JPS6062987A - ノウルセオトリシンとその吸着質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の応用分野〕 本発明は、ノウルセオトリ／／の新規な発酵製造法およ
びその塩と吸着質の形での製法に関す。

ノウルセオトリｖ　ｙ　（Ｎｏｕｒ’ｆｆｇｔｈｒｉｃ
ｉｎ）は、ストレプトトリフｙ（Ｓｔｒｅρｔｏｔｂｒ
ｉｃｉｎｅ）族に属する抗生物質であって、家畜に対し
て動物飼料と共にエルサトロビー量（ｅｒｇｏｔｒｏｐ
ｅｎ　Ｄｏｓｅｎ）を供給したのち、体重増加の促進と
同時に飼料消費量の減少をもたらす。故に、この物質は
、畜産および製薬工業と混合飼料工業にとって有用であ
る。

〔公知技術方法の特徴〕

ストレゾトマイツエス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
）の１変種、ノウルセイーＡＴＣＣ１１４５５の培養菌
群から分離された抗生物質、ノウルセオトリ７ノは、ダ
ラム陽性菌およびグラム陰性菌およびミコノ々クチリア
に対して試験管的に有効である（　Ｇ、Ｂｒｅｄｌｅｒ
およびＨ，Ｔｈｒｕｍ著、「ノウルセオトリクンＡおよ
びＢ、ストレゾトマイツエスーノウルセイー変種の二種
の新規抗菌性抗生物質Ｊ　Ｚｓｃｈｒ、　Ａｌｌｇｅｍ
。

Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、３　、１０５−１１２（１９６３
））。ノウルセオトリ７ノは、水および低級アルコール
に可溶の塩基である。取扱い易い形はその塩である。ノ
ウルセオトリノ／の分子は、アミノ糖グロースアミンお
よびアミノ酸ストレプトリジン並びにβ−υツノから構
成される。ノウルセオトリ／／のそれぞれの成分は分子
中のペプチド様の相互に結合されたβ−リフ／残基の数
によって区別される。ノウルセオトリクン複合体は、約
（イ）％乃至おおよそ同等の割合まで二主成分Ｆ、Ｄか
ら成り、また約１０％まで二側成分Ｃ，Ｅからなる（　
Ｕ−Ｇｒａｆｅ、−ＨｌＢｏｃｋｅｒ、　Ｇ、　Ｒｅ１
ｎｈａｒｄｔ、およびＨ−Ｔｈｒｕｍ著：ストレゾトマ
イツエス・ノルセイＪＡ３８９０ｂの培養菌群中におけ
る０−アミノ安息香酸によるノルセオトリ／／生合成の
調節的影響。ｚｓｃｈｒ、　Ａｌ１ｇ。

Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、　１４　、６５９−６７３　（１
９７４）　）。

抗生物質ノウルセオトリクンを生産するストレプトマイ
ツエテｙ　（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅｎ　）菌株
は、ドイツ民主共和国−科学アカデミ−微生物学および
実験療法中央研究所の菌株保管品の中に、ストレゾトマ
イツエス・ノウルセイＺＩＭＥＴ　ＪＡ　３８９０ｂの
名称で寄託され、現在、ストレゾトマイツェスＺＩＭＥ
Ｔ　４３７１６の名称を有する。

文献において公知の方法（Ｈ＋　Ｂ　ｏｃｋｅｒおよび
Ｈ０７’ｂｒｕｍ　著二アミノ安息香酸によるノウルセ
オトリ７）の製造促進。ｐ／ｉ、　Ｈｅｒｏｌｄおよび
Ｚ　、　Ｇａｈｒｉｅｌ著：抗生物質−その研究、製造
および臨床使用の進歩。

口／トン（１９６６）ｐ４８４−５８７に記載）に従っ
て、好気性条件で培養を実施する。そのため、このスト
レゾトマイツエス菌株の土壌で親液的に乾燥された胞子
物質を適当な寒天培養基上に植付ける。路〜（資）℃で
６日〜１０日間の発酵ののち、このようにして生育し、
発芽した菌糸体集落を無菌栄養液体培地の接種に応用す
る。またこの接種は、直接に、ノウルセオトリ７ノを生
産するストレゾトマイツエテン菌種の親液的にゼラチン
で乾燥された液中培養菌糸体（Ｓｕｂｍｅｒｓｍｙｓｅ
ｌ　）のストックをもって実施することができる。接種
物質の液中生育のための液体栄養培地は、基質として炭
素源および窒素源ならびに無機塩を含有する。炭素源と
して、ブドウ糖および（または）グリセリンが使用され
る。窒素源としては、特殊な大豆粉、各種のアミノ酸お
よび（または）アンモニウム塩が考慮される。培養初期
の接種物質の生育に最も適した酸性度はＤＨ６，０〜ｐ
Ｈ６，７の範囲である。

発酵は３〜３０℃の温度で２４〜４８時間、実施される
。

この様に生育された接種物質は、主培養のための無菌流
動栄養培地の接種に役立つ。この栄養培地は炭素源およ
び窒素源ならびに無機塩から成る。

炭素源としては、トウモロコシ澱粉および（または）ブ
ドウ糖が使用される。窒素源としては、特殊な大豆粉、
各種のアミノ酸および（または）アンモニウム塩が考慮
される。発酵初期において抗生物質の生産に最適の酸性
度はｐＨ６，ｏ〜ｐＨ７，５の範囲である。

培養は２６〜３２℃、好ましくは公〜３０’Ｃの温度で
、１５０時間まで実施される。

ストレプトマイラニス・ノウルセイＺＩＭＥＴＪＡ　３
８９０ｂの液中培養は、公知のように振盪培養として、
すなわち攪拌通気式発酵器の中で、培養基の追加乃至は
ｐＨ値の調整なしで実施される。

公知のよう＜　（Ｇ−ＢｒａｄｌｅｒおよびＨ−Ｔｈｒ
ｕｍ著：「ノウルセオトリクンＡおよびＢ、ストレプト
マイラニス・ノウルセイ変種の２種の新規な抗菌性抗生
物質Ｊ　Ｚｓｃｈｒ、Ａｌｌｇｅｍ、Ｍｉｋｒｏｂｉｏ
ｌ、　３　、１０５〜１１２（１９６３））、初期発酵
培地における比較的低いノウルセオトリ７／生産は、ア
ミノアリールカルボ／酸、特に５〜１０ｍＭの０−アミ
ノ安息香酸を主培養の初期に公知の技術条件で添加する
ことにより、５〜１０倍に増大させることができる（Ｈ
。

ＢｏｃｋｅｒおよびＨ，Ｔｈｒｕｍ著「アミノ安息香酸
によるノウルセオトリ７）製造促進」。Ｍ、　Ｈｅｒｏ
ｌｄおよびＺ　＋　Ｇａｂｒｉｅｌ著「抗生物質−その
研究、製造および臨床使用」口／トン（１９６６）ρ、
　５８４−５８７に記載）。

種々の研究（Ｕ、　Ｇｒ’ａｆｅ　、　Ａ、　Ｓ　ｔｅ
ｕｄｅｌ　、　Ｈ，Ｂｏｃｋｅｒ＃　、ｌ：　ヒＨ，Ｔ
ｈｒｕｍ著［ストレプトマイツエスーノウルセイＪＡ　
３８９０ｂの培養におけるノウルセオトリ７）の生合成
に対する０−アミノ安息香酸（ＯＡＢＡ）の調節的影響
」の中に要約的に引用。

チトクローム水準とアミノ酸輸送に対する０ＡＢＡの効
果、Ｚｓｃｈｒ、　Ａｌ１ｇｍ、Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、
　３０　、１８５−１９４（１９８０）参照）から、０
−アミノ安息香酸および（または）他のアミノアリール
カルボ４酸はＡ型のチトクローム（チトクローム−オキ
７ダーゼ）の生成を特異的に抑止し、これにより栄養培
地から菌糸体への輸送、およびノウルセオトリ７／生成
体の細胞中のアミノ酸の酸化性脱アミノ化を間接的に抑
制することが知られている。これにより。

一方では、窒素分解産物への細胞過剰供給による二次物
質代謝の抑止が避けられる。他方において。

このようにして、ノウルセオトリ／／の前駆体として役
立つ抗生物質生成体の培地のアミノ酸が。

抗生物質生成体の成長期において大量に消費されること
が防出される。故に、このアミノ酸は、ノウルセオトリ
クン生成中の二次物質代謝により多く使用される。生体
の生成のために優先的に無機窒素源（アンモニウム−窒
素）が使用されるからである。

アミノアリールカルボン酸の使用によるノウルセオトリ
ノン発酵製造法は１周知のように発酵収率のかなりの増
大な可能とするのであるが、特に価格、殺菌および廃水
の問題について欠点を示し、これらの欠点が量産使用の
妨げとなる。

さらに、たいていの二次代謝物質の生合成が過剰なリン
酸塩によって否定的影響を受けることが知られている（
Ｊ、Ｆ、ＭａｒｔｉｎおよびＡ、　Ｌ、　Ｄｅｍａｔｉ
ｎ著「抗生物質の生合成の制御Ｊ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
　、　Ｒｅｖ。

４４．２３０〜２５１（１９８０）に要約的に引用）。

この故に、二次代謝物質の、例えば、抗生物質の、製造
のための工業的微生物発酵は、生成体の生育にとって不
十分なり／酸塩濃度で実施される。原則として、デンジ
／。大豆粉、トウモロコア汁、糖蜜、肉エキスなど植物
起原および動物起原の複合栄養培地成分が、二次代謝物
質を得るための大量生産発酵工程に際して装入される。

これらの複合栄養培地成分は、それぞれの起原と前処理
とによって、生理学的有効性の相異る総り／酸塩含有量
をもっている。発酵培地中において有効リン酸塩の一部
は可溶性リン酸塩として存在する。こりような状況が栄
養培地の標準化を基本的に困難にする。

しかし、可溶性乃至有効り／酸塩の初期濃度は所望の二
次代謝産物の発酵収率に対して決定的意義を有する。な
ぜかならば、一方において、生成微生物の生育のために
はす／ハ塩の特定量が必要であり、他方、過度に高いリ
ン酸塩初期濃度は二　□次代謝物質の生成を抑制するか
らである。

東独特許第１５５２３９号明細書は、培養培地中に含有
されたリン酸イオン＃度を培養工程の安定化の調整値と
して使用することに関する。しかしこの方法は、濃度の
予定値が加〜６０ｒｎｇ／ｌリンの範囲内に入る生体の
発酵生成のみにＶＡするものである。微生物のノ々ツチ
培養における二次代謝物質の生合成の調整にこの方法を
使用することは知られていない。

二次代謝物質の微生物的製造方法の改良に際して、リン
酸塩の相互に矛盾した調整的影響の妥協が成立つように
、相互に修正することによって栄養培地と生成微生物と
を互に順応させている。しかし、このような段階的効率
上昇法は時間を要し、コストがかかる。

