JPS6058069A - Νａｄ（ｐ）ｈオキシダ−ゼの製造方法 - Google Patents
Νａｄ（ｐ）ｈオキシダ−ゼの製造方法Info
- Publication number
- JPS6058069A JPS6058069A JP16737083A JP16737083A JPS6058069A JP S6058069 A JPS6058069 A JP S6058069A JP 16737083 A JP16737083 A JP 16737083A JP 16737083 A JP16737083 A JP 16737083A JP S6058069 A JPS6058069 A JP S6058069A
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- JP
- Japan
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- oxidase
- nad
- enzyme
- bacillus stearothermophilus
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、新規な、安定で、かつＮＡＤＨおよびＮＡＤ
ＰＨのいずれをも酸化する活性を有するｒｙｈｎ（ｐ）
ｕす番・ンぶ−ゼの一浩古辻ｆ間ナス＆のである。
ＰＨのいずれをも酸化する活性を有するｒｙｈｎ（ｐ）
ｕす番・ンぶ−ゼの一浩古辻ｆ間ナス＆のである。
近年、生体におけるすぐれた、化学反応触媒である酵素
を化学工業をはじめとする諸産業へ利用することが、検
討されている。これらの中で、エネルギーの供給系や酸
化還元系などを含む複合的な酵素反応を利用するバイオ
リアクター（生体反応装置ンの開発が試みられているが
、そのためには補酵素の効率的転換を行う酵素が必要と
される。
を化学工業をはじめとする諸産業へ利用することが、検
討されている。これらの中で、エネルギーの供給系や酸
化還元系などを含む複合的な酵素反応を利用するバイオ
リアクター（生体反応装置ンの開発が試みられているが
、そのためには補酵素の効率的転換を行う酵素が必要と
される。
酸化還元系においてはＮＡＤ にコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド。以下同じ。）あるいはＮＡＤＰ にコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸。以下同じ。
ジヌクレオチド。以下同じ。）あるいはＮＡＤＰ にコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸。以下同じ。
）が、しばしば用いられ、これらは酵素反応で基質によ
りＮＡＩＪＨ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド。以下同じ。）あるいはＮＡＤＰＨ（還元型ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸。以下同じ。
りＮＡＩＪＨ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド。以下同じ。）あるいはＮＡＤＰＨ（還元型ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸。以下同じ。
）に還元されるが、バイオリアクターの効果的運転のた
めには、これらＮＡＩ）ＨあるいはＮＡＤＰＨを他の酵
素によシ酸化し、ＮＡＤあるいはＮＡＩ）Ｐに効率よく
再生することが不可欠である。またＮＡＤあるいはＮＡ
ＤＰの還元に伴う酵素反応を測定するための副酵素系と
してもこのような酵素の開発が望まれる。
めには、これらＮＡＩ）ＨあるいはＮＡＤＰＨを他の酵
素によシ酸化し、ＮＡＤあるいはＮＡＩ）Ｐに効率よく
再生することが不可欠である。またＮＡＤあるいはＮＡ
ＤＰの還元に伴う酵素反応を測定するための副酵素系と
してもこのような酵素の開発が望まれる。
