JPS61130305A - 担体支持分子、該分子の製法及び適用法 - Google Patents
担体支持分子、該分子の製法及び適用法Info
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- JPS61130305A JPS61130305A JP60153941A JP15394185A JPS61130305A JP S61130305 A JPS61130305 A JP S61130305A JP 60153941 A JP60153941 A JP 60153941A JP 15394185 A JP15394185 A JP 15394185A JP S61130305 A JPS61130305 A JP S61130305A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ポリヌクレオチド、よシ詳細には固体担体に
共有結合的に固定されたオリゴヌクレオチドフラグメ７
ＫＦｒ勢、該担体支持ポリヌクレオチド又はオリゴヌク
レオチドの製法、これらの製造に有用な中間体、該中間
体の獲得方法及びその適用法に係る。
共有結合的に固定されたオリゴヌクレオチドフラグメ７
ＫＦｒ勢、該担体支持ポリヌクレオチド又はオリゴヌク
レオチドの製法、これらの製造に有用な中間体、該中間
体の獲得方法及びその適用法に係る。
本発明はより詳細には、更に、小形の核酸配列。
特に５０個未満或いは２０個未満のヌクレオチドを含み
得るオリゴヌクレオチドを使用し、固体担体によシ支持
されるか又は該担体く固定される上記型のゾンデ（プロ
ーブ）の製造を可能くする技術に係る。
得るオリゴヌクレオチドを使用し、固体担体によシ支持
されるか又は該担体く固定される上記型のゾンデ（プロ
ーブ）の製造を可能くする技術に係る。
ゾンデとして使用される所定のヌクレオチド配列と、核
酸を含む組成物中に含まれ得るゾンデの配列と相補的な
ヌクレオチド配列とのノ・イゾリソド形１ｉ１ＥＫ基づ
くこのような検出技術は、当業者に公知である。しかし
乍ら、この技術は実施が困難であり、非常に熟練した専
門家でなければ再現的な結果を得られず、ゾンデが担体
く固定される場合、及び検出すべきヌクレオチド７２グ
メ／トを含み得る核酸の組成物が、ハイプリント形成条
件下でゾンデＫｗ：触させられ、接触を維持される場合
２この傾向は特に顕著である。
酸を含む組成物中に含まれ得るゾンデの配列と相補的な
ヌクレオチド配列とのノ・イゾリソド形１ｉ１ＥＫ基づ
くこのような検出技術は、当業者に公知である。しかし
乍ら、この技術は実施が困難であり、非常に熟練した専
門家でなければ再現的な結果を得られず、ゾンデが担体
く固定される場合、及び検出すべきヌクレオチド７２グ
メ／トを含み得る核酸の組成物が、ハイプリント形成条
件下でゾンデＫｗ：触させられ、接触を維持される場合
２この傾向は特に顕著である。
担体支持ゾンデの製造は、一般にゾンデ配列を担体く固
定する反応を使用している。該固定は、場合によっては
化学的試薬（例えばカルボジイミド又はジアゾ化試薬）
Ｋより強化され、一般に。
定する反応を使用している。該固定は、場合によっては
化学的試薬（例えばカルボジイミド又はジアゾ化試薬）
Ｋより強化され、一般に。
該当ヌクレオチド配列に沿って任意に分配された複数の
点即ち部位で形成される。従って、ハイブリッド形成の
可能な条件下では、所定の組成物に含まれ得る相補的ヌ
クレオチド配列と接触するのは、ゾンデの非固定部分の
みに限られる。
点即ち部位で形成される。従って、ハイブリッド形成の
可能な条件下では、所定の組成物に含まれ得る相補的ヌ
クレオチド配列と接触するのは、ゾンデの非固定部分の
みに限られる。
従って、従来の固定方法では、ゾンデ配列の長さが短い
とすぐに適用不可となる。
とすぐに適用不可となる。
本発明の目的は、以上の問題を解決し、これらの欠点の
ない担体支持ポリヌクレオチド、好ましくはオリゴヌク
レオチドを提供することＫある。
ない担体支持ポリヌクレオチド、好ましくはオリゴヌク
レオチドを提供することＫある。
特に、本発明の目的は、非常に小形の担体支持ヌクレオ
チド配列を提供することにあり、該配列は、従来条件で
相補的ヌクレオチド配列とハイブリッド形成反応を生じ
得るか、又はより長い配列を同一の担体く固定する起剤
として機能し得る。
チド配列を提供することにあり、該配列は、従来条件で
相補的ヌクレオチド配列とハイブリッド形成反応を生じ
得るか、又はより長い配列を同一の担体く固定する起剤
として機能し得る。
本発明は更に、このように担体に支持されたポリヌクレ
オチドの獲得方法に係り、該方法は、所定の配列を有し
固体担体に共有結合された非保護オリゴヌクレオチドが
最終的に配置されるような条件下で、固相オリゴヌクレ
オチド合成法、例えばホスホトリエステル法又はホスホ
ラミゲイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ ）法
を適当に使用ｆルコ、！ＪｆＣより達成てれる。
オチドの獲得方法に係り、該方法は、所定の配列を有し
固体担体に共有結合された非保護オリゴヌクレオチドが
最終的に配置されるような条件下で、固相オリゴヌクレ
オチド合成法、例えばホスホトリエステル法又はホスホ
ラミゲイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ ）法
を適当に使用ｆルコ、！ＪｆＣより達成てれる。
本発明は、まず第１に担体支持分子に係り、該分子は言
わば、担体支持オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチ
ドの形成を可能にする起剤であり得る。該分子は、固体
担体に共有結合的に固定でれた少くとも１個のヌクレオ
シド又はヌクレオチド基を構造中に含んでおり、ヌクレ
オシド基の固定部位は、該ヌクレオシド基の構成に含ま
れる複素環に配置される。このような結合では、糖のヒ
ドロキシル基が遊離したままであり、３′→５′方向及
び／又は ５′→３′方向にオリ！ヌクレオチド鎖（Ｄ
ＮＡ又はＲＮＡ ）を構成することができる。
わば、担体支持オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチ
ドの形成を可能にする起剤であり得る。該分子は、固体
担体に共有結合的に固定でれた少くとも１個のヌクレオ
シド又はヌクレオチド基を構造中に含んでおり、ヌクレ
オシド基の固定部位は、該ヌクレオシド基の構成に含ま
れる複素環に配置される。このような結合では、糖のヒ
ドロキシル基が遊離したままであり、３′→５′方向及
び／又は ５′→３′方向にオリ！ヌクレオチド鎖（Ｄ
ＮＡ又はＲＮＡ ）を構成することができる。
更に本発明は、従来公知の固相ヌクレオテｒ鎖延長法に
より、例えば本文末尾に参考文献として掲示し九論文Ｉ
１１〜（６）Ｋ記・哉されているような条件下で、＊に
上記担体支持分子から形成され得る担体支持オリゴヌク
レオチド又はポリヌクレオチドに係る。との担体は参考
文献０３および０４に記載されているようなりＮＡまた
はＲＮＡリガーゼ断片の酵素的合成も可能にする。一方
、該支持分子を、従来方法のヌクレオチド鎖伸長過程で
適当な官能化担体に第１のヌクレオシ１′（デオキシリ
ポヌクレオシド又はリポヌクレオシド）を固定すること
により得られる生成物に置換することにより、合成第１
７ ｆヌクレオチド配列の脱保護操作時に、全保護基が
遊離されており且つ固体担体く共有結合された合成ヌク
レオチド配列を得ることができる。
より、例えば本文末尾に参考文献として掲示し九論文Ｉ
１１〜（６）Ｋ記・哉されているような条件下で、＊に
上記担体支持分子から形成され得る担体支持オリゴヌク
レオチド又はポリヌクレオチドに係る。との担体は参考
文献０３および０４に記載されているようなりＮＡまた
はＲＮＡリガーゼ断片の酵素的合成も可能にする。一方
、該支持分子を、従来方法のヌクレオチド鎖伸長過程で
適当な官能化担体に第１のヌクレオシ１′（デオキシリ
ポヌクレオシド又はリポヌクレオシド）を固定すること
により得られる生成物に置換することにより、合成第１
７ ｆヌクレオチド配列の脱保護操作時に、全保護基が
遊離されており且つ固体担体く共有結合された合成ヌク
レオチド配列を得ることができる。
従来の固相オリゴヌクレオチ１合成法では、特に酸もし
くは塩基処理、又は同時に該２種類の処理により保護基
を脱保護化即ち脱離する最終段階で、担体をも脱離させ
てしまうが、本発明方法は、この点くおいて従来方法と
相異する。
くは塩基処理、又は同時に該２種類の処理により保護基
