JPS607974B2 - 肝硬変の予防及び治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な肝硬変の予防及び治療剤に関する。

更に詳しくは本発明はノブドウの果実のアルコール浸出
液を主成分として成る肝硬変の予防及び治療剤に関する
。肝硬変はアルコール、ウイルス、自己免疫など種々の
原因によって肝臓中に腰質線縦が生成され、肝細胞の壊
死と機能消失とが生じ肝硬変患者は遂には死に陥いる病
気である。

また肝硬変から肝癌の発生にまで至る場合も多い。多数
の人々の努力にも拘らず肝硬変に対する有効な予防剤ま
たは治療剤は従来発見されておらず、せいぜい肝細胞の
機能消失をわずかに予防する程度のものであった。

０ 本発明者らは鋭意研究の結果ノブドウ〔学名アンベ
ロプシス・ブレビベデユンクラタ（マキシム）トラウト
ブ、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｂｒｅｖｉｐｅｄｕｎｃｕｌ
ａｔａ（Ｍａｄｍ）Ｔｒａｕｔｖ．〕の果実のアルコー
ル浸出液が肝硬変の予防及び治療に対して顕著な効果が
あることを発見した。ブドウ（葡萄）は被子植物、双子
葉類の一科目で、クロウメモドキ目（ラムナルス、Ｒｈ
ａｍＭ１ｅｓ）にまとめられ、１２属、約７０の蓮があ
り、日本には５属１４瞳が知られている。

本発明においてはこれらブドウの内、特にノブドウの果
実を使用するものである。

ノブドウはブドウ科の多年草であって、山野に普通に見
られるつる草である。夏に淡黄緑色の五弁の小花をつけ
る。花後、球形の液果を結び、熱すれば白、紫、碧など
混交する。本発明においてノブドウの果実を使用するに
当つては房（ふご）を充分水洗し、そのまま、あるいは
果実をつぶした状態となして、あるいは果実から表皮と
種子とを除いた状態となす等そのいずれでもよい。

浸出剤または抽出剤としては医薬上許容し得る タ任意
の溶剤を使用することができるが工業的見地からアルコ
ール類が望ましく、特にエチルアルコール類が好ましい
。

アルコールは水との混合物の状態すなわちアルコール水
溶液として使用することができ、その混合割合（希釈度
）は任意であるＺが約２０％〜約５０％が好ましい。ノ
ブドウ果実に対するアルコールの使用量は特に制限はな
いが重量において約１．３音またはそれ以上が使用され
る。浸出は常温において行うことができ、通常６日ない
し約６カ月を要する。浸出期間は特に長期間Ｚにする必
要はないが通常２ヵ月で充分である。以下実施例により
図面及び顕微鏡写真を参照して本発明を具体的に説明す
る。ただし本発明はこの実施例のみに限定されるもので
はない。実施例
２ノブドウの果実を充分に水洗し、その約ｌｋ９を約４
０％のエチルアルコール水溶液１．５夕に室温で約２力
月浸潰し、その浸出液をェバポレーターにより減圧蒸留
してアルコールを留去し、濃縮する。

この生成物は褐色の粘穂な液体であり、赤外分光分析の
デ−夕によれば糠質、ベプチド及び有機酸を含有する。
添付第１図は本物質の赤外スペクトル図である。

この図において約１０５０伽‐１及び約１４００肌‐１
における吸収は糠質の存在、約１６１０肌‐１及び約３
２４０肌‐１における吸収はべプチドの存在、また１７
００肌‐１及び１７５０ｃｍ‐１における吸収は有機酸
の存在を示す。実験例 １ 本剤について組織培養法により試験管内における現象を
追跡した。

使用した細胞は、１９６３王２月４日に培養を開始し（
ＪＡＲ−１系ラッチＦ１６、生後１０日の肝臓を使用）
、ＤＡＢ処理、なぎさ培養によって得た変異株系の細胞
（以下Ｍ細胞という）である。

ここにＤＡＢ処理とはＤＡＢすなわち４ージメチルアミ
ノアゾベンゼン（俗称バターイエロー）をラッチに食べ
させると肝癌が出来ることが知られていることに基づき
、ラッチ肝由来細胞をＤＡＢを含む塔地で数日間以上培
養すると、細胞に変異が起るので、肝塵様細胞となす処
理をいう。この系はアルファーフイトプロテイン（Ｑ−
ｆｅｔｏｐｒｏにｉｎ）を産生し、未分化の肝細胞と思
われるが培養内で大量の勝原線縦を産生するのが特徴で
、いわば肝硬変になっているような細胞である。

短冊型のカバーガラスを入れた平型培養管に前記ノブド
ウ果実浸出液を添加してＭ細胞を培養しへ経日的に固定
した標本を鍍銀染色して観察した。

この標本の培養１週間後の顕微鏡写真（４００倍）を第
３図に示す。Ｊ方対照群として前記ノブドウ果実浸出液
を添加しないで同一手順により得られた標本の培養１タ
週間後の顕微鏡写真（４０ぴ音）を第２図に示す。

