JPH0272198A - 抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒト肺腺癌由来のＶＭＲ（、ＬＣＲ株を免疫原
として作成された融合細胞が産生し、その認識する抗原
がシアル酸化された糖蛋白あるいは糖脂質であることを
特徴とするモノクローナル抗体並びにこれら抗体を用い
た肺腺癌及び膵癌等、他のヒト腺癌の直情学的な早期診
断並びに病理診断の利用に関するものである。

〔従来の技術） 肺癌は気管支から末梢までにできた悪性腫瘍で本邦にお
いて１９８６年の死亡数は３．０万人と胃癌に次いで癌
死の主な原因とされ〔財団法人がん研究財団発行、がん
の統計、　１９８７］　、さらには、統計」二減少傾向
の認められる胃癌に比べ、１９９０年の死亡数は３．５
〜４万人と増えるものと推定されている。　　　この疾
患は５つの主要組織型に分類され（ＷＨＯ）、その特徴
はｌ）偏平上皮癌（３０〜３５ｚ）：　喫煙と最も関連
があり、治癒の可能性は高い。

発生部位は３／４が肺門型、１１）小細胞癌（１０−１
５χ）；増殖の進展が早く悪性度は極めて高く、多くは
太い気管支に発生、１ｉｉ）腺癌（４０χ）；肺癌中足
も多く、大部分は末梢（細気管支、肺胞上皮）に発４に
、ｉｖ）大細胞癌（５〜１０χ）；多くは細気管支より
宋＋ｆｆに発生、ν）その他（５χ）；悪性度は低いに
分卸される〔臨床腫瘍学、朝倉書店、　１９８２）。

肺癌は他の癌と同様に多くの場合、放射線療法および化
学療法によっては完治せず、Ｍ瘍の完全な外科的手術が
唯一の有効な療法と考えられている。

従って、−￥−術可能な早期に診断することが望まれて
いる。

癌の血ｔｔｆｆ学的な診断の試みは、Ｇｏｌｄらにより
ヒト大腸癌組織中に癌特異抗原として見出された癌胎児
性蛋白抗原；Ｃａｒｃｉｎｏｅ＋＋ｂｒｏｎｉｃ　ａｒ
＋Ｌｉｇｅｎ　（ＣＥＡ）（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、１
２１，４６７（１９６５）、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、＋　
　１２２４６７（１９６５）　）をＴｈｏｎｓｏｎ　　
らがＲａｄｉｏｉｍｎｕｎｏａｓｓａｙ（１？ＩＡ）に
より測定した報告［Ｐｒｏ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、。

６４．１６１（１９Ｇ９）　）　、その後ＡＦＰ、ＥＩ
ａｓＬａｓｅ　１．ＰＡＰ。

ＴＰＡ　、　ＳＣＣ等の癌の血清学的マーカーが報告な
されている。　さらには高い特異性、一定の品質の抗体
が無水に得られる等の利点より、モノクローナル抗体を
用いて、これらマーカーを測定することが報告されてい
る。

モノクローナル抗体はＸｏｈｌｅｒら（Ｎａ　Ｌｕｒｅ
＋　２５６＋４９５（１９７５）　）により考案された
融合細胞技術、即ら抗体産生細胞と骨髄腫細胞とを融合
した融合細胞は、抗体を産生ずる能力と細胞培養液中で
永久的に培養できる能力を「１しているため抗体産生細
胞が予め暴露、規定された抗原に対して特異的なモノク
ローンな免疫グロブリンを型造できる。

融合細胞技術を用いてヒ）Ｎｔｉ癌に対するモノクロー
ナル抗体を得ることはすでに報告されている（Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ、、４２，１５０（１９８２）、Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ、、４２゜３１８７　（１９８２）等〕。

