JPS61104255A - 高速液体クロマトグラフイ−用微粒子多孔質ガラス充填剤の湿式充填方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、高速液体クロマトグラフィー用微粒子多孔質
ガラス充填剤の湿式充填方法に間するものであり、特に
平均粒子径が３０ｐｍ以下の微粒子多孔質ガラス充填剤
をゲル浸透クロマトグラフィー用分析クロマト管に充填
する方法に関するものである。

〔発明の背景］ 高速液体クロマトグラフィー法（以下ＨＰＬＣと略称す
る）は測定時間が短時間で且つ高分離能を有するため、
各種物質（検体）の分離１分析技術のための有用技術と
して汎用されている。

ＨＰＬＣを利用した測定システムの中で、検体の分離機
能を示す充填カラムの良、不良は分析精度及び効率に大
きく寄与するものである。その充填カラムの性能評価は
、たとえば、ゲル浸透クロマトグラフィー（以下ＧＰＣ
と略称する）においては、理論段数と検量曲線の形状に
より決まる。

そして、この検量曲線は充填剤の性質を左右する諸因子
により決まるものである。すなわち、均一、かつ最密状
態に充填剤を充填することにより高理論段数のカラムが
得られるものである。

従来、シリカゲル系充填剤の充填方法としては乾式充填
法と湿式充填法が知られており、前者は乾燥状態の充填
剤をカラム内に、振動を与えながら大気雰囲気下で充填
する方法であり、平均粒子径が約３０４ｍより大きい粉
体に適しており、比較的容易に最密充填が得られる方法
である。しかし、平均粒子径が約３０ｐｍ以下の特に微
粒子状の充填剤の場合には乾式充填法では均質な最密充
填が困難となるため、後者の湿式充填法が用いられてい
る。この湿式充填法は、溶媒（分散媒体）中に充填剤を
分散させてスラリーを調製し、このスラリーをカラム内
に送液ポンプなどで高圧をかけながら充填する方法であ
る。ｒ、） 湿式充填法は大別して、平衡スラリー法と粘度Ｘｌ！Ｉ
整法に分けられる。平衡スラリー法は充填剤粒子と比重
が略々等しい分散媒体を用いることにより、自然沈降に
伴うサイジング効果（カラムの高さに沿った粒度の不均
一化が発生する現象）を防止するものである。一方、粘
度調整法は高粘度の分散媒体を用いることによって、上
記のサイジング効果を防止するものである。

いずれにしろ、湿式充填法の実施に際しては、自然沈降
に伴うサイジング効果を防ぐために、充填剤スラリーを
高流速で充填する方法が一般に用いられる。

しかしながら、充填操作を高流速で実施すると、パフカ
ー（加圧充填装ａｔ）内でスラリーが乱流となり、形成
される充填層に乱れが生じ、その結果としてカラムの中
心側の充填状態が疎になる現象が発生しやすい、この現
像は特にカラム内径が大きい程著しくなる。この乱流は
レイノルズ数Ｒｓ＝ρｕＤ／ｇ（ρは流体密度、Ｕは流
体線速度、Ｄはカラム内径、ルは流体の粘度）で推定す
ることが出来る。従って、乱流（Ｒｅ）を大きくするこ
となく流体線速度（Ｕ）を高く維持するためには、流体
の粘度（ル）を高くすれば良いことになる。またカラム
内径ＣＤ）が大きくなれば、それに応じて流体の粘度（
ト）を太きくしなけらばならない。

なお１分散媒体は充填剤に対して親和性をもつことが必
要である。これは充填剤を均一に分散させるためである
。

また、湿式充填操作に際しては、カラムに充填剤スラリ
ーを導入した後、更に加圧下に充填溶媒（加圧液体）を
導入するが、この加圧液体が充填剤スラリーが混合しな
いことも必要である。すなわち、加圧液体と充填剤スラ
リーとが混合した場合には、充填剤スラリーの均一性が
失われ、その結果、形成される充＠暦に疎密が生じる。

従って、得られる充填カラムの理論段数が低くなると共
に、充填された充填層は柔らかくなり、時間の経過と共
に充填層が収縮し、カラム上部に空隙が生じる様になる
。すなわち、理論段数の経時変化が発生することになる
。