を脱保護化即ち脱離する最終段階で、担体をも脱離させ
てしまうが、本発明方法は、この点くおいて従来方法と
相異する。
好ましくは、ヌクレオ７Ｆ基、又はオリゴヌクレオチＰ
もしくはポリヌクレオチドの末端ヌクレオチＰを担体く
固定する部位は、場合（応じて該ヌクレオシド基又は末
端ヌクレオチ１のピリミジン環のＣ４位又はプリン環の
０６位に配置される。
もしくはポリヌクレオチドの末端ヌクレオチＰを担体く
固定する部位は、場合（応じて該ヌクレオシド基又は末
端ヌクレオチ１のピリミジン環のＣ４位又はプリン環の
０６位に配置される。
好ましくは、ヌクレオシド又はヌクレオシド基は、好ま
しくは炭素原子数４〜２０個の炭素鎖長に相当する長さ
を有する腕を介して、該当担体く共有結合的に固定嘔れ
る。
しくは炭素原子数４〜２０個の炭素鎖長に相当する長さ
を有する腕を介して、該当担体く共有結合的に固定嘔れ
る。
当然のこと乍ら、該鎖長それ自体は主要な決定因子とな
らないが、腕が短か過ぎると、）・イブリフ１形成操作
時Ｋ、相補的ヌクレオチド配列を含む核酸に担体支持オ
リｌヌクレオチーを完全に接触させることができない場
合があり、鎖長が長過ぎると融通性が非常に大きくなり
、同様に類似の条件でのハイブリッド形成に干渉し得る
。後者の場合、特に連鎖が折曲るという危険がある。
らないが、腕が短か過ぎると、）・イブリフ１形成操作
時Ｋ、相補的ヌクレオチド配列を含む核酸に担体支持オ
リｌヌクレオチーを完全に接触させることができない場
合があり、鎖長が長過ぎると融通性が非常に大きくなり
、同様に類似の条件でのハイブリッド形成に干渉し得る
。後者の場合、特に連鎖が折曲るという危険がある。
本発明の好適な担体支持分子は、以下の一般式ここで、
円内のＮは、ウラシル、５−メチルウラシル、グアニン
、キサンチン、５−メチルシチジン、シチジン、２−ア
ミノアデニン、イノシン等の塩基、円内のＳは、リボー
ス又は２′ −デオキシリ、ぜ−ス基でちって、Ｒ１は
ＯＨ基、ホスフェートａ又はオリゴもしくはポリヌクレ
オチド基、Ｒ，はＨ又はＯＨ％Ｒ１はＯＨ，ホスフェー
ト又はオリゴもしくはポリヌクレオチド、図式中の数字
２′、３′及び５′は、該当糖類の一般的位数に対応し
、Ｘは二価ＮＨ又はＯ基、Ｂは腕、Ａは固体担体を示す
Ｏ 好適な腕Ｂは、炭素原子数４〜２０個の炭素鎖から構ｅ
、すれ、該炭素原子のいくつかは、場合によっては、Ｏ
，Ｎ又はＳ等のヘテロ原子で置換され得る。
円内のＮは、ウラシル、５−メチルウラシル、グアニン
、キサンチン、５−メチルシチジン、シチジン、２−ア
ミノアデニン、イノシン等の塩基、円内のＳは、リボー
ス又は２′ −デオキシリ、ぜ−ス基でちって、Ｒ１は
ＯＨ基、ホスフェートａ又はオリゴもしくはポリヌクレ
オチド基、Ｒ，はＨ又はＯＨ％Ｒ１はＯＨ，ホスフェー
ト又はオリゴもしくはポリヌクレオチド、図式中の数字
２′、３′及び５′は、該当糖類の一般的位数に対応し
、Ｘは二価ＮＨ又はＯ基、Ｂは腕、Ａは固体担体を示す
Ｏ 好適な腕Ｂは、炭素原子数４〜２０個の炭素鎖から構ｅ
、すれ、該炭素原子のいくつかは、場合によっては、Ｏ
，Ｎ又はＳ等のヘテロ原子で置換され得る。
好ましくは、腕は、対応する任意の二官能性鎖から得ら
れる。例えば、エチレンジアミン、１．６−ジアミノへ
キサｙ、１．１０−ジアミノデカン、スペルミン、ジエ
チレングリコール又はソアルキレングリコールが挙げら
れる。
れる。例えば、エチレンジアミン、１．６−ジアミノへ
キサｙ、１．１０−ジアミノデカン、スペルミン、ジエ
チレングリコール又はソアルキレングリコールが挙げら
れる。
別の好ましい態様では腕Ｂは、末端に官能基Ｍ。
友とえばアミノヒドラツノ基のような窒素含有基。
イオウ含有基、エーテル官能基５カルボキシルもしくは
カルボニル基を有する炭素骨格鎖からなる。
カルボニル基を有する炭素骨格鎖からなる。
当然のこと乍ら、「固体担体」なる語は、核酸を溶解し
て含み得る少なくともｌＮの所定の媒体に不溶性である
よりな全担体の意である。多数の担体が使用可能である
。炭素鎖で形成された腕Ｂの場合固体担体Ａはより特定
的に、担体支持分子の製造に使用する水性緩衝液と有機
溶媒との両者に相溶性のものから選択される。例えは、
ポリマー、シリカ又はガラス球を使用することができ、
これらの担体は、場合によっては、各分子を直接又は腕
を介して固定する反応に関与し得る官能基団を形成する
ように、予処理（官能化）される。
て含み得る少なくともｌＮの所定の媒体に不溶性である
よりな全担体の意である。多数の担体が使用可能である
。炭素鎖で形成された腕Ｂの場合固体担体Ａはより特定
的に、担体支持分子の製造に使用する水性緩衝液と有機
溶媒との両者に相溶性のものから選択される。例えは、
ポリマー、シリカ又はガラス球を使用することができ、
これらの担体は、場合によっては、各分子を直接又は腕
を介して固定する反応に関与し得る官能基団を形成する
ように、予処理（官能化）される。
このような担体は市販されでいる。例えば、商品名［エ
ンザクリル−ケ−・２（ＥＮＺＡＣＲＹＬ Ｋ−２月で
市販されているよ５なポリアクリルモルホリド型のゲル
が使用される。
ンザクリル−ケ−・２（ＥＮＺＡＣＲＹＬ Ｋ−２月で
市販されているよ５なポリアクリルモルホリド型のゲル
が使用される。
腕Ｂの末端が官能基Ｍで停止している場合には、固体担
体Ａは必らずしも上記の要件に合致する必要はなく、ア
ガロース特にセファａ−ス（３５ｐｈａｒｏｓｓ）とい
う商標で市販されているもの、ポリアクリルアミド、ポ
リスチレンまたはセルロースのように上布されているあ
らゆる種類の担体から選択される。
体Ａは必らずしも上記の要件に合致する必要はなく、ア
ガロース特にセファａ−ス（３５ｐｈａｒｏｓｓ）とい
う商標で市販されているもの、ポリアクリルアミド、ポ
リスチレンまたはセルロースのように上布されているあ
らゆる種類の担体から選択される。
本発明の担体支持分子の好適な製法は、塩基がピリミジ
ンの場合にはＣ４位、塩基がプリンの場合には０６位を
予め活性化させたヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド
の末端ヌクレオチｖｔ、好ましくは、該塩基の活性化部
位と反応する官能基を有する適当な腕を固定するこ−と
くより予め「官能化」された担体Ａと反応させ、この反
応により、該位置と腕末端に共有結合を形成することか
ら成る。
ンの場合にはＣ４位、塩基がプリンの場合には０６位を
予め活性化させたヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド
の末端ヌクレオチｖｔ、好ましくは、該塩基の活性化部
位と反応する官能基を有する適当な腕を固定するこ−と
くより予め「官能化」された担体Ａと反応させ、この反
応により、該位置と腕末端に共有結合を形成することか
ら成る。
塩基の適当な位置を活性化する好ましい方法としては、
たとえば文末に添付の参照文献＋７１ 、 ＋８１及び
（９１に記載の技術の１つを用いてトリアゾール。
たとえば文末に添付の参照文献＋７１ 、 ＋８１及び
（９１に記載の技術の１つを用いてトリアゾール。
ニトロ−トリアゾール、テトラゾールのタイプの複素環
誘導体を前記位置に固定する方法がある。
誘導体を前記位置に固定する方法がある。
このように付活されたヌクレオシド（又はオリゴヌクレ
オチドの末端ヌクレオチに）は末端官能基Ｎ Ｈ２を有
する機能（官能化）担体と反応し得、例えば式 で示される反応を生じる。
オチドの末端ヌクレオチに）は末端官能基Ｎ Ｈ２を有
する機能（官能化）担体と反応し得、例えば式 で示される反応を生じる。
但し、上記化学式に於いて、
一人は固体担体を示し、
−Ｂｚはベンゾイル基を示し
−ＤＭＴはジメトキシトリチル基を示す。
言う迄もなく、複素環塩基の該適正位置を予め付活して
おくタイプの別の如何なる化学反応を使用してもよく、
該塩基に別の如何なる基を任意に予め固定しておいても
よく、また、活性基ど担体との反応を前記条件下で行な
ってもよい、複素環塩基の該位置の公知の付活方法の例
としては、酸塩化物を介して行なう方法（文末の参照文
献ＯＩ。
おくタイプの別の如何なる化学反応を使用してもよく、
該塩基に別の如何なる基を任意に予め固定しておいても
よく、また、活性基ど担体との反応を前記条件下で行な
ってもよい、複素環塩基の該位置の公知の付活方法の例
としては、酸塩化物を介して行なう方法（文末の参照文
献ＯＩ。
α釦；ある。
従って本発明方法によれば、各ヌクレオチド毎に（又は
各ヌクレオチド群毎に）最終的に保設基が完全に除去さ
れており且つ固体担体に安定に結合した合成オリゴヌク
レオチドを形成し得る。オリ、、１１ヌクレオチド配列