この際、種々の基質の還元と共役させて、ＮＡＤＨある
いはＮ Ａ ］） Ｐ Ｈを酸化する酵素は種種存在す
るが、酸素によシ直接ＮＡＤＨあるいはＮＡＩ）ＰＨの
酸化を触媒する活性を有するオキシダーゼは反応の副成
物が水のみであシ、基質の導入、生成物の除去などの前
処理、後処理が簡単となるため、最も望ましい酵素であ
る。またバイオリアクターに組込むためには安定である
ことが望ましい。
いはＮ Ａ ］） Ｐ Ｈを酸化する酵素は種種存在す
るが、酸素によシ直接ＮＡＤＨあるいはＮＡＩ）ＰＨの
酸化を触媒する活性を有するオキシダーゼは反応の副成
物が水のみであシ、基質の導入、生成物の除去などの前
処理、後処理が簡単となるため、最も望ましい酵素であ
る。またバイオリアクターに組込むためには安定である
ことが望ましい。
本発明者らは、上記の観点から、常温での活性が高く、
かつ安定なＮＡＤ（ＰＩＨオキシダーゼを得るべく鋭意
研究した結果、中等度好熱菌であるバチルス・ステアロ
サーモフィルスよυ、安定であシ、かつＮＡＤＨおよび
Ｎ Ａ Ｄ Ｐ Ｈのいずれをも酸化しうるＮＡＤ■Ｈ
オキシダーゼを見出し、本発明を完成した。
かつ安定なＮＡＤ（ＰＩＨオキシダーゼを得るべく鋭意
研究した結果、中等度好熱菌であるバチルス・ステアロ
サーモフィルスよυ、安定であシ、かつＮＡＤＨおよび
Ｎ Ａ Ｄ Ｐ Ｈのいずれをも酸化しうるＮＡＤ■Ｈ
オキシダーゼを見出し、本発明を完成した。
本発明の目的は、特に熱的に安定なＮＡＤ（ト）ｌ（オ
キシダーゼの製造方法を提供することにある。
キシダーゼの製造方法を提供することにある。
本発明におけるＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼの製造方法
は、好熱性細菌バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐ旧１ｕｓ
）の培養物からＮＡＤＨ及びＮＡＤＰ）（のいずれをも
酸化し得るＮＡＤ■Ｈオキシダーゼを採取することを特
徴とする 特ニパチルス・ステアロサーモフイルスヲ定常状態まで
生育させ、この菌体を超音波破壊して後カラムクロマト
グラフィーにかけることが望ましい。
は、好熱性細菌バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐ旧１ｕｓ
）の培養物からＮＡＤＨ及びＮＡＤＰ）（のいずれをも
酸化し得るＮＡＤ■Ｈオキシダーゼを採取することを特
徴とする 特ニパチルス・ステアロサーモフイルスヲ定常状態まで
生育させ、この菌体を超音波破壊して後カラムクロマト
グラフィーにかけることが望ましい。
本発明において使用する細菌はバチルス・ステアロサー
モフィルスであシ、これに属する各種菌株はいずれも本
酵素を生産する能力を有する。
モフィルスであシ、これに属する各種菌株はいずれも本
酵素を生産する能力を有する。
本菌株の培養は液体培養で行い、培地には微生物の培養
に際して通常用いられる種々の炭化水素。
に際して通常用いられる種々の炭化水素。
天然栄養源、ビタミン、無機塩類は全て用いることがで
きる。特に窒素源としてはペプトン、イースト・エキス
、カゼイン、コーン・ステイープリカーなどが好適に利
用され、これら栄養源を炭素源とした培地での培養も可
能であるが、これに少量のブドウ糖を加えることにより
菌の生育が促進される。堵責温度は４５〜６５Ｃ１好ま
しくは５５°〜６０Ｃである。例えば通気攪拌下、温度
６０Ｃ１初発ｐ ）ｌ ７で培養すると通常２〜３時間
で培養は終了する。
きる。特に窒素源としてはペプトン、イースト・エキス
、カゼイン、コーン・ステイープリカーなどが好適に利
用され、これら栄養源を炭素源とした培地での培養も可
能であるが、これに少量のブドウ糖を加えることにより
菌の生育が促進される。堵責温度は４５〜６５Ｃ１好ま
しくは５５°〜６０Ｃである。例えば通気攪拌下、温度
６０Ｃ１初発ｐ ）ｌ ７で培養すると通常２〜３時間
で培養は終了する。
用警終了後、培養液よシＮＡＩ）（）’）Ｈオキシダー