水系ＧＰＣ用のシリカゲル充填剤を平衡スラリー法で充
填する場合の分散媒体として、たとえばテトラブロモエ
タン、テトラクロロエチレンなどを使用することが知ら
れているが、これらは毒性があり、また加水分解し易い
不安定な液体であるため、取り扱いに注意が必要であり
、実用上に問題が多い、また粘度調整法における分散媒
体としテ、シクロヘキサノール、流動パラフィン、ホＩ
Ｊエチレングリコール類を用いることも知られているが
、これらを用いて高速で充填すると、カラム上部に空隙
が形成されやすいとの問題がある。

上記のような公知の充填剤用分散媒体の問題点は、多孔
質ガラス充填剤の湿式充填方法においては特に問題とな
る。すなわち、高速液体クロマトグラフィー法に用いる
充填剤として多孔質ガラス充填剤微粒子を用いる技術は
既に知られている。

この微粒子状多孔質ガラス充填剤を湿式充填法によりカ
ラムに充填する場合においても、上述のようなシリカゲ
ル充填剤を用いる場合と同様な問題が発生する。特に、
微粒子状多孔質ガラス充填剤は、その製造工程において
破砕などの操作が加わることが多い、そのような破砕粒
子を多量含む微粒子状多孔質ガラス充填剤の均一な充填
は、球状もしくはそれに類似した形態の粒子を中心とす
るシリカゲル充填剤に比較して更に困難となる。特に従
来知られているよりも径の小さい微粒子状の多孔質ガラ
ス充填剤では、上記の問題はその充填剤の使用における
大きな障害となる。

［発明の目的］ 本発明の目的は、改良された高速液体クロマトグラフィ
ー用微粒子多孔賀ガラス充填剤の湿式充填方法を提供す
ることにある。

本発明は特に、高速液体クロマトグラフィー用微粒子多
孔質ガラス充填剤の湿式充填方法において、特定の分散
媒体組成物を用いることにより。

高流速の充填条件であっても均質な充填剤カラムの形成
を可能とする湿式充填方法を提供することにある。

また本発明は、特に径の小さい微粒子多孔質ガ　　　　
　　　、）ラス充填剤のカラムへの高流速かつ均質な充
填に適した高速液体クロマトグラフィー用微粒子多孔質
ガラス充填剤の湿式充填方法を提供することをもその目
的とする。

［発明の要旨］ 本発明は、微粒子多孔質ガラス充填剤を充填用分散媒体
に均一に分散させてスラリーを調製したのち、これをカ
ラムに導入することからなる高速液体クロマトグラフィ
ー用微粒子多孔質ガラス充損剤の湿式充填方法において
、上記充填用分散媒体が、エチレングリコール、低級ア
ルコールおよび低級脂肪酸の三成分を基本成分とする混
合液体であることを特徴とする湿式充填方法を提供する
ものである。

［発明の詳細な記述］ 本発明で用いる充填用分散媒体は、エチレングリコール
、低級アルコールおよび低級脂肪酸の三成分を体積比で
、５０〜７０　：　２０〜３００　：０．１〜２の割合
にて含有する混合液体であることが好ましい、上記分散
媒体組成物は、他の溶媒を含有することを妨げるもので
はない０本発明で用いる充填用分散媒体は、その比重が
０．８０〜１、ｌＯｇ／ｃ♂の範囲にあることが望まし
く、０　、９０〜ｌ　、　ＯＯｇ　／　ｃ　ｍ’の範囲
にあることが特に望ましい、一方、上記分散媒体組成物
の粘度は２，０〜８．ＯｃＰの範囲にあることが望まし
く、３．０〜５．ＯｃＰの範囲にあることが特に望まし
い。

本発明において低級アルコールとは炭素数１〜４の脂肪
族アルコールを意味し、その例としてはメタ／−ル、エ
タノール、プロパツール、インプゴバノール、およびｎ
−ブタノールを挙げることができる。これらの内で、メ
タノールおよびエタノールが好ましく、特にメタノール
が好ましい。

本発明において低級脂肪酸とは炭素数１〜４の脂肪酸を
意味し、その例としてはギ酸、酢酸、およびプロピオン
酸を挙げることができる。これらの内で、酢酸が好まし
い。

エチレングリコールは高粘性で、サイジング現象を防ぐ
のに特に効果的であり、またメタ／−ルなどの低級アル
コールは低密度（メタノールでは０．７９ｇ／ｍｕ、２
５°Ｃ）であって、レイノルズ数低減に特に効果的であ
り、さらに酢酸などの低級脂肪酸は充填剤を分散媒体に
均一に分散させるのに特に有効である。

