陽性（通常強く反応
） 一：反応しない ＊：弱く反応 以下の第２表は１５Ａ８と正常組織および非乳房悪性腫
瘍との反応性をまとめたものである。
Ａ８抗体の結合 ５Ａ８ 乳ガン ＭＣＦ−７＋ ＭＪＪＡ−１５７＋ ＤＵ４４７５ −非乳房部 ａｒｒ −ＰＡＩ
−組織（凍結） ヒト乳ガン（全体） ＋（２６／
２９）−次性浸潤性管状ガン ＋（１
４／１７）肝臓、肺網および脳に転移した 浸潤性管状ガン ＋（５１５）
腺管内乳頭性コロイド状乳ガン ＋（６／６
）面飽（コメド）ガン ＋（１／
１ ）葉状嚢帷状肉種 −（１
）乳頭小管過形成、硬化性腺疾患 ＋（２／２
）線維嚢胞性疾患 中（２／２
）線維＠仲 ＋（２／２
）＋ニイムツバ−オキシダーゼ反応陽性（通常強く反応
） 一：反応しない ＊：弱く反応 以下の第２表は１５Ａ８と正常組織および非乳房悪性腫
瘍との反応性をまとめたものである。
１５Ａ８は正常な胸部、腎近傍細管、表皮、食道および
唾液腺上皮と交叉反応し、また頚ガン、結腸ガンおよび
前立腺ガンの各１検体と交叉反応した。１５Ａ８はｌＪ
知のエストロゲンリセプターおよびプロゲステロンリセ
グター陰性胸部ガンの６検体のうち３つを染色したが、
既知のエストｏゲンリセプターおよび／ｌたはプロゲス
テロンリセプター陽性胸・部ガンの全・４□検体を染色
した。
唾液腺上皮と交叉反応し、また頚ガン、結腸ガンおよび
前立腺ガンの各１検体と交叉反応した。１５Ａ８はｌＪ
知のエストロゲンリセプターおよびプロゲステロンリセ
グター陰性胸部ガンの６検体のうち３つを染色したが、
既知のエストｏゲンリセプターおよび／ｌたはプロゲス
テロンリセプター陽性胸・部ガンの全・４□検体を染色
した。
第２表
正常組織および非乳房悪性１！［に対する抗体、ｔｓＡ
、ｓの結合 ５Ａ８ 正常組織 表皮 十唾液腺
、 ＋甲状腺
−副腎
−肺
−気管支 −心
臓 −大動脈
−食道
十胃
−小腸
− 大腸 −肝＠（２１− 膵臓 − 胆嚢 − 膵臓 − リン／耐節 −腎＠（２）
近傍細管十膀胱
− 卵巣 −精巣
− 頚 −子宮
−骨髄
−脳
−叶・・ 鱗状細胞ガン 子 線ガン −小細胞ガン
− 胃腸 胃ガン −胆管ガン
−膵臓ガン
− 結腸ガン（２１−／ ＋ 性尿器 頚ガン ＋ 卵巣ガン − 膀胱ガン − 腎臓ガン −前立腺ガン（２
＋ −／ ＋リンパ呻 １ｇ１胞 −中皮腫
−黒腫
−１５Ａ８抗体はヒト乳ガンに多く見られる抗原
を検知するので、本抗体は現在のところ乳ガン細胞を診
断するのに有用であり、将来においてはこれらの腫瘍細
胞の系統パターンの研究に有用となるであろう。１５Ａ
８は細胞表面に露出しているので、腫瘍の局部化および
治療の双方に応用することもできる。このモノクローナ
ル抗体が胸部ガン細胞の成長を生体外および生体内で阻
害したという予備的証拠によっても治療剤としての可能
性は支持される。
、ｓの結合 ５Ａ８ 正常組織 表皮 十唾液腺
、 ＋甲状腺
−副腎
−肺
−気管支 −心
臓 −大動脈
−食道
十胃
−小腸
− 大腸 −肝＠（２１− 膵臓 − 胆嚢 − 膵臓 − リン／耐節 −腎＠（２）
近傍細管十膀胱
− 卵巣 −精巣
− 頚 −子宮
−骨髄
−脳
−叶・・ 鱗状細胞ガン 子 線ガン −小細胞ガン
− 胃腸 胃ガン −胆管ガン
−膵臓ガン
− 結腸ガン（２１−／ ＋ 性尿器 頚ガン ＋ 卵巣ガン − 膀胱ガン − 腎臓ガン −前立腺ガン（２
＋ −／ ＋リンパ呻 １ｇ１胞 −中皮腫
−黒腫
−１５Ａ８抗体はヒト乳ガンに多く見られる抗原
を検知するので、本抗体は現在のところ乳ガン細胞を診
断するのに有用であり、将来においてはこれらの腫瘍細
胞の系統パターンの研究に有用となるであろう。１５Ａ
８は細胞表面に露出しているので、腫瘍の局部化および
治療の双方に応用することもできる。このモノクローナ
ル抗体が胸部ガン細胞の成長を生体外および生体内で阻
害したという予備的証拠によっても治療剤としての可能
性は支持される。
このモノクローナル抗体が中皮腫細胞と反応しないとい
う事実は特に意義深い。これらの細胞は乳ガン細胞では
ないが、転移性乳ガンと同じ部位に生じることが多い。
う事実は特に意義深い。これらの細胞は乳ガン細胞では
ないが、転移性乳ガンと同じ部位に生じることが多い。
従って１５Ａ８抗体は中皮腫１瘍と転移したガンとを区
別するのに特に有用である。
別するのに特に有用である。
本発明の範囲を逸脱することなく当業者は明らかに本技
術を変更しうる。例えば、抗体の産生は完全な乳ガン細
胞というよシむしろ細胞膜断片または細胞膜由来物質を
宿主動物に接種することによっても該宿主動物中で産生
しうる。
術を変更しうる。例えば、抗体の産生は完全な乳ガン細
胞というよシむしろ細胞膜断片または細胞膜由来物質を
宿主動物に接種することによっても該宿主動物中で産生
しうる。
本発明の種々の特徴については特許請求の範囲で説明さ
れている。
れている。
Claims (17)
- （１）ヒト乳ガン細胞に多く見られる細胞表面抗原に特
異的なモノクローナル抗体を産生する方法であつて、該
抗原を含む物質を動物に接種し、該動物から抗体−産生
細胞を得、該抗体−産生細胞と新生物細胞とを融合して
ハイブリドーマを形成し、ほとんどのヒト乳房腫瘍組織
と反応し且つ他のヒト腫瘍組織とは一般的に反応しない
抗体を産生するハイブリドーマを選択し、該選択したハ
イブリドーマのクローンを作製し、それによつて産生さ
れる抗体を回収する工程からなる上記方法。 - （２）該抗体−産生細胞がＢＡＬＢ／ｃマウス脾臓細胞
である特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （３）該抗体が、無作為に得た２９のヒト乳ガンのうち
約２６と反応し、実質的に全ての腺維嚢胞疾患と反応し
