JPS61146194A

JPS61146194A - ３′−デオキシグアノシンの製造法

Info

Publication number: JPS61146194A
Application number: JP26709084A
Authority: JP
Inventors: Tetsuro Fujishima; 藤島　鉄郎; Yuichiro Midorikawa; 緑川　祐一朗
Original assignee: Yamasa Shoyu KK
Current assignee: Yamasa Shoyu KK
Priority date: 1984-12-18
Filing date: 1984-12-18
Publication date: 1986-07-03

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、グアニン誘導体と３′−デオキシアデノシン
誘導体とを原料として酵素合成により３′−デオキシグ
アノシンを製造する方法に関する。

〔従来の技術〕

３′−デオキシグア／シンは、癌治療において放射線増
感作用を示すだけではなく、各種の抗癌剤と併用する際
にその効果を増強する作用を有しており、現在注目を浴
びている化合物である（特開昭５７−８５５１６号）。

従来、３′−デオキシグアノシンの調製法としては、２
−アセトアミドヒポキサンチンを原料とする化学合成法
（ザ・、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリ
ー（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ）　３０　、２８５１（１’
９６５））が知られているが、縮合反応時に異性体を生
ずるとか有害化合物を使用する、あるいは目的物の３′
−デオキシグアノシンの収率が低い等、工業的生産１ζ
於て種々の難点を有していた。

また３′−デオキシアデノシンから化学的に合成した２
−アミノ−３′−デオキシアデノシンまたはそのＮ６位
置換誘導体のＮ６位のみをアデノシンデアミナーゼによ
って選択的に脱アミノし、３′−デオキシグアノシンを
製造する方法も開発されている（特開昭５８−９６９６
号）。しかしこの方法は、原料化合物を３′−デオキシ
アデノシンから化学的に合成しなければならず、収率お
よび操作性に問題がある。

先に本発明者らは、特定のグアニン誘導体と、特定の８
−デオキシリボース供与体とを、ヌクレオシドホスホリ
ラーゼ含有物の存在下で反応させて３′−デオキシグア
ノシンを酵素的に合成する方法を開発した（特開昭５８
−１７０４９３号）。

その後、本発明者の一人は、上記と同様の方法において
ヌクレオシドホスホリラーゼ源として特定の微生物を使
用する方法を開発した（特開昭５９−８５２９８号）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ヌクレオシドホスホリラーゼの作用によって３′−デオ
キシグアノシンを調製する場合、３−デオキソリボース
供与体として３′−デオキソイノンンを用いると、８′
−デオキシアデノシンを用いる場合よりも目的の３′−
デオキシグアノシンの生成量が低下することが判明して
いる。

すなわち、３−デオキシリボース供与体として、入手の
容易な８′−デオキシアデノシン誘導体を使用し、ヌク
レオシドホスホ、リラーゼ源として、アデノシンデアミ
ナーゼ活性の混在する複数酵素含有物を用いる場合、８
′−デオキシアデノシン誘導体はアデノシンデアミナー
ゼによって脱アミノ反応を受けて８′−デオキシイノシ
ン誘導体となり、最終的には８′−デオキシグアノシン
の収率低下の原因となる問題点が存在している。このよ
うな問題点は、ヌクレオシドホスホリラーゼ源として微
生物を培養して得られる培養物、培養菌体またはこれら
の粗精製物を使用する場合に顕著に表われる。ヌクレオ
シドホスホリラーゼ生産菌の中には、〔問題点を解決す
るための手段〕前記の問題点を解決するために、ヌクレオシドホスホリ
ラーゼ源に混在するアデノシンデアミナーゼのみを特異
的に除去する方法について種々の方法を検討した。

温度、ｐＨ等の条件を変えた熱処理では、共存するアデ
ノシンデアミナーゼのみを特異的に消失させることはで
きなかった。

次いで酵素阻害剤の存在下で反応を行う方法を検討した
結果、反応液中にアデノシンデアミナーゼ阻害剤を存在
させると、８′−デオキシアデノシンの脱アミノ化が抑
制され、３′−デオキシグアノシンへの転換率が向上す
ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成させ
た。