ゼを採取するには、一般の採取法を用いることが出来る
が、本酵素は凶体内酵素であるため、菌体を培心分離、
濾過などによシ集め、緩衝液に懸濁後、（ｍ＞音波、高
圧ポモジナイザー、フレンチプレスあるいは機械的磨砕
などによシ菌体を破壊し、酵素を菌体外に排出し、可溶
化させる。この際、タンパク質分解酵素の阻害剤である
フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、＄
るいはジイソプロピルフルオロリン酸（１１ＦＦ）なに
よシ、収量が向上する。この際、少量の金属キレート剤
を加えることによシ、さらに酵素を安定に採取すること
が出来る。この溶液を濾過、遠心分離などによシ菌体の
破壊物を除く。このようにして得られた粗酵素標品を更
に精製するには、セファデクス（ファルマ７ア社の製品
名）、七フアクリル（ファルマシア社の製品名）、バイ
オゲル（バイオラド社の製品名）などによるゲル濾過。
ゼを採取するには、一般の採取法を用いることが出来る
が、本酵素は凶体内酵素であるため、菌体を培心分離、
濾過などによシ集め、緩衝液に懸濁後、（ｍ＞音波、高
圧ポモジナイザー、フレンチプレスあるいは機械的磨砕
などによシ菌体を破壊し、酵素を菌体外に排出し、可溶
化させる。この際、タンパク質分解酵素の阻害剤である
フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、＄
るいはジイソプロピルフルオロリン酸（１１ＦＦ）なに
よシ、収量が向上する。この際、少量の金属キレート剤
を加えることによシ、さらに酵素を安定に採取すること
が出来る。この溶液を濾過、遠心分離などによシ菌体の
破壊物を除く。このようにして得られた粗酵素標品を更
に精製するには、セファデクス（ファルマ７ア社の製品
名）、七フアクリル（ファルマシア社の製品名）、バイ
オゲル（バイオラド社の製品名）などによるゲル濾過。
イオン交換セルロース、イオン交換セファデクス（ファ
ルマシア社の製品名）、ノ・イドロキシアバタイトなど
を用いたクロマトグラフィー、あるいは硫安塩析、有機
溶媒沈澱など通常の酵素精製技術も適宜選択し、組合せ
て実施すればよい。
ルマシア社の製品名）、ノ・イドロキシアバタイトなど
を用いたクロマトグラフィー、あるいは硫安塩析、有機
溶媒沈澱など通常の酵素精製技術も適宜選択し、組合せ
て実施すればよい。
次に本発明によるＮＡＤＱ’）Ｈオキシダーゼの諸性質
について述べる。
について述べる。
■ 作用及び基質特異性
ＮＡＤＨ！るいはＮＡＤＰＨのいずれにも作用し、酸素
によシこれらを酸化し、ＮＡＤあるいはＮＡＤＰを生成
する。
によシこれらを酸化し、ＮＡＤあるいはＮＡＤＰを生成
する。
噂だ、太′ｆＭ壺！＋層書の什ｈＫ、ジクロロフェノー
ルインドフェノール、メナジオン（ビタミンＫｎ）。
ルインドフェノール、メナジオン（ビタミンＫｎ）。
フェリシアン化カリウム、あるいはフェリシアン化ナト
リウムによ、９ＮＡＤ）ｌあるいはＮＡＤＰＨを酸化す
るデヒドロゲナーゼ活性も有する。
リウムによ、９ＮＡＤ）ｌあるいはＮＡＤＰＨを酸化す
るデヒドロゲナーゼ活性も有する。
■ 活性化
、１％Ｘはフジピシアデニンジヌクレオテド（ＦＡＤ）
の添加によシＮＡＤＨを基質とした場合、５〜１０倍活
性化される。ＮＡＤＰＨを基質とした場合、中性および
弱アルカリ性では活性化の効果はなく、ｐ Ｈ７以下で
は１．５〜３倍の活性化が認められる。
の添加によシＮＡＤＨを基質とした場合、５〜１０倍活
性化される。ＮＡＤＰＨを基質とした場合、中性および
弱アルカリ性では活性化の効果はなく、ｐ Ｈ７以下で
は１．５〜３倍の活性化が認められる。
■ 至適ｐＨ
ＦＡＤ非存在下（無添加時ンではＮＡＤＨを基質とした
場合（第１図の曲＃１）、ｐＨ７〜１１、ＮＡＤＰＨを
基質としたとき（第２図の曲線１１１）、ｐ ｌ（５，
５〜７．５であシ、ＦＡＤｌ、２ｍＭ添加時においては
、ＮＡＤＨを基質とした場合（第１図の曲ａｒ１＞ ｐ
Ｈｓ、ｓ 〜９、ＮＡＤＰＨを基質とした時（第２図の
曲線ｉＶ ）、ｐＨ５，７〜７である。尚、第１図、第