を脱保訝すべ〈従来から使用されている環基性及び酸性
の化学処理を実施しても、完全に脱保護されたヌクレオ
チ「配列の担体上での安定性は変化しないことが確認さ
れた。
各ヌクレオチド群毎に）最終的に保設基が完全に除去さ
れており且つ固体担体に安定に結合した合成オリゴヌク
レオチドを形成し得る。オリ、、１１ヌクレオチド配列
を脱保訝すべ〈従来から使用されている環基性及び酸性
の化学処理を実施しても、完全に脱保護されたヌクレオ
チ「配列の担体上での安定性は変化しないことが確認さ
れた。
従って、ハイプリツＰ可能な配列を含む担体は、前記タ
イプの反応を利用する全ての場合に使用し得る。
イプの反応を利用する全ての場合に使用し得る。
従って本発明方法くよれば、共有結合的に神体に安定結
合した小さいサイズのオリゴヌクレオチド配列を形成し
得るのみでなく、同様に該担体に結合したよシ大きいサ
イズの核酸も製造し得る、また、別々のヌクレオチド配
列を有する複数のオリジヌクレオチドを同じ担体に固定
することも可能であり、特に、各オリｆヌクレオチＦの
末端ヌクレオチドの塩基を付活し同一担体に含まれる別
々のアーム（腕）の末端に固定してもよい。
合した小さいサイズのオリゴヌクレオチド配列を形成し
得るのみでなく、同様に該担体に結合したよシ大きいサ
イズの核酸も製造し得る、また、別々のヌクレオチド配
列を有する複数のオリジヌクレオチドを同じ担体に固定
することも可能であり、特に、各オリｆヌクレオチＦの
末端ヌクレオチドの塩基を付活し同一担体に含まれる別
々のアーム（腕）の末端に固定してもよい。
上に示したようＫＤＮＡまたはＲＮＡ断片は下記の式に
従いＲＮＡＩＪガーゼを用いて騨素的に担体に支持され
た分子上で合成することができる（後記ａりおよび（１
４）参照）。
従いＲＮＡＩＪガーゼを用いて騨素的に担体に支持され
た分子上で合成することができる（後記ａりおよび（１
４）参照）。
ｎン３１ｍ＞１
他の態様において共有結合で固体担体に結合したＤＮＡ
またはＲＮＡ断片を合成するには、３′もしくは５′末
端かまたは配列内部の１箇所以上に下記式の修飾ヌクレ
オチドを含むオリゴヌクレオチｒ配列（ＤＮＡまたはＲ
ＮＡ断片）を合成し、この配列を反応性官能基Ａ′を有
する担体と反応させる。上記式中のＳ 、Ｎ、ＸＴｈよ
びＢは前記定義のようなものであり、Ｍ′は官能基であ
り、Ｍ′とＡ′は配列と担体間に共有結合が形成され得
るように選択する。
またはＲＮＡ断片を合成するには、３′もしくは５′末
端かまたは配列内部の１箇所以上に下記式の修飾ヌクレ
オチドを含むオリゴヌクレオチｒ配列（ＤＮＡまたはＲ
ＮＡ断片）を合成し、この配列を反応性官能基Ａ′を有
する担体と反応させる。上記式中のＳ 、Ｎ、ＸＴｈよ
びＢは前記定義のようなものであり、Ｍ′は官能基であ
り、Ｍ′とＡ′は配列と担体間に共有結合が形成され得
るように選択する。
Ｍ′とＡ′をアミノ官能基特に−ＮＨ意、イオウ含有基
特に−８Ｈ，ヒドロキシル化基、カルボキシル化基から
選択すると有利であｐｌあるいはＭ′は−ＮＨリガンド
基を表わす。
特に−８Ｈ，ヒドロキシル化基、カルボキシル化基から
選択すると有利であｐｌあるいはＭ′は−ＮＨリガンド
基を表わす。
Ｍ′とＡ′の結合は特に次式に示したような従来技術に
よって行なわれる。
よって行なわれる。
腕Ａを有するオリゴヌクレオチドは、／ｅスツール研究
所（１’ｒｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅｕｒ）とＣＮＲ
８名義の特許出ＨｆＪＸ ８４）３０９６号（１９８４
年８月２２日）に記載されている修飾ヌクレオシドＸと
Ｙを用いて化学的に合成する。修飾ヌクレオシドｔＴ（
Ｘ）とｔｃ（ｙ）を配列の３’、５’またはいずれかの
部位１箇所以上に導入して、後述の実施例（２，２およ
び３．１）に示すように鎖ＸＢＭを合成の最後に反応さ
せる。
所（１’ｒｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅｕｒ）とＣＮＲ
８名義の特許出ＨｆＪＸ ８４）３０９６号（１９８４
年８月２２日）に記載されている修飾ヌクレオシドＸと
Ｙを用いて化学的に合成する。修飾ヌクレオシドｔＴ（
Ｘ）とｔｃ（ｙ）を配列の３’、５’またはいずれかの
部位１箇所以上に導入して、後述の実施例（２，２およ
び３．１）に示すように鎖ＸＢＭを合成の最後に反応さ
せる。
活性担体とオリゴヌクレオチドの他の反応性末端（３’
、５’のＯＨ，塩基のＮＨ２）との間で共有結合が形成
されるように、オリゴヌクレオチド断片が反応性末端Ｍ
を有する腕をもっていることは当然である。
、５’のＯＨ，塩基のＮＨ２）との間で共有結合が形成
されるように、オリゴヌクレオチド断片が反応性末端Ｍ
を有する腕をもっていることは当然である。
有利なことにこの態様によると、担体の活性官能基と反
応させる前にＨＰＬＣま念は電気泳動によって機械的に
または手操捧で精製した担体に精製ＤＮＡ（またはＲＮ
Ａ ）配列をグラフトすることが可能になり、したがっ
て共有結合で固体担体に結合した精製ＤＮＡ断片を得る
ことができる。
応させる前にＨＰＬＣま念は電気泳動によって機械的に
または手操捧で精製した担体に精製ＤＮＡ（またはＲＮ
Ａ ）配列をグラフトすることが可能になり、したがっ
て共有結合で固体担体に結合した精製ＤＮＡ断片を得る
ことができる。
同様に、−重鎖または一本鎖のオリゴヌクレオチド断片
２個以上を１回の化学反応に付すことも可能であろう。
２個以上を１回の化学反応に付すことも可能であろう。
さらに、文献に記載されている化学または生化学反応に
よって生成オリｆヌクレオチドを担体がら最終的に分離
し得るように本発明を利用することもできる。たとえば
、ヌクレオチｒ配列の第１の要素をリボヌクレオチドで
形成し、他の部分を全てデオキシリポヌクレオチｇで構
成することも考えられる。この場合デオキシヌクレオチ
ド鎖ト担体の分離は公知の方法たとえば化学試薬で処理
して行なうことができるであろう。
よって生成オリｆヌクレオチドを担体がら最終的に分離
し得るように本発明を利用することもできる。たとえば
、ヌクレオチｒ配列の第１の要素をリボヌクレオチドで
形成し、他の部分を全てデオキシリポヌクレオチｇで構
成することも考えられる。この場合デオキシヌクレオチ
ド鎖ト担体の分離は公知の方法たとえば化学試薬で処理
して行なうことができるであろう。
更に注目すべきは１本発明を用いた場合、文献［１３に
記載の化学反応又は生化学反応によって形成オリゴヌク
レオチドが担体から最終分離できることである。分離は
、担体もしくはアーム末端に近傍の特異的部位又はヌク
レオチド鎖自体の内部に備えられた部位で生じる。例え
は、ヌクレオチＦ配列の最初の数エレメントがりボヌク
レオチドから成り、以後のエレメントが全てデオキシリ
ボヌクレオチドから成ると想定する。この場合、デオキ
シリボヌクレオチド鎖と担体とを分離させるには、公知
方法例えば化学試薬又はリボヌクレアーゼを用いて処理
するとよい。
記載の化学反応又は生化学反応によって形成オリゴヌク
レオチドが担体から最終分離できることである。分離は
、担体もしくはアーム末端に近傍の特異的部位又はヌク
レオチド鎖自体の内部に備えられた部位で生じる。例え
は、ヌクレオチＦ配列の最初の数エレメントがりボヌク
レオチドから成り、以後のエレメントが全てデオキシリ
ボヌクレオチドから成ると想定する。この場合、デオキ
シリボヌクレオチド鎖と担体とを分離させるには、公知
方法例えば化学試薬又はリボヌクレアーゼを用いて処理
するとよい。
オリゴまたはポリヌクレオチｒ残基を含有する担体支持
分子は相補配列の検出用のプローブの製造に使用するこ
とができ、これによって−重鎖（ｍｏｎｏｂｒｉｎ ）
のＤＮＡまたはＲＮＡの精製または同定が可能になる。
分子は相補配列の検出用のプローブの製造に使用するこ
とができ、これによって−重鎖（ｍｏｎｏｂｒｉｎ ）
のＤＮＡまたはＲＮＡの精製または同定が可能になる。
またこのプローブは、前記担体支持分子に接触する溶液
中に含有されている相補ポリヌクレオチドの分離、相互
にハイプリン１形成し得る条件下で使用する検出または
分離用としても非常に重要である。担体上で一本鎖（ｄ
ｏｕｂｌｅ ｂｒｉｎ ）を形成することによ−１）て
ＤＮＡ断片と相互作用するタン／ｅり質を精製すること
が可能である。
中に含有されている相補ポリヌクレオチドの分離、相互
にハイプリン１形成し得る条件下で使用する検出または
分離用としても非常に重要である。担体上で一本鎖（ｄ
ｏｕｂｌｅ ｂｒｉｎ ）を形成することによ−１）て
ＤＮＡ断片と相互作用するタン／ｅり質を精製すること
が可能である。