本発明は、一般式（１）〔式中、Ｒは水素原子またはリボース−１−イル基、２
−デオキシリボース−１−イル基もしくはこれらのモノ
りん酸エステル、ジりん酸エステル、トリりん酸エステ
ルを示す。〕で表わされるグアニン誘導体の一種または
二種以上と、３′−デオキシアデノシン誘導、体の一種
または二種以上とを、ヌクレオシドホスホリラーゼ含有
物の存在下で反応させて３′−デオキシグアノノンを合
成する齋こ際し、反応液にアデノシンデアミナーゼ阻害
剤を存在せしめることを特徴とする３′−デオキシグア
ノシンの製造法を提供するものである。

本発明はヌクレオシドホスホリラーゼの作用によって８
′−デオキシグアノシンを製造する公知の方法１こおい
て、反応液中にアデノシンデアミナーゼ阻害剤を存在さ
せることに特徴を有する方法であり、他の要件は前記の
公知方法によることができる。

以下、本発明を具体的に説明する。

原料のグアニン誘導体としては前記一般式Ｎ）に含まれ
る化合物の一種または二種以上が使用されるか、具体的
にはグアニン（Ｇｕａ）またはグアノシン（Ｇｕｍ）、
２′−デオキシリｙ　ノン７　（ｄＧｕｏ）　　もしく
はこれらのモノりん酸エステル、ジりん酸エステル、ト
リりん酸エステルなどを挙げることができる。上記のヌ
クレオシドの各種りん酸エステルは、糖残基における水
酸基のいずれの位置がりん酸エステル化されたものであ
ってもよい。これらりん酸エステルの具体例としてはグ
アノシン−５′−モノりん酸（ＧＭＰ）　、グアノシン
−８′−モノりん酸、グアノシン−２′−モノりん酸、
グアノシン−５′−ジりん酸（ＧＤＰ）　、グアノシン
−５′−トリりん酸（ＧＴＰ）、２’−デオキシグアノ
シン−５′−モノりん酸（２’　−ｄＧＭＰ　）、２′
−デオキシグアノシン−３′−モノりん酸、２′−デオ
キシグアノノン−５′−ジりん酸（２’　−ｄＧＤＰ　
）、２′−デオキシグアノシン−５′−トリりん酸（２
’−ｄＧＴＰ）などの遊離型もしくは適当な塩型、たと
えばナトリウム塩を挙げることができる。本発明の目的
に特に好適なグアニン誘導体はグアノシンまたはグアノ
シン−他の原料である８′−デオキシアデノシン誘導体
とは、ヌクレオシドホスホリラーゼの作用によって前記
グアニン誘導体に対して３−デオキシリボースを供与し
うる化合物であり、具体的には８′−デオキシアデノシ
ン（３’　−ｄＡｄｏ；別名、コルジセピン）そのもの
、・またはそのモノりん酸エステル、ジりん酸エステル
もしくはトリりん酸エステルなどが挙げられる。上記の
りん酸エステルは３−デオキソリボースにおける水酸基
のいずれの位置がりん酸エステル化されたものであって
もよ（、遊離型、塩型のいずれであってもよい。具体的
には８′−デオキシアデノシン−５′−モノりん酸（８
’　、−ｄＡＭＰ）、８′−デオキシアデノシン−５′
−ジりん酸、３′−デオキシアデノシン−５′−トリり
ん酸などが例示される。