しかしながら、これらの報告は、ヒト正常細胞とも反応
するものが多（、血清学的診断に足る抗体は得られてい
ない。

〔発明が解決しようとする問題点および解決方法〕肺癌
のモノクローナル抗体は知られていたが、さらに優れた
抗体の開発が梁まれていた。本発明はヒト肺腺癌由来の
Ｖ　Ｍ　ＲＣ−Ｌ　ＣＲ株を免疫原として作成した融合
細胞が産生ずるモノクローナル抗体が、シアル酸化され
た糖蛋白あるいは糖脂質を抗原として認コすることによ
り肺腺癌に対して優れた反応性を有し、従来のマーカー
のうち肺腺癌での陽性率が高いとされていたＣＥＡにお
いても早期の癌（ステージ１期、■期）〔松原ら。

内科、　６０，７０３Ｃ１９８７）　］では、２５％以
下であったが、本モノクローナル抗体を用いた測定にお
いては５５％以上の陽性率であり、さらには膵癌をはじ
めとしたヒト腺癌の血清学的診断に有用なモノクローナ
ル抗体を製造し本発明を完成した。

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明は、免疫原としてヒト肺腺癌由来のＶＭＲＣ−Ｌ
ＣＲ株〔（受託番号）微工研菌寄　第９８４９号〕を用
いたものであるが、ＶＭＲＣＬＣＲ細胞は、本発明者の
秋山等により米国ンアトルのＶｅｒｇｉｎｉａ　Ｍａｓ
ｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒにおいて６３歳
の女性（Ｍ、Ｒ，Ｒ，）に発生した肺腺癌の手術材料か
ら培養株として樹立されたもので、当該肺腺癌組織は超
微形態的には、Ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｏ−Ａｌｖｅｏｌａ
ｒｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　と診断されている。

先頭では、大部分の腺癌細胞は低分化型腺癌であるが、
一部に大細胞化し局所的にムチン産生部を認めている。

当該細胞株の樹立の方法は、細切した肺腺癌組織を１０
％Ｆｅｔａｌ　Ｃａ１ｆ　Ｓｅｒｕｍを含むＰＲ旧−１
６４０倍地で初代培養し、同様の借地で継代培養して樹
立した。　Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏでの培養下では、主に２！
ｉの形態の異なる細胞から形成され、一つは立方型の細
胞であり、他は紡錘型である。ｄｏｕｂｌｉｎｇ　Ｌｉ
ａ＋ｅは極めて遅く、約７日間と推定される。又ヌード
マウスへは再移植性であり、ｔｏ６，５Ｘ１０ｂ、　１
０’個をその皮下に移植した実験において、すべてのマ
ウスに皮下腫瘤を形成した。摘出した腫瘤の先頭像では
充実性の腫瘍の形成がみとめられた。

当該Ｖ　Ｍ　ＲＣ−１＝　ＣＲ株で免疫した呻Ｒ動物の
稗臓細胞と骨髄腫細胞とを融合させ、得られた融合細胞
よりヒト肺腺癌に特異性を有するモノクローナル抗体を
産生ずる！Ｉ胞株をクローニングすることにより得られ
たものである。本発明のモノクローナル抗体は、ＩｇＭ
またはＩＰ、Ｇｌ型抗体で、ンアル酸化された糖蛋白ま
たは糖脂質を抗原として認識する。

本発明は以上のような特性を有するモノクローナル抗体
を用いてヒト肺腺癌及び膵癌などのヒト腺癌のＩ１１清
学的診断並びに病理診断法を提供するものであり、次に
示す種々の方法により達成できる。

（１）ヒト肺腺癌に対するモノクローナル抗体を製造す
る方法 ヒト肺腺癌に対するモノクローナル抗体１：Ｌ、ｉ融合
細胞融合技術により、３Ｉｌ製できる。

豚、牛、兎、サル、ラット、マウス等、人以外の哺乳動
物、好ましくは抗体産生細胞の相手になる骨髄８＝胞が
マウス由来のため特にマウスがよく、３〜１０週令、退
会しくは８退会のマウスに、ヒト肺腺癌由来のＶ　Ｍ　
ＲＣ−１−ＣＲ株をそのままあるいはホモジナイズして
、皮下あるいは静脈内あるいは腹腔内に適当なアジュバ
ントとともにＩ　ＸＩＯ’〜Ｉ　Ｘ１０７個を注射し、
必要に応じて追加免疫する。最終免疫後３〜７日にこれ
らマウスより抗体を産生ずるリンパ球を含むＩＰ！Ｊｆ
ｆｌを摘出する。摘出する組織はリンパ節等末梢リンパ
系組織ならばどこでもよい。