本発明の別の特徴は１本発明の担体結合（支持）分子の
栴造の好ましい例に関する以下の記載より明らかＫされ
るであろう。言う迄もなくこの記載は限定的な性格を全
く持たない。
栴造の好ましい例に関する以下の記載より明らかＫされ
るであろう。言う迄もなくこの記載は限定的な性格を全
く持たない。
実施例１ｆ！！＋）アクリルアミド担体の官能化樹脂Ａ
、、Ａ、及びＡ３を担体として使用する。これらの担体
は以下のように機能化（官能化）した、樹脂Ａ。
、、Ａ、及びＡ３を担体として使用する。これらの担体
は以下のように機能化（官能化）した、樹脂Ａ。
エチレングリコール（１４ｍ／）に入れたポリアクリル
モル７オリド（エンザクリルＥＮＺＡＣＲＹＬＫ−２ゲ
ル、ＩＡＩ）と１−１０−ジアミノ−デカン（ＩＩＩ）
との混合物を１７５Ｃに加熱しこの温度で１晩維持する
。冷却した反応媒質に氷を加え。
モル７オリド（エンザクリルＥＮＺＡＣＲＹＬＫ−２ゲ
ル、ＩＡＩ）と１−１０−ジアミノ−デカン（ＩＩＩ）
との混合物を１７５Ｃに加熱しこの温度で１晩維持する
。冷却した反応媒質に氷を加え。
濾過する。樹脂を水（３５ｍ）、０．１ ＮｔＪ！＃
（３５−）、０．ＩＮ炭酸ナトリウム（３５／）、水（
３５−）、メタノール（７ｏｂ）を順次用いて洗浄し、
真空下で乾煤する（１１）。グラフトしたアミン官能基
の割合を定戴測定すると、樹脂Ａ、 １ 、Ｆ当りの劃
Ｆｉ４４０μＭ／ＩＩである。
（３５−）、０．ＩＮ炭酸ナトリウム（３５／）、水（
３５−）、メタノール（７ｏｂ）を順次用いて洗浄し、
真空下で乾煤する（１１）。グラフトしたアミン官能基
の割合を定戴測定すると、樹脂Ａ、 １ 、Ｆ当りの劃
Ｆｉ４４０μＭ／ＩＩである。
樹脂Ａ。
３ＩＩのエンザクリルデルに−２と２５−のエチレンジ
アミンとを出発物質として用い同様に処理して樹脂Ａｔ
をｖＩ４ｇする。
アミンとを出発物質として用い同様に処理して樹脂Ａｔ
をｖＩ４ｇする。
樹脂Ａ。
１００岬のエンザクリルに一２ゲルと１００＋ｌＩＰの
スペルミンとを２ｄのエチレングリコールに入れて１６
０Ｃに加熱して１晩維持すると８０■の樹脂Ａ３が得ら
れる。
スペルミンとを２ｄのエチレングリコールに入れて１６
０Ｃに加熱して１晩維持すると８０■の樹脂Ａ３が得ら
れる。
１）４−）リアゾロ−５′−〇−ジメトキシトリチルＡ
、に固定 機能化し念２００ダの樹脂Ａ、七１５０＃１９の化合物
ｌを４−のジオキサンに入れた混合物を室温で静置する
。５日間経過後、樹脂を乾燥しジオキサ／又はメタノー
ルで洗浄し定量する。インゼンスルホ／酸（ＡＢＳ）で
ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）を定量とすると（５０７
ｎｍでのＵＶＫよる）、置換量は３１ｐＭ／Ｐである。
、に固定 機能化し念２００ダの樹脂Ａ、七１５０＃１９の化合物
ｌを４−のジオキサンに入れた混合物を室温で静置する
。５日間経過後、樹脂を乾燥しジオキサ／又はメタノー
ルで洗浄し定量する。インゼンスルホ／酸（ＡＢＳ）で
ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）を定量とすると（５０７
ｎｍでのＵＶＫよる）、置換量は３１ｐＭ／Ｐである。
更に８５〜の化合物１を樹脂と反応させると３日後に置
換量は６３μＭ／Ｐになる。５０℃の濃アンモニア水で
５時間を要して処理しても（オリゴヌクレオテｒ配列の
脱保護条件の１つ）、（ジメトキシ） ＩＪチル基の定
量により測定した）Ｐ；合ヌクレオチドの量は変化しな
い。５０℃の濃アンモニア水中での加熱を１晩維持した
後ＫＤＭＴを定量すると、ｌＯチの減量が見られる。
換量は６３μＭ／Ｐになる。５０℃の濃アンモニア水で
５時間を要して処理しても（オリゴヌクレオテｒ配列の
脱保護条件の１つ）、（ジメトキシ） ＩＪチル基の定
量により測定した）Ｐ；合ヌクレオチドの量は変化しな
い。５０℃の濃アンモニア水中での加熱を１晩維持した
後ＫＤＭＴを定量すると、ｌＯチの減量が見られる。
２２０■の樹脂Ａ１と１０５ ＃の化合物２とを２−の
ジオキサンに入れ室温で２０日間靜靜置る。脱トリチル
化によって定量すると樹脂に固定された量は７１μＭ／
Ｐ−である・ 樹脂Ａ、に固定 ２５０■の樹脂Ａ！と１００ＩＩＱの化合物２とを４Ｒ
ｔのジオキサンに入れ室温で１４日間靜量中る。
ジオキサンに入れ室温で２０日間靜靜置る。脱トリチル
化によって定量すると樹脂に固定された量は７１μＭ／
Ｐ−である・ 樹脂Ａ、に固定 ２５０■の樹脂Ａ！と１００ＩＩＱの化合物２とを４Ｒ
ｔのジオキサンに入れ室温で１４日間靜量中る。
ＡＢＳで定量すると置換量は３２μＭ／Ｐである。
Ｑ＝ｐ−ＱＣ鴇Ｃ馬ＣＮ
ジオキサンに入れ室温で２５日間靜靜置る。樹脂の置換
を定量するために、（ビリノン中の１０％無水酢酸で）
担体の遊離アミンをアセチル化後にカンプリングする。
を定量するために、（ビリノン中の１０％無水酢酸で）
担体の遊離アミンをアセチル化後にカンプリングする。
トリエチルアミン／ビリノン／水（１／３／１）の混合
物に入れて樹脂を脱シアンエチル化し、ビリジ／中で共
蒸発（ｃｏ６ｖａｐｏｒａｔｆｏｎ ） ８せ走後、６
０習の化合物３と６０Ｉｎｇのカンプリフグ剤（トリイ
ソプロぎルベンゼンースルホニルーニトロトリアゾール
（ＴＰＳＮＴ）とを入れた３００μｌのピリジ／ＭｅＯ
Ｈ： ９０／１０の混合物とを順次用いて洗い、次に定
量する。ＡＢＳ（村／ゼンスルホン酸）で脱トリチル化
するとダイマーの置換量は２９μＭ／？である。
物に入れて樹脂を脱シアンエチル化し、ビリジ／中で共
蒸発（ｃｏ６ｖａｐｏｒａｔｆｏｎ ） ８せ走後、６
０習の化合物３と６０Ｉｎｇのカンプリフグ剤（トリイ
ソプロぎルベンゼンースルホニルーニトロトリアゾール
（ＴＰＳＮＴ）とを入れた３００μｌのピリジ／ＭｅＯ
Ｈ： ９０／１０の混合物とを順次用いて洗い、次に定
量する。ＡＢＳ（村／ゼンスルホン酸）で脱トリチル化
するとダイマーの置換量は２９μＭ／？である。
Ｉｔ！ｒＡ、に固定
０１に
６５＃ｌ１ｉｌの樹ｌｌ！ｒＡｓと３０ダの化合物１と
を１−のジオキサンに入れ室温に１３日間静置する。樹
脂の置換量は９４μＭ／９−である。
を１−のジオキサンに入れ室温に１３日間静置する。樹
脂の置換量は９４μＭ／９−である。
実施例２ シリカ担体
アミノプロピル鎖（Ｓｔ −（ＣＨｗ）ｓ ＮＨｔ）を
もつ”機能化しｆｔ’ ７リカ５００ ＃＋９と２００
〜の化合物ｌとを４ｍｇのジオキサ７に入れ室温に維持
する。
もつ”機能化しｆｔ’ ７リカ５００ ＃＋９と２００
〜の化合物ｌとを４ｍｇのジオキサ７に入れ室温に維持
する。
２０日後、置換量は８５μＭ／Ｐである。
アミノプロピル鎖をもつ機能化したシリカ“ポラシルＰ
ＯＲＡＳ Ｉ Ｌ ’ ５００〜と２００ダの化合物４
とを４−のジオキサンに入れ室温で静置する。
ＯＲＡＳ Ｉ Ｌ ’ ５００〜と２００ダの化合物４
とを４−のジオキサンに入れ室温で静置する。
２０日間経過後、置換量は１６μＭ／Ｐである。
ピアス（ＰＩＥＲＣＥ）社によシ市販の商品名ＣＰＧ：
ＡＡＬＣ５００オングストロームの多孔質がラスビー
ズ（直径５００Ａ）を式中（示す鎖で機能化し、このビ
ーズ１ンと３１０１９の化合物１とを８１Ｒｔ！７）ジ
オキサン（入れ室温に静置する。１６日後、担体の置換
量は２２μＭ／Ｐである。
ＡＡＬＣ５００オングストロームの多孔質がラスビー
ズ（直径５００Ａ）を式中（示す鎖で機能化し、このビ
ーズ１ンと３１０１９の化合物１とを８１Ｒｔ！７）ジ
オキサン（入れ室温に静置する。１６日後、担体の置換
量は２２μＭ／Ｐである。
ヌクレオシド−担体結合の安定性を確認するために、前
記の如く機能化されたガラスピースを５０℃に加熱して
１晩維持する。５′に於けるノメトキシトリチルの量は
変らなかった。ま九、高圧液相クロマトグラフィー（１
（ＰＬＯ）によるコントロール（比較）定量では、Ｐ液
中に複素環が存在しないことが判明したつ この担体をｒｌｇ−ｍｅｒＪ配列の形成に使用すると、
参考文献ｆ４）１ｃ記載の方法を用い念ときの平均カン
プリング効率が燐酸トリエステル法で８５％になる。全
ての保護基の保護を解険（脱ブロック）し、担体く結合
し九ＤＮＡ１９を片を２Ｎ塩酸で５時間を要して加水分
解する。Ｆ液中には使用した４種の塩基が好ましい割合
で存在する（ＨＰＬＣ定量）。
記の如く機能化されたガラスピースを５０℃に加熱して
１晩維持する。５′に於けるノメトキシトリチルの量は
変らなかった。ま九、高圧液相クロマトグラフィー（１
（ＰＬＯ）によるコントロール（比較）定量では、Ｐ液
中に複素環が存在しないことが判明したつ この担体をｒｌｇ−ｍｅｒＪ配列の形成に使用すると、