、また正常なヒト胸部上皮細胞、腎近傍の細管、皮膚、
食道および唾液腺ともより弱く反応するが、他のいずれ
のヒト正常組織とも実質的に反応せず、且つ中皮腫とも
反応しないＩｇＧ１イソタイプであると特徴づけられる
特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （４）該抗原−含有物質がヒト乳ガン細胞系ＭＣＦ−７
に由来する特許請求の範囲第３項に記載の方法。 - （５）該新生物組繊細胞が骨髄腫細胞系ＰＡＩである特
許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （６）該クローンを宿主動物中で生育させ、該抗体を宿
主動物の血清および宿主動物の腹水からなる群から得る
特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （７）該クローンを生体外で生育させ、該抗体を該クロ
ーンの培養上清から得る特許請求の範囲第１項に記載の
方法。 - （８）抗体−産生動物細胞と新生物細胞との融合によっ
て作られる細胞系であつて、ヒト乳ガン細胞に多く見ら
れる細胞表面抗原に特異的な抗体を産生する細胞系。 - （９）該抗体−産生細胞が齧歯動物に由来する特許請求
の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１０）該抗体−産生細胞が齧歯動物脾臓細胞および齧
歯動物リンパ節細胞からなる群から選択される特許請求
の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１１）該抗体−産生細胞がＢＡＬＢ／ｃマウス脾臓細
胞である特許請求の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１２）該新生物細胞が非−抗体産生性である特許請求
の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１３）ハイブリドーマＨＢ−８６５５およびその抗体
−産生性再クローンからなる群から選択される特許請求
の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１４）該抗体が無作為に得た２９のヒト乳ガンのうち
約２６と反応し、実質的に全ての腺維嚢胞疾患と反応し
、また正常なヒト胸部上皮細胞、腎近傍の細管、皮膚、
食道および唾液腺ともより弱く反応するが、他のいずれ
のヒト正常組織とも実質的に反応せず、且つ中皮腫とも
反応しないＩｇＧ１イソタイプであると特徴づけられる
特許請求の範囲第８項に記載の細胞系。 - （１５）ヒト乳ガン細胞に多く見られる細胞表面抗原に
特異的なモノクローナル抗体。 - （１６）ハイブリドーマＨＢ−８６５５およびその抗体
−産生性再クローンからなる群から選択される培養物か
ら得た特許請求の範囲第１５項に記載のモノクローナル
抗体。 - （１７）該抗体が無作為に得た２９のヒト乳ガンのうち
約２６と反応し、実質的に全ての腺維嚢胞疾患と反応し
、また正常なヒト胸部上皮細胞、腎近傍の細管、皮膚、
食道および唾液腺ともより弱く反応するが、他のいずれ
のヒト正常組織とも実質的に反応せず、且つ中皮腫とも
反応しないＩｇＧ１イソタイプであると特徴づけられる
特許請求の範囲第１５項に記載のモノクローナル抗体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US67826184A | 1984-12-05 | 1984-12-05 | |
| US678261 | 1984-12-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61180725A true JPS61180725A (ja) | 1986-08-13 |
| JPH0717679B2 JPH0717679B2 (ja) | 1995-03-01 |
Family
ID=24722079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60274294A Expired - Lifetime JPH0717679B2 (ja) | 1984-12-05 | 1985-12-05 | 乳ガン細胞表面抗原に特異的なモノクロ−ナル抗体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0184369B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0717679B2 (ja) |
| AT (1) | ATE74382T1 (ja) |
| CA (1) | CA1306428C (ja) |
| DE (1) | DE3585778D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2651046B2 (ja) * | 1990-10-12 | 1997-09-10 | アメリカ合衆国 | マウスモノクローナル抗体 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4863854A (en) * | 1985-08-12 | 1989-09-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies to mucin-like human differentiation antigens |
| US6004761A (en) * | 1986-11-19 | 1999-12-21 | Sanofi | Method for detecting cancer using monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