また、栄養培地の組成による調整的影響のほか、特に実
時間制御のような発酵工程制御によっても発酵収率の改
良が達成される（　Ｄ、　Ａ、　Ｓ　ｕｋａｔｓｃｈお
よびＧ、　Ｎｅｓｅｍａｎｎ著「工業的発酵における自
動的Ａｒラメータ計測Ｊ　Ｃｈｅｍｉｅ−Ｔｅｃｈｎｉ
ｋ６−２６１　（１９７７））。

効果的な発酵の実施のために必要とされる実時間制御を
実施する際に、多くの場合、時間を必要とする化学分析
によってあとから確定される培地濃度の代りに、ｐＨ値
、ｐＯ２値、配置率、排気成分。

生成熱などの発酵技術における連続測定可能の全体的工
程パラメータを主たる規整工程パラメータとして採用し
なければならないという困難がある。

最後に、ノウルセオトリ／／の分離に関しては。

菌糸体から放出された作用物質が培養ｐ液から適当なカ
チオン交換体に吸着され、つづいて希釈酸によって溶離
され、溶離液の中和、濃縮、メタノール／アセト／系の
中における粗生成物の再沈殿および乾燥ののちに、純粋
物質として得られることが知うしてイル（Ｇ、　Ｂｒａ
ｄｌｅｒおよびＨ−Ｔｈｒｕｍ著［ノウルセオトリシン
ＡおよびＢ、ストレプトマイラニス・ノウルセイ変種の
二種の新規抗菌性抗生物質Ｊ　Ｚｓｃｈｒ−ＡＩＩｇｍ
、Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、　３　、１０５〜１１５（１９
６３））。

〔発明の目的〕

本件発明は、作用物質ノウルセオトリ７ノを時間的量的
により高い収率で提供することを目的とする。

〔発明の詳細な説明〕

本発明の基礎にある課題は、従来公知の方法の欠点を避
けて、塩および吸着質の形のノウルセオトリクンの製造
を可能とする技術的に有利な方法を提供するにある。

呼吸連鎖の阻害物質１例えばナトリウムアノ化物乃至他
のアルカリアジ化物、ピロカテコールおよびアミタール
（＝エチルイソアミルノ々ルビツール酸）、および（ま
たは）生細胞中のアミノ酸輸送阻害物質１例えばβ−ア
ラ二／または水溶性亜鉛塩の添加量を接種時に主培養菌
群に添加すれば。

発酵工程の化学的および生理学的特性を変えるような影
響もなく、ノウルセオトリ７ンの生合成に対して必要な
作用を加えることが見い出された。

より高いデンジ／加水分解活性の菌種が開用されまた高
分子炭素源、特にトウモロコシ澱粉が装入される場合、
呼吸連鎖および（または）アミノ酸輸送の抑制物質の添
加は問題にならない。

驚くべきことに、ノウルセオトリ７／生成培養の代謝活
性（呼吸、酸性化率、ブドウ糖吸収およびアンモニウム
吸収、抗生物質生成など）は主として発酵中のリン酸塩
の特異有効性によって決定され、炭素源および窒素源の
供給のみによって決定されるものではないことが見い出
された。その場合、一般的に無菌栄養培地中で可溶性の
また生理学的に有効なリン酸塩の初期濃度が加熱殺菌を
実施することにより、殺菌関数（Ｓ　ｔｅｒｉｌｉｓａ
ｔｌｏｎｓ−ｈ欣ｔｉｏｎａｌｓ）と、硫酸イオンの含
有量と、す／酸イオン乃至硫酸イオンと共に難溶性沈殿
物を生じる無機塩乃至金属イオ／の含有量とに基いて低
下させられることは特別の意味を持っている。この場合
において、十分量の硫酸イオンの存在下のこの初期濃度
の低下は、殺菌中に硫酸カルシウムが沈殿して酸性硫酸
イオンが培地から除去されることにより、弱酸性栄養培
地の酸性度がアルカＩＪ　ｐＨ値に移行することが原因
であることが示された。

これに対応して、可溶性乃至生理学的に有効なリン酸塩
の初期濃度は、殺菌前のアルカリｐＨ値の調整によって
も低下させられる。ｐＨ値の上昇は、リン酸塩が栄養培
地中に存在する特定の金属イオンとの難溶性沈殿物とし
て沈殿する条件を与える。

υノ酸塩含有沈殿物の沈殿は、この種の金属イオン、例
えば亜鉛（鎖および（または）鉄０■）、アルミニウム
（ｎ夏）、マグネ７ウム（ｎＬ　カルシウム（川、マｙ
　カン（川などの積極的付加によって促進されル。

高圧水蒸気のｉα接作用または発酵のｐＨ緩衝のために
、炭酸カル７ウムを装入しかつ大てぃの技術的発酵で使
用される殺菌法が、’）７ｅ塩の沈殿にとって特に有効
である。

また一般に培地のリン酸塩含有量は、リン酸塩含有複合
装入物質部分を低減させることによっても低下させるこ
とができる。これにより、工程のコストを低減すること
ができる。

前述の前提のもとに、司溶性乃至生物学的有効リン酸塩
の初橋度は、ノウルセオトリ７ノ生成微生物にとって特
異的なリン酸塩上限許容値をそれぞれの場合に下回るよ
うに低下させることができる。そこで、このような低リ
ン酸塩濃度は、殺菌後の特定のす／酸塩導入により、リ
ン酸塩に関して十分に標準化された培地を得ることを可
能にする。さらに、す／酸塩の添加管理のほか、高い生
産収率が得られるように微生物のリン酸塩代謝作用を制
御することができる。リン酸塩の導入は、溶液または固
体または懸濁液の形で実施することができる。またリン
酸塩は、遊離リン酸イオ／の形で、または化学的にある
Ｖｌは物理的に結合されたリン酸塩の形で存在すること
ができる。す／酸塩乃至り／酸塩含有物質の添加は、そ
れぞれの発酵管理によって、殺菌後または発酵中に、−
回添加および（または）多回添加および（または）連続
添加によって実施される。連続添加は発酵中に相異る割
合で実施することができる。

このような添加は、培養中に複合リン酸塩源、例えば大
豆粉、落花生粉、ジャガイモ澱粉などかう加水分解また
は酵素分解によって遊離されるリン酸、乃至は無機沈殿
物から可逆遊離されるリン酸塩に対する追加として実施
される。前記の有機基質の加水分解は殺菌によるアルカ
リ反応で促進される。生理学的領域内部における水素イ
オノ濃度の上昇により、無機沈殿物からのり／酸塩の遊
離が改良され、代謝活性が賦活される。

周辺条件として、生成物の生成にとって不利な基質制限
が生じないようにし、または、す／酸塩添加とその結果
としての成長と関連した環境条件によって物質代謝活性
の増大が生じるようにしなければならない。

７．４〜７．８のｐＨ値範囲でのアルカリ性殺菌の実施
、殺菌の終了および７．２〜８．８のｐＨ値への到達の
のち１発酵工程の制御に際して、Ｊ）Ｈ５，０〜６．５
の酸性度範囲３０〜８０％、好ましくは４０〜６０％の
酸素分圧（ｐｏ２）でブドウ糖およびアンモニウム塩乃
至水酸化アンモニウムの配量により、ブドウ糖対無機性
窒素の比率を５翫１５対０．０１５〜Ｏ−２［Ｊ／ｚ（
ブドウ糖）：９／ｌｃ無機性窒素）〕に調整し保持する
ことによって、ノウルセオトリン／生成の生産力が、よ
り長時間に亘って、より影響を受けることが見い出さ幻
、た。

驚くべきことに、好適な１度の水酸化アンモつウム溶液
を浣加する際にｐＨ下限を確保するため。

培養溶液ＯｐＨ値を生理学的通常有効ｐＨ値の範囲内に
調整するように適当な予定値範囲を選定すれば。

水酸化アンモニウム配置率の時間経過が生理学的作用リ
ン酸塩の消費率の時間経過に対応することが見い出され
た。この対応の程度は、ｐＨ値の規定下限の定め方に依
存している。発酵第１段階におけるｐＨ経過と、これに
対応する水酸化アンモニウム配量率の調整は、出発栄養
培地の緩衝度によって決定される。

このようにして、直接および（または）間接リン酸塩配
量の制御のための、従って発酵培養の代謝活性の制御の
ための、すぐねた感度の連続信号が得られる。

外部夕／りからのυノ酸塩含有物質の添加の形の直接的
す／酸塩配量と、複合基質の酵素分解または加水分解に
よるリン酸塩化合物の調製のような間接的υノ酸塩配量
とに関して、水酸化アンモニウム配量の値がその顕著な
増大乃至は低下によって直接的す／酸塩配量と間接的リ
ン酸塩配量との間の変換を示すことが発見された。変化
の大きさはり／酸塩後流＠　（Ｐｂｏｓｐｈａｔｎａｃ
ｈｆｌｕｓｓ　）によって決定される。

さらに、実際の水酸化アンモニウム配量率が炭素源なら
びに追加的窒素源および奏効作用を有する物質の配量り
制御値として役立ち、また当該発酵菌の特異散票移行率
を考慮して１発酵が望ましい生成物生成率をもって進行
するように直接り／酸塩配量を変更しなげればならない
ことが発見された。このようにして、特定の通気量にお
いて反応器技術的に与えられる成葉導入条件のもとで、
高い生成物量終値の実現と、所望の発酵時間内の基質の
有効な利用と、処理技術的に妥当な程度の生体濃度の制
限とが可能となる。

さらに１代謝活性の時間経過が反応熱および（または）
呼吸率によって表示されることが発見された。この理由
から、実際の反応熱と呼吸率は同じくリン酸塩乃至は他
の物質の配量の制御値である。

製造工程のためには、下記の基準を特徴とするストレゾ
トマイツエス属、特にストレプトマイラニス・ノウルセ
イ種のノウルセオトリ７ノ生産ストレプトマイツエテ／
菌株が適当である。

（ａ）　主培養の栄養培地中において、可冶性リン酸塩
の高濃度に対するノウルセオトリ７ン生成感度 （ｂ）　複合リン酸塩含有炭素源および窒素源を分解す
る能力 （Ｃ１高分子炭素源の分解のためのデンプン加水分解活
性 前記の工程の具体的な実施法は、それぞれの装入された
ストレプトマイツエテン菌株が前記の三基率に関して適
当であるかいなかに従って修正される。

前記の工程の範囲内で生産菌のり／酸塩感度が高い極端
な場合、１０り／　ｔ　（リン酸塩−リン酸）以下の範
囲にある主培養の栄養培地の溶解リン酸塩初濃度を、ア
ルカリ培地中におり−る加熱殺菌および（または）す／
酸塩沈殿物質の添加などの先に述べた手段によって低下
させた場合にのみ、高いノウルセオトリクン生成が可能
となる。

栄養培地中に十分量存在することが前提とされる複合リ
ン酸塩含有物質の高分解能力のノウルセオトリクン生成
ストレゾトマイツェテン菌株の装入に際しては１発酵中
のリン酸塩の配量を０値まで減少することができる。

高い剛り／１１！塩件のノウルセオトリ７／生成ストレ
ゾトマイツェテン菌株の装入に際しては、主培養の栄養
培地に対するリン酸塩沈殿物質の添加は０値まで減少さ
せることができる。ストレプトマイラニス・ノウルセイ
種のこのようなストレプトマイツェテン菌株は同時に高
いデ／ゾ／分解活性を有することが発見された。