２図共、ＦＡＤ無添加時における酵素活性の最大値を１
００チとした。
場合（第１図の曲＃１）、ｐＨ７〜１１、ＮＡＤＰＨを
基質としたとき（第２図の曲線１１１）、ｐ ｌ（５，
５〜７．５であシ、ＦＡＤｌ、２ｍＭ添加時においては
、ＮＡＤＨを基質とした場合（第１図の曲ａｒ１＞ ｐ
Ｈｓ、ｓ 〜９、ＮＡＤＰＨを基質とした時（第２図の
曲線ｉＶ ）、ｐＨ５，７〜７である。尚、第１図、第
２図共、ＦＡＤ無添加時における酵素活性の最大値を１
００チとした。
■ 作用適温の範囲
第３図、第４図は温度−活性曲線でおシ、第３図はＮ
Ａ Ｄ ）ｉを基質とした場合、第４図はＮＡＤＰＨを
基質とした場合である。いずれも５０°Ｃにおける酵素
活性を１００チとした。
Ａ Ｄ ）ｉを基質とした場合、第４図はＮＡＤＰＨを
基質とした場合である。いずれも５０°Ｃにおける酵素
活性を１００チとした。
ＮＡＤＨを基質とした場合（第３図）及びＮＡＤｐＨを
基質とした場合（第４図）、共に常温よ、！！７５０Ｃ
〜６０Ｃまで温度の上昇とともに活性は増大する。
基質とした場合（第４図）、共に常温よ、！！７５０Ｃ
〜６０Ｃまで温度の上昇とともに活性は増大する。
■ 耐熱性
第５図は酵素の熱安定性を示したもので、曲線Ｖは５０
Ｇ加熱における残存活性を示し、曲線ｖ１は７０ｔｒ加
熱における残存活性を示す。いずれにしても基質はＮＡ
ＤＨである。
Ｇ加熱における残存活性を示し、曲線ｖ１は７０ｔｒ加
熱における残存活性を示す。いずれにしても基質はＮＡ
ＤＨである。
第５図に示す通ル本酵素は５０Ｃ１２時間の加熱に対し
ては全く活性を失わず、７（１，２時間の加熱に対して
も約５５チの活性を保持する熱安定な酵素である。
ては全く活性を失わず、７（１，２時間の加熱に対して
も約５５チの活性を保持する熱安定な酵素である。
■ 分子量
ヒファデクスＧ−２００（ファルマシア社製）によるゲ
ル１１７５過の結果から、分子量は１５〜１９万とＪ１
定される。タンパク質分解酵素の阻害剤を用いない場合
は分子量８〜１ｏ万の酵素が得られる。
ル１１７５過の結果から、分子量は１５〜１９万とＪ１
定される。タンパク質分解酵素の阻害剤を用いない場合
は分子量８〜１ｏ万の酵素が得られる。
■ 力価測定法
ＮＡＩＪＨｉｐ化においては０．２ｍＭＮＡＤＨを含む
５０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，５）を調製する
。この反応液に適当量のＮＡＤ［Ｆ］Ｉ（オキシダーゼ
を加えることによυＮＡＤＨは溶液中の酸素によシ酸化
されてＮＡＤを生成する。この反応をＮ Ａ Ｄ Ｈの
示す３４（１ｍにおける吸光度の減少の時間変化によシ
カ価を測定する。１分間に１マイクロモルのＮＡＤＨを
酸化せしめる酵素活性をもって１単位とする。ＦＡＤ添
加時の力価は反応液に０．５ ｎｌ ＭのＦＡＤを添加
して反応させてめる。酸素以外の物質にょるＮ Ａ Ｊ
） Ｈの酸化反応の力価は通常容器あるいは空気を窒素
に置換した密閉容器中で、帥記の反応液に０．４ ｍ
ＭのジクロロフェノールλソＬ′７丁ノー１１． Ｊ
、Ｊ−’−上１１＋エリシアン化カリウム、あるいはフ
ェリシアン化ナトリウムを添加し、同様の方法によ請求
める。
５０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，５）を調製する
。この反応液に適当量のＮＡＤ［Ｆ］Ｉ（オキシダーゼ
を加えることによυＮＡＤＨは溶液中の酸素によシ酸化
されてＮＡＤを生成する。この反応をＮ Ａ Ｄ Ｈの
示す３４（１ｍにおける吸光度の減少の時間変化によシ
カ価を測定する。１分間に１マイクロモルのＮＡＤＨを
酸化せしめる酵素活性をもって１単位とする。ＦＡＤ添
加時の力価は反応液に０．５ ｎｌ ＭのＦＡＤを添加
して反応させてめる。酸素以外の物質にょるＮ Ａ Ｊ
） Ｈの酸化反応の力価は通常容器あるいは空気を窒素
に置換した密閉容器中で、帥記の反応液に０．４ ｍ
ＭのジクロロフェノールλソＬ′７丁ノー１１． Ｊ
、Ｊ−’−上１１＋エリシアン化カリウム、あるいはフ