得られた組織からリンパ球を単細胞として分離する方法
としては、例えば免疫実験操作法Ｂ〔１９７４年日本免
疫学会発行１２５３ページ〕に記載されている方法によ
る。次にリンパ球が半永久的に継代できる増殖清を持た
せる方法としてｌ）ポリエチレングリコール、センダイ
ウィルス等の存在下で骨髄腫細胞等の癌細胞と融合させ
る方法１ｉ）ＥＢＶ等のウィルスにリンパ球を感染させ
トランスホームする方法がある。　実際の細胞融合の手
法としては、上記抗体産生リンパ球細胞とマウス骨髄腫
細胞とを、ポリエチレングリコールの存在下でＨΔＴ培
地（ヒボキサンヂン、アミノプテリン、チミノン添加培
地）で３７℃で１０〜１４日間培養する。コロニー状に
成した融合細胞は、その培養液中の抗体を、蛍光法ある
いは酵素法により二次抗体で染色し抗体価を測定してス
クリーニングする。スクリーニングにより活性を認めた
融合細胞株株は、限界希釈法により複数回のクローニン
グを行いクローンを確立する。クローンの作るモノクロ
ーナル抗体は一般に抗体価が高（、細胞培養液の上ｌｌ
１ｔをそのまま或いは分離精製して使用できるが、ブリ
ステン処理（２，６，１０，１４−テトラメチレルベン
タデカンを投与し、２週間程度飼育）したマウスの腹腔
にクローンを注入して生ずる腹水。

または面清中に存在する抗体を使用する。これら抗体は
さらに塩析、イオン交換ゲル濾過、アフィニティカラム
クロマト等で精製して使用することもてきる。

（２）モノクローナル抗体が認識する抗原の解析方法 本モノクローナル抗体を用いて、血ｉｌ？学的診断並び
に病理学的診断を実施する場合において本モノクローナ
ル抗体が抗原（肺腺癌組織、肺腺癌培養細胞）の認識部
位を決定する方法として、抗原をノイラミニダーゼ、ト
リブノン、過ヨウ素酸等の試薬で処理した後、モノクロ
ーナル抗体と反応させ、これらの処理をしない場合にお
ける抗原の反応性と比較する。

ノイラミニダーゼ処理により抗原性が消失すればシアル
酸が、トリプシン処理により抗原性が消失すれば蛋白が
、過ヨウ素酸処理により抗原性が消失すれば糖鎖を認識
する抗体と決定できる。

（３）　ＩｆｌＬ清学的清新的診 断方法イフチ方式により達成できる。すなわち固相化し
たモノクローナル第一抗体に抗原を含む検体を抗原抗体
反応により結合させ、次いで固相上のモノクローナル第
一抗体に結合した抗原に標識剤で標識したモノクローナ
ル第二抗体を作用させることにより〔固相化モノクロー
ナル第一抗体〕−〔抗原〕−〔標識化モノクローナル第
二抗体〕複合物を形成させ、固相−］二あるいは液１，
４の標識化モノクローナル抗体の標識剤の活性を測定し
、予め濃度既知の抗原において同様にして得られた標準
曲線より検体中の抗原ｔ１を求める。検体としての生体
試料は、血清血漿、尿、腹水、胸水等の体液があげられ
る。