コｈ、　ラの実施の態様は、この製造工程のために生理
学的に相異なる種々のストレプトマイツェテ／菌株が装
入されることを示している。故に本発明の特徴を備えた
特定のストレゾトマイツェテン菌株が存在するわけでは
ない。

培養溶液から作用物質を得ることに関連して、驚くべき
ことに、ノウルセオトリクンが菌糸体含有吸着質の形で
分離され５ることが発見された。

この場合、発酵の停止ののち、培養溶液は希硫酸の添加
によって弱酸反応まで、特にｐＨ６，０〜６．２まで調
整される。つづいて、生理学的に問題のない吸着剤１例
えばナトリウム化べ／トナイト（ｎａｔｒｉｆｉｓｉｅ
ｒｔｅｒ　Ｂｅｎｔｏｎｉｔ）の弱酸性水性懸濁液が前
記の酸処理された培養溶液に対してよく攪拌混入される
。この際に、反応溶液の酸性度がｐＨ５，５〜６．５の
範囲内に保持されるように注意すべきである。沈殿した
ノウルセオトリン／含有固体分をｐ過または遠心分離に
よって分離し、熱空気流の中で、最高７０’の生成物温
度で乾燥させる。このようにして製造された菌糸体含有
吸着質は、ノウルセオトリ７ノ塩基として計算して１〜
１０％、王として４〜７％の作用物質を含有している。

さらに、驚くべきことに、特定のノウルセオトリ７ノ塩
は９０〜９５％水性メタノールの中に難溶であって、下
記に説明する工程条件のもとに分離精製されることがで
きる。この際に、ノウルセオトリクン吸着質は、ノウル
セオトリ７ノ塩基と共にメタノール不溶塩を形成する希
釈多塩基←舟釈酸を含む弱酸性カチオン交換剤なもって
溶離される。

つづいて、溶離液の中に副生物として存在する多価無機
カチオ／が、離水溶性塩として沈殿する。

そののち、Ｈ型のスルホン酸型高網目状カチオ／又換削
をもって溶離液を処理することによって一価の無機カチ
オンが分離され、遊離した酸がＯＨ形のアニオン交換剤
によって中和される。溶離液の真空中濃縮と、活性炭吸
着による不純物の除去ののちに、最後にメタノール沈殿
または温和な乾燥によってノウルセオトリシンの純粋塩
が得られる。

ノウルセオ）　ＩＪンノ硫酸塩は、無定形の、白色の、
易水溶性の、メタノールおよびたいていの有機溶媒中に
離溶の粉末である。元素組成（Ｃ＝３２．４６．３２−
３１　；Ｉ（＝６．６５．６．２２　；Ｎ＝１５−７３
゜１６．００　；　５＝７−７４．７．６０　）は、ス
トレプトトリ７／Ｄ−硫酸塩（Ｃ３□ｌＮ５８Ｎ□２０
□。−２ｍ５Ｈ２ＳＯ４−Ｈ２０）およびストレプトト
リＶｙＦ−硫酸塩（Ｃ１，Ｈ３４Ｎ８０８＠　１−３Ｈ
２Ｓｏ４−Ｈ２０）のｔｒｉ混合物の化学組成に非常に
よく対応している。

ノウルセオトリ／ン７ユウ酸塩は無定形の白色。

易水溶性、アルコールおよび他の有機溶媒中に難溶性の
粉末である。その元素組成（Ｃ４０，３１゜４０．４４
　；Ｈ６，４２，６，２１；Ｎ１６．２１．１６．４９
　）およびシュウ酸含有量（２０，１２，２０，２８）
は、ストレプトトリ７ンＤ−７ユウ酸塩（Ｃ３□Ｈ５８
Ｎ１□０□０・２．５Ｃ２Ｈ２０４・ｌ−３■ｌ２ｏ）
およびストレプトトリジ／Ｆ−７ユウ酸塩（Ｃ１９Ｈ３
４Ｎ８０８・１．５Ｃ２Ｈ２０，−１〜３　Ｈ２０）の
ｌ：１混合物の組成に大体に対応している。

ノウルセオトリ７／−リ／ｅ塩は無定形の、白色の、易
水溶性の、アルコールおよび他の有機溶媒中に難溶性の
物質である。元素組成（Ｃ３１，５９，３１，８５；　
Ｈ６，２５、Ｌ６３　；　Ｎ　１４．９．５．１５．１
８　；ＰｌＯ，０８，１０，３６）は、ストレプトトリ
７７１）　−リン酸塩（Ｃ３１Ｈ５８Ｎ１２０１Ｇ　’
　４Ｈ３Ｐ０４・０−１）１２０）およびストレプトト
リ７ンＦ−リン酸塩（Ｃ１９Ｈ３４Ｎ８０８・２Ｈ３Ｐ
Ｏ，・０〜ｌ　Ｈ２０）の１：ｌ混合物の組成に対応し
ている。

こりようにして得られた塩の相対的抗菌活性は。

被検生体として枯草菌ＡＴＣｃ６６３３を用いて、小孔
板拡散テストによって微生物学的に横置することができ
る。標準として精製ノウルセオトリシ／硫酸塙が使用さ
れ、この硫酸塩は、その組成において、ストレプトトリ
／７Ｄ−硫酸塩（ｃ３□Ｈ５８Ｎ□２０□ｏ−２，５Ｈ
２Ｓｏ４＠Ｈ２０）とストレゾトトリシ７Ｆ−硫酸塩（
Ｃ’□９Ｈ３，Ｎ８０８−１．５Ｈ２０）　０）　１　
：　１混合物に対応し、また７０２μｇ（塩基）７ｍ９
を含有している。微生物学的評価条件は、１祷あたり１
０μ９のノウルセオトリク／塩基を含有する試験溶液０
．０５ｍｂが９ＩｌｊＩＯ打抜ぎ穴径において１９土１
１１１径の阻害区域を生じるように選定される。

〔実施例〕

例１ ストレプトマイラニス・ノウルセイＺＩＭＥＴ４３７１
６　（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｎｏｕｒｓｅｉ　
ＺＩＭＥＴ４３７１６　）菌株の親液性土壌乾燥胞子ス
トックを適当な寒天培地１例えばエマーノン（ｇｍｅｒ
ｓｏｎ）寒天の上に播く。

（９）℃での約７日間の培養ののち約２ｃＷＬ２　の大
きさの菌糸体群の小片を切出し、これをそれぞれ第１前
培養の培養プライマーとして接種する。

この前培養の培地は１リツトルあたり次の組成を有する
。４０．０　＃のブドウ糖、１５．０．９の大豆抽出層
、０．３ｆ９のＫＨ２ＰＯ４，５−０＃のＮａＣ１＆３
−ＯＪｉ’のＣａＣＯ３，１０００Ｕまでの残部の水道
水。ｐＨ６−５〜数の中に、前記の培地をそれぞれ５Ｑ
　ｍＡづつ注ぎ入れる。殺菌は、オートクレーブ中、　
１２１℃の温度で３５分間加熱して行われる。

接種されたプライマーを４８時間、振盪培養として２９
℃で培養させる。とのようにして得られた前培養ａ　Ｔ
ｎｔづつをもって主培養のゾライマーとして接種する。

主培養のためＶＣ，ｌｔの水道水あたり次の基礎培地を
加える。

培地Ｂｏ−３０２９，０９ブドウ糖、　１３．０．９大
豆抽出屑−５−ＯＪ？　ＮａＣ１、３−０９ＣａＣＯ３
゜１０１００Ｏまでの残部　水道水。ｐＨ’６．５（殺
菌前）。

培地Ｂｏ−３１３０−０，９）ウモロコ７澱粉、３．ｏ
ｉ　ブドウ糖、　７．０９　大豆抽出屑、　５．０．９
Ｎｌ（４Ｎｏ　３．２．０．９　ＭｇＳＯ４，５−ＯＪ
？Ｎａ１ｌ、　３．０５１　ＣａＣｏ３．１０１００Ｏ
までの残部　水道水。ｐＨ６−０（殺菌前）。

主培養の栄養培地をそれぞれ８０ｍ６づつ、５００Ｕ容
縫の綿栓で封じられた細首フラスコの中に注ぎ入Ｊｔ、
オートクレーブ中で３０分間、１２１℃でれ菌する。

試験計画に従って１表１および２に示した対応物質（最
高３．Ｑｍｅ添加物／８０１培地）の無菌濾過された水
性の中性溶液との接種時に、前記のように処理された主
培養のプライマーが使用される。

振動板（１８０ｒ−ｐ、ｍ、）上で２６℃、７２〜１２
０時間で主培養の生育を行い、被検菌として枯草菌ＡＴ
’ＣＣ６６３３を使用して小孔板拡散テストにより横歪
された最萬ノウルセオトリ／ン濃度を表１および２に示
す。他の処理は、例８〜１３におＶｌて行われる。

ノウルセオトリ／／生産菌株Ｚ　ＩＭＥＴ４３７１６の
セレクタントＮＧ　１３−１４　（５ｅｌｅｋｔａｎｔ
ｅ　ＮＧ　１３−１４　）の親液性土壌乾燥胞子ストッ
クを、適当な寒天培地。

例えばエマ−ソノ寒天上に接種する。３０℃で約７日の
培養ののち、約２ｃｒｎ２　の大きさの菌糸体群の小片
を切出し、これをそれぞれ萌培養プライマーとして接種
する。前培養培地は水道水ｌｔあたり下記の添加物質を
含有する。４０９のブドウ糖、１５ｇの大豆抽出屑−’
　Ｏ−３９ＫＨ２ＰＯ４、５１１（１）ＮａＣ１゜３．
９のＣａＣＯ３゜殺菌前の酸性度をＰＨ６，５の値に調
整する。この培地な、５００ｍＡ容量の綿栓で封じられ
た細首フラスコの中に、５０祷づつ注ぎ入わる。

殺菌は、オートクレーブ中、１２１’Ｃで３５分加熱し
て行われる。

接種された前培養プライマーを４８時間、２９℃で振盪
培養として生育する。このようにして得られた前培養１
５０鮎をもって、主培養の２５００　ｍｂのプライマー
を実験培養器の中で接種する。

主培養では、培地Ｂｏ−３４を使用する。この培地は、
１ｔの水道水の中に下記の添加物質を含有している。３
２Ｊ？のトウモロコシ澱粉、２９９のブドウ糖、１１ｇ
の大豆抽出屑、１１１の（ＮＨ４）２Ｓｏ４．２ＩのＭ
ｇＳＯ４”　７Ｈ２０，ｌ　ｌ／ｆ）ＮａＣ１、６１１
ｃｖＣａＣＯ３゜０．５９のＺｎＳ０４−７Ｈ２０゜２
５００　ｍｂの栄養培地の上に、ケイ素系消泡削として
の１喘のア／り７０／を加える。殺菌前の酸性度は、ｐ
Ｈ６，０の値である。