参考文献ｆ４）１ｃ記載の方法を用い念ときの平均カン
プリング効率が燐酸トリエステル法で８５％になる。全
ての保護基の保護を解険（脱ブロック）し、担体く結合
し九ＤＮＡ１９を片を２Ｎ塩酸で５時間を要して加水分
解する。Ｆ液中には使用した４種の塩基が好ましい割合
で存在する（ＨＰＬＣ定量）。
０＝Ｐ−ＯＣＲ，ＣＨ，ＣＮ
０ＣａＨ＊ＣＡｔ
２００ Ｉ＃ｇのガラスピーズＣＰＧ／ＡＡＬＬ ５０
０オングストローム（ヒ０アス）と５０１１ｋｇの化合
物５とを２ｄのジオキサンに入れ室温く静置する。１７
日後、置換量はｌＯμＭ／Ｐである。
０オングストローム（ヒ０アス）と５０１１ｋｇの化合
物５とを２ｄのジオキサンに入れ室温く静置する。１７
日後、置換量はｌＯμＭ／Ｐである。
１５０岬の担体Ａ ５ （１，８ｐｒｒｍｌ ）をｔ−
ブチルアミン／ピリジｙ（１／９）混合物で脱シアノエ
チル化した後次の３− ｒｎｅｒ （三量体）と結合す
る：”ＣＣＣ、′Ｈ０ＡＧＴ、 ”ＣＡＣ，”ＧＡＣお
よび ｃ’ｒ’ｒＴｒｅ各々の結合ステップの前に、形
成された中間体オリザマーを脱シアノエチル化する。次
に担体を配列の脱ブロツク条件下においた： Ｉ Ｍ
ＴＭＧＰＡＯ１晩、その後５０℃ＮＨ４０Ｈ５時間。
ブチルアミン／ピリジｙ（１／９）混合物で脱シアノエ
チル化した後次の３− ｒｎｅｒ （三量体）と結合す
る：”ＣＣＣ、′Ｈ０ＡＧＴ、 ”ＣＡＣ，”ＧＡＣお
よび ｃ’ｒ’ｒＴｒｅ各々の結合ステップの前に、形
成された中間体オリザマーを脱シアノエチル化する。次
に担体を配列の脱ブロツク条件下においた： Ｉ Ｍ
ＴＭＧＰＡＯ１晩、その後５０℃ＮＨ４０Ｈ５時間。
合成したオリビマーが担体上に存在することを確認する
ために、これらの球５０〜をアルカリ加水分解する（２
ＮＮａＯＨ，６０℃、１０分）。セファデックス（５ｅ
ｐｈａｄｅｘ ） Ｇ −１０で＃Ｊｌｌ！ （ＴＥＡ
Ｂｏ、０５ Ｍ ） １．、＆後、回収り九２０ＤをＨ
ＰＬＣ（ゾルｚＺククス（Ｚｏｒｂａｘ） ００ｓ：
１０−”Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ｐＨ６
，５）中７＋トニトリル勾配、保持時間１０．６４分）
で精襄する。
ために、これらの球５０〜をアルカリ加水分解する（２
ＮＮａＯＨ，６０℃、１０分）。セファデックス（５ｅ
ｐｈａｄｅｘ ） Ｇ −１０で＃Ｊｌｌ！ （ＴＥＡ
Ｂｏ、０５ Ｍ ） １．、＆後、回収り九２０ＤをＨ
ＰＬＣ（ゾルｚＺククス（Ｚｏｒｂａｘ） ００ｓ：
１０−”Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ｐＨ６
，５）中７＋トニトリル勾配、保持時間１０．６４分）
で精襄する。
５Ｏｔｓ酢酸で４時間脱トリチル化すると１５−ｍ＋ｅ
ｒが０．２３０Ｄ （粗生成物の１１ｓ）を得られる（
Ｈ８−５０１８上の保持時間は３’ＯＨ＃’Ｊｆマーが
１１．５２分、３′ＯＴオリ！マーが１８．６９分）。
ｒが０．２３０Ｄ （粗生成物の１１ｓ）を得られる（
Ｈ８−５０１８上の保持時間は３’ＯＨ＃’Ｊｆマーが
１１．５２分、３′ＯＴオリ！マーが１８．６９分）。
実施例５
１００５１９の担体Ａ ５ （１，２ｐｍｏｌ ）を２
ＳＡＢＳで脱トリチル化し、次に無水酢酸−ピリジン（
１／９ ）混合物でアセチル化する。最初のステップは
脱シアノエチル化した担体とヌクレオシドＤ′ＴｏＨト
の３１−３を結合であり（収率６１９６）、次に従来法
テＤＭＴＧＴ、 ””ＧＡＣ、ＤＭＴＣＡＣ、ＤＭＴＡ
ＧＴ オヨヒ”ｃｃｃとそれぞれ３ｌ−ｓｌ結合する（
５回、平均収率８０チ）。担体を脱ブロツク条件（Ｉ
Ｍ ＴＭＧＰＡ０１晩およびＮＨａＯＨ５０℃５時間）
にする。特性決定のためにアルカリ加水分解（２Ｎ、
ＮａＯＨ，１０分ンしてオリザマーを担体からはずす。
ＳＡＢＳで脱トリチル化し、次に無水酢酸−ピリジン（
１／９ ）混合物でアセチル化する。最初のステップは
脱シアノエチル化した担体とヌクレオシドＤ′ＴｏＨト
の３１−３を結合であり（収率６１９６）、次に従来法
テＤＭＴＧＴ、 ””ＧＡＣ、ＤＭＴＣＡＣ、ＤＭＴＡ
ＧＴ オヨヒ”ｃｃｃとそれぞれ３ｌ−ｓｌ結合する（
５回、平均収率８０チ）。担体を脱ブロツク条件（Ｉ
Ｍ ＴＭＧＰＡ０１晩およびＮＨａＯＨ５０℃５時間）
にする。特性決定のためにアルカリ加水分解（２Ｎ、
ＮａＯＨ，１０分ンしてオリザマーを担体からはずす。
セファデックス（５ｅｐｈａｄａｘ） Ｇ −１０Ｋよ
ってこれら球５０ｍｇを精製すると１．６０Ｄが得られ
る。ＨＰＬＣ精製および脱トリチル化すると１５− ｍ
ａｒが０．３５０Ｄ （粗生成物の２２％）得られる（
Ｈ８−５Ｃ１８：保持時間は３′ＯＨが１１．５７分、
３’ ＯＴｒが１７．２５分）。
ってこれら球５０ｍｇを精製すると１．６０Ｄが得られ
る。ＨＰＬＣ精製および脱トリチル化すると１５− ｍ
ａｒが０．３５０Ｄ （粗生成物の２２％）得られる（
Ｈ８−５Ｃ１８：保持時間は３′ＯＨが１１．５７分、
３’ ＯＴｒが１７．２５分）。
実施例 ６
からの合成
合成はホスホトリエステル法（球１００〜上）Ｋよる手
操作で、またホスホラミダイト法（球３０〜から）Ｋよ
る自動操作て行なった、 配列中Ｋ Ｒａａ Ｉ制限部位が存在したのでその合成
を調節することができた。最初のステップは担体の５′
末端を標識する（ポリヌクレオチドキナーゼ）ことと、
従来法で合成した相補１６− ｍａｒを存在させて制限
酵素１邑Ｉを作用させることである。
操作で、またホスホラミダイト法（球３０〜から）Ｋよ
る自動操作て行なった、 配列中Ｋ Ｒａａ Ｉ制限部位が存在したのでその合成
を調節することができた。最初のステップは担体の５′
末端を標識する（ポリヌクレオチドキナーゼ）ことと、
従来法で合成した相補１６− ｍａｒを存在させて制限
酵素１邑Ｉを作用させることである。
上清をゲル電気泳動くかけると、酵素切断で得られる９
−ｍａｒに対応するパン１が２種の担体に存在するこ
とが確かめられる。
−ｍａｒに対応するパン１が２種の担体に存在するこ
とが確かめられる。
←−５’［１６−面ｒ］
脣 〔９−ｒ薗ｒ〕
実施例 ７
７− ｍａｒ １ ： ＤＭＴ ＣＧ”ＣＧＣＧ”Ｃ１
１ｒＨ−””” −”保穫された７ −ｍａｒ ””Ｃ
Ｇ−ＣＧＣＧ’Ｔ□Ｂｚ（１７０＃１９，４５μｍｏｌ
）を液相ホスホトリエステル法に従って合成した。こ
の７− ｒｍｒ １００ ＃ＩｆＪ（２６ｐｍｏｌ ）
をジオキサン中５当量のへキナン−１ｔ６−：）アミン
溶液によって室温で１２時間処理する。こうしてアミン
で官能化した７ −ｍ＠ｒを従来の条件に従って脱ブロ
ックする（ ＴＭＧＰＡＯ−０，３Ｍ 、 １晩；ＮＨ
４ＯＨ。
１ｒＨ−””” −”保穫された７ −ｍａｒ ””Ｃ
Ｇ−ＣＧＣＧ’Ｔ□Ｂｚ（１７０＃１９，４５μｍｏｌ
）を液相ホスホトリエステル法に従って合成した。こ
の７− ｒｍｒ １００ ＃ＩｆＪ（２６ｐｍｏｌ ）
をジオキサン中５当量のへキナン−１ｔ６−：）アミン
溶液によって室温で１２時間処理する。こうしてアミン
で官能化した７ −ｍ＠ｒを従来の条件に従って脱ブロ
ックする（ ＴＭＧＰＡＯ−０，３Ｍ 、 １晩；ＮＨ
４ＯＨ。
５０℃、５時間）。セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄａ
ｘ ） Ｇ −１０（ＴＥＡＢ Ｏ，０５Ｍ ）および
ＨＰＬＣ（ゾルパックス（Ｚｏｒｂａｘ ） ＯＤＳ
、 １ （１”Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液中
アセトニトリル勾配、保持時間１０．７９５））によっ
て精製して、ノメトキシトリデル化５′−ヒｒロキシを
有する７−ｍａｒｌを４〜得る。
ｘ ） Ｇ −１０（ＴＥＡＢ Ｏ，０５Ｍ ）および
ＨＰＬＣ（ゾルパックス（Ｚｏｒｂａｘ ） ＯＤＳ
、 １ （１”Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液中
アセトニトリル勾配、保持時間１０．７９５））によっ
て精製して、ノメトキシトリデル化５′−ヒｒロキシを
有する７−ｍａｒｌを４〜得る。
実施例８
ＮＨ−（ＣＨｔ）ａ −ＮＨｔ
７− ｍａｒ ２ ： ＤＭＴＭ＠ＣＧＣＧＣＧＣＯＨ
ホスホ） ＩＪエステル法によって「活性Ｊ７−ｍ＠ｒ
ＤＭ′ｒｔＴＧｃＧＣＧｃを液相で合成してヘキサンジ
アミンで置換した後、この官能化オリビマー（］１８循
。
ホスホ） ＩＪエステル法によって「活性Ｊ７−ｍ＠ｒ
ＤＭ′ｒｔＴＧｃＧＣＧｃを液相で合成してヘキサンジ
アミンで置換した後、この官能化オリビマー（］１８循
。
３２μｍｏｌ）を従来の条件で脱ブロックする。
セファデックス（Ｓ＊ｐｈａｄｓｏｃ ） Ｇ −１０