本発明の反応における酵素源であるヌクレオシドホスホ
リラーゼとは、りん酸イオン供与体の存在下でグアニン
誘導体と８′−デオキシアデノシン誘導体とを反応させ
て８′−デオキシグアノシンを与える単独もしくは複数
の酵素を総称するものである。したがって、本発明にお
いては［ヌクレオシドホスホリラーゼ」という用語には
、プリンヌクレオシドホスホリラーゼなどのホスホリラ
ーゼ型の酵素だけではなく、ヌクレオシド−Ｎ−グリフ
シルトランスフエーゼのような転移酵素型の酵素、ヌク
レオチダーゼ、ホスファターゼなど本発明の反応に関与
する可能性のある酵素も包含される。また、本発明は酵
素源の中にヌクレオシドホスホリラーゼとともに存在す
るアデノシンデアミナーゼの活性を抑制することによっ
て３′−デオキシリアノシンの収率を向上させることを
目的とする発明であるから、ヌクレオシドホスホリラー
ゼ含有物中１こはヌクレオシドホスホリラーゼとともに
アデノシンデアミナーゼも存在するものとする。

なお、本発明においてアデノシンデアミナーゼとは、３
′−デオキシアデノシン誘導体に作用して対応する３′
−デオキシイノシン誘導体を与える酵素をいう。

本発明においてヌクレオシドホスホリラーゼ含有物とは
以上のような酵素を任意の形態で含有する物質を総称す
るものであり、その起源・由来を問わない。すなわち、
微生物由来てあれ、動物由来であれ、また、調製形態の
いかんを問わず、本発明の目的を達成することができる
ものであれば本発明に適用できる。特に、微生物由来の
ヌクレオシドホスホリラーゼ含有物が好ましい。

微生物由来のヌクレオシドホスホリラーゼ含有物として
は、シュウトモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　；以下
「工」と略す。）属、ブレビバクテリウム（略す。）属
、ミクロコツ力ｘ　（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　；以下
［Ｍ、Ｊ、！：略す。）属、スタフィロコッカス（する
微生物に由来するヌクレオシドホスホリラーゼ含有物が
例示される。以上の属に属する微生物の一例としては以
下に示す菌株が挙げられる。なお、これらの菌株は全て
公知の菌株である（特開昭５８−１７０４９８号、特開
昭５９−８５２９８号参照）。

１）シュウトモナス・テスモリチカ（ｐ、ｄｅｓｍｏｌ
ｙｔｉｃａ）　Ｊ　−４−２微工研菌寄第６３０７号（
ＦＥＲＭ　Ｐ　−６８０，７）２）プレヒハクテリウム
・アセチリカム（Ｂ、ａｃｅｔｙｌｉｃｕｍ）ＡＴ−６
−７微工研菌寄第６３０４号（ＦＥＲＭ　Ｐ−６８０４
）４）キサントモナス・キャンペストリス（Ｘ、　ｃａ
ｍｐｅｓｔｒｉｓ）微工研菌寄第６７８２号（ＦＥＲＭ
　Ｐ　−６７８２）。

ＩＡＭ　１６７１．ＡＴＣＣ７８８１５）ミクロコツカス・ルテウス（Ｍ、　１ｕｔｅｕｓ）
ＡＴＣＣ４６９８，ＩＡＭ　１０５６６）スタフィロコッカス・アウレウス（５ｔ、　ａｕｒ
ｅｕｓ）ＩＡＭ　１０１１．ＡＴＣＣ６５８８Ｐ７）　
　　　　　　同　　上　　　　　　　　ＩＦＯ３０６０
８）スタフィロコッカス・エビデルミゾイス（３ｔ、　
ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）ＩＦＯｆｌ１７６２．ＡＴＣ
Ｃ１５５９）サルシナ・マルギナータ（肋、　ｍａｒｇｉｎａｔ
ａ）微工研菌寄第６５３９　（ＦＥＲＭ　Ｐ−６５３９
）また、前記の菌株から、紫外線、Ｘ線、γ線の照射な
どの物理的処理もしくはニトロソグアニジンなどによる
薬剤処理など、一般的変異誘導法による誘発突然変異ま
たは自然の原因に起因する自然突然変異によって誘導さ
れた変異株も、本発明の目的に適したヌクレオシドホス
ホリラーゼ活性を失わない限り、本発明に使用すること
ができる。