標識剤としては放射性同位元素、酵素あるいは蛍光物質
等を用いることができる。

（４）病理学的診断方法 病理組織を標本とし、モノクローナル抗体を反応させ免
疫学的にモノクローナル抗体が結合する抗原を検出する
方法として１）間接法１１）直接法がある。１１；１者
は、病理標本にモノクロナル抗体を反応させ、次いで標
識化した二次抗体を反応させ、後者は標コ化したモノク
ロ−する抗体を直接病理標本に反応させた後、両者とと
も標識剤の活性を測定する。直接法の利点としてはモノ
クローナル抗体に直接標識剤を標識し病理標本と反応さ
せるため、間接法に比ベステノブが少ない。ところがバ
ックグランドを高めることとなり欠点となる。　標識剤
としては酵素あるいは蛍光物質等をもちいることができ
る。

〔実施例〕

以下に実施例を示し本発明を更に詳細に説明する。

実施例　ｌ。

モノクローナル抗体の作成 ヒト肺腺癌組織由来の細胞株であるＶＭＲＣＬ　ＣＲ株
を５　ｘ　ｌ　Ｏ”個をＲ１）旧−１６４０（ＧＩＢＣ
Ｏ社５！ｉ）培養液で洗浄後、０．２　ｍｌの固液に浮
遊させ、退会８週のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス皮下
に投与、更に２週間隔で腹腔内に２回の免疫を行った。

３回目の免疫終了後、３日目にこのマウスより無菌的に
Ｆ！臓を摘出し、摘出した８！！Ｉ臓は裁断しさらにメ
ソシュを通してリンパ球の縣濁液を得た。融合細胞とし
てのマウスミエローマ細胞（Ｒ３−ＮＳＩ−へｇ４７１
株）は、勘合の２日前よりｌＯ％生胎児血清（Ｆｅ２）
を含むＲＰＭＩ　−１６４０培養液中５％ＣＯ，，３７
℃の条件で増殖させた。上記脾臓細胞８．４　Ｘ１０７
個とマウスミローマ細胞４．２　ｘ１０７Ｂを含む培養
液を混合し、１５，０００ｒｐｍで３０分遠心後、上清
を捨て、４２％ポリエチレングリコール６．０００　　
（Ｋｏｄａｋ社３１）１ｍｌを１７Ｆ２ｉづつ滴下しな
がらゆっくりと細胞をはぐしだ。　　１分後、ＦＣ５含
有ＲＰ旧−１６４０培養液を１ｍｌゆっくりと滴下しな
がら細胞を混合させ、同様の操作を１分間繰り返した。

さらにＦｅ２を含む１？ＰＭＩ　−１６４０培養液ｂ＋
１を３分間かけてゆっくりと遠心管を回転させながら加
えた。この時点で培養液をさらに加え１２．６Ｘ１０’
個の細胞が１２．６ｍｌの培養液に含まようにＪ整しこ
の細胞縣濁液０．１１づつを９６穴マイクロプレートに
分注し、１０％ＣＯ２下で３７℃で培養した。培養開始
２日後、３日後５日後、７日後、　１１日後に培養上清
０．ｌ哨１を廃棄し、ヒボキサンチン、アミノプテリン
　チミジンおよびＦｅ２を含むＲＰＭＩ−１６４０培養
液０．１ｍｌを加えた。増殖限界に達した融合細胞は、
予めｌ穴あたり５Ｘ１０′″個のマウス胸腺細胞を播種
しておいた２４穴培養プレートに移し、更に培養した。

増殖限界になったところでＶＭＲＣ−ＬＣＩ７細胞に対
する培養土清中の抗体活性を間接蛍光抗体法で検討した
。　コロニを通常の培ＭＡに移し替え、それぞれ５ｍｌ
の培養液でＩ　ＸｌＯ７個／ｍｌになるまで培養した。

モノクローナル抗体産生クローン３種類の細胞を０．２
１１のブリステンによって処理したＢＡＬＢ／ｃマウス
腹腔内に注射し、２週間後に腹水を採取した。

実施例　２゜ モノクローナル抗体の精製 実施例１で得た腹水を１５，０００　ｒｐｍで３０分間
遠心分離し上ｌａを得た。上清に生理食塩水を加えて２
倍量とし、この希釈腹水に飽和硫安を徐々に加えて硫安
４０％飽和とし、室温で３０分静かに攪拌後５．０００
　ｒｐｍで３０分間遠心分離して沈渣を得た。