とＨＰＬＣ（ゾルパックス（Ｚｏｒｂａｘ ） ＯＤＳ
＋保持時間１１．４０分）で精製すると、ジメトキシ
トリル化５′−ヒドロキシを有する７ −ｍｅｒｒ ２
が２．３ＩＩＩ９得られる。
とＨＰＬＣ（ゾルパックス（Ｚｏｒｂａｘ ） ＯＤＳ
＋保持時間１１．４０分）で精製すると、ジメトキシ
トリル化５′−ヒドロキシを有する７ −ｍｅｒｒ ２
が２．３ＩＩＩ９得られる。
実施例 ９
既に記載した条件（１０−”Ｍ ＨＣＪ ）で洗浄した
活性セファａ −ス（５ａｐｈａｒｏｓ＠） ４ Ｂ
２００ Ｑに、反応緩衝液ａ （０，１Ｍ ＮａＨＣＯ
ｓおよび０５ Ｍ ＮａＣＪ ）１ｍｌｔ／Ｃ溶解した
７ −ｍ＠ｒ １を１．２１１９ （０，５４ｐｒｒｔ
ｒｌ ）加える。室温で１時間および４℃に１晩置いた
後担体をフリット上で乾燥し、緩衝液ａで洗浄する。
活性セファａ −ス（５ａｐｈａｒｏｓ＠） ４ Ｂ
２００ Ｑに、反応緩衝液ａ （０，１Ｍ ＮａＨＣＯ
ｓおよび０５ Ｍ ＮａＣＪ ）１ｍｌｔ／Ｃ溶解した
７ −ｍ＠ｒ １を１．２１１９ （０，５４ｐｒｒｔ
ｒｌ ）加える。室温で１時間および４℃に１晩置いた
後担体をフリット上で乾燥し、緩衝液ａで洗浄する。
反応しなかつな担体の活性官能基を緩衝液ｂ （０，１
Ｍ Ｔｒｉｓ −、ＨＣＣｐＨ８，１ｍ１， ４℃１時
間）でブロックする。次に担体を緩衝液旦と旦（旦：０
．１ＭＴｒｉｓおよび０．５ Ｍ ＮａＣＣｐＨ８；
ｄ ： ０．Ｉ Ｍ酢酸ナトリウムおよび０．５ Ｍ
ＮａＣ１、ｐＨ４）で交互に洗浄する。
Ｍ Ｔｒｉｓ −、ＨＣＣｐＨ８，１ｍ１， ４℃１時
間）でブロックする。次に担体を緩衝液旦と旦（旦：０
．１ＭＴｒｉｓおよび０．５ Ｍ ＮａＣＣｐＨ８；
ｄ ： ０．Ｉ Ｍ酢酸ナトリウムおよび０．５ Ｍ
ＮａＣ１、ｐＨ４）で交互に洗浄する。
実施例 １０
上記条件によって洗浄した活性セファロース（５ｅｐｈ
ａｒｏｓｅ ） ４ Ｂ ２００４に、緩衝液ａｌｄｌ
ｃ溶解した７ −ｒｎｅｒ ２１．Ｉ Ｑ （０，５０
ｍｏｌ ） ｔ−加える。室温で１時間および４℃で１
晩経通後担体２ｔ−前記の如く（担体］参照）処理する
。
ａｒｏｓｅ ） ４ Ｂ ２００４に、緩衝液ａｌｄｌ
ｃ溶解した７ −ｒｎｅｒ ２１．Ｉ Ｑ （０，５０
ｍｏｌ ） ｔ−加える。室温で１時間および４℃で１
晩経通後担体２ｔ−前記の如く（担体］参照）処理する
。
担体１と２の置換率はＤＭＴ＋カチオ／の５０７ｎｍ四
定−ｆｆｉＫよって評価することができる（脱トリチル
化はトリクロロ酢酸による）。導入率は約９０％であり
、担体１が２．４モル／？で担体スが２．２モル／？で
ある。
定−ｆｆｉＫよって評価することができる（脱トリチル
化はトリクロロ酢酸による）。導入率は約９０％であり
、担体１が２．４モル／？で担体スが２．２モル／？で
ある。
試験−コントロール
担体ｌと２（乾燥１０〜２ （１９）を酸加水分解Ｃ２
ＮＭＣＩ！、８０℃）し、活性化し之出発担体ユとこれ
を官能化されてないｉ５− ｍａｒ ＣＧ”ＣＧＣＧで
活性化し之担体４も加水分解する。後者の２つはこのテ
ストでブランクとして用いる。加水分解産物をＨＰＬＣ
分析すると、担体１と２にはンドシン塩基とグアニン塩
基が存在し、担体４の場合は弱い結合（ぐ１０％）がみ
られるがこれはおそらく担体上に６− ｍａｒが吸着さ
れているためであろう。
ＮＭＣＩ！、８０℃）し、活性化し之出発担体ユとこれ
を官能化されてないｉ５− ｍａｒ ＣＧ”ＣＧＣＧで
活性化し之担体４も加水分解する。後者の２つはこのテ
ストでブランクとして用いる。加水分解産物をＨＰＬＣ
分析すると、担体１と２にはンドシン塩基とグアニン塩
基が存在し、担体４の場合は弱い結合（ぐ１０％）がみ
られるがこれはおそらく担体上に６− ｍａｒが吸着さ
れているためであろう。
担体ｌと２にホスホノエステラーゼ■（ガラガラヘビ（
立面ｍ１ｕｓ ｄｕｒｃｉｓｇｕｓ ）を作用させる。
立面ｍ１ｕｓ ｄｕｒｃｉｓｇｕｓ ）を作用させる。
緩衝液（０，０２５Ｍ Ｔｒｉｍおよび０．０５ Ｍｇ
Ｃ１ｔ、 ＰＨ９）１００ ｐｉ中で担体ｌ＃Ｉ９と酵
素１０μ１ｃ１０ｐＰ）を３７℃に３時間熱し、次に室
温に１晩保つ。
Ｃ１ｔ、 ＰＨ９）１００ ｐｉ中で担体ｌ＃Ｉ９と酵
素１０μ１ｃ１０ｐＰ）を３７℃に３時間熱し、次に室
温に１晩保つ。
粗上清をノｑルテイシ＃ （Ｐａｒｔｉａｉｌ ） Ｐ
ＸＳ １０ ／２５ＳＡＸ上のＨＰＩ、Ｃ（等色１ａｏ
ｃｈｒａｔｌｑｎｅ 、 １０−” ＭＫＨ，ＰＯ４お
よび１０−’ＭＫＣ！、ｐＨ＝５）で分析すると、担体
１と２にはｐｄＣとｐｄＧ（保持時間１Ｏ１７分と１８
．４＋。対照と同じ）が存在するが、担体まに対してこ
のテストは陰性である。
ＸＳ １０ ／２５ＳＡＸ上のＨＰＩ、Ｃ（等色１ａｏ
ｃｈｒａｔｌｑｎｅ 、 １０−” ＭＫＨ，ＰＯ４お
よび１０−’ＭＫＣ！、ｐＨ＝５）で分析すると、担体
１と２にはｐｄＣとｐｄＧ（保持時間１Ｏ１７分と１８
．４＋。対照と同じ）が存在するが、担体まに対してこ
のテストは陰性である。
参考文献
ｉｌｌ ｆ：、７チーーｘｘター等（Ｈ，Ｋｏｓｔｅ
ｒ ａｔ Ｃｏ１１． ） ＋テトラヘトｏ ｙ（Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ） ＋ ４０．１０３．１９８４）
２１ ｘｙチ・カルリース等（Ｈ，Ｃａｒｕｔｈｅｒ
ｓ ｅｔ Ｃｏ１１．） ＋テトラヘト（＋ ７−レタ
ーズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ）
。
ｒ ａｔ Ｃｏ１１． ） ＋テトラヘトｏ ｙ（Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ） ＋ ４０．１０３．１９８４）
２１ ｘｙチ・カルリース等（Ｈ，Ｃａｒｕｔｈｅｒ
ｓ ｅｔ Ｃｏ１１．） ＋テトラヘト（＋ ７−レタ
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２１ 、７１９．１９８０
１３１ ｘム−ジエ・ケイト等（Ｍ、Ｊ、Ｇａ１ｔ
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ｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） 、 １０ 、６２４３
、１９８２（４） ケー・イタクラ等（Ｋ、 Ｉｔ
ａｋｕｒａ ＠ｔ Ｃｏ１１． ）、 ヌクレイツク、
アシッド・リサーチ（Ｎｕｅｌｅｉｃ Ａｃ１ｄａＲｅ
＋５ｅａｒｃｈ ）、 ８ 、５５０７ 、１９８０＋
５１．Ｚ−ｅｌ−ゼンタール等（Ａ、 Ｒｏｓｓｎｔｈ
ａｌ ｅｔ Ｃｏ１１． ）テトラへｒロン・レターズ
（Ｔｅｔｒａｈ＠ｄｒｏｎ Ｌ ｅｔｔｓｒｓ ） 。
ｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） 、 １０ 、６２４３
、１９８２（４） ケー・イタクラ等（Ｋ、 Ｉｔ
ａｋｕｒａ ＠ｔ Ｃｏ１１． ）、 ヌクレイツク、
アシッド・リサーチ（Ｎｕｅｌｅｉｃ Ａｃ１ｄａＲｅ
＋５ｅａｒｃｈ ）、 ８ 、５５０７ 、１９８０＋
５１．Ｚ−ｅｌ−ゼンタール等（Ａ、 Ｒｏｓｓｎｔｈ
ａｌ ｅｔ Ｃｏ１１． ）テトラへｒロン・レターズ
（Ｔｅｔｒａｈ＠ｄｒｏｎ Ｌ ｅｔｔｓｒｓ ） 。
２４、１６９１．１９８３
ｆ６１シ−−ケー・ブラフシュ＃（Ｃ６に、Ｂｒｕａｈ
ｅｔＣｏｌ１，）。
ｅｔＣｏｌ１，）。
ヌクレイツク・アシッド・リサーチ（Ｎｕｅｌｅｉｃ
Ａｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） 、 １０ 、６２９
５ 、１９８２１７＋ シー・ビー・リース等（Ｃ、
Ｂ 、 Ｒ１１１＠１１１１！ ａｔ Ｃｏ１１． ）
。
Ａｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） 、 １０ 、６２９
５ 、１９８２１７＋ シー・ビー・リース等（Ｃ、
Ｂ 、 Ｒ１１１＠１１１１！ ａｔ Ｃｏ１１． ）
。
ナト２ヘドロフーレターズ（Ｔａｔｒａｈｅｄｒａｎ
ＸＡｔｔｅｒｓ ） 。
ＸＡｔｔｅｒｓ ） 。
２１．２２６５．１９８０
（８） ダプリュ・エル・サンプ（Ｗ、 Ｌ、 Ｓｕ
ｎｇ） 、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミスト
リイ（Ｊ。
ｎｇ） 、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミスト
リイ（Ｊ。
Ｏｒｇ、 Ｃｈｅｍ、 ） 、 ４７ 、３６２３ 、
１９８２ｆ９１シー・ビー・リース等（Ｃ，Ｂ、Ｒｓｅ
