JPS6091988A - チオバシルス　フエロオキシダンスのための選択的シヤトル　クローニングベクターの製造方法 - Google Patents

チオバシルス　フエロオキシダンスのための選択的シヤトル　クローニングベクターの製造方法

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JPS6091988A
JPS6091988A JP59180227A JP18022784A JPS6091988A JP S6091988 A JPS6091988 A JP S6091988A JP 59180227 A JP59180227 A JP 59180227A JP 18022784 A JP18022784 A JP 18022784A JP S6091988 A JPS6091988 A JP S6091988A
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JP
Japan
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plasmid
grasmid
size
approximately
recombinant
Prior art date
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Application number
JP59180227A
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English (en)
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ダグラス　エリツク　ラウリングス
ダビツド　ランドル　ウツズ
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General Mining Union Corp Ltd
Original Assignee
General Mining Union Corp Ltd
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Publication date
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Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora

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  • General Health & Medical Sciences (AREA)
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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は選択的クロラムフェニコール耐性遺伝子をきみ
、そしてティー、フェロオキ／ダンス（Ｔ、　ｆｅｒｒ
ｏｏｘｉｄａｎｓ　）及びエンエリチア：ｆｆ１Ｊｃｉ
ｌｌｕｓ　ｆｅｒｒｏｏｘｉｄａｎｓ　）のだめの組換
えＬ）ＮＡクローニング　グラスミド　ベクターの製法
に関す他のバクテリアのため忙製造された選択的クロー
ニング　ベクターはすでに公知であるが、イー、コリ菌
内においても又複製することができるティー、フェロオ
キシダンスのための選択的クローニング　ベクターの製
法に関しては従来全く報告されていない。
本発明においてグラスミド　ベクターは、ティー、フェ
ロオキ／ダンス菌株よシ保護ＤＮＡプラスミドを取り出
し、同一の制限酵素を用いてティー、フェロオキ／ダン
ス　グラスミド及びクロラムフェニコール耐性遺伝子を
含む第二のプラスミドを開裂させ、次いで上記プラスミ
ドを結合させて組換えプラスミドを形成することによシ
５＃遺される。
第二のグラスミドはプラスミドｐＢａ　３２５であシ得
るが、ｐＢル３２５の代わシに他の適するグラスミドを
使用するこ七もできろう 得られた組換えプラスミドルＤ几４０１はイー。
コリ菌内で複製される。
本発明の別の特徴は、ｐＤ几４０１プラスミドは再び取
シ出され複製用のイー、コリ原体に組み込むため如少な
くとも一種の制限酵素を用いて開裂することによシ改良
され得ることである。
除去された組換えグラスミドｐＪ）Ｒ４１２はクロラム
フェニコール耐性遺伝子を註み、そして複製用のティー
、フェロオキシダンスを使用することによりイー、コリ
菌内で複製さｆ’Ｌる。
本発明は又、本明＋ｄｌＩ　ｇ中に記載のように、新規