これらの微生物の培養に際し、使用される培地および培
養法は、これらの微生物が生育する限り、特に限定され
ない。

培地としてはこれらの微生物が資化可能な炭素源および
窒素源を適当量含有し、必要に応じて無機塩、微量発育
促進物質、消泡剤などを添加したものが使用される。

微生物由来のヌクレオシドホスホリラーゼ含有物として
は、通常、培養物、生菌体または菌体処理物が使用され
ている。

ここで、培養物とは微生物を培養して得られる微生物菌
体と培地とが未分離の状態のものをいう。

また、生菌体は、培養物から遠心分離、沈降分離、凝集
分離などの通常の分離方法によって分離された菌体で、
後述する処理（菌体分離処理を除く）を施さないものを
いう。さらに、菌体処理物とは、乾燥菌体、細胞膜およ
び／または細胞壁変性菌体、破砕菌体、固定化菌体、菌
体抽出物、ヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有する菌
体抽出物の蛋白質画分もしくはその精製物、蛋白質画分
もしくはその精製物の固定化物などを指称する。

菌体処理物を得るための方法を以下に例示する。

すなわち、■生菌体に対し、たとえば凍結融解処理、凍
結乾燥処理、通風乾燥処理、アセトン乾燥処理、酸性な
いしアルカリ性下における加温処理、磨砕処理、超音波
処理、浸透圧処理などの物理的処理手段、もしくはたと
えば、リゾチーム、細胞壁溶解酵素などの酵素処理、ト
ルエン、キシレン、ブチルアルコールなどの溶媒もしく
は界面活性剤との接触処理などの化学的ないし生物化学
的処理を単独もしくは組合せて施す方法、■菌体抽出物
に対し、たとえば塩析処理、等電点沈澱処理、有機溶媒
沈澱処理、各種クロマトグラフ処理、透析処理などの酵
素分離精製手段を単独もしくは組合せて施す方法、■生
菌体、菌体抽出物もしくはその精製物に包括処理、架橋
処理、担体への結合処理（共有結合、イオン結合、物理
的吸着などによる。ンなどの酵素固定化手段を施す方法
などにより菌体処理物を得ることができる。

本発明においてアデノシンデアミナーゼ阻害剤とは、前
記のアデノシンデアミナーゼを阻害する物質をいう。こ
のようなアデノシンデアミナーゼ阻害剤として公知の物
質としては、例えば（Ｒ１−３−（２−デオキシ−β〜
Ｄ−エリスロベントフラノシル）　−８，６，７，８−
テトラヒドロイミダゾ〔４゜５−ｄ：）〔１，ｌ）ジア
ゼピン−８−オール（別名；２′−デオキシコホルマイ
シン）（特公昭５８−４８１６０号、特公昭５８−４４
５５９号１特公昭５６−２４５１８号）、９−β−Ｄ−
リボフラノシルプリン（別名募ネブラリン）（特開昭５
８−５２２２３号）、Ｎｌ−メチル−８−（ω−アミノ
ア１ルキルアミノ）−アデノシン（特開昭５５−１２７
４００号）などが知られており、いずれの化合物を本発
明に使用してもよい。本発明の目的には特に２′−デオ
キシコホルマイシンが好ましい。

なぜなら、２′−デオキシコホルマイシンは、強力なア
デノシンデアミナーゼ阻害活性を有する化合物であると
ともに特定の微生物を培養することによって容易に製造
することができるからである。

微生物による２′−デオキシコホルマイシンの製造法と
しては、ストレプトマイセス・アンチビオチフスを培養
して製造する方法（特公昭５８−４８１６０号）および
アスペルギルス属またはエメリセラ属に属する微生物を
培養して製造する方法（特公昭５８−４４５５９号、特
公昭５６−２４５１８号）が知られている。本発明にお
いて使用される２′−デオキシコホルマイシンは、いか
なる製法によって使られたものであっても同様に使用す
ることができるが、とりわけアスペルギルス属またはエ
メリセラ属に属する微生物を培養して得られるものが好
ましい。