この沈渣をさらに３回４０％飽和硫安溶液で洗浄しＴ−
グロブリン分画を得た。このＴ−グロブリン分画ヲＤＥ
ＡＥ−セルロースカラムクロマトグラフィ法にて精製抗
体を回収した。なお、これら抗体のアイザイムの特徴づ
けは寒天ゲル沈降反応によったところ、第−表に示すよ
うな結果であった。

第−表 須二表 実施例　３゜ モノクローナル抗体の特異性 実施例２で得られた抗体を各種癌細胞法の反応性より特
異性を調べた。第二表にモノクローナル抗体ＬＩＳＡＩ
ＯＩの反応特異性を示した。

実施例　４゜ モノクローナル抗体が認識する抗原の解析実施例２で得
たモノクローナル抗体が認識する抗原を解析するために
、Ｖ　Ｍ　ＲＣ−Ｌ　ＣＲ株の成分をノイラミニダーゼ
、トリプシンおよび過ヨウ素酸で処理した後、抗体の反
応性を調べた。

酵素及び試薬 ノイラミニダーゼ（Ｓｉｇｍａ社製） ＰＢＳ　（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　５
ａｌｉｎｅ）中０．００１　０．０１．０．１μ／ｍｌ
含有トリプンン（Ｓｉｇｍａ社製） リン酸緩衝液中０．２５％含有 過ヨウ素酸（和光純薬社製） ＰＢＳ中１．１０．１１００ＩＩ含有 ＶＭＲＣ−ＬＣＲ株の成分を５０μｌ／穴ツツ、マイク
ロプレートに入れ０．５％グルタルアルデヒド１００μ
ｌを添加し室温で７分間静置する。ＰＢＳで３回洗浄後
０．３％過酸化水素メタノール溶液１００　μｍを加え
３０分間室温で静置する。　ＰＢＳで３回洗浄後、上記
試薬を５０μｍ／穴づつ分注し、３７℃で１時間反応さ
せた。反応ｌ＆ＴＢＳ　（Ｔｗｅｅｎ　２０ＢＳＡ、Ｐ
ＢＳ　）で３回洗浄後、モノクローナル抗体５０μＩ／
穴分注し室温で１時間反応させた。ＴＢＳで３回洗浄後
、パーオキシダーゼ標識抗−マウスＩｇＧを５０β１／
穴加え室温で１時間反応させた。

ＴＢＳで３回洗浄後オルトフェニレンジアミン）！５質
１０ｏｚ１１を加え３０分間反応後、１規定硫酸１００
μｍを加え反応を停止Ｆシ、４９２　ｎｍにおける吸光
度を測定した。結果は第三表に示した。

計算： 君昌未 処理抗原を抗体と反応 させた時の吸光度 処理抗原を陰性コントロール と反応させた時の吸光度 ％− 未処理抗原を抗体と反応 させた時の吸光度 未処理抗原を陰性コントロール と反応させた時の吸光度 ＶＭＩ？Ｃ１，ｃｌ？１ｌｒＪの／１．＄Ｉ胞を間接蛍
光抗体法で染色した。トリブンン処理＋１ｉｌｌ＆の陽
性率をセルソーターで解析した。

討Ｓ１ トリプノン処理後の陽性細胞率 ％− ×１００ 未処理の陽性細胞率 実施例　５゜ モノクローナル抗体への１２５１標識 ２ｍＣｉのＮａ　１２Ｊ　４０μＬ０．５Ｍリン酸緩衝
液５０μ＋。