ェリシアン化ナトリウムを添加し、同様の方法によ請求
める。
ＮＡＤＰＨの酸化の力価をめる場合は、０，２ｍＭＮＡ
ＤＰＨを含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，
０）の反応液を用い、Ｎ Ａ ｌ） Ｐ Ｉ−１のもつ
３４ Ｑ ｎｍの吸光度によｐＮＡＤＩ（の場合と同様
に行う。
ＤＰＨを含む５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，
０）の反応液を用い、Ｎ Ａ ｌ） Ｐ Ｉ−１のもつ
３４ Ｑ ｎｍの吸光度によｐＮＡＤＩ（の場合と同様
に行う。
次に本発明の実施例を示す。
ポリペプトン１％、イースト・エキス０．５％。
塩化ナトリウム０．５ ％ 、ブドウ糖ｏ、ｉｓからな
るｐＨ７，２に調整した培地１５０−を含む５００ ｍ
ｌ坂ロフラスコにバチルス・ステアロサーモフィルスＩ
ＡＭ１１００４を接種し、６０？？にて振盪培養を行っ
た。約２時間で菌の増殖は定常期に達し、この時点で培
養を終了し集菌した。得られた菌体量は５ｇ／ｌ（湿量
）であった。１体は一２０Ｃで凍結することによシ最低
１年間は安定であった。
るｐＨ７，２に調整した培地１５０−を含む５００ ｍ
ｌ坂ロフラスコにバチルス・ステアロサーモフィルスＩ
ＡＭ１１００４を接種し、６０？？にて振盪培養を行っ
た。約２時間で菌の増殖は定常期に達し、この時点で培
養を終了し集菌した。得られた菌体量は５ｇ／ｌ（湿量
）であった。１体は一２０Ｃで凍結することによシ最低
１年間は安定であった。
一体約２０ｇを２倍量の、０．２ ｍ ＭのＰＭＳＦ及
び５０ｍＭ塩化カリウムを含む５０ｍＭ）リスー塩酸緩
衝液（ｐＨ７）に懸濁し、超音波破砕器にて３分間、９
回の破砕を行い、遠心分離によ多細胞破砕物を除去し、
ＮＡＤ助Ｈオキシダーゼの粗抽出液を得た。この粗抽出
液には８４単位（ＦＡＤ無添加時）のＮＡＤ（ト）Ｈオ
キシダーゼがあった。
び５０ｍＭ塩化カリウムを含む５０ｍＭ）リスー塩酸緩
衝液（ｐＨ７）に懸濁し、超音波破砕器にて３分間、９
回の破砕を行い、遠心分離によ多細胞破砕物を除去し、
ＮＡＤ助Ｈオキシダーゼの粗抽出液を得た。この粗抽出
液には８４単位（ＦＡＤ無添加時）のＮＡＤ（ト）Ｈオ
キシダーゼがあった。
この抽出液に硫安塩析を行い、２０％〜３５チ飽和区分
での沈澱を集め、上記の緩衝液に透析後、あらかじめ同
じ緩衝液で平衡化しであるセファデクスＧ−２００（フ
ァルマシア社製）を用いゲル濾過を行った。最初に溶出
する細胞膜両分に基づ＜ＮＡＤ）Ｉオキシダーゼ画分を
除き、次に溶出するＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼの活性
画分を集めた。
での沈澱を集め、上記の緩衝液に透析後、あらかじめ同
じ緩衝液で平衡化しであるセファデクスＧ−２００（フ
ァルマシア社製）を用いゲル濾過を行った。最初に溶出
する細胞膜両分に基づ＜ＮＡＤ）Ｉオキシダーゼ画分を
除き、次に溶出するＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼの活性
画分を集めた。
次に、この両分を、前記緩衝液にてあらかじめ平衡化し
たＤＥＡＥ−セルロースに吸着後回緩衝液を用い５０ｍ
Ｍ〜０．５Ｍの塩化カリウムの直線濃度勾配によシＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈオキシダーゼを溶出させた。
たＤＥＡＥ−セルロースに吸着後回緩衝液を用い５０ｍ
Ｍ〜０．５Ｍの塩化カリウムの直線濃度勾配によシＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈオキシダーゼを溶出させた。
この酵素液を５１０Ｍのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７
，５）に透析後、同緩衝液であらかじめ平衡化したハイ
ドロキシアパタイトカラムに吸着させ５ｍＭから２００
ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）の直線濃度
勾配にてＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼを溶出させ、この
活性画分を集めることによＪ、２ｍｇのＮ Ａ Ｄ（Ｐ
ｉ Ｈオキシダーゼを得た。
，５）に透析後、同緩衝液であらかじめ平衡化したハイ
ドロキシアパタイトカラムに吸着させ５ｍＭから２００
ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）の直線濃度
勾配にてＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼを溶出させ、この
活性画分を集めることによＪ、２ｍｇのＮ Ａ Ｄ（Ｐ
ｉ Ｈオキシダーゼを得た。
比活性はｌ ＩＩＩ ｇあたり２単位（ＦＡＩ）無添加
時）であった。粗酵素液からの回収率は５％であった。
時）であった。粗酵素液からの回収率は５％であった。
以上説明したように、本発明によれば特に熱的ニ安定な
ＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼを得ることができる。
ＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼを得ることができる。
第１図乃至第５図はいずれも本発明による案１図
ｐＨ
弔２ｍ
第３図
１度（°Ｃ）
弔４図
０１０２０３０４０５０
偏７ｔ （°ｃ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、好熱性細菌バチルス・ステアロサーモフィルスの培
養物から還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
及び還元謔ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸のいずれをも酸化し得るＮＡＤ（ト）Ｈオキシダーゼ
を採取することを特徴とするＮＡＤ［Ｆ］Ｈオキシダー
ゼの製造方法。 ２、特許請求の範囲第１項記載において、前記バチルス
・ステアロサーモフィルスを定常状態まで生育させ、こ
の菌体を超音波破壊して後カラムクロマトグラフィーに
かけることを特徴とするＮＡＩ）（ト）Ｈオキシダーゼ
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16737083A JPS6058069A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Νａｄ（ｐ）ｈオキシダ−ゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16737083A JPS6058069A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Νａｄ（ｐ）ｈオキシダ−ゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6058069A true JPS6058069A (ja) | 1985-04-04 |
Family
ID=15848449
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16737083A Pending JPS6058069A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Νａｄ（ｐ）ｈオキシダ−ゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6058069A (ja) |
-
1983
- 1983-09-09 JP JP16737083A patent/JPS6058069A/ja active Pending
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