以下、その理由を述べる。すなわち、アスペルギルス属
またはエメリセラ属に属する微生物は、２′−デオキシ
コホルマイシンと同時に、本発明において３−デオキシ
リボース供与体として使用される３′−デオキシアデノ
シンを大量に生産するので、上記微生物の培養物より調
製された両物質の混合物を本発明における原料として用
いるときには、反応に際して３′−デオキシアデノシン
の脱アミノ化を抑制し、ひいては８′−デオキシグアノ
シンの収率向上につながるのである。

例エバ、アスペルギルス・ニドランスＹ１７６−２（微
工研菌寄第３４７８号）の粧培養抽出液中には、１ｅあ
たり３′−デオキシアデノシン約２９および２′−デオ
キシコホルマイシン約２０ｑが含まれており、この抽出
液は、本発明の反応の原料として十分な量の３′−デオ
キシアデノシンおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を
含有している。

２′−デオキシコホルマイシンは前記のとおり微生物を
培養して培地中に生成蓄積させることができるが、その
方法は公知の方法によって行うことができる。すなわち
、成体培養による場合は、使用微生物が同化可能な炭素
源および窒素源はじめ生育に必要な各種微量成分を含有
する液体培地に、使用微生物を接種し、表面培養法また
は十分な酸素供給下における深部培養法によって培養し
、２′−デオキシコホルマイシンが生成畜積するまで培
養する。また、固体培養による場合は、例えば適度に撒
水した粧または米などの天然固体培地、炭素源と窒素源
とを含む粒状物培地、または栄養物を含有させたスポン
ジその他の多孔性固相培地に使用微生物を接種し、常法
によって好気的に培養し、培地中に２′−デオキシコホ
ルマイシンを生成蓄積させることができる１、培養後、
液体培養物の場合は常法により菌体を除去し、固体培養
物の場合は水などによって抽出し、必要に応じて濾過、
遠心分離などに付して２′−デオキシコホルマイシンを
含有する溶液を得ることができる。本発明においてはこ
の溶液をそのまま使用してもよいが、部分的に精製して
粗精製物として、または完全に精製し、２′−デオキシ
コホルマイシンを単離して使用してもよい。

なお、２′−デオキンコホルマイノン生産微生物。

としてアスペルギルス属またはエメリセラ属に属する微
生物を使用する場合には、培養物中に２′−デオキシコ
ホルマイシンと同時に３′−デオキシアデノシンも生成
蓄積されるので、液体培養物または固体培養物の抽出液
から必要に応じて固型物を除去し、またはこれを適宜精
製し、本発明の反応に際し、３′−デオキソアデノノン
と２′−デオキンコホルマイシンを含有する混合物を調
製し、これを基質溶液として使用してもよい。

以下、本発明の反応方法および反応条件について述べる
。

本発明の反応は、前記のグアニン誘導体、３′一デオキ
シアデノシン誘導体およびアデノシンデアミナーゼ阻害
剤を含をする基質溶液とヌクレオシドホスホリラーゼ含
有物とを接触させ、原料化合物にヌクレオシドホスホリ
ラーゼを作用させることによって行われる。

基質溶液は、基本的にはグアニン誘導体、３′−デオキ
シグアノシン誘導体およびアデノシンデアミナーゼ阻害
剤が溶解（一部懸濁する場合も含む。）した水性媒体で
ある。水性媒体は水または酵素反応に好適な各種緩衝液
（りん酸緩衝液、イミダゾールー塩酸緩衝液、ベロナー
ル−塩酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液など）であり、り
ん酸イオン供与源を含有し、必要に応じてその他の物質
を含有していてもよい。

本発明の反応は、基本的にはヌクレオシドホスホリラー
ゼの作用・に基つくものであるから、反応液中にりん酸
イオン供与源か存在する必要がある。

りん酸イオン供与源としては、水性媒体中でりん酸イオ
ンに解離しつるもののいずれを用いてもよく、たとえば
遊離型りん酸そのもの、無機りん酸塩、たとえばナトリ
ウム、カリウムなどのアルる。これらのりん酸供与源は
りん酸イオンとしてグアニン誘導体の約１．０〜２．５
倍モルｉこなるように使用すればよい。