ｓｓｅｔＣｏｌ１，）。
１９８２ｆ９１シー・ビー・リース等（Ｃ，Ｂ、Ｒｓｅ
ｓｓｅｔＣｏｌ１，）。
ヌクレイツク・アンツｒ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ
ＡｅｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） ＋シンポジウム・シ
リーズ（Ｓ）ｒｍｐｏｓｉｕｍＳｅｒｉｅｓ ） 、
７ 、 ：Ｉスター・エディター（ＫｏｓｔｅｒＦＪｉ
ｔｏｒ）、 Ｉ）、 ５゜ Ｎｍシー−ビー・リース等（Ｃ，Ｂ、 Ｒｓｅｓｅ ５
ｔｃａ１１．）。
ＡｅｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ ） ＋シンポジウム・シ
リーズ（Ｓ）ｒｍｐｏｓｉｕｍＳｅｒｉｅｓ ） 、
７ 、 ：Ｉスター・エディター（ＫｏｓｔｅｒＦＪｉ
ｔｏｒ）、 Ｉ）、 ５゜ Ｎｍシー−ビー・リース等（Ｃ，Ｂ、 Ｒｓｅｓｅ ５
ｔｃａ１１．）。
テトラへＦ １：１７ ・レターズ（Ｔａｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ） 。
ｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ） 。
２２、４７５５．１９８１
（１υ アール・ニー・ジョーンズ等（Ｒ，Ａ、 Ｊｎ
ｎｅｓ ｅｔＣｏｌ１，）、テトラへ１０ン・レターズ
（’ｌ’ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ ） 、
４旦、 ３．１９８４０ｚ ソニー・アール・ガラ等
（Ｃ、Ｒ，Ｇｏｕｇｈ ＠ｔ Ｃａ１１． ）。
ｎｅｓ ｅｔＣｏｌ１，）、テトラへ１０ン・レターズ
（’ｌ’ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ ） 、
４旦、 ３．１９８４０ｚ ソニー・アール・ガラ等
（Ｃ、Ｒ，Ｇｏｕｇｈ ＠ｔ Ｃａ１１． ）。
テトラヘトａｙ−ｖターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
Ｌｅｔｔｅｒｓ ） 。
Ｌｅｔｔｅｒｓ ） 。
２４．５３１７．１９８３
Claims (16)
- （１）固体担体に共有結合的に固定された少なくとも１
個のヌクレオシド基を構造中に含んでおり、ヌクレオシ
ド基の固定部位が、該ヌクレオシド基の構成に含まれる
塩基に配置されている担体支持分子。 - （２）ヌクレオシド基が、オリゴヌクレオチド又はポリ
ヌクレオチドの末端ヌクレオチドに属することを特徴と
する特許請求の範囲第１項に記載の担体支持分子。 - （３）ヌクレオシド基又はオリゴヌクレオチドもしくは
ポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドの担体への固定部
位が、場合に応じてヌクレオシド基又は末端ヌクレオチ
ドのピリミジン環のＣ４位又はプリン環のＣ６位に配置
されることを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２
項に記載の担体支持分子。 - （４）以下の図式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、円内のＮは、ウラシル、５−メチルウラシル
、グアニン、キサンチン、５−メチルシチジン、シチジ
ン、６−アミノアデニン、イノシン等の塩基、円内のＳ
は、リボース基又は２−デオキシリボース基であつて、
Ｒ＿１はＯＨ基、ホスフェート基又はオリゴもしくはポ
リヌクレオチド基、Ｒ＿２はＨ又はＯＨ、Ｒ＿３はＯＨ
、ホスフェート又はオリゴもしくはポリヌクレオチド、
図式中の数字２′，３′及び５′は該当糖類の一般的拡
散に対応し、Ｘは二価ＮＨ又はＯ基、Ｂは腕、Ａは固体
担体を示す。） で表され得ることを特徴とする特許請求の範囲第１項か
ら第３項のいずれかに記載の担体支持分子。 - （５）ヌクレオシド又はヌクレオチド基が、場合によつ
てはＯ、Ｎ又はＳ等のヘテロ原子により一部を置換され
得る４から２０個の炭素原子を有する炭素鎖の鎖長に好
ましくは対応する長さの腕Ｂを介して、該当種の担体に
共有結合的に固定されることを特徴とする特許請求の範
囲第１項から第４項のいずれかに記載の担体支持分子。 - （６）腕が、エチレンジアミン、１，６−ジアミノヘキ
サン、１，６−ジアミノデカン、スペルミン、ジエチレ
ングリコール又はジアルキレングリコールから誘導され
るような二官能性鎖から得られることを特徴とする特許
請求の範囲第５項に記載の担体支持分子。 - （７）共有結合による固定が、末端に官能基たとえばア
ミノ、ヒドラジノ基等の窒素含有基、イオウ含有基また
はカルボキシルもしくはカルボニル基を有する腕Ｂを介
して行なわれていることを特徴とする特許請求の範囲第
１項から第４項のいずれかに記載の担体支持分子。 - （８）ピリミジン塩基ｙの少なくとも１部が基Ｘで置換
されており、および／またはプリン塩基ｙの少なくとも
１部が基Ｙで置換されている修飾ヌクレオシドに鎖Ｘ−
Ｂが固定されており、基ＸおよびＹはそれぞれ式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｘ▲数式、化学式、
表等があります▼Ｙ （式中Ｒは水素原子またはメチル基を表わす）に対応し
ていることを特徴とする特許請求の範囲第７項に記載の
担体支持分子。 - （９）オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、担
体もしくは腕末端の近傍の特異的制限部位、又は腕自体
内の部位で、固体担体から分離され得ることを特徴とす
る特許請求の範囲第６項又は第７項に記載の担体支持分
子。 - （１０）特許請求の範囲第１項から第９項のいずれかに
記載の担体支持分子を含み、ヌクレオチド鎖の３′→５
′および／または５′→３′方向に伸びた結果得られる
、担体に支持されたオリゴヌクレオチドまたはポリヌク
レオチド。 - （１１）特許請求の範囲第１項から第９項のいずれかに
記載の担体支持分子の製法において、塩基がピリミジン
の場合にはＣ４位、塩基がプリンの場合にはＣ６位を予
め活性化したヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドもし
くはポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドを、該塩基の
活性化部位と反応性の官能基を有する適当な腕を担体に
固定することにより好ましくは予め「官能化」された該
担体Ａと反応させ、該反応により、該部位と腕末端との
間に共有結合を形成することを特徴とする方法。 - （１２）特にトリアゾール、ニトロトリアゾール又はテ
トラゾール型の複素環式誘導体を塩基の特定部位に固定
することにより、該部位を予め活性化しておくことを特
徴とする特許請求の範囲第１１項に記載の方法。 - （１３）得られた担体支持分子を３′→５′および／ま
たは５′→３′方向に伸ばし、場合によつてＲＮＡリガ
ーゼを用いる合成法によつてＤＮＡまたはＲＮＡ断片を
付加することを特徴とする特許請求の範囲第１１項また
は第１２項に記載の方法。 - （１４）オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド基を
含む特許請求の範囲第２項から第９項のいずれかに記載
の担体支持分子および特許請求の範囲第８項に記載の担
体に支持されたオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオ
チドを、相補的配列の検出用プローブの構成、又は該担
体支持分子と接触される溶液中に含まれる相補的ポリヌ
クレオチドの分離に適用する適用法であつて、相互ハイ
ブリッド形成条件下で該検出又は分離を実施する適用法
。 - （１５）一本鎖のＤＮＡおよびＲＮＡの精製および同定
に適用することを特徴とする特許請求の範囲第１４項に
記載の適用法。 - （１６）ＤＮＡ断片と相互作用するタンパク質を担体上
に一本鎖を形成することによつて精製するための、特許
請求の範囲第１５項に記載の適用法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8411101 | 1984-07-12 | ||