本発明のエチレングリコール、低級アルコールおよび低
級脂肪酸の三成分を基本成分とする混合液体は高速液体
クロマトグラフィー用微粒子多孔質ガラス充填削の湿式
充填方法において特に有効である。

すなわち、微粒子多孔質ガラスを高速液体クロマトグラ
フィー用充填剤として用いる技術は既に知られており１
本発明の高速液体クロマトグラフィー用微粒子多孔買ガ
ラス充填剤の湿式充填方法は、それらの公知の微粒子多
孔質ガラス充填剤の充填に際して有効に利用することが
できる。前述のように公知の微粒子多孔質ガラス充填剤
は破砕粒子を多量含むものが多く、本発明の充填用分散
媒体はそれらの充填剤の高流速かつ均質の充填に有効に
利用できる。

ただし、本発明の高速液体クロマトグラフィー用微粒子
多孔質ガラス充填剤の湿式充填方法は、その平均粒子径
が３０ｐｍ以下の微粒子多孔質ガラス充填剤の湿式充填
に特に有効に利用できる。

上述のような平均粒子径が３０ルｍ以下の微粒子多孔質
ガラス充填剤の例としては、Ｓ　ｉ　Ｏ２・Ｂ２Ｏ２・
Ｎａ２Ｏの三成分系からなる硼硅酸ソーダ多孔質ガラス
微粒子であって、該微粒子の平均直径が０．１〜３０ｐ
ｍであり、かつ所望により、粒子表面がシランカップリ
ング剤で処理されていてもよい多孔質ガラス充填剤を挙
げることができる。

上記の多孔質ガラス充填剤は、５ｉ０２・Ｂ２Ｏ３ψＮ
ａ２Ｏの三成分系の分相性硼硅酸ソーダガラスに熱処理
を施して分相させた後、酸溶出処−理により酸可溶性相
の少なくとも一部を溶出除去して得られる多孔質ガラス
粒子を、微粉砕操作と分級操作とにかけることによって
平均直径０．１〜３０ｐｍの多孔質ガラス微粒子を得て
１次いで所望により該粒子の表面をシランカー２プリン
グ剤　　　　　−で処理することからなる製造法により
製造することができる。なお、このような平均粒子径が
３０トｍ以下の微粒子多孔質ガラス充填剤の物性、特性
値、５ｉ！遣方法などの詳細については、本願出願人に
よる特願昭５９−９５３８０号出願の明細書に記載があ
る。

本発明の湿式充填方法の実施に際しては、まず微粒子多
孔質ガラス充填剤を、上記に規定した充填用分散媒体に
均一に分散して充填剤スラリーをｙＪ製する０次いで、
高速液体クロマトグラフィー用カラム（クロマト管）に
上記充填剤スラリーなパッカーなどの公知の充填装置を
利用して加圧充填する。

本発明の湿式充填方法に際して、カラムへの充填操作時
のスラリーの流量を１０〜２０ｍ２７分とし、かつ加圧
用液体の流量を３０〜３５ｍｆｔ／分となるように調整
することが望ましい、また、充填圧は２〜８ｋｇ／ｃｒ
ｎ’とするのが望ましい。

なお、カラムへの充填操作時の加圧用液体としては、ｎ
ゴヘプタンなどの脂肪族炭化水素溶媒を用いることが好
ましい、ｎ−ヘプタンなどの脂肪族炭化水素溶媒は適度
に密度が小さく（ｎ−ヘプタンは０．８８ｇ／ｍｌ、２
０℃）、かつ本発明の分散媒体と混和性に乏しく、スラ
リーの均一性を保持しつつ加圧するのに優れた液体であ
る。

第１図および第２図に、本発明の湿式充填方法により微
粒子多孔質ガラス充填剤を高速液体クロマトグラフィー
用カラムに充填して得た充填カラムを用いた場合の溶出
曲線、および分子量対保持容量の関係を示した検量曲線
の例を示す、これらの曲線は下記の充填剤、分散媒体お
よび装置を用い、下記の条件にて充填を行なった際に得
られたものである。