第３図に見られるようにノブドウ果実浸出液添加群は培
養１週間後において細い網目状の線維のみが形成され、
一方対照群の第２図においては太い階級性の線縦（勝原
級紙）が形成されることが０観察された。すなわち本発
明のノブドウ浸出液は勝原線総の形成に対し顕著な抑制
作用を有することが判明した。実施例 ２ ノブドウエキスの抗脂肝因子について次のよう夕に実験
を行った。

テスト法 実験的に、下記３種の肝障害を起こさせたラット（各群
３〜５匹）に、ノブドウエキス（ノブドウをエチルアル
コール水溶液で浸潰し、アルコ−０ルを減圧蒸留により
除去したもの）を呑ませ、１日後、屠殺し、肝臓の組織
標本を作り、その障害の度合を観察した。

なお、対照群には、水道水を呑ませた。肝障害を起こさ
せた種類 ５１ ガラクトサミソの１５０爪９を腹腔内に投与。

２ エチルアルコール１０％溶液の５肌‘を腹腔内に投
与。

３ ェチオニン２．５％溶液の０．５Ｍを腹腔内に投与
。

０結果 結果を、顕微鏡写真によって示す。

第４図は、無処置（健康）のものである。

第５図及び第６図はガラクトサミン投与群である。

第７図及び第８図はエチルアルコール投与群である。

第９図及び第１０図はェチオニン投与群である。

第５図、第７図及び第９図は、水道水を呑ませた対照群
である。

第６図、第８図及び第１０図は、ノブドウエキスを呑ま
せた実験群である。

これら第５〜１０図において、細胞質に白く丸く抜けて
いるのが脂肪類粒であって、いずれも実験群（ノブドウ
エキスを呑ませた群）が、対照群（水道水を呑ませた群
）に比較して、脂肪変性軽減が顕著に観察された。

実施例 ３ （亜急性毒性試験） ノブドウ浸出液の安全性を立証するため、雌雄ラットに
ノブドウ浸出を３５日間連続経口投与して亜急性毒性試
験を行った。

供試検体 ノブドウ浸出液を約６．８倍に濃縮した黒褐色液を供試
検体として用いた。

供試動物 ＳＤ−ＣＲＪ系雌雄ラット（日本チャールスリバー株式
会社）を、４週令で購入し、１週間予備飼育後、順調な
生育を示した動物を実験に用いた。

また、各投与群への動物の振り分けは、群間の平均体重
と標順偏差がほぼ等しくなるように行った。なお、実験
開始時の体重は雄１３１〜１４８夕であり、雌１１４〜
１３９夕であった。投与量及び投与方法投与量は本実験
に先き立ち、ノブドウ浸出液を２週間連続経口投与する
投与量設定試験を行い、その結果を参考に決定した。

すなわち、連続投与可能最大量と考えられる２０．０の
‘′ｋ９において、死亡例は認められなかった。

この結果より、本実験における最高投与量を、３５日間
連続投与を前提として物理的に投与可能最大量と考えら
れる２０．０泌′ｋ９とし、以下公比１／４で５．０叫
′ｋｇ及び１．２５肌′ｋ９を設け、対照群を加え４群
とした。

−群の動物数は対照群及び２０．０舷／ｋ９投与群では
雌雄各１５匹、その他の各投与群では１群雌雄各１０匹
とした。

各投与群とも投与期間終了時（直後群）に雌雄各１０匹
を、また１５匹を供試した各投与群については残り雌雄
各５匹を回復期間終了時（回復群）にそれぞれ屠殺し、
諸検査を実施した。投与にあたっては、各投与群とも投
与液量が２泌／１００タ体重となる様に、検体を蒸留水
でそれぞれ１倍（原液）、４倍および１６倍に希釈し、
金属製胃ゾンデを用い１日１回づつ、３５日間連続経口
投与した。対照群には蒸留水のみを同様に投与した。な
お回復期間中は、各投与群とも投与を０中止し休薬せし
めた。病理学的検査方法 採血後、全動物を腹大動脈切断により放皿致死せしめ、
直ちに開胸、開腹して各臓器の肉眼的観察を行った。

続いて「肝を摘出し、湿重量（絶対夕重量）を測定した
。また体重１００９当りの肝の重量比（比重量）を、一
夜絶食後胤定した体重により算出した。病理組織学的検
査には、臓器（肝）を、１０％中性ホルマリン液に固定
後、常法によりへマトキシリンーェオシン染色標本を作
製し鏡検した。

統計処理数値化した成績については、群平均値及び標準
偏差を求め、対照群と各投与群との間で、ｔ検定により
、有意差の検定を行った。

Ｓ実験結果 臓器重量 投与及び回復期間終了時の絶対重量を、表１、表２、表
３及び表４に示す。

表１ ノブドウ浸出液のラットによる３５日間経口投与、亜急
性毒性試験とその回復試験絶対重電直後群）〔者標塗偏
差〕 表２ ノブドウ浸出液のラツトによる３５日間経口投与、亜毒
性試験とその回復試験※：対照群と比べ有意差あり（Ｐ
く０．０５）表３ノブドウ浸出液のラットによる３５日
間経口投与、亜急性毒性試験とその回復試験表４ ノブドウ浸出液のラツトによる３５日間経口投与、亜急
性毒性試験とその回復試験（比重量：回復群） ※：対照群と比べ有意差あり（Ｐ＜０．０５）投与期間
終了時の絶対重量及び比重量では、雌雄各投与群で有意
な変化はみられなかった。