２５００　ｗｔｔが充填された発酵培養器をオートクレ
ーブ中で１２１℃の温度で殺菌して再び３０’Ｃに冷却
したのち、１０％無菌硫酸を無菌的に添加することにま
つ毛開始に酸性度をｐＨ６，８に調整する。接種された
発酵プライマーを、１６８時間、３０℃の温度で、毎分
２５００嚇空気の通気量をもって、毎分８００回転（ｒ
、ｐ、ｍ、）の攪拌速度で攪拌しながら生育する。

主培養の接種後１．５時間から、蒸留水ｌｔあたり４９
０ＫＨ２ＰＯ４溶液を、５時間、１．８祷／時間の速度
で、ぜん動７ｉｅンゾをもって連続的に配量する。

次にこの添加を２１時間、３．５１Ｍ／時の配量率でつ
づける。発酵中に、無菌条件で、培養溶液の試料を定期
的に採り、これらの試料につＶ）で、小孔版拡散テスト
により被検菌としての枯草菌ＡＴＣＣ６６３３を用いて
のノウルセオトリ７ｙ塩基、ブドウ糖、アンモニウム性
窒素および固体の含量を測定する。この工程進行中、パ
ラメータｐｏ２．ｐＨおよび排気中のＣＯ２含量を、記
録測定に訳って追う。

培養溶液の酸性度がｐＨ値５．８以下に低下することを
、無菌５％苛性ソーダ溶液の添加によって防止する。

ブドウ糖濃度が５，９／ｌに下降しまたはアンモニウム
性窒素が帆５　＆／ｌに下降した時、ｐＨ値とｐＯ２４
値との上昇ならびに排気中のＣＯ□含量の低下が認めら
れ、無菌濃縮溶液として２５ｇのブドウ糖乃至は１０ｇ
（ＮＨ４）２Ｓ０４が不連続的に添加される。

その後の発酵は、Ｋ）（２Ｐ０４、ブドウ糖および（Ｎ
Ｈ４）２Ｓ０４を配量しないことを除いて、同じ条件で
行われる。発酵を停止したとき、培養溶液は。

なお明白に検出できる量の遊離ブドウ糖と遊離アンモニ
ウムを示す。

相異る両方の発酵条件での培養ｐ液中において測定され
たノウルセオトリ７ノ塩基の濃度を表３に示す。

例３ 例２に示したノウルセオトリノン生産ストレプトマイツ
エテ／菌株の、親液性のブドウ糖−ゼラチン乾燥菌糸体
ストック（ストック内容物の総重量は約３００り）を、
３ｍＡの０．９％ＮａＣｌ溶液と懸濁させる。この懸濁
液の０．５１が、第１段階の前培養４００ｍＡｌ７）接
種剤として用いられる。

前培養培地は１例２に述べたものと同等の組成および酸
性度をもつ。この培地’Ｙ、２５００祷容量の綿栓で封
じられた細首フラスコの中に、　４００ｍｔ景づつ注ぎ
入れる。殺菌は、オートクレーブ中において、１２１℃
の部分間の加熱で実施される。

室温まで冷却されかつ接種されたプライマーを、４８時
間、２９℃で振盪培養（ｌｓｏ　ｒ−ｐ、ｍ、）として
生育する。このようにして得られた第１前培養の培養溶
液１２００ｍＡをもって前培養の第２段階とし、前培養
第１段階と同じ組成の１５０ｔの加熱殺菌された培地（
１２１’Ｃでω分間）で充填されかつ無菌通気装置と攪
拌装置とを備えた特殊鋼発酵器（２５０を総容量）で、
接種する。この培養は、２７〜２９　’ｃ、２４Ｏｒ、
ｐ、ｍの攪拌速度、培養溶液ｌｔあたり毎分空気１ｚの
通気速度で、実施される。

主培養では、無菌通気装置と中心攪拌装置とを備えた特
殊鋼発酵器（’Ｈｏｔ総容量→が使用され、この発酵器
はそれぞれ５００　ｔの栄養培地のＢｏ−３４（受容体
は例２参照）で充填される。消泡剤として０．５９／ｌ
のアンタフａ　ン（Ａｎｔａｐｈｒｏｎ）を添加する。

殺菌前に酸性度を６．７〜７−００ｐ）ｌ範囲に調整す
る。栄養培地（ブドウ糖成分を含まず）の殺菌は、その
場で、約７０℃のジャケット蒸気による予備加熱と、そ
れに続＜１２１℃の直接蒸気による１５分間の加熱とに
よって実施される。約（９）℃に冷却したのち、１２１
℃の３０分の加熱によって５０％水溶液の形で分離され
た無菌ブドウ糖が、無菌条件で添加される。接種前に、
無菌ｌＯ％ｆｔＬ酸をもって開始酸性度が６．９〜７．
１のｐＨ値範囲に調整される。

第２の前培養段階からの５％接種剤それぞれで接種され
た主培養の発酵プライマーは、１２０時間。

路〜Ｉ℃の温度、毎分５００を空気の通気速度（圧力０
．１４〜０．１６　ＭＰａ　）で、撹拌下（３２０ｒ、
ｐ−ｍ、　）培養される。

接種後２時間から１両方の発酵プライマーの一方に対し
て、８７１１のＫＨ２ＰＯ４水溶液なぜん動ポ／ゾをも
って一定速度で配量する。酸性度がｐＨ６，３以下に低
下したとき、無菌２５％水酸化アンモニウム水溶液でこ
のｐＨ値を回復させる。

発酵中無菌条件で、培養ｍ液の試料を定期的に採り、こ
わらの試料について、小孔板拡散テストにより被検菌と
して枯草菌ＡＴＣＣ６６３３を用いてノウルセオトリノ
ン塩基の濃度、ブドウ糖濃度。

およびアンモニウム性窒素濃度、および固体分を測定す
る。工程進行中のパラメータｐ、Ｈおよび排気中のＣＯ
２含量は、記録測定によってモニターされる。

ブドウ糖濃度が５Ｉｉ／を以下に落ち、あるいはアンモ
ニウム性窒−素が０．５１１７ｔｌＪ下に落ちたとき。

測定ｐＨ値のと昇および排気中のＣＯ□含量の低下によ
って確昭され、５０００９のブドウ糖乃至は１８００．
９の硫酸アンモニウムを無菌濃縮水溶液として不連続的
に添加する。

他方の発酵プライマーには、リン酸塩、ブドウ１１乃至
は硫酸アンモニウムが配量されない。ｐＨの調整は行わ
れない。連続的に測定された酸性度値はｐＨ６，４とｐ
Ｈ７，２の範囲内を変動する。発酵を止めたとき、この
培發溶液は、なお５９／を以上のブドウ糖と０−５　＆
／を以上のアンモニウム性窒素を含有している。

両方の相異なる発酵における培養Ｐ液について測定され
たノウルセオトリ７ノ塩基濃度は１表４に示されている
。

例４ ストレゾトマイツエス・ノウルセイの有効菌株の生理食
塩水中の菌糸体親液性ストックの懸濁液が、第１液中培
養（Ｓｕｂｍｅｒｓｐａｓｓａｇｅ）の接押削として使
用される。

栄養培地は水道水１ｔの中に下記のものを含む。

１５ｇのブドウ糖、１５ｇの大豆抽出層、０．３５’の
ＫＨ２ＰＯ４，５，０９ＯＮａＣ１，１，０ｇのＣａＣ
Ｏ３゜ＤＨ６，５〜６．９　（５００祷振動フラスコ中
に５Ｑ　ｒｎｂづつ注入）。

培地の殺菌は１２０℃であ分間性われる。回転式振動装
置の上で２８℃で４８時間培養したのち、接種剤１部に
対し栄養培地２５部の割合の第２液中培養Ｃ２Ｃ２００
Ｏ振動フラスコ中に２５０ｍＡ注入）をＵ時間、回転振
動装置上で行う。

８００ｔ１７Ｊ接種発酵培地の接種のため６００ｍＡの
第２液中培養を使用する。

栄養培地はリットルあたり次のものを含有する。

１５９のブドウ糖、１５９０大豆抽出屑、０．３．９の
Ｉ’Ｇ（２ＰＯ４，５，０９のＮａＣｌ　、１．０１ｃ
ｒ）ＣａＣＯ３，５９のアは１２０℃で（イ）分間実施
される。２８℃の約凹時間の培養ののち、約６０ｍ９／
ｌの可溶性リン酸塩が消費さ幻、その際１２〜１５．９
　／　ｔの生体が生成される。

主培養の約１８ｍ３　の生成物生産培地の接種のために
は、８００ｔの接種材料で十分である。

生産発酵器の栄養培地はリットルあたり次のものを含む
。３２．０９のジャガイモ澱粉、１５−ＯＪ？ノ大豆抽
出屑、１．０１９ＯＮａＣｌ　、６−０９　ノＣａＣ０
ａ　。

０．５９のＺｎＳＯ４−７Ｈ２０，２，０９のＭｇＳＯ
４−７Ｈ２０，３，０９のヒマワリ油、０．３９のアノ
タフ口／。

２９．０９のブドウ糖、６．０．９の（ＮＨ４）　２８
０４゜ブドウ糖と硫酸アンモニウム成分は、別々の殺菌
（１２０°Ｃ，３０分）ののち、栄養培地に添加される
。

培地の殺菌は約１１５℃で０分間実施され、その際に殺
菌開始前にｐＨ値は７．５〜７．８に調整さ′）１５、
滅菌終了後に７．２〜８．２のｐＨ値に達する。

でき上った培地は７．０〜７．４の範囲のｐＨ値に達す
る。発酵は、２８℃の温度で、０−０２ＭＰａにお７ｈ
て０．３ＶＶＭ（毎分、培養溶液ｌ容積に対して空気ｌ
容積）の比率と６０％の酸素分圧とをもって実施される
。

ブドウ糖について１５９／ｌ、アンモニウム性窒素につ
いて０．２９　／　Ｌの限界値を下回ったとき。

培養溶液が３００ｍ９／を以上のアンモニウム性窒素値
、５．２０ｐＨ値となるまで、これらの成分を５０％無
菌溶液として添加する。

ｐＨ値５．５へめ一定化に際して、アンモニア水の配量
により、アンモニア性窒素がさらに添加される。１３０
時間の発酵時間ののち、８０００〜１１０００μｓノウ
ルセオトリ７ｙ　／　ｍＡ　（培養溶液）の生理学的活
性が得られる。

例５ 接種材料の培養のために、無菌栄養培地を４００ｍ６づ
づ含有する２、５を細汀フラスコに、ストレプトマイツ
エスーノウルセイＺＭＥＴ　４３７１６のセレクタ／ト
の菌糸体ストックの懸濁液０．５祷を接種する。この培
地には、リットルあたり４０．９のブドウ糖と、■５１
の大豆抽出層と、０．３Ｊ？のＫＨ２ＰＯ２と、５９の
ＮａＣ１と、３９のＣａＣＯ３と、残部の水道水とな含
有する。培養は、四℃、４８時間、回転振動板上で実施
される。