| FR8411101A FR2567523B1 (fr) | 1984-07-12 | 1984-07-12 | Polynucleotides lies de facon covalente a un support solide, et procede pour leur obtention |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61130305A true JPS61130305A (ja) | 1986-06-18 |
Family
ID=9306072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60153941A Pending JPS61130305A (ja) | 1984-07-12 | 1985-07-12 | 担体支持分子、該分子の製法及び適用法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0174879B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61130305A (ja) |
| AT (1) | ATE56724T1 (ja) |
| DE (1) | DE3579776D1 (ja) |
| DK (1) | DK318885A (ja) |
| ES (1) | ES8604259A1 (ja) |
| FR (1) | FR2567523B1 (ja) |
| GR (1) | GR851739B (ja) |
| PT (1) | PT80807B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62188970A (ja) * | 1985-12-11 | 1987-08-18 | カイロン コーポレイション | 液相核酸サンドイツチアツセイおよびそこで有用なポリヌクレオチドプロ−ブ |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4734363A (en) * | 1984-11-27 | 1988-03-29 | Molecular Diagnostics, Inc. | Large scale production of DNA probes |
| US4818681A (en) * | 1985-02-22 | 1989-04-04 | Molecular Diagnostics, Inc. | Fast and specific immobilization of nucleic acids to solid supports |
| EP0209996A3 (en) * | 1985-06-25 | 1987-09-02 | Siska Diagnostics,Inc. | Nucleic acid probes comprising n4 -(substituted amino)cytidines |
| JPH084519B2 (ja) * | 1987-12-25 | 1996-01-24 | エフ・ホフマン―ラ ロシュ アーゲー | ハイブリッド形成用担体およびその調整方法 |
| US5744101A (en) | 1989-06-07 | 1998-04-28 | Affymax Technologies N.V. | Photolabile nucleoside protecting groups |
| US5215882A (en) * | 1989-11-30 | 1993-06-01 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method of immobilizing nucleic acid on a solid surface for use in nucleic acid hybridization assays |
| GB0326073D0 (en) | 2003-11-07 | 2003-12-10 | Solexa Ltd | Improvements in or relating to polynucleotide arrays |
| CA3067434A1 (en) * | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Illumina, Inc. | Compositions and methods for chemical cleavage and deprotection of surface-bound oligonucleotides |
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|---|---|---|---|---|
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| US4259232A (en) * | 1979-10-23 | 1981-03-31 | Miles Laboratories, Inc. | Flavin adenine dinucleotide-labeled protein and polypeptide conjugates |
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| JP2548112B2 (ja) * | 1983-09-02 | 1996-10-30 | シンジェン，インコーポレイテッド | 担体およびオリゴヌクレオチドの合成 |
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1984
- 1984-07-12 FR FR8411101A patent/FR2567523B1/fr not_active Expired
-
1985
- 1985-07-11 ES ES545431A patent/ES8604259A1/es not_active Expired
- 1985-07-12 GR GR851739A patent/GR851739B/el unknown
- 1985-07-12 EP EP85401433A patent/EP0174879B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-12 DE DE8585401433T patent/DE3579776D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-12 AT AT85401433T patent/ATE56724T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-07-12 DK DK318885A patent/DK318885A/da not_active Application Discontinuation
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- 1985-07-12 JP JP60153941A patent/JPS61130305A/ja active Pending
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|---|---|---|---|---|
| JPS62188970A (ja) * | 1985-12-11 | 1987-08-18 | カイロン コーポレイション | 液相核酸サンドイツチアツセイおよびそこで有用なポリヌクレオチドプロ−ブ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3579776D1 (de) | 1990-10-25 |
| DK318885A (da) | 1986-01-13 |
| PT80807A (fr) | 1985-08-01 |
| GR851739B (ja) | 1985-11-26 |
| EP0174879A1 (fr) | 1986-03-19 |
| ES545431A0 (es) | 1986-02-01 |
| FR2567523B1 (fr) | 1987-11-13 |
| FR2567523A1 (fr) | 1986-01-17 |
| DK318885D0 (da) | 1985-07-12 |
| ES8604259A1 (es) | 1986-02-01 |
| ATE56724T1 (de) | 1990-10-15 |
| EP0174879B1 (fr) | 1990-09-19 |
| PT80807B (fr) | 1987-03-26 |
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