JPS6057544B2 - リウマトイド因子の指示方法 - Google Patents

リウマトイド因子の指示方法

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JPS6057544B2
JPS6057544B2 JP52090878A JP9087877A JPS6057544B2 JP S6057544 B2 JPS6057544 B2 JP S6057544B2 JP 52090878 A JP52090878 A JP 52090878A JP 9087877 A JP9087877 A JP 9087877A JP S6057544 B2 JPS6057544 B2 JP S6057544B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫グロブリンクラスIgM、IgGおよびI
gAの少なくとも1種に属する、水性試料中のリウマト
イド因子の指示方法に関する。
抗免疫グロブリンもまた指定されたリウマトイド因子で
あり免疫グロブリンクラスIgM、IgG、IgAに属
するか、あるいは、その他の免疫グロブリンクラスにも
属することができる。
リウマトイド因子は免疫複合体形成または凝集に基づく
構造上の変化を受けた、IgGまたはIgMクラスに属
する免疫グロブリン、あるいはその他の免疫グロブリン
クラスに対して順次指向されることができる。従来指示
されたリウマトイド因子の指示試験方法は例えば血球ま
たはIgGで被覆されたラテックス粒子の凝集に基づい
ている。
これらの試験方法は第一義的に変性されたIgGに対す
るIgM型のリウマトイド因子を指示する。慢性リウマ
チ患者の大部分から得られた試料は前記の試験に対して
陽性の結果を示すが、20〜30%からの試料は陰性の
結果を示す。本発明によれば、水性試料中のリウマトイ
ド因子を指示する方法が提供され、゜該方法は従来既知
の方法で可能であつた方法よりも一層完全な方法ヨで試
料中のすべてのリウマトイド因子すなわち免疫グロブリ
ンクラスIgMに属さずしかもkgMクラスに属する前
記因子の存在下または不在下において所望の程度に指示
されることが従来不可能であつたリウマトイド因子をも
指示する。
本発明による前記の方法は、試料中に存在する任意の補
体因子Clqをそれ自体既知の方法で不活性化させ、次
に前記試料を1種またはそれ以上の分析的に指示可能な
原子または基で標識された可溶性の凝集(Aggreg
ated)免疫グロブリンと反応させて前記リウマトイ
ド因子と標識された凝集免疫グロブリンとの間で凝集物
を生成させ、該凝集物を沈殿させ、その後前記の沈殿を
分離しそして前記の分析的に指示可能な原子または基を
前記沈殿相および(または)溶液中で指示することを特
徴とする。
前記試料中の補体因子Clqは、例えば、前記試料を加
熱するかまたは該試料にジアミノブタンまたはデオキシ
リボ核酸をそれ自体既知の方法で添加することによつて
静止されうる。
前記の可溶性の凝集免疫グロブリンは、例えば、免疫グ
ロブリンの溶液を加熱するかあるいは−ビスージアゾ化
ベンジジンまたはジー(4−アミノーフェニル)−スル
ホンで化学的に処理し〔D.M.Weir編ハンドブッ
ク・オブ・イクスペリメンタル●イムノロジー第2版(
ブラックウェル●サイエンティフィック●パプリケイシ
ヨンズ、オーツクスフオード、197岬)第19.75
頁参照〕、次に可溶性の凝集免疫グ七プリンを単量体性
免疫グロブリンおよび不溶性凝集物が形成される場合に
はその少量からゲル淵過法によつて分離することによつ
て製造されることができる。
好適には上記のζ方法において使用される免疫グロブリ
ンはIgGクラスに属する。前記の免疫グロブリンは凝
集免疫グロブリンの主要部分が前記水性試料中において
依然として可溶性である以上には凝集化されない。凝集
免疫グロブリンの標識に際しては免疫グロブリンの標識
に関して既知の任意の分析的に指示可能な原子または基
が使用されうる。
すなわち、凝集免疫グロブリンの放射性同位元素による
標識は慣用の方法で行なわれ、この目的に対してはTl
25lのような適当な同位元素が選択される〔例えば、
HunterおよびGreenwOOd両氏によるNa
ture第1蛯(196評)、第495頁記載の方法参
照〕。同様に、標識は螢光性基により慣用の方法で、例
えばフルオレスセインイソチオシアネートのようなフル
オレスセイン誘導体の助けで行なわれることもできる。
さらに標識は酵素的に活性な基または目的指示に対して
適当な遊離基を含有する基によつても行なわれうる。リ
ウマトイド因子とと標識された凝集免疫グロブリンとの
間で形成された凝集物を一層完全に沈殿させるために巨
大分子の沈殿に関してそれ自体既知の方法を使用するこ
とができる。
例えば、巨・大分子に到達しうる溶液の液体容積を所謂
立体的反発によつて減少させ、それによつて前記巨大分
子の溶解度を低下させることによつて巨大分子の沈殿を
促進する(例えば、免疫反応に関しては抗体一抗原複合
体の沈殿を促進する)ために使用されうるタイプの水溶
性の無荷電の重合体を添加しうる〔例えば、HelIs
ing氏著ActaChem.Scand.第2罎(1
96師)、第1251頁参照〕。前記の重合体の例とし
ては水溶性ポリエチレングリコール、多糖類、および(