な選択的シャトル　ベクターであり、そしてティー、フ
ェロオキシダンス及びイー、コリを用いる遺伝子操作実
験のために期用され得る組換えグラスミドｐｌ）几４０
１及びｐＤ此４１２を含むものである。
それ数本発明は約１７．８ｋｂの大きさを有し、そして
制限酵素Ｐｖｕ　Ｉにより各々大きさ３．ｓｋｂ、６．
２ｋｂ及び８．１ｋｂを有する３個のフラグメントに分
割されるプラスミドｐｕｉｔ　４０１を提供するもので
ある。
本発明は又、約１４．８ｋｂの大きさを有し、そして制
限酵素ＰｖｕｌＫよシ各々大きさａ、ｓｋｂ、５．１ｋ
ｂ及び６．２ｋｂを有する３個のフラグメントに分割さ
れるプラスｄドｐＤ几４１２を挾供するものである。
以下に保護プラスミド及び本発明のプラスミドの地図を
示す図面に基づいて本発明の詳細な説明する。
１２、．４キロベース（ｋｂ）の保護グラスミドｐＴＦ
−１？ｃ：ｌｊ：南アフリカ国　ゼネラル　マイニング
ユニオンコーホｖ　−−７ヨｙ　（Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍ
ｉｎｉｎｇＵｎｉｏｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　）株
式会社　フェアーピユーマイｙ　（Ｆａｉｒｖｉｅｗ　
Ｍｉｎｅ　）からの酸銀過液より分離されたディー、フ
ェロオキ／ダンス菌株より取り出されたつ ｐＴＦ　−Ｆｅ２の制限電図（Ｒｅ５ｔｒｉｃｔｉｏｎ
　ｍａｐｐｉｎｇ　）よシ、これが唯一のＰｓｔ　１　
、　Ｘｈｏ　１　、　Ｋｐｎ　１　。
Ｅｃｏ几１．　Ａｐａ　ｉ　、　Ｃ１ａ　１限定区（Ｒ
ｅ５ｔｒｉｃｔｉｏｎｓｉｔｅｓ　）及び２箇所のＰｖ
ｕＪ限定区を有することが判かる。
組換えグラスミドｐＤＨ，４０１は、ｐＴｌｉ”　−Ｆ
ｅ２のＰｓｔ１区（ｓｉｔｅ）ヘイ−、コリ　グラスミ
ドルＢ几３２５を導入することにより製造された。
ｐＢＲ３２５ｉ、ｔアムビシリン（Ａｐ）、クロラムフ
ェニコール（Ｃｍ）及びテトラナイフリン耐性遺伝子を
含んでいる。Ｐｓｔ１区における復製は更にＡｐＲ遺伝
子並びにＣｍ”　、　ＴｃＲ及びＡＪ）Ｉｇが分離はれ
たイー、コリ変性様を不活性化する。組換えプラスミド
ｐＤＩ（４０１（約１７．８ｋｂ）はイー、コリ変性様
よυ取り出−１１”Ｌ　、そして区分分析（ｒｅｓｔｒ
ｉｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ　）によシ特徴付けらＪ
また。この新規な組換えグラスミドはＣｒｎＲ及びＴＣ
Ｒのだめの遺伝子ヲサみ、そしてティー、フェロオキシ
ダンス及びイー、コリ菌内で複製され得る。
除去プラスミドｐｒ）几４１２　（約１４．８　ｋｂ　
）　ｔｒｉ　続＜ｐＤ几４０１のＳａｌ　１　／　Ｘｈ
ｏ　１分解及び複製の原ｐＢＩＬ　３２５及び°ｌ’ｃ
鍛伝子の約半分、及びティー。
フェロオキシダンスｐＴＦ　−Ｆｅ２　ＤＮＡ　０．３
　ｋｂ部を含む８ａ１１　／　Ｘｈｏ　１７ラグメント
（約３．０　ｋｂ　）の除去によυ製造された。区分分
析によシ、グラスミドｐＤｌ（４１２においてＳａｌ　
１　／　Ｘｈｏ　１　（７）３．１ｋｂの７ラグメント
が除去されたのが判る。
この新規な租換えプラスミドはＣｍＲのための遺伝子を
含み、そしてティー、フェロオキシダンス及びイー、コ
リ内で複製されイ０る。
二種のグラスはドｐＤＦＬ４０１及びｐＤＲ４１２は制
限奪素を用いる核開裂により特徴付けられた。
したがって、制限酵素ＰｖｕｌはプラスミドルＤ几４０
１を各々３．５ｋｂ　、　６．２ｋｂ及び８．１ｋｂの
大きさを有する３種の７ラグメントに分解する。
同一の制限酵素ＰｖｕｌはグラスミドルＤ几４１２を各
々３．５ｋｂ、５．１ｋｂ及び６．２ｋｂの大きさを有
する３種の７ラグメントに分解する。
【図面の簡単な説明】
図ｔま各４１ｉａプラスミドの地図を示す概略図である
。 特許　出　ａ　人　ゼネラル　マイニング　ユニオン手
続補正書 昭和５９年　１１月２６１ 特許庁長官→峠隈殿 事件との関係　特許出願人 名称セネラル　マイニング　ユニオン コーポレーション　リミテッド （ほか　１　名） ５、補ｉ１Ｅ命令のト」イ」 （４）代理権を証明する書面 ７、補正の内容 （１）願書を別紙のとおり補正する。 （２）　明細書全文を別紙のとおり補正する。 （手書き明細書をタイプ浄書した。内容に変更なし。） （３）出面を別紙のとおり補正する。 （浄書した図面内容に変更なし＝） （４）委任状及びその訳文を提出する。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （１）　ティー、フェロオキシダンス菌株よシ保護１）
    ＮＡプラスミドを取り出す工程と、同一の制限１孝素を