このよ５ｖｃ、シて得られた前培養第１段階の８００ｍ
６培養酵液それぞれなもって、前培養第２段階として、
第１段階と同等の組成の１８０１の水蒸気殺菌培地（１
２０℃で４５分間）を充填した特殊鋼発酵器（総容量２
４０　ｔ　）に接種する。培養は、４０時間、２８〜２
９℃の温度、　２４Ｏｒ、ｐ、ｍの攪拌器回転速度で、
１、ＯＶＶＭの通気速度で実施される。

主培養では１％殊鋼発酵器（総容量４２ｏｏｔ）が使用
され、この発酵器に下記の基本組成の２５００ｔの栄養
溶液を充填する。６２．５９のトウモロコア澱粉、２．
５Ｊのブドウ糖、１６ＩＩの大豆抽出層、１１９のＮＨ
４５０４，ｌのＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，１ｇのＮａＣ１
，６９のＣａＣ０ａ　−０−５１のポリプロビレ／グリ
コール、残部の水道水。この基本組成に対して。

１度目は水道水１ｔあたり０．５９のＺｎＳＯ４−７Ｈ
２０，２度目には０．１．９のＦｅ　２　（５Ｏ４）３
　・７　Ｈ２Ｏを加える。

栄養溶液の酸性度は殺菌前に６．２のｐＨ値に調整され
る。殺菌（ブドウ糖分を含まず）は、直接水蒸気をもっ
て１２０℃で１５分間加熱することによって実施される
。２９℃に冷却したのち、５０％水溶液の形に分離され
た無菌ブドウ糖が無菌条件で添加される。接種前に、栄
養溶液の開始酸性度が、硫酸によってｐＨ値６．８±０
．１に調整される。

前培養第２段階からの４％接種削で、発酵プライマーが
接種される。培養は、１４０時間、２９℃、０．０３Ｍ
Ｐａの過圧におけｂ　Ｏ，５ＶＶＭ　（０〜２０時間）
〜１．０　ＶＶＭ　（２０〜１４０時間）の通気速度で
１８Ｏｒ。

ｐ、ｍで攪拌しながら実施される。培養溶液の酸性度は
、６．０±０．１のｐＨ値に低下した際、２５％水酸化
アンモニウム溶液で一定に調整される。

生理学的試験において、培養溶液中に下記のノウルセオ
トリシン濃度が測定される。

発酵時間　ノウルセオトリー／−４度ＣμＩＩＡｒｔｔ
）９２４．９５．１ １１６　７．１　６＝８ １４０　８−３　８−０ 例６ 接種材料の培養のために、第１段階において。

そわぞれ４００ｍＡの無菌栄養培地（１５，９の落花生
抽出Ｈ，１，ｏ９のトウモロコシ汁（１００％乾燥物質
）。

４０１１　（７Ｊ　マル）　ｘ　、　５１１　’）　（
ＮＨ４）２８０４　、６　Ｊｉ’のＣａＣＯ３，残部の
水道水）を含有する２、５ｔの細首フラスコに、第１段
階においてストレプトマイラニス・ノウルセイＺＩＭＥ
Ｔ４３７１６のセレクタントの菌糸体ストック懸濁液０
．５ｍｔづつで接種する。培養は、２９℃、４８時間２
回転振動板の上で実施される。

このようにして得らｈた前培譬第１段階の培養溶液８０
０ｒｎｔづつなもって、前培養第２段階として。

第１段階と同様の組成の水蒸気殺菌培地（１２０’Ｃで
加分間）ＩＳＯＺを充填した特殊鋼発酵器（総容量２４
０１　’）　Ｋ接種する。培養＋’！、’、　４０時間
、２８Ｓ２９℃、２５０　ｒ、ｐ、ｍの攪拌回転速度で
、０．０３ＭＰａの加圧下において１．ＯＶＶＭ（７）
通気速度をもって実施される。

主培養のために特殊鋼発酵器（認容＊　７２０　ｔ　）
が使用される。この発酵器は下記組成の５００１の栄養
溶液をもって充填される。リットルあたり。

６０ｇのトウモロコ／澱粉、２５９の落花生抽出層。

１０ｇのトウモロコシ汁（１００％乾燥物質）、１０９
の（ＮＨ４）２Ｓｏ４．５　ｇのりューゲ／クライゼ（
Ｒｉ；−ｇｅｎｋｒｅｉｓｅ）　、３　ｇのヒマワリ油
、残部の水道水。

栄養培地のｐＨ値は、殺菌前にＰＨ６，８〜７．０に調
整される。殺菌は加分間１２０℃で実施される。

発酵ゾライマーが、前培養第２段階から得られた５％接
種材料で接種される。発酵の進行中、２度さらに、培養
あたり３０ｇのトウモロコア澱粉を加％懸濁液として添
加する（公知のようにデ／ゾ／加水分解活性を有する酵
素１例えば醸造用酵素をもって処理することにより水性
懸濁液を液化し、次に殺菌したのちである）。培養溶液
の酸性度は。

５％水酸化アンモニウム溶液をもって６．２上帆１Ｏｐ
Ｈ値に一定に維持される。

３２０　ｒ、ｐ−ｍの攪拌速度と０．０３ＭＰａの加圧
下における０、７５　ＶＶＭの通気速度をもって２９℃
で１４４時間発酵したのち、５８０　ｔの培養溶液が得
られ、この溶液においてミリリットルあたり６．８５μ
ｇノウルセオトリ７ノの生成物濃度が測定された。

例７ 主培養のために無菌通風装置と中心攪拌装置とを備えた
特殊鋼発酵器（４２００ｚａ容量）を使用し、この発酵
器に、１ｔの水道水に対して下記の組成を有する２５０
０ｔの栄養培地を充填する。３２ｇのジャガイモ澱粉、
６０ｇのブドウ糖、１１９０大豆抽出屑、１１ｇの（Ｎ
Ｉ（４）２Ｓ０４．２９０）　Ｍｇ５０４−７Ｈ２０，
１，９ＯＮａＣ１，６＆のＣａ　Ｃｏ　３および０．５
９のＺｎＳＯ４゜−消泡剤として培養溶液１を当り０．
５９のアンタフ口ｙＮＭ４０を添加する。殺菌前に酸性
度ｔｐＨ値６．２に調整する。制御値としての殺菌関数
値を用いて、直接水蒸気で栄養培地（ブドウ糖分を含ま
ず）をその場で加熱殺菌する。この制御のための予定値
は５ｔ＝３５であり（汚染危険率１０−３．殺菌前の細
胞密度５・１０６細胞／−（培養溶液、ＫＬ））、導入
される直接水蒸気の制御によって１２０℃前後のプラト
ー（ｐｌａｔｅａｕ）　’温度に保持される。その際に
、殺菌関数Ｓｔの実際値は、下記の式によってめられる
。

５ｔ＝＝貞［Ａ、Ｅ、Ｔ（τｌａｄτ 式中、ｆ［〜］は殺菌温度Ｔ（ｔ）の実際の経過から得
られたアレニウス関数とする。

第１図と第２図は、再冷された殺菌栄養培地中の酸溶性
リン酸塩の濃度とその酸性度との殺菌関数予定値に対す
る依存関係な示し、５ｔ−３５は。

有効ジノ酸塩の初濃度を５ダ／　ｔ　、　、ｐＨＢ、０
に調整することに対応している。

発酵初期において７．４の生理学的ｐＨ要求値に低下さ
せることは、硫酸の添加によって実施され、そののち関
％水宕液の形で分離された無菌ブドウ糖分（３０分間１
２０”Ｃで加熱）が無菌的に添加される。前培養の第２
段階から得らゎた４％接種剤をもって接種された主培養
の発酵プライマーな、１２０時間、２９℃、０−０−０
３Ｐ加圧下、毎分１２５゜ｔ　（０〜１２ＲＩＭ）　乃
！毎分２５００　ｔ　（１２１１２０時間）の；ｍ気速
度で、１８０分−１の攪拌速度をもって培養する。

発酵の経過を以下に示す。

第３図・・・生成された抗生物質ノウルセオトリ／／と
生体乾燥型槽の時間的経過。

第４図・・・ｐｌ（値、ブドウ糖およびアンモニウム性
窒素の濃度の時間的経過。

第５図・・・水酸化アンモニウムの配量率、リン酸塩濃
度および射存散票濃度の時間的経過。

第６図・・・υ［気の散票および二酸化炭素濃度および
反応熱の時間的経過。

第７図・・・生成物生成の比速度および生育比速度の時
間的経過。

発酵は、規則に沿って、水酸化アンモニウム配量り変動
に応じて、直接的なリン酸塩配量およびブドウ糖配量に
よって手動的に不連続的に実施される。ｐＨ理論値間隔
は６．２上帆０５に固定さね、３８時間の発酵時間のの
ちに下限ｐＨ６，１５に達する。

直接的なり／酸塩配量りために、ＫＩＪ２Ｐ０４の無菌
水溶液が使用さｌ）ｌる。最初の３２時間に、物質代謝
活性を刺激するため、培養啓液リットルあたり全部で４
２ηのリンがリン酸塩の形で添加されるように前記の水
溶液を配量する。

所定のｐＨ理論値間隔と、栄養培地の緩衝状態と、アル
カリ濃度とを決定して、３８時間から水酸化アンモニウ
ム（２！５％溶液）を配量しはじめる。

水酸化ア／モニウム配量上昇率において見られる減少は
、４７〜４８時間、乃至５３〜５４時間の間において培
養溶液リットルあたりそ幻ぞれ８−５ｎＱのり／酸塩−
り７の直接的な配量を引き起す。

これにより６２時間において配量率は、その最高値に達
し１次に基質からの遊離により、直接す／酸塩配量から
間接り／酸塩配置への移行に対応して減少する。このよ
うにして培養溶液１ｆｆ１３および１時間あたり２３Ｏ
Ｎのδ％水酸仕アンモニウム峙液の最適比配置１ｉ率の
付近において、約即時間発酵が生じる。なλ累濃度な生
理学的好適領域に保持するためには、添加された水酸化
アンモニウム溶液は十分である。そＪｌ、故に、それ以
上の窒素源は添加されない。炭素源に関しては、第２の
リン酸塩配量ののちに水酸化アンモニウム配蓋上昇率の
低下が強くなるために、５６時間目に培養溶液１リツト
ルあたり４８１１のブドウ糖を添加配電する。９５時間
前後における間接的り／酸塩配量へ移行すると、培養溶
液１リツトルあたり１８ｇの第２のブドウ糖を配量する
。

直接的リン酸塩配量に際しては、溶存散票の濃度に関し
て何の制限もない。反応熱と排気組成が発酵相の状態を
表示し、基質制限を回避することができる。有効比生成
物生成率が４５時間にゎたって毎時８・１０−３と毎時
９・１０−３の間にあれば、　１０．５μ、９〜（培養
溶液）のノウルセオトリノン最終値が得られる。そのほ
か、添加されたブドウ糖を１完全に発酵され、また処理
技術的に定ｙ）らハ、た生体限界を超えることがなＶｌ
。