実施例２で作成したモノクローナル抗体ＬＩＳＡ１０１
を５０μｌ　及びクロラミンＴ　（１ｍｇ／ｍ１）２５
　ｔｔ　１を混合し２０秒間よく振って反応させた後、
１０秒間静置した。これにメタル亜硫酸ナトリウム（１
ｍｇ／ｍ＋）１００μｍを加えて反応を停止した。さら
にヨウ化カリウム（５０ｍｇ／ｎ　ｌ　）２５　μｍ、
５％ＢＳ八を含有するＩ’ＢＳ　１００μｍ、ブルーデ
キストラン（５０１ｇ／ｍ１）２５μｍを加えてｐｏ−
ｔｏによるゲル濾過で遊離の１２５１　を除去し、″′
ｌ標識ＬＩＳＡＩＯＩ抗体を得た。

実施例　６゜ モノクローナル抗体への蛍光標識 実施例２で得られたモノクローナル抗体ＬＩＳＡ１０１
を０．０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液に溶解させたものと
、２町のＦＩＴＣ（Ｓｉｇｍａ社髪）を０．０５Ｍ炭酸
ナトリウム緩衝液に溶解させたものを混合し、４℃で２
４時間反応させた。反応生成物を０．０１ＭＩＪン酸緩
衝液で平衡化したセファデックスＧ−２５にかけ０．０
１Ｍリン酸緩衝液で溶出した。ＤＥＡＥセルロースカラ
ムに溶出分画をかけ０．０１ＭＩＪン酸緩衝液で未反応
ののＩＰ、Ｇだけを溶出させた。０．０５Ｍ塩化ナトリ
ウムを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液でＦＩＴｅａ識１ｇ
Ｇを溶出させて蛍光標識ＬＩＳＡＩＯＩ抗体を得た。

実施例　７゜ モノクローナル抗体への酵素標識 実施例２で作成したモノクローナル抗体Ｌ　Ｉ　Ｓ△！
０１，５０μｍを１１１のＰＢＳに溶解し、ついで２０
０　μｌ　の１ｍＭのＮ−サクンニジル３−（２−ピリ
ジルチオ）プロピオネ−）　（ＳＰＤＰ）　（和光純薬
社製）のエタノール溶液を攪拌しながら添加し、室温で
３０分間反応を行った。反応後セファデックスＧ−２５
カラムクロマトグラフィーを用いて未反応の５ＰＤＰ及
び抗体とＳ　Ｐ　Ｄ　）１結合抗体分画を分離した。こ
の５ＰＤＰ結合抗体分画をジチオスレイトール（ＤＴＴ
）処理した。他方、西洋ワサビバーオキンダーゼ（ＩＩ
ＲＰＯ）（Ｓ　ｉ　Ｐ、ｎ＋ａ社製）　０．５　ｎａｇ
を１ｍｌのＰＢＳに溶解し、ついで　２５０μｍのＩｍ
Ｍ　ＳＰ叶エタノール溶液を攪拌しながら添加し、室温
で３０分間反応後、セファデックスＧ−２５カラムクロ
マトグラフイーを用いて未反応の５ＰＤＰ及びＩＩＲＰ
Ｏと５ＰＤＰ結合１−ＩＲＰＯ分画を分離した。

この５ｐｏｐ結合ＨＲＰＯ分画とＤＴＴ処理した５ｐｏ
ｐ結合抗体分画とを混合した後室温で１６時間反応させ
、酵素標識ＬＩＳＡＩＯＩ抗体を得た。

実施例　８゜ モノクローナル抗体固相化プレートの作成９６穴のプレ
ート（Ｆｌｏｗ社５！りの各式に、実施例２で作成した
モノクローナル抗体ＬＩＳＡＩＯ１の１００＋＊Ｍ炭酸
水素ナトリウム−５０ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液を５０
μｌずつ各式に分注し、室温で１時間静置後１％ＢＩＩ
Ｓで洗浄し、Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　１０１抗体固相化プレー
トを得た。

