JPS6044287B2 - 制癌剤の製造法 - Google Patents
制癌剤の製造法Info
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- JPS6044287B2 JPS6044287B2 JP50141611A JP14161175A JPS6044287B2 JP S6044287 B2 JPS6044287 B2 JP S6044287B2 JP 50141611 A JP50141611 A JP 50141611A JP 14161175 A JP14161175 A JP 14161175A JP S6044287 B2 JPS6044287 B2 JP S6044287B2
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- manufacturing
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、クロレラを原料として制癌作用を示す有効物
質を製造する方法に関する。
質を製造する方法に関する。
従来、担子菌類、いね、酵母等、天然物からの制癌剤の
製造方法は数多く知られているが、クロレラおよびセネ
デイスムス等の単細胞緑藻類より製造する方法は全く知
られていなかつた。
製造方法は数多く知られているが、クロレラおよびセネ
デイスムス等の単細胞緑藻類より製造する方法は全く知
られていなかつた。
本発明者等は、クロレラから分離精製して得た物質か強
力な制癌作用を有することを見出し、この知見に基づき
本発明を完成した。
力な制癌作用を有することを見出し、この知見に基づき
本発明を完成した。
本発明において用いたクロレラは、クロレラ・レギユラ
リス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｒｅｇｕｌａｒｉｓ）であつ
て、分類上の位置は田宮博、渡辺篤編集「藻類実験法」
１９６時１１５〜１２６ページ記載によれば、緑藻綱（
Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、クロロコック目（Ｃｈ
ｌｏｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ）、オオシスチス科（Ｏｏｃ