／ 例８ 抗生物質の分離のため、２９００μｇ／ｉｎ　ｌのノウ
ルセオトリシン塩基含有量を有する７５０１の発酵溶液
に、７．６ｋｇシュウ酸の飽和水溶液を加える。アンモ
ニアをもってｐＨ４，２に調整したのち、溶液を短時間
７０℃に加熱し、固体分音分離処理し、培養ｆＪｄをア
ンモニアで中和し、混濁物質の除去のために再び分離処
理し、次に２５１／時の速度で吸着するため、それぞれ
５ｊのポファテイト（Ｗｏｆａｔｉｔ）　ＣＰ　（Ｎａ
形）を含む２個の前後に接続されたカラム全通してＦか
ら上に導く。両方のカラムの吸着質を順次に、３０１づ
つの水、加ｌづつの０．Ｉ　Ｎ酢酸および１．５１づつ
の水で洗浄する。

そののち、抗生柳買全それぞれ２０１の０．５　Ｎ硫酸
と、次に１０１づつの水で溶離する。３．０以下のｐＨ
値を有する溶離７１１ポフアテイ）　ＡＤ４１（ＯＨ形
）で中和する。

カラム１の溶離液（３２，１）　’ｅ攪拌しながら、７
．５〜７，７のｐＨｔｉ、においてもはや沈殿が生じな
くなるまで、リン酸水素ジアンモニウムとアンモニアを
加える。沈殿した無機リン酸塩を１過によって分離した
のち、透明なρ液を、脱塩のため加ｌ／時間の速度をも
って、１０４のボファデイ）ＫＰ１６（Ｈ形）全通して
、次にｌＯｌのポファテイ）ＡＤ４１　（ＯＨ形）全通
してｒ過する。２０１の水をもって交換樹脂金洗浄した
のち、溶離液と洗浄水を集め（約５５１）、真空中３０
〜４０℃で６．５１に濃縮し、次Ｋ　１００ｇの活性炭
で処理する。Ｐ液に硫酸によって４．０〜４．５のｐ［
Ｉｉまで調整し、次に攪拌しなから７５１メタノール中
に滴下し、その際に無定形ノウル七オトリシン硫酸塩が
沈殿する。沈殿物を１別し、メタノールで洗い、真空中
４０℃で乾燥する。

カラムＩＩの８４液についても同様に処理ｔ−，６゜収
率： カラムｌ　：　７４５ｇのノウルセオトリシン硫酸塩、
〔α）ｊ５−−２７．５°（ε＝１、水）、硫酸塩灰、
２．２チ微生物学的効率＝６８７μｇ　／　ｍｇカラム
Ｉｆ　：　５７９　ｇのノウルセオトリシン硫酸塩、硫
酸塩灰、２．０Ｓ微生学的効率：４７０ｇｇ　７ｍ　ｇ
　。

例９ 例８によって得られ脱塩された溶離液フラクション９．
６１を真空中において３０〜４０℃で４４０　ｍｌの体
積まで蒸発させ、この溶離濃縮液を１２ｇの活性炭で処
理し、ｌ”過ののち硫酸によってｐＨ６，０に調整する
。

噴霧乾燥： 脱色された溶離濃縮ｅ、２２０ｍ１　（固体含有量３３
チ）全実験用噴霧乾燥器（Ｍｉｎｔ　８ｐｒａｙ　Ｄｒ
ｙｅｒＢＮｃｈｉ　１９０の中で、１６５〜１７５℃の
流入空気温：（と８５〜９０℃の排出空気温度をもって
噴霧乾燥する。

収率：５８．４ｇのノウルセオトリシン硫酸塩、微生物
学的効率：９８０ｇｇ／ｍｇｚ　Ｃα）２５＝−３２，
８゜（ε＝１、水）、硫酸遺灰０．４チ、水分：６．０
％Ｃ３６，８７、３７，０１；　Ｈ６，４８，６，６６
；　Ｎ１６．９９゜１６．９５　；　Ｓ　５．６４．５
．７１冷凍乾燥： 脱色された溶離濃縮液２２０　ｍｌを、生成物用発温１
ぎ一加℃と最終圧０．０３　）−ルにおいて、冷凍装置
ＴＧ５　（製造元：ＶＫＢホツホノ９クーム、ドレスデ
ン）の中で乾燥させた。

収率：　７１．５　ｇのノウルセオトリシン硫酸塩微生
物学的効率＝９９４μｇ／ｍｇ 〔α）：’＝−３４，２°（ε＝　１．２８、水）水分
：３．０％ Ｃ３６，８５、３６，９８；　Ｈ６，３２，６，３２；
　Ｎ　１６．８９゜１７．１６　；　Ｓ　５．８７．５
．８５元素分析では、ストレプトトリシンロー硫酸塩と
ストレゾトドリシンＦ−硫酸塩との２＝１混合物のＦ記
成分におおよそ対応している（Ｃ３□馬、Ｎ１□０□０
・２Ｈ２ＳＯ４ｅ２Ｈ２０＋Ｃ□９Ｈ３４Ｎ８０８１１
Ｈ２ＳＯ４・２Ｈ２０）例１０ 抗生物質の吸着のため、４８４６μｇ／ｍｌのノウルセ
オ）　ＩＪシン塩基全含有する例８によって得られた培
養ｆ液７５ｇを、２１ポフアテイトＣＰ　（Ｎａ形）を
含むカラムの中に上向きに４１ｊ／時の速度で通した。

次に樹脂を順次に、１５１の蒸留水、９１の０．ＩＮ酢
酸およびｌＯ１蒸留水をもって抗浄し、そののち抗生物
質を１４／の０．５Ｎ！ｊン酸をもって溶離する。溶離
液（ｐＨ３〜４）を２ｊのポ７アテイ）ＡＤ４１（ＯＨ
形）と共に攪拌することによって中和する。沈殿したリ
ン酸カルシウムをイオン交換剤と共にｆ別し、ｆ液にア
ンモニアｋｐＨ７，７まで加え、そこでリン酸マグネシ
ウムアンモニウムが沈殿し、これを濾過によって除去す
る。

次に一価カチオンｉ、ｉｚボファテイ）ＫＰ１６（Ｈ形
）と共に撹拌することによってノウルセオトリシンリン
酸溶液から分離する。そののち、浴液（１７＃）を真空
中４０℃で、１．５１まで蒸発させ”リン酸ヲもってｐ
Ｈ４，５すて酸性化し、７．５ｇの活性炭τもって処理
する。透明なＩｙ：１欲ｔ２Ｄｌのメタノール中に滴−
ドする。ｒ’ｇ液中に残ったコロイド状ノウルセオトリ
シンリン酸塩は、２５％ジメチルアミン溶液の添加より
、十分に濾過される凝結状態の形状にもたらされる。沈
殿物’ｆｃＰ別し、メタノールで洗浄し、Ａ窒中で塩化
カルシウム上で乾燥する。

収率：　１６９．５ｇのノウルセオトリシンリン酸塩、
〔α）２５＝−２９，９°（ε＝１、水）、硫酸塩灰：
例１１ ３０００μｇ／ｍｌのノウルセオトリシン塩基をき有す
る例８で得られた培養Ｐ液７５１ｆｃ、２１のボファテ
イ）　ＣＰ（Ｎａ形）を含むカラムの中に上向きに、４
１／時の速度で通す。樹脂をＬ５１蒸留水、ｌＯｌの０
．ＩＮ酢酸、次に再びｌＯｌの蒸留水で洗浄したのち、
抗生物質を１．０　／の０．５Ｎシユウ酸會もって溶離
する。Ｐ６！１（ｔｔｌ）ｋ２１のボ７アティ）ＡＤ４
１（ＯＲ形）と共に１兎拌することによって中和し、沈
殿した塊とイオン交換剤と全−緒にＰ別し、透明なｆ５
液を一価カチオンの除去のために２１のボファティ）Ｋ
Ｐ１６（Ｈ形）と共に撹拌する。次に溶液’に０．５７
のボファティ）ＡＤ４１（ＯＨ形）によって中和し、真
空中４０℃で、ｓｏ。

ｍｌまで蒸発させる。濃縮液を７ｇの活性炭で処理し、
濾過めのち１２４’のメタノール中に滴下する。

溶液中に残存しているコロイド状ノウルセオトリシンシ
ュウ酸塩金、２５チジメチルアミン溶液の添加によって
凝結させ、良好な１過可能の形状になる。１別された沈
殿ミ吻をメタノールで洗い、真空中でｊ奮化カルシウム
上で乾燥する。

収率：　１６２ｇのノウルセオトリシンシュウ酸塩。

〔α）２５＝−４１，８°（ε＝ｉ、水）、硫酸塩灰：
Ｏ０９チ 微生物学的効率＝８０９μｇ／　ｍｇ　。

例１２および１３ ブタ飼料実験において、４０ｍｇ／ｋｇ乾燥物（ＴＳ）
の４酸ノウルセオトリクンを補給した混合飼料（プレミ
ックス）をもって７０日の実験期間中給餌することによ
り、平均体重増加６チの改良が確認さ九だ。また７０日
の飼料実験中に日量飼料と共に菌糸体吸着質としてのノ
ウルセオトリシン２１　ｍｇ／ｋｇ（ＴＳ）を供給する
ことにより、１日当りの平均体重増加が２３％増大され
た。その場合対照グループの動物よりも飼料消費喰が７
％まで減少した。

子牛について菌糸体吸着質の形のノウルセオトリシンを
５２　、５　ｍｇ作用吻質／動物／日までの段階的用量
で供給して動物の健康に対して非盾にすぐれた影ｆｌＩ
を及ぼした。これは死亡率の顕著な減少と、下痢日数の
大巾な低下によって明らかである。

子牛の体重増加に対する好ましい作用は、特に、生れて
から５週間において確認された。飼料に対してノウルセ
オトリシン′ｆ：３５ｍｇ／動物の割合で毎日添加する
ことにより、４週間の飼育期間後、２５％の体重増加の
改良が見られた。１０週間の飼育実験の終了後に、この
値は最高１３％となった。

ノウルセオトリシン菌糸体の耐性は動物試験において無
毒と証明された。５０００　ｍｇ　／　ｋｇ　体重（Ｋ
Ｍ）ｔでの用量ヲオスおよびメスのウエスタラット（体
重２００ｇまで）に対して１度呼食道ゾンデによって注
入しても、被験動物の体重増加についても死亡率につい
ても影響が見られなかった。

例１２ 閑糸体含有ペレトナイト吸着体の形のノウルセオトリシ
ン含有プレミックスヲ製造するため、発酵の終了直後、
培養溶液１００１当り０．１４のホルマリン溶液を添加
し、１５〜３０分間攪拌した。次に、ｐＨ６，０の酸性
度に達するまで、２５チ硫酸を添加した。

あらかじめ耐酸性材料から成る攪拌器の中で、１５ｄ水
中［２ｋｇのナトリウム化ベントナイトを導入し、０．
２１の２５％硫酸を添加することによって、ベントナイ
）Ｉｌｌ濁液が準備された。この懸濁液の膨潤時間は少
なくとも１２時間におよぶ必要がある。

このように準備されたベントナイト懸濁液を１００１培
養溶液（作用物質含有量：５０００ｍｇノウルセオトリ
シン／／）の中で攪拌したのち、通例６．０〜６．５の
ｐ）（匝が得られる。必要な場合には、′／！Ｓ％硫酸
乃至は３０％苛性ソーダ溶液を添加することにより、と
のｐＨ範囲に調整する。吸着工程中、反応溶液を常に攪
拌する。少なくともω分の反応時間ののち、固体外の分
離を開始することができる。これは、１過または分離で
実施される。