無荷電の)多糖類誘導体例えはテキストランならびに水
溶性セルロース誘導体が包含される。前記重合体は反応
が起こる前に添加するのが好ましいが、反応過程中ある
いは反応後に添加してもよい。重合体の添加量はすべて
の場合において重合体濃度水準が、該反応に関与する各
筬分のいずれか(すなわち、第一義的には標識された凝
集免疫グロブリン)の沈殿が得られる濃度水準のすぐ下
に存在するように選択される。適当な濃度は簡単な試験
により容易に確立されうる。本発明を次の特定の例によ
りさらに説明する。例(A)凝集ヒトー1gG(Agg
IgG)の製造結合ヒト血清から得られるヒトー1gG
(コーン氏のフラクシヨン化によつて得られるフラクシ
ヨン■)(スエーデン、カビ社製)を2%IgG溶液と
して2紛間60℃に加熱した。
こうして得られた凝集1gG(a廚1gG)を単量体性
IgGからエピクロロヒドリンで交叉結合されたデキス
トラン〔スエーデン、フアルマシア●ファイン●ケミカ
ルズ社製セフアデツクス(登録商標名)G−200〕の
粒子を含有する90×1.5C111カラム上のゲル枦
過により分離し、次に0.5MNaCeを含有するPH
7.4の0.1Mトリス(ヒドロキシメチル)−アミノ
メタンーHC′一緩衝液で平衡化した。凝集1gGの濃
度を280r1mにおいて分光光度法により測定した。
(B)標識された凝集1gGの製造 前記(4)により得られた凝集1gG40μfを含有す
る溶液20μeにNalf′500μキュリーおよびP
H7.4の0.5M燐酸ナトリウム緩衝液10Peおよ
び水10μ′中のクロラミンTlOμyを添加した。
5囲2後、ピロ亜硫酸ナトリウム24μfを加えた。
以上の反応混合物をセフアデツクスG一200(エピク
ロロヒドリンで交叉結合されたデキストランからなるゲ
ル粒子)上で分離し、空孔容積を有する第一フラクシヨ
ンを回収した。溶離される標識された凝集1gGを35
00yにおいて5分間遠心分離にかけて自発的に沈殿し
うるIgGを分離した。前記標識されたプロテインを、
PH7.5の0.1M燐酸ナトリウム緩衝液500m1
、0.15MNace500m1、5%(w/v)Na
N3lOmlおよびトウイーン(登録商標名)20(ポ
リオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート)
5m1から製造された緩衝液で約40μYle(0.1
m1中4000■Pm)に希釈した。(C)リウマトイ
ド因子活性の測定患者から血液試料を無菌的に採取しそ
室温で凝固させ、その後3000yにおいて遠心分離し
、血清を回収し、3053−間56℃の温度において加
熱処理した。
前記の血清を次の組成すなわち、PH7.5の0.1M
燐酸ナトリウム緩衝液500TILt10.15MNa
Ce500m1、5%NaN3lOml、5m1のトウ
イーン20およびポリエチレングリコール(分子量60
00)2gの組成を有する溶液で1:40に希釈した。
この希釈血清400Peおよび(前記(B)により得ら
れた)I25lで標識された凝集1gG(4000■P
m)100Peをプラスチック製の管に充填した。前記
管に栓をして内容物を一定の回転条件下に托時間+4℃
においてインキュベートした。次に管の内容物を350
0yにおいて3分間遠心分離した。プラスチック製の栓
を除去して0.5%のトウイーン20を含有する0.9
r!4NaCe溶液2mtを各管に加えた。次に管内容
物を3500gにおいて3分間遠心分離した。上澄み液
を吸引により除去した。この洗浄処理を3回繰り返した
。次に前記の管に栓をして自動ガンマ計数管中に入れた
。慢性関節リウマチ患者から得られた試料から高い測定
値が得られた。
本発明の方法を使用する場合には通常の測定方法と比較
して、測定結果と臨・床的診断とが一層よく一致した。
ある種の慢性関節リウマチのうたがいのある関節疾患を
訴えるが、通常の方法により試験される場合には負の結
果を示した28人の患者を本発明方法によつて試験した
ところ16人の患者の場合にリ・ウマトイド因子の存在
を示す高い測定値が得られた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 水性試料中に存在する任意の補体因子C1qをそれ
    自体既知の方法で不活性化させ、次に前記試料を1種ま
    たはそれ以上の分析的に指示可能な原子または基で標識
    された可溶性の凝集免疫グロブリンと反応させてリウマ
    トイド因子と前記の標識された凝集免疫グロブリンとの
    間で凝集物を生成させ、該凝集物を沈殿させ、次に該沈
    殿を分離しそして前記の分析的に指示可能な原子または
    基を前記沈殿相および(または)溶液中で指示すること
    からなる、免疫グロブリンクラスIgM、IgGおよび
    IgAの少なくとも1種に属する、水性試料中のリウマ
    トイド因子を指示する方法。 2 標識された凝集免疫グロブリンがIgG−クラスに
    属する前記特許請求の範囲第1項記載の方法。
JP52090878A 1976-09-08 1977-07-28 リウマトイド因子の指示方法 Expired JPS6057544B2 (ja)

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