五厘１ Ｓ　ｉ　Ｏ２含量が約９２％の高ケイ酸質であって、通
常の分相熱処理、可溶性相の酸による溶出、コロイド状
シリカのアルカリ溶液による溶出、微粉砕、水ひ分級の
工程を経て作られ、最後に粒子表面をγ−グリシドオキ
シプロビルトリメトキシシランにより親水性に二表面改
質したものである。平均孔径は１７０〜５００Ａ、孔容
積は０．７０〜１．０ｍ免／ｇ、モして粒子直径は５．
０卦ｍである。

ユ之」 内径７．２ｍｍ、長さ２５０ｍｍの分析用クロマト管を
使用した。

充ＪＬ駈Ｚ 内径１６ｍｍ、長さ４００ｍｍ、内容積８０ｍｌのパフ
カーに、メインカラムと同サイズのプレカラムを連結し
、その下にメインカラムをユニオンで接続したもの、パ
ッカーを上に、カラムを下側にしてスタンドに保持し、
パフカーへの送液は定圧式ポンプを使用した。

Ｌｉ１立盈１遣 エチレングリコール・メタノール・酢酸（６２：３８：
ｌ、体積比） 比Ｑ　：　０　、９５　ｇ　／　Ｃｍ２、粘度：４．０
ｃＰＬ１ユｊ まずパッカー上部より四塩化炭素２５ｍｊｌを注入した
０次に充填剤７．８〜８．０ｇを分散媒体７０ｍ文に加
え、超音波で均一に分散させた。得られた充填剤スラリ
ーをすみやかにバッカー上部より加える。バッカー上部
の空白部をｎ−ヘプタンで充満させる。加圧＃奴の流量
が１０〜２０ｍｆＬ１分（充填剤の種類により異なる）
の間の最適値になるように、ガス圧を徐々に上昇させ、
最高充填圧力を５００ｋｇ／Ｃｒｒｌ’とする。メイン
カラム出口より溶出液が９５ｍＡ流れた出した後。

加圧溶媒流量を３０〜３５ｍ見／分となるようにガス圧
をｙ４ＦＭシ合計３００ｍＪ１の加圧溶媒が流れ出した
時点で中止する。

充填終了後、カラム内の溶媒をクロロホルム、メタノー
ル、および水で順次置換し、得られた充填剤カラムをＨ
ＰＬＣ測定装置にかける。

ＨＰＬＣ測定装置はＴＲＩＲＯＴＡＲ−Ｖを用い、検出
器は示差屈折計５Ｅ−１１（レンジ８）および紫外部検
出器ＵＮＩＤＥＣニー１００　（波長２８０ｍｍ、Ｌ／
７ジ０．０８）を用いた。理論段数の測定は標準物質と
じてエチレングリコール（１，０％）を用い。

注入量５ＪＬＪ１、示差屈折検出器（ｘ８）、移動線　
　　　　　　？水流量０．５ｍｌ／分で測定した。得ら
れた溶出曲線を第１図に示す（チャート速度：１ｃｍ／
分）、理論段数（Ｎ）＝９ａｏｏ。

検量曲線の測定は標準物質としてポリエチレンオキサイ
ド（分子ｉ：　３００〜３００，０００）を用い、注入
量２５路文、紫外部検出器（波長２８０ｎｍ、Ｌ／７ジ
０．０８）、移動相水、流量１．０ｍｌ１分にて測定し
た。得られた検量曲線を第２図に示す。

以下に本発明の実施例を記載する。

〔叉施例１コ （１）微粒子多孔質ガラス充填剤 ケイ酸、ホウ酸および硝酸ナトリウムを原料として、酸
化物換算の組成が５ｉ０２＝６０．３％、Ｂ　２０　ｚ
　”　３０　、０％、Ｎａ２０＝９．７％（いずれも重
量％）となるようにボールミルで均一に混合して８０ｋ
ｇの原料混合物を得た。この原料混合物を白金ルツボに
入れ、電気炉中で１３５０℃で１０時間攪拌しながら熔
解した０次いで室温迄急冷し、５５０℃で９６時間分相
熱処理を施した。そののちクロスビータ−ミルで粗粉砕
し、篩分機で８０〜４００メツシユに粒度を整え、３Ｎ
塩酸を用い、９０℃で２４時間酸処理を行った。水洗後
、１７２Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用い、２０〜２５℃
で２時間コロイダルシリカ除去処理を行なった。