このような分離作業には真空回転式１過器が特に適当で
あって、この濾過器は、予め、特に準備された硫酸カル
シウムの１過助剤ｔｆ４を展張することによって準備さ
れる。

７・ｌＯ’Ｐａ　の減圧下で、２５０１　／　ｍ２・ｈ
の濾過効率が得られる。１００１の培養溶液（約１１５
〕のベントナイト−培養溶液−懸濁液）から、初期活性
の５〜ＩＯ％に対応する作用物質残！’（ｒもって、９
３〜９８／のＰ液が排出される。

中間生成物としてＰ別された固体は、５８〜６５チの残
留湿分て１２〜１４　ｋｇに達する。１１０〜１１５１
懸濁液の濾過に際して、２．０〜２．５　ｋｇの１過助
剤が消費される。ｆ別された湿った固体外は直ちに乾燥
に送られる。

熱空気中の乾燥工程中、生成＃温度は７Ｅを超えてはな
らない。１２〜１４ｋｇの湿潤固体から、乾燥物質当り
７５〜８５ｇのノウルセオトリシン含有量をゼする４、
５〜５．０ｋｇの乾燥生成物が得られる。被検菌として
枯草菌ＡＴＣＣ６６３３を用い、寒天板拡散テストによ
って作用・勿貞よＭ量を測足した。

還流乾燥器を用いた場合、乾燥生成物は、これを混合飼
料中に配量するプレミックスとして直接に使用できるよ
うな細粒状に堆積する。格子状、帯状または渦層乾燥器
をもって得られた生成物は、標準化乃至は混入のＡｉｌ
に粉砕しなければならない。

混合飼料の配合は、混合飼料乾燥物質キログラム当りの
ノウルセオトリシン含有喧が５〜１００ｍｇに達するよ
うに４蝋されるべきである。

それぞれのｆｌに栗用勧物種と飼育期ｌｌ：１１につい
て、所定の混合飼料の組成は、′動物生産における混合
飼料の品質規則”によって義務づけられている。

例１３ 菌糸体乾燥生成物の形のノウルセオトリシン含有プレミ
ックスの製造のためには、発酵の終了直後に、培養溶ｌ
ｆｉ、ｖこ、例１２１ｃ述べたようにホルマリンを加え
、２５％硫酸の添加によって、ｐＨ６，０の酸性度に調
整する。

次に、このように処理された培養溶液は適当な蒸祐器（
真空循環式蒸発器、減圧度４・１０４〜６．１０’Ｐａ
、温度７０℃）の中で温和条件で蒸発させられ、次に濃
縮液が真空ローラ乾燥器によって＃細塊状固体となるま
で乾燥される。４・ｌＯ４〜６・ｌｏ’Ｐａの減圧下で
進行する乾燥工程中、乾燥製品Ｑ７０℃以上に加熱する
べきでない。乾燥された最終生成物の残留湿分は３％以
下でちるべきである。５０００ｍｇ／ｉｔノウルセオト
リシンの当初作用物質含有量をもつ１００ｊの培養溶液
から、乾燥物質１ｇ当り１１３ｍｇのノウルセオトリシ
ンの作用物質含有ｔをもつ３７５０　ｇの菌糸体ぎ有乾
燥生成吻が得られる。

このようにして得られた菌糸体乾燥生成物は、標準化乃
至は混入前に粉砕される。

作用物質含有量の生理学的測定法および混合飼料の配合
法は、例【２に述べたものと同１ポである。

−以下において本発明の利点・とその応用に関連して説
明する。

千飼いにおいて実施される飼料実検のため、４００匹の
未選別ブロイラー雛（テトラＢ）をそれぞれ８匹づつの
下位グループに分けた。谷処理について１０回づつ繰返
した。実験開始時の雛の平均体重は３８ｇ／動吻で動物
た。１９８０／８１国家品質規格に対応したブロイラー
飼育調整飼料を給餌しこの飼料はＦ記から成る。

６４．５％トウモロコシひきわり ２１．０チ大豆エキスひきわシ ６．０％魚粉 ２．０％飼料酵素 ３．０多ナタネ ２．５％５４ｇ　Ｐ／ｋｇを含有する家禽用ミネラル混
合物 １．０係ブロイラー飼育調整飼料用の作用物質プレｌ　
ミックス（抗生物質を含まず） 実１次グループに対する日量の飼料に塩酸ノウルセオト
リシンの純粋物質を補給した。

体重増加、飼料摂取量および飼料消費量に対する段階的
ノウルセオ）　ＩＪシン添加の効果を表５、表６および
表７にそれぞれ示す。

バタ’）　−（Ｂａｔｔ’ｅｒｉｅ）［いにおいて実施
される飼料実験のために、３０００匹の未選別ブロイラ
ー離（テトラＢｌ（ｉ＝それぞれ１００匹の下位グルー
プに分けた。各操作は６回繰返された。実験開始時の雛
の平均本選は３７．５ｇであった。給餌された飼料は前
記と同僚の組成であった。実験グループに与えられる日
量飼料に、塩酸ノウルセオトリシンの純粋物質を補給し
た。

体重増加、飼料摂取量および飼料消費量に対する段階的
ノウルセオ）　ＩＪシン添加の効果を表８、表９および
表１０に示した。

床面給餌において実施される飼料実験のため、現在、ブ
タ生産において使用されている交雑種の５５匹の子ブタ
全１１匹づつの下位グループに分けた。

実験開始時の平均体重は１０．５ｋｇ／動物であった。

給餌された混合飼料は次の組成含有していた。

４０ｋｇの体重まで： ４５．０％小麦 ３３．０％　大麦 ５．０チ　魚粉 ５．０％　乾燥脱脂乳 １０．０係　大豆エキスひきわり １．０％　無機室プレミックス、５０ｇＸＰ／ｋｇ含有
、１．０％　ブタ飼育Ｉ用作用物質プレミックス（抗生
物質を含まず） 体重４０ｋｇから： ４０．０％　小麦 ４８．０チ　大麦 ７．０係　大豆エキスひきわり ３．０チ　魚粉 １．０チ　３５ｇＰ／ｋｇ含有無機質プレミックス１．
０％　ブタ飼育飼料■用作用物質プレミックス（抗生物
質を含まず）。

実験グループに対する日量飼料に、塩酸、ノウルセオト
リシン、コルモグリシン乃至ジンクツマシトラジンの純
粋物質を補給した。

体重増加、飼料摂取量および飼料消費量に対する段階的
成長促進剤添加の効果をそれぞれ表１１、表１２および
表１３に示した。

床面給餌において実施される２回の飼料実験（実験Ａと
Ｂ）のために、現在ブタ生産において１更用される交：
ｒ４［；　’ＦｈＫのそれぞれ４８匹の子ブタを、１２
匹づつの下位グループに分けた。実験開始時の平均体重
は１０．７ｋｇ　（実験Ａ）乃至１２．６ｋｇ　（実験
Ｂ）であった。

実験グループ用の日量飼料に、菌糸体含有ベントナイト
吸着質の形のノウルセオトリシンプレミックスを補給し
た。

それぞれ７０日の実験期間中に確認された体重増加、飼
料摂取量および飼料消費量に対する効果を表１４、表１
５および表１６に示した。

１０週間飼料のため、３６匹の子牛（黒ブチ乳牛）全そ
れぞれ９匹の下位グループに分けた。実験開始時の平均
体重は５４ｋｇ／励物であった。

ミルク代用飲物は、水にｇＭされた１リットル当り１０
０　ｇの子牛用ミルク代用剤を含んでいた。

この飲物はその供給直前に、菌糸体含有ソウル２セオト
リシンーベントナイトー吸着ＪＲをイ＋ｈ給されていた
。

さらにｍＪ物は′ド記組成の濃縮物ミックスを随意にと
った。

３０．０％　小麦ひきわり ３８．０％　大麦ひきわり ２０．５％　大豆エキスひきわり ４．０％　乾燥さとう大根砕片 ３．０多　乾燥飼料酵素 １．５チ　ミレイノぐン（ビタミン・濃縮物）また、成
牛に対応する日量０．５ｋｇまでのマグサ／動物をとっ
た。