なお、基質のグアニン誘導体および／または３′一デオ
キシアデノシン誘導体としてりん酸エステル体のものを
用い、かつ反応液中にホスファターゼ活性物質またはヌ
クレオチダーゼ活性物質が存在する場合には、特に他の
りん酸供与源を添加する必要はない。

反応に際し、基質濃度は特に制限されないが、いずれの
基質も５〜５０　ｍＭの範囲で通常使用され、グアニン
誘導体番とついては１５〜３５　ｍＭ程度が、３−デオ
キシアデノシン誘導体についても１５〜８０ｍＭ程度が
好適である。

反応液中のアデノシンデアミナーゼ阻害剤の濃度も特に
限定されない。また、好適な濃度は反応液中のアデノシ
ンデアミナーゼ活性およびアデノシンデアミナーゼ阻害
剤の種類によって異なるので、反応液中のアデノシンデ
アミナーゼの活性および使用するアデノシンデアミナー
ゼ阻害剤の阻害活性の程度を勘案して決定すればよい。

また、ヌクレオシドホスホリラーゼ含有物の使用量は基
質の濃度、反応効率、経済性などを考慮し、当業者が容
易に決定できる。

基質溶液とヌクレオシドホスホリラーゼ含有物を接触さ
せる方法は、本発明の酵素反応か進行する限り特に限定
されず、バッチ方式でも、連続方式でもよい。また、ヌ
クレオシドホスホリラーゼ含有物が微生物の培養物であ
るときには、微生物の培養中に培地に前記の基質および
アデノノンデアミナーゼ阻害剤を添加して本発明による
反応を起こさせることも可能である。

反応条件は、アデノシンデアミナーゼ阻害剤の添加によ
って特に変更する必要はなく、公知の条件と同様でよい
。すなわちヌクレオシドホスホリラーゼ含有物に含まれ
るヌクレオシドホスホリラーゼの至適温度および至適ｐ
Ｈ１基質の安定性、反応効率などを考慮して決定すべき
ものであるが、通常、温度３５〜８０°Ｃ１好ましくは
４０〜７０’Ｃ，ｐＨ５，０〜９．０１好ましくはｐＨ
６，０〜８．０の範囲である。なお、反応中にｐＨが変
動するときは、酸またはアルカリなどを用いて好ましい
ｐＨに補正すればよい。また、例示菌株に由来するヌク
レオシドホスホリラーゼ含有物を使用する際には、その
至適温度はいずれも４０〜７０°Ｃ付近であり、比較的
高温で反応を行えるので微生物汚染への対策を考慮する
必要がないという利点を有する。

反応時間は、反応基質の目的物への変換率を確認しなが
ら決定すればよいが、通常バッチ方式では１５〜４５時
間程度、好ましくは２４〜３６時間程度反応させればよ
く、連続方式ではバッチ方式に準じて適当な条件を設定
して反応させればよい。

反応後、必要に応じて常法によってヌクレオシドホスホ
リラーゼ含有物を分離除去し、３′−デオキシグアノシ
ンの単離精製工程に供する。

３′−デオキシグアノシンの単離精製は公知の方法によ
ればよく、たとえばイオン交換クロマトグラフィー、吸
着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル
濾過など各種のクロマトグラフィー、向流分配法、再結
晶法などの一般的な分離精製法を単独であるいは適宜に
組合せて行えばよい。

〔作用〕

まず、本発明の発想の基礎となる事実について述べる。

ヌクレオシドホスホリラーゼ含有物として微生物の生菌
体を使用し、３−デオキシリボース供与体として３′−
デオキシアデノシンまたは３′−デオキシイノシンを用
いて、グアニン誘導体との反応を行ったところ、３−デ
オキシリボース供与体とだ。さらに、３′−デオキシア
デノシンと３′−デオキシイノシンの量比を変えて両者
を混合して３−デオキシリボース供与体として使用し、
反応を行ったところ、３゛−デオキシアデノシンの量比
か低下し、３゛−デオキシイノシンの量比が上昇するに
従って３′−デオキシグアノシンの生成率は低下した。