実施例　９゜ モノクローナル抗体を用いた癌の血清学的診断（サンド
イッチ方式による酵素免疫測定法）実施例８で得たＬ　
Ｉ　Ｓ　Ａ　Ｉ　Ｏ１抗体固相化プレートの各式に検体
面精５０μｍを加え、室温で１６時間反応後、ＰＢＳで
洗浄する。　第二抗体として、実施例７と同様の方法で
作成したペルオキシダーゼ標識Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　２０２
抗体を１００μＩ各穴に加え室温で１６時間反応した後
、ＰＢＳでよく洗浄した。

次に酵素基質反応の基質として、オルト−フェニレンジ
アミン（Ｓｉｇｎａ社り　（３ｎｇ／ｍｌ）を１００μ
ｌ各穴に加え、室温で３０分間反応させ、ＩＮ硫酸１０
０μｍを各式に加え反応を停止した。各式の溶液の４９
２　ｎｍにおける吸光度を測定した（００４９□）。そ
の結果は図に示す様に、健常者１ｆｌｌｔ＃では、その
最１？１ｉ測定値は０．２９５であったので、０．３０
を正常の上限とした（１２９例）。正常値を０．３０と
した、各種の癌患者での陽性率は、肺癌患者では４６％
（１１２例１１５１例）、胃癌患者では１８％（１７例
中３例）、大腸癌患者では１３％（１５例中２例）、肝
癌患者では１８％（３９例中７例）、膵癌患者では７９
％（３３例中２６例）、という結果であった。この結果
は肺癌及び膵癌で４６％及び７９％と高い確立で診断が
可能であることがわかる。肺の良性疾患および消化器の
良性疾患での陽性率は、それぞれ１２％（５１例中６例
）および２％（５４例中１例）という結果であった。

また肺癌患者の組織別での陽性率は、腺癌患者では６０
％（５０例中３０例）、扁平上皮癌患者では２９％（３
８例中１１例）、小細胞癌患者では４２％（２４例中１
０例）という結果であり、組織別でみると特に腺癌の陽
性率が高いことがみとめられた。さらに腺癌をステージ
別に分類すると、ステージＩと■では５６％（１８例中
ＩＯ例）、ＩＩＩでは５０％（１６例中８例）、■では
７５％（１６例中１２例）、という結果であった。

この結果は現在の早期の肺腺癌（ステージＩ。

■）でのＣＥＡの陽性率が２５％以下ということを勘案
すれば、５６％の陽性率は早期の肺腺癌の発見に特に有
用であることが示唆された。

【図面の簡単な説明】

図は、本モノクローナル抗体を用いたエンザイムイムノ
アノセイによる種々の癌患者の血清学的診断の結果を示
す。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト肺腺癌由来のＶＭＲＣ−ＬＣＲ株を哺乳動物
   に免疫し、当該動物から得られる抗体産生細胞と骨髄腫
   細胞とを融合させた融合細胞が産生し、その認識する抗
   原がシアル酸化された糖蛋白あるいは糖脂質であり、か
   つヒト肺腺癌細胞と反応し、ヒト正常肺細胞とは反応し
   ないことを特徴とする抗ヒト肺癌モノクローナル抗体。
2. （２）クラスＩｇＧ＿１に属する特許請求の範囲第（１
   ）項記載の抗ヒト肺癌モノクローナル抗体。
3. （３）クラスＩｇＭに属する特許請求の範囲第（１）項
   記載の抗ヒト肺癌モノクローナル抗体。
4. （４）免疫する動物がマウスで、抗体産生細胞がマウス
   脾臓由来のＢ細胞である特許請求の範囲第（１）項記載
   の抗ヒト肺癌モノクローナル抗体。
5. （５）ヒト肺腺癌由来のＶＭＲＣ−ＬＣＲ株を哺乳動物
   に免疫し、当該動物から得られる抗体産生細胞と骨髄腫
   細胞とを融合させた融合細胞が産生し、その認識する抗
   原がシアル酸化された糖蛋白あるいは糖脂質であり、か
   つヒト肺腺癌細胞と反応し、ヒト正常肺細胞とは反応し
   ない抗ヒト肺癌モノクローナル抗体を用いた免疫学的測
   定法。