子牛の健康および体重増加に対する段階的ノウルセオト
リシン添加の効果を表１７に示す。

表３：ストレゾトマイツエス・ノウルセイＺＩＭＥＴ４
３７１６／ＮＧ１３−１４菌株のＮＨ２ＰＯ４、ブドウ
糖および（ＮＨ４）　２Ｓｏ４に配量した実験発酵培養
と配量されていない実験配量培養との、発酵時間に対す
るノウルセオトリシン含有量 ２４　１０３５　２４９　４１５　１００４８　２９８
０　１６５　１８０５　１００７２　５４１２　２９４
　１８４０　１００９６　８３１１　２１３　３９０５
　１００１２０　８８００　１９５　４５２０　１００
１４４　９２３０　２１３　４００５　１００表４＝ス
トレプトマイツエス・ノウルセイＺＩＭＩＥＴ４３７１
６／ＮＧ　１３−１４菌株の、ＮＨ２ＰＯ４、ブドウ糖
および（ＮＨ４）２８０４′ｔ−配量され、あるいは配
量されていない５００１の発酵培養の発酵時間に対する
ノウルセオ）　ＩＪシン含有量 −２０２２５２１６１０４１００ ４４１６００２２８７０２１００ ６８４８５８２９９１６２７１００ ９２４９０３２０８２３６２１００ １１６６８６２１９１３５８５１００ １４４７７８１２００３８８５１００ 表５：平飼いにおけるブロイラー雛の生体重増加に対す
る段階的ノウルセオトリシン添加の影響 塩酸ノウルセ　動物あたりの体重 （ｍｇ／ｋｇ）　（ｇ）　ｆ％）　（ｇ）　（％）（ｇ
）（％）０　２００　１００　５２５　１００　１４６
３　１００５．０　１９０　９５　５３２　１０１　１
４６９　１００１０．０　２０８　１０４　５４８　１
０４　１４７８　１０１３０．０　２１０　１０５　５
９３　１１３　１５４８　１０６５０．０　２１４　１
０７　５８８　１１２　１５４３　１（１６０，０５１
４５１７７ 表６：平飼いにおけるブロイラー雛の飼料摂取量に対す
る段階的ノウルセオトリシン添加の影響塩酸ノウルセオ
ト　飼　料　摂　取　量リシン補給量　第２８日　第５
２日 （ｍｇ／ｋｇ）　（ｇ）　（％）　（ｇ）　（％）０　
１１０５　１００　３５６０　１００５．０　１０８７
　９８　３４３０　９６１０．０　１１８３　１０７　
３５０５　９９３０．０　１１４６　１０４　３５２２
　９９５０．０　１１００　１００　３４７６　’−１
８表７：平飼いにおけるブロイラー雛の飼料消費量（１
〜５２飼育日）に対する段階的ノウルセオトリシン添加
の影響 （％）　１００　９６　９６　９２　９２表８：パタリ
ー飼いにおけるブロイラー雛の体重増加に対する段１昔
的ノウルセオトリシン添加の影響 塩酸ノウル　体　重　／　動物 （ｍｇ／ｋｇ）　（ｇ）　（％）　（ｇ）　（％）　（
ｇ）　Ｃ％）０　２０３　１００　５７５　１００　１
４７７　１００２０　１９６　９７　５９４　１０３　
１４８９　１０１３０　２１５　１０６　６０３　１０
５　１５６７　１０６４０　２１９　１０８　６１４　
１０８　１６１２　１０９５０　２０８　１０３　５４
７　９５　１５４６　１０５ＴＯ，０５２５１１４ 表９＝パタリー飼いのブロイラー雛における飼料摂取量
に対する段階的ノウルセオ トリシン添加の影響 塩酸ノウル　飼料摂取量 （ｍｇ／ｋｇ）　（ｇ）　（％）（ｇ）　優）０　１１
３１　１００　３５６２　１００２０　１１８６　１０
５　３６０５　１０２３０　１１５７　１０２　３６４
１　１０２４０　１０４８　９３　３５３０　９９５０
　１０６１　９４　３４００　９６表１Ｏ：バタリー銅
いのブロイラー雌における飼料消費量（第１〜第２５＠
育日）ＶＣ対する段ｉ嘴的ノウルセオトリシン添加の影
響 塩酸ノウルセオ トリシン補給量　０　２０　３０　４０　５０（ｍｇ／
ｋｇ） 表１１：床而給餌のブタにおける毎日生体重増加に対す
る各種促進剤の影響 ジンクパシトラ　５１０　１０５ シン　（８２，８） １２０ｍｇ／ｋｇ ジンクパシトラ　６２１　１０１　５８１　１０１シン
　（８６，０）　（７０’、７） ４０ｍｇ／ｋｇ コルモグリシン　５５９　１１５　５７８　９４　５７
４　１０１塩５投ノウルセオ　５０３　１０４　６０２
　９８　５６７　１００トリフ／　（５７，８）　（５
５，０）　（４０，２）１０ｍｇ／ｋｇ 塩酸ノウルセオ　５８７　１２１　６１７　１０１　６
０２　１０６トリシン　（５６，６）　（６３，７）　
（４７，７）４０ｍｇ／ｋｇ 対照　４８４１００６１３１００５６８１００（カッコ
内の数値は、実測呟のバラツキ）表１２＝床面給餌のブ
タにおける毎日飼料摂取量に対する各種促進剤の作用 生体重平均　８〜４５ｋｇ４５〜１２０ｋｇ８〜１２０
ｋｇ（促進剤）（ｇ）（％）　（ｇ）　（％）　（ｇ）
　ｆ％）ジンクノマシトラ　１．３３　９５　２．１２
　９５シン １２０ｍｇ／ｋｇ ジンクパシトラ　２°５９９７ シン ４０ｍｇ／ｋｇ コルモグリノン　１．３７　９８　２．４９　９３　２
．１０　９４４０ｍｇ／ｋｇ ノウルセオトリ　１．３４　９５　２．５８　９６　２
．１１　９５シン １０　ｋ　ｇ／ｋ　ｇ ノウルセオトリ　１．７４１２４　２．６５　９９　２
．３１１０４シン ４０ｍｇ／ｋｇ 対照　１．４０１００２．６７１００２．９４１００表
１３＝床面給餌のブタにおける飼料消費量に対する各種
促進剤の影＃（ｋｇ／　ｋｇ増加）生体重平均　８〜４
５ｋｇ　４５〜１２０ｋｇ　８〜１２０ｋｇ（促進剤）
（ｇ）（％）　（ｇ）　（条）　（ｇ）　（襲）ジンク
パシトラ　２．６１　９０　３．５８　９１シン １５０ｍｇ／ｋｇ ジンクパシトラ　４．１８　９５ シン ４０ｍｇ／ｋｇ コルモグリシン　２．４５　８５　４．３８　９９３．
６３　９３４０ｍｇ／ｋｇ 塩酸ノウルセオ　２．６６　９２　４．２８　９７３．
７４　９５トリシン １０ｍｇ／ｋｇ 塩酸ノウルセオ　２．９６１０２　４．２６　９６３．
８４　９８トリシン ４０ｍｇ／ｋｇ 対照　２．８９１００４．４２１００３．９２１００表
１４二床面給餌ブタにおける平均毎日体重増加（２／動
物）に対する段階的ノウルセオトリシン°添加（菌糸体
吸着質］の効果：実験期間７０日実験　対照　ノウルセ
オ）ＩＪシン作用物質（ｍｇ／ｋｇ飼料）（ｇ）（％）
　７　１４　２１ （ｇ）（チ）（ｇ）（％）（ｇ）（％）Ａ　４７９１０
０　４９６　１０４　５４８１１４　５８０１２３（１
０４）　（１４０）　（４１）　（１１８）Ｂ　５８４
１００　５６４　９７　５９４１０２　６１６　１０６
（８５）　（９２）　（ｎｓ）（５０７）表１５＝床面
給餌ブタにおける平均毎日飼料摂取量（ｋｇＭ料／動物
）に対する段階的ノウルセオトリシン添加（菌糸体吸着
質）の効果：実験期間７０日 実験　対照　ノウルセオトリシン作用物質（ｍｇ／ｋｇ
ｌｌｊｌ科）（ｇ）（飼　７　１４　２１ Ａ　１．３３１００１．３８１０４　１．５６１１７　
１．５５１１７Ｂ　１．７２１００１．６６　９７　１
．６２　９４　１．６８　９８表１６：床而給餌ブタに
おける平均飼料消費量（ｋｇ／ｋｇ増加）に対する段階
的ノウルセオトリシン添加（菌糸体吸着質）の効果：実
験期間７０日（ｇ）（灼　７　１４　２１ Ａ　２．７８１００２．７８１００　２．８５１０２　
２．６３　９５Ｂ　２．９４１００２．９４１００　２
．７３　９３　２．７３　９３

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、リン酸塩濃度および酸性度の殺
菌関数理論ｕｆｉＶｒ一対する関係金示す図、第３図は
、生成された抗生酸質ノウルセオトリシンと生体乾燥電
歇の時間的経過を示す図、ｆ２４図は、ｐＨ値、ブドウ
糖およびアンモニウム性盪素の濃度の時間的経過を示す
図、第５図は、水酸化アンモニウムの配置率、リン酸塩
濃度および溶存酸素濃度の時間的経過金示す図、 第６図は、排気の酸素および二酸化炭素濃酸および反応
熱の時間的経過を示す図、および′＠７図は、生成物生
成の比速度および生育比速匿の時間的経過を示す図であ
る。 出願人代理人　猪　股　清 ０発　明　者　ボルフ、ユンネ　ドイツ民主共和国６９
０αり、２０／２０４ ０発　明　者　へルムート、リンデ　ドイツ民主共和国
６９００＠発明者　ミヒヤエル、メナー　ドイツ民主共
和国６９０１゜ル、シュトラーセ、１０１ ＠発明　者　クララスーブイータ　ドイツ民主共和国５
３２０、−、メンツエル　シュトラーセ、１０ ０発　明　者　ベーターーユルゲン、ドイツ連邦共和国
６９０１ミユラー　ベーク、１ ■発　明　者　グンター、プロン力　ドイツ民主共和国
６９００．８、マイ、２ ■発明者　ハンス、ディーター、ドイツ民主共和国６９
０αポール　１４ ■発明　者　イエルク、シュナイダ　ドイツ民主共和国
６９０２、−　ツアー−シュトラーセ、 ０発　明　者　ハイフン、トルム　ドイツ民主共和国６
９０（１トラーセ、６２ 、イエナ、スピッツパイデンベー 、イエナ、アム、ゲンゼベルク、２ １アメルバツハ、アメルバツヒエ 、アポルタ、ヘルマンーマテルンー １アメルバツハ、メルツエンベルク 、イエナ、シュトラーセ、デス１ 、イエナ、フオンーハセーベーク１ 、イエナーロベダ、オツトー−ミリ お イエナ、ヘルマンーレンスーシュ 手υごネ市　正　書　（方式） 昭和５９年５り＝１′ｙ−日 持ＷＦ庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 昭和５９年′特ム′ｆ願　第８３７６号２　発明の名称 ソウルセフ１１〜リシンとその吸着質の製造法３　補正
をする者 事イ９との関係　特Ｗ［出願人 ）４ルクスアイグネルベトリーブ、 イエナファルム ４代理人 昭和５９年４月４日 （発送１」　昭和５９年４月２４０） ６　補正の対象 図面 ７　補正の内容

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、好適な炭素源および窒素源ならびに無機塩を含有す
   る栄養培地中で、好気性液中培養条件のもと（ノウルセ
   オトリシ／生産ストレプトマイツエテ／閑株を培養し、
   次に作用物質分離を行うことによってノウルセオトリ７
   ）、その塩および吸着質を製造する方法において、 （イ）主培養では、アルカリアジド、ピロカテコールお
   よび（もしくは）エチルインアミルノζルビツール酸の
   型の呼吸連鎖阻害物質ならびに（または）水溶性亜妬塩
   および（もしくは）β−アラニンの型のアミノ酸輸送阻
   害物質な添加すること、 （ロ）−硫酸イオンおよび炭酸カル７ウムのほか、リン
   酸塩−沈殿物質の存在において、必要に応じて予めアル
   カリ暗皓を添加して、主培養の栄養培地の規則に沿った
   加熱殺菌を実施し、その際に殺菌の終了後には、７．２
   〜８．８の範囲のｐＨ値にすること。 （ハ）発酵中に、０．１〜１０η（リン酸塩−リン）／
   ｌ／ｈの範囲内に比率限定されたす／酸塩供給を確保し
   、ｐＨ’　５〜６．５の範囲のｐＨ値に制限し、また（
   ９）％〜８０％の０２〜分ｌＥに調整し、さらに、炭素
   −窒素濃度比を５〜１５９（ブドウ糖単位）７１対０．
   ０１５〜０．２　ｇ（アンモニウム性窒素）／１に維持
   して基質制限を・確保すること、 に）　ノウルセオトリン／吸着質としての培養溶液に対
   して吸着剤を添加することにより、または、培養涙液か
   ら弱酸性カチオン交換４りで吸着して希釈多塩基酸で溶
   離し、次に濃縮。 中和、および精製し、さらに対応の酸の塩をメタノール
   中に沈殿させて、もしくは乾燥させることにより、抗生
   物質を分離すること、を特徴とするノウルセオトリクン
   とその塩および吸着質の製造法。 ２．　Ｉ）Ｈ予定値の制御のために、炭素源または窒素
   源オヨヒ（または）有効物質添加の調整のために、なら
   びにリン酸塩配量の調整のために、アルカリ配量率を特
   徴する特許請求の範囲第１項記載の製造法。 ３、反応熱が調整値として利用される、特許請求の範囲
   第１項または第２項記載の製造法。 ４、規則に沿った加熱殺菌は、殺菌関数に基いて加熱量
   の調整によって実施される、特許請求の範囲第１項記載
   の製造法。