アルカリ溶液を除去するために、十分に水洗を施し、そ
の後ＩＮ塩酸にて、室温で２時間酸洗浄を行なった。Ｐ
Ｈ＝７になるまで水洗を行ない、最後に１００℃で乾燥
を行なって粗粒子多孔質ガラスを作成した。

このサンプルの特性は平均孔径１７０人、比孔容積０．
８１ｍＪ１／ｇ、孔径分布＋２１／−１５％、比表面積
１６２ｒｒｒ’／ｇ、シラノール基２２フルモル／ｇで
あった。孔特性の測定は水銀圧入法により、比表面積は
Ｂ、Ｅ、Ｔ法により、そしてシラ／−ル基はメチルレッ
ド吸若法によって行なった・ 上記の粗粒子多孔質ガラスを衝撃型ピンミルで微粉砕後
、気流分級機を用い分級点４．ＯＰＬｍ及び６．０ルｍ
で分級し、この４．０〜６．０ルｍの粒子を水篩分級に
かけた。

水篩分級は沈降高さ１０ｃｍ、沈降時間１．５及び２．
０時間にて１０回繰り返し行なった０分散媒は純水とし
た。最後に１００℃で真空乾燥を行ない、微粒子状多孔
質ガラスを得た。得られた微粒子状多孔質ガラスの粒度
特性は、平均粒径（０５０）’−５、０μｍ、粒度分布
（Ｄ　９０／　Ｄ　５０）＝１．３０、粒度分布（Ｄ５
０１０１０）　＝　１　、３１であった。

上記で製造した微粒子状多孔質ガラスに対して水系ＧＰ
Ｃ用の親水性表面改質を行なった。すなわち０．２Ｎ硝
酸を用い、８０℃で３時間１表面活性化処理を行い、冷
却後ｐＨ約６．０になる迄洗浄し、その後１２０℃で数
時間乾燥した。シランカップリング処理（グリセリル化
処理）は市原のγ−グリシドキシプロピルトリメトキシ
シランを使用し、これを試料（微粒子状多孔質ガラス）
のシラノール基量に対し、約５倍当量添加した。

また界面活性剤も少量添加し、水溶媒中で９０℃、８時
間反応させて処理を行なった。冷却後。

水、アセトン、メタノールで十分に洗浄し、６０℃、１
０−”　トールで真空乾燥した。処理後の微粒子状多孔
質ガラスの残存シラノール基量は未処理試料のそれに対
し約３．０％であった。この測定はメチルレッド吸着法
によった。

得られた充填剤は下記の特性値を有するものであった。

平均孔径：５００Ａ 孔容積　：０．７０ｍ見／ｇ 平均粒径：５．ＯＩＬｍ （２）充填用分散媒体 エチレングリコール、メタノール、酢酸（６２：３８：
１．体積比）からなる混合物を、１．５倍（体積比）の
メタノールで希釈したもの、比重：０．９ｇ／ａｒｔ？
、粘度：３．２ｃＰ。

（３）充填方法 充填剤８．５ｇを上記の分散媒体７０℃見に加え、超音
波で３分分散させて充填剤スラリーを調製した。

パフカーの上部より四塩化炭素２５ｍＪｌを注入した。

パフカー上部の空白部をｎ−ヘプタンで充満させ、メイ
ンカラム出口からの流出液が平均流ｉｌｌ　ｌ　７　ｍ
　ｌ　７分になるよう昇圧させ、９５℃見が流れ出す迄
、最高充填圧５００に、ｇ／ａｍ’に保持した。その後
、最高充填圧を４５０　ｋ　ｇ　／　ｃ　ｔｎ’に下げ
、流出液合計３００ｍｌになる迄流速を３５ｍ文／分と
した。充填終了後、カラム内溶媒をクロロホルム、メタ
ノール、水で順次置換し、標準物質ピレンを用いて理論
段数を測定した。得られた理鵡段数は下記の通りである
。

Ｎ＝１２０００／２５ｃｍ 上述の如く本発明の充填方法により、破砕状の微粒子多
孔質ガラスを充填すると、ＨＰＬＣ用分析カラムとして
高理論段数のカラムが得られることが確認できた。