    用いてティー、フェロオキシダンスプラスミド及びクロ
    ラムフェニコール耐性遺伝子をａむ第二のプラスミドを
    開裂する工程と、次いで上記プラスミドを結合させて組
    換えプラスミドを形成する工程とよりなることを特徴と
    するグラスごド　ベクターの製造方法。 （２）　１呆に色グラスミドが大きさ１２．．４ｋｂの
    ｐＴＦ’　−Ｆｅ２であることを特徴とする特〆「請求
    の範囲第１項記載の方法。 （３）第二のプラスミドがｐＢＲ３２５であることを特
    徴とする特許請求の範囲第２項記載の方法（４１ｐＢル
    ３２５グラスミドがｐ’ｌ’Ｆ　−ＦＣ２プラスミドの
    Ｐｓｔ１区に導入さＪすることを特徴とする特許請求の
    範囲第３項記載の方法。 （５）　組換えプラスミドをｉＴ＋び１反り出す工１呈
    と。 該取り出さｉまた。１ｊ１換えグラスミドを生産するた
    めに、復製用のイー、コリ原体に組み込むために少なく
    とも一棟の制限酵素を用いて該組換えプラスミドを開裂
    する工程とを言むことを特徴とする特許請求の範囲第１
    頃ないし第４項のいずれか１項記載の方法。 （６）　開裂工程が、第二のプラスミドの複製用の基質
    を有する約３．Ｏｋｂの７ラグメントの組換えプラスミ
    ドからの除去を陰むことを特徴とする特許請求の範囲第
    ５項記載の方法。 （７）特許請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１
    項Ｃ；ピ１１戊の方法により製造をＪまた大きさ約１７
    ．８ｋｂの組換えプラスミドルＤ几４０１゜（８）ｌ特
    許請求の範囲第５項又は庄６項の方法によシ製造さ九た
    大きさ約１４８ｋｂの除去された。　組換えプラスミド
    ｐＤＩＬ　４１２゜（９）大きさ約１７．８ｋｂであシ
    、且つ制限酵素Ｐｖｕｌにより各々大きさ３．５ｋｂ、
    　６．２ｋｂ及び８．１ｋｂを有する３個の７ラグメン
    トに分割されることを特徴とするグラスミドｐＤＲ４０
    １。 １１０＋　大ぎさ約１４．８ｋｂであシ、且つ制限酵素
    Ｐｖｕｌによシ各々大きさ３．５ｋｂ、　５．１ｋｂ及
    び６．２ｋｂを有する３個の７ラグメントに分割される
    ことを特徴とするプラスミドｐｏ１ｔ　４１２゜Ｉ　添
    付図面記載の前述のプラスミドｐＤＲ４０１及びｐＤ）
    も４１２゜ （１り　添付図面記載の前述のグラスミド　ベクターの
    製造方法。
JP59180227A 1983-08-29 1984-08-29 チオバシルス　フエロオキシダンスのための選択的シヤトル　クローニングベクターの製造方法 Pending JPS6091988A (ja)

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BE (1) BE900457A (ja)
BR (1) BR8404310A (ja)
CA (1) CA1226538A (ja)
DE (1) DE3431780A1 (ja)
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JPS63209591A (ja) * 1987-02-27 1988-08-31 Dowa Mining Co Ltd チオバチルス属菌のための組換えプラスミド、水銀耐性ベクタ−プラスミドおよびそれらの作製法

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ATA276784A (de) 1990-02-15
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DE3431780C2 (ja) 1988-07-28
CA1226538A (en) 1987-09-08
AU584584B2 (en) 1989-06-01
GB8421834D0 (en) 1984-10-03
BE900457A (fr) 1984-12-17
GB2148300B (en) 1988-07-13
AU3245384A (en) 1985-03-07
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SE460055B (sv) 1989-09-04
FI86078C (fi) 1992-07-10
SE8404290D0 (sv) 1984-08-29
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