回復期間終了時の絶対重量及び比重量では、雌２０．０
の‘′’ｋ９投与群でそれぞれ肝に有意な増加がみられ
た。病理組織学的所見 投与及び回復期間終了時の病理組織学的所見を表５及び
表６に示す。

表５ ノブドウ浸出液のラットによる３５日間経口投与、亜急
性毒性試験とその回復試験病理組織学的所見（直後群） 註 ‐：異常なし 士：軽微 ＋：軽度 汁：中等度
Ｍ：高度 ※：検体欠如表 ６ノブドウ浸出液のラット
にょる３５日間経口投与、亜急、′生毒性試験とその回
復試験病理組織学的所見（回復群） 註 −：異常なし、士軽減、十：軽度、什：中等度、州
：高度、※：検体欠如以上を総括すると、次のとおりで
ある。

ノブドウの浸出液の１．２５の【′ｋ９、５．０の‘／
ｋ９及び２０．０肌／ｋ９を雌雄ラットに３５日間連続
経口投与し、亜急性毒性及び回復性について検討した。

雌雄各投与群とも、投与及び回復期間を通じＬ死亡例は
観察されなかった。肝の絶対重量或は比重量に有意な増
減が散見されたが、これは軽度であり、用量相関性も明
らかでなく、また病理組織学的にも変化を示唆する所見
がみられないことにより、偶発的なものであると考えら
れる。

剖検において、雌雄各投与群で検体投与に起因すると考
えられる異常所見はみられなかった。

病理組織学的検索において、検体投与に起因すると考え
られる変化はみられなかった。すなわち、肝（グリソン
鞘内リンパ球浸潤、脂肪化「空月包変性）の変化は、準
生理的所見或は飼育条件等による所見と考えられる。上
述した如く、雌雄各投与群で、いずれの検査項目‘こも
検体投与に起因すると考えられる特異的変化は観察され
ず、回復期間終了時の諸検査にも異常はみられなかった
。

以上の結果より、ノブドウ浸出液の最大安全量は雌雄ラ
ットともに２００机【′ｋ９以上である。

本発明の肝硬変の予防及び治療剤は前記ノブドウ果実の
浸出液をそのまま、あるいは乾燥粉末化し、或は各種の
佐薬または賦形剤と配合して経口投与することもできる
。あるいは場合によっては注射液とすることもできる。
調剤例 水洗したノブドウの果実２２．２ｋ９を約４０％のエチ
ルアルコール水溶液１００夕に室温で約６ケ月間浸出し
た。

この浸出液をェバポレーターにて減圧蒸留に付し、濃縮
して、褐色の粘鋼な液体生成物６夕を得た。この生成物
を約１川音量の精製水（場合によっては「ビタミンまた
は糖分を添加）に溶解し、１２０ｃｃのビンに小分けし
た。

本発明の肝硬変の予防及び治療剤の投与量は前記ノブド
ウ果実のアルコール浸出液として約０．１なし、し約１
多／ｋ９／日である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のノブドウ果実浸出液の赤外スペクトル
図である。 第２図は本発明の肝硬変の予防及び治療剤を使用せずに
培養したＭ細胞の顕微鏡写真である。第３図は本発明の
肝硬変の予防及び治療剤を使用し培養したＭ細胞の顕微
鏡写真である。第４図は、ラットの無処置肝臓の顕微鏡
写真である。第５〜１０図は肝障害を起こさせたラット
の肝臓の顕微鏡写真であるが、その内第５図、第７図及
び第９図は水道水を呑ませた対照群であり、また第６図
、第８図及び第１０図は本発明に係るノブドウエキスを
呑ませた実験群である。第１図 第４図 第２図 第３図 第５図 第６図 第７図 第８図 第９図 第１０図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ノブドウの果実をアルコールで浸出した浸出液を主
   成分として成る肝硬変の予防及び治療剤。 ２ ノブドウの果実をそのままアルコールで浸出する特
   許請求の範囲第１項記載の肝硬変の予防及び治療剤。 ３ ノブドウの果実の漬したものをアルコールで浸出す
   る特許請求の範囲第１項記載の肝硬変の予防及び治療剤
   。 ４ ノブドウの果実から表皮と種子とを除いたものをア
   ルコールで浸出する特許請求の範囲第１項記載の肝硬変
   の予防及び治療剤。 ５ アルコールとしてエチルアルコールを使用する特許
   請求の範囲第１項記載の肝硬変の予防及び治療剤。 ６ 浸出剤としてアルコールと水との混合物を使用する
   特許請求の範囲第１項記載の肝硬変の予防及び治療剤。 ７ ノブドウの果実の重量に対しアルコールを１．５倍
   以上の量において使用する特許請求の範囲第１項記載の
   肝硬変の予防及び治療剤。