| DK554886A (da) * | 1986-11-19 | 1988-07-18 | Novo Industri As | Antistoffer |
| NZ222509A (en) * | 1986-11-19 | 1993-03-26 | Oncogen | Hybridoma cell line producing antibodies binding to tumour-associated mucin antigen |
| IE62463B1 (en) * | 1988-07-07 | 1995-02-08 | Res Dev Foundation | Immunoconjugates for cancer diagnosis and therapy |
| IE63847B1 (en) * | 1989-05-05 | 1995-06-14 | Res Dev Foundation | A novel antibody delivery system for biological response modifiers |
| ZA200305980B (en) | 2001-02-12 | 2007-01-31 | Res Dev Foundation | Modified proteins, designer toxins, and methods of making thereof |
| IL159894A0 (en) | 2001-07-17 | 2004-06-20 | Res Dev Foundation | Therapeutic agents comprising pro-apoptotic proteins |
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| JPS60253976A (ja) * | 1984-05-01 | 1985-12-14 | コーニング グラス ワークス | 乳癌抗原 |
| JPS61103837A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体 |
| JPS61132182A (ja) * | 1984-08-22 | 1986-06-19 | テル・アヴイヴ・ユニヴア−シテイ | モノクロ−ナル抗体を用いる乳ガンのイムノアツセイ |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4522918A (en) * | 1981-12-15 | 1985-06-11 | Jeffery Schlom | Process for producing monoclonal antibodies reactive with human breast cancer |
| EP0118365B1 (en) * | 1983-03-04 | 1990-08-29 | Health Research, Inc. | Monoclonal antibodies to human breast carcinoma cells and their use in diagnosis and therapy |
-
1985
- 1985-11-26 AT AT85308580T patent/ATE74382T1/de active
- 1985-11-26 CA CA000496242A patent/CA1306428C/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-26 EP EP85308580A patent/EP0184369B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-26 DE DE8585308580T patent/DE3585778D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-12-05 JP JP60274294A patent/JPH0717679B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (5)
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| JPS60253976A (ja) * | 1984-05-01 | 1985-12-14 | コーニング グラス ワークス | 乳癌抗原 |
| JPS61132182A (ja) * | 1984-08-22 | 1986-06-19 | テル・アヴイヴ・ユニヴア−シテイ | モノクロ−ナル抗体を用いる乳ガンのイムノアツセイ |
| JPS61103837A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体 |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1306428C (en) | 1992-08-18 |
| EP0184369A2 (en) | 1986-06-11 |
| EP0184369A3 (en) | 1989-03-29 |
| ATE74382T1 (de) | 1992-04-15 |
| DE3585778D1 (de) | 1992-05-07 |
| JPH0717679B2 (ja) | 1995-03-01 |
| EP0184369B1 (en) | 1992-04-01 |
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