［実施例２］ （１）微粒子多孔質ガラス充填剤 実ｍ例１記載の方法と同様な方法により下記の特性値を
有する微粒子多孔質ガラス充填剤を製造した。

平均孔径：１７０Ａ 孔容ａ　：０．７５ｒｎｌ／ｇ 平均粒径：５．６糾ｍ （２）充填用分散媒体 エチレングリコール、メタノール、酢酸（６２：３８：
１、体積比）からなる混合物を、同量（体積比）のメタ
ノールで希釈したもの、比重＝０　、９５　ｇ　／　ｃ
ｍ’、粘度：４．ＱｃＰ。

（３）充填方法 充填剤８．５ｇを上記の分散媒体７０ｍｌに加え、超音
波で３分分散させて充填剤スラリーを調製した。

パッカーの上部より四基化炭′素２５ｍ見を注入した。

パッカー上部の空白部をｎ−ヘプタンで充満させ、メイ
ンカラム出口からの流出液が平均流速１２ｍＪ１／分に
なるよう昇圧させ、９５ｍｌ流れ出す迄、最高充填圧５
００　ｋ　ｇ　／　ｃ　ｎｆに保持した。その後、最高
充填圧を５００ｋｇ／ｃｒｎ’で保ち、流出液合計３０
０ｍＭになる迄流速を３０１１７分とした。充填終了後
、カラム内の溶媒をクロロホルム、メタノール、水で順
次置換し、標準物質ピレンを用いて理論段数を測定した
。得られた理論段数は下記の通りである。

Ｎ＝１２５００７２５ｃｍ 上述の如く本発明の充填方法により、破砕状の微粒子多
孔質ガラスを充填すると、ＨＰＬＣ用分析カラムとして
高理論段数のカラムが得られることが確認できた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の湿式充填方法により微粒子多孔質ガ
ラス充填剤を充填した充填剤カラムを、ＨＰＬＣ装置で
測定した溶出曲線の一例を示すグラフである。 第２図は１本発明の湿式充填方法により微粒子多孔質ガ
ラス充填剤を充填した充填剤カラムを。 ＨＰ　Ｌ　Ｃ装置で測定した分子量対保持容量の関係を
示す検量曲線の一例を示すグラフである。 特許出願人　富士写真フィルム株式会社代　　理　　人
　　弁理士　　　柳　川　　泰　　男第１図 イ呆　）−１時　＋ｆｉｌ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、微粒子多孔質ガラス充填剤を充填用分散媒体に均一
   に分散させてスラリーを調製したのち、これをカラムに
   導入することからなる高速液体クロマトグラフィー用微
   粒子多孔質ガラス充填剤の湿式充填方法において、上記
   充填用分散媒体が、エチレングリコール、低級アルコー
   ルおよび低級脂肪酸の三成分を基本成分とする混合液体
   であることを特徴とする湿式充填方法。 ２、上記充填用分散媒体が、エチレングリコール、低級
   アルコールおよび低級脂肪酸の三成分を体積比で、５０
   〜７０：２０〜３００：０．１〜２の割合にて含有する
   混合液体であることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の湿式充填方法。 ３、上記充填用分散媒体の比重が０．８０〜１．１０ｇ
   ／ｃｍ＾２の範囲にあることを特徴とする特許請求の範
   囲第１項記載の湿式充填方法。 ４、上記充填用分散媒体の粘度が２．０〜 ８．０ｃＰの範囲にあることを特徴とする特許請求の範
   囲第１項記載の湿式充填方法。 ５、上記充填用分散媒体の低級アルコールがメタノール
   であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の湿
   式充填方法。 ６、上記充填用分散媒体の低級脂肪酸が酢酸であること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の湿式充填方法
   。 ７、カラムへの充填操作時の加圧用液体としてｎ−ヘプ
   タンを用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載の湿式充填方法。 ８、カラムへの充填操作時のスラリーの流量を１０〜２
   ０ｍｌ／分とし、かつ加圧用液体の流量を３０〜３５ｍ
   ｌ／分となるように調整することを特徴とする特許請求
   の範囲第７項記載の湿式充填方法。 ９、上記微粒子多孔質ガラスの粒子の平均径が３０μｍ
   以下であることを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至
   第８項のいずれかの項記載の湿式充填方法。