例えば、ヌクレオシドホスホリラーゼ含有物としてブレ
ビバクテリウム・アセチリカムＡＴ−６−７（微工研菌
寄第６３０５号）を用い、３′−デオキシアデノシンと
３′−デオキシイノシンの量比を変えて反応を行ったと
ころ３′−デオキシグアノシンの生成率は第１表に示す
とおりであった。

第　　１　　表上記の傾向は他の菌株を使用した場合も同様に認められ
た。

以上の事実から３′−デオキシグアノシンの生産に関与
するヌクレオシドホスホリラーゼは、３′−デオキシア
デノシン誘導体に対する基質特異性が高いことが推定さ
れた。

一方、３−デオキシリボース供与体として８′−デオキ
シアデノシンのみを使用し、ヌクレオシドホスホリラー
ゼ含有物としてブレビバクテリウムアセチリカムＡＴ−
６−７を使用して上記と同様に反応を行い、反応終了後
、反応液中に存在する物質について分析を行ったところ
、３′−デオキシイノシンが比較的多く存在することが
判明した。

この事実から、原料として使用した３′−デオキソアデ
ノシンの一部は、３′−デオキシグアノシンに変換され
ることなく、アデノシンデアミナーゼの作用を受けて３
′−デオキシイノシンに変換され、反応液中に残存した
ものと推定された。

これらの事実から、８′−デオキシアデノシン誘導体は
３′−デオキシグアノシンの生産１こ関与するヌクレオ
シドホスホリラーゼの良好な基質ではあるが、その一部
は３′−デオキシグアノシンへ変換されず、アデノシン
デアミナーゼの作用を受けて３′−デオキシイノノン誘
導体へ変換され、３′−デオキシイノシン誘導体はヌク
レオシドホスホリラーゼの良好な基質ではないために３
′−デオキシグアノシンに変換されず、そのまま残存す
るものと結論した。

以上の事実を踏まえてヌクレオシドホスホリラーゼ含有
物に対し、各種の処理を行い、ヌクレオシドホスホリラ
ーゼには損傷を与えず、アデノシンデアミナーゼのみを
特異的に失活させる方法および条件を検索したが、これ
らの処理に対して同酵素がほとんど同一の挙動を示すこ
とから、このような処理によっては目的は達成できなか
った。

本発明は、以上の試行錯誤の末に、反応液中にアデノシ
ンデアミナーゼ阻害剤を存在させることを発想すること
によって完成されたものである。

本発明の作用は、８′−デオキシグアノシンの生産に関
与するヌクレオシドホスホリラーゼが３′−デオキシア
デノシン誘導体に対して高い基質特異性を示すこと、お
よびアデノシンデアミナーゼ阻害剤がヌクレオシドホス
ホリラーゼに影響を及ぼすことなく、共存するアデノシ
ンデアミナーゼにのみ作用して３′−デオキシアデノシ
ンの分解を抑制することに基いている。

〔実施例〕

以下、実施例をもって本発明をより具体的に説明するが
、これらはいずれも実施の一態様を示すものであって、
本発明の範囲を制限するものではない。

なお、各実施例において３′−デオキシグアノシンの分
析は高速α体りロマトグラフィ一番こよって行った。以
下に示す装置および条件で分析すると、３′−デオキシ
グアノシンは保持時間１２．９０分付近に溶出され、検
量線よりその量を算出できる。

また、３′−デオキシグアノシン生成率とは基質である
３−デオキシリボース供与体に対する生成した３′−デ
オキシグアノシンのモル比□□□である。

装置：島原高速液体りロマトグラフＬＣ−８Ａ型（■島
原製作所製）カラム：ゾルバック７、　（５ｏｒｂａｘ　）　Ｑ　Ｄ
Ｓ、　４．６１１１１Ｘ２５０１１１１１（島原デュポ
ン社製）溶出剤：５％アセトニトリルを含む２０ｍＭト
リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）流速：１１１ｔ／分カラム操作温度：室温実施例１３′−デオキソアデノシン２．５１２す、５′−グアニ
ル酸ナトリウム（水分１０．２９９６）　６．８０９Ｖ
およびりん酸−カリウム０．８４０１　を溶解し、さら
に１．５　％酵母エキス培地１０ｄで培養したブレビバ
クテリウムづセチリカムＡＴ−６−７の分解菌体を添加
してＩｇ（ｐＨ７，ｏ）とし、５５°Ｃ３２２時間反応
した。３′−デオキシグアノシンの生成率は、５４．７
６％であった。上記反応液に２５＃の２′−デオキソコ
ホルマイシンを添加し、同一条件で反応したところ、３
′−デオキシグアノシンの生成率は、８８．４９６であ
っ總実施例２アスペルギルス・ニドランスＹ−１７６−２の鼓（ふす
ま）培養抽出液を濃縮し、９２４の濃縮液を得た。この
濃縮液中には、３９３ｇの３′−デオキシアデノシンと
８．０６　ｇの２′−デオキシフホルマイシンが存在し
ていた。この濃縮液に５′−グアニル酸ナトリウム（水
分１０．２９％）１０６２．１　９と、りん酸−カリウ
ム５８ｇを加え、さらに１．５　％酵母エキス１０００
ｊ？て培養したブレビバクテリウム・アセチリカムＡＴ
−６−７７７）分離菌体を添加して２００６（ｐＨ７，
０）とし、５５°０．２３時間反応した。

この時の３′−デオキシグアノシンの生成率は９２．０
％であった。反応液から遠心分離により菌体を除去した
液を５００ｅ（ｐＨ５，５）に稀釈し、ハイポーラス吸
着樹脂１２０１に吸着、水洗後、５０９Ｍ）エタノール
５００ａで溶出した。

溶出液をｐＨ７，０に中和後濃縮し６４ｇとし、活性炭
１４ｇを加え脱色処理を行い、冷却した。

生成した結晶を再結晶し、乾燥後３′−デオキシグアノ
シンの結晶３２２すを得た。精製収率は８８．７３％で
あった。

〔発明の効果〕

本発明は、３−デオキソリボース供与体として、３′−
デオキシグアノシンの生成に関与するヌクレオシドホス
ホリラーゼに関して最も有利な基質である８′−デオキ
シアデノノン誘導体を利用すること、および反応液中に
共存するアデノシンデアミナーゼの作用を同酵素の阻害
剤を反応液中に存在させることによって抑制し、ヌクレ
オシドホスホリラーゼによる反応に関しては不利な基質
である３′−デオキシイノシン誘導体の生成を防止し、
結果的に３′−デオキシアデンンの生産効率を向上させ
たものである。

さらに、３′−デオキシアデノシンとアデノシンデアミ
ナーゼ阻害剤である２′−デオキシコホルマイソンを同
時に生産する微生物を培養して得た、両物質の混合物を
本発明の基質の一部として使用する場合には、アデノシ
ンデアミナーゼ阻害剤を別途添加することなく、８′−
デオキシアデンンの生産効率を向上させることができる
とともに、生産工程を著しく簡略化できる利点がある。

Claims

【特許請求の範囲】一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕〔式中、Ｒは水素原子またはリボース−１−イル基、２
−デオキシリボース−１−イル基もしくはこれらのモノ
りん酸エステル、ジりん酸エステル、トリりん酸エステ
ルを示す。〕で表わされるグアニン誘導体の一種または
二種以上と、３′−デオキシアデノシン誘導体の一種ま
たは二種以上とを、ヌクレオシドホスホリラーゼ含有物
の存在下で反応させて３′−デオキシグアノシンを合成
するに際し、反応液にアデノシンデアミナーゼ阻害剤を
存在せしめることを特徴とする３′−デオキシグアノシ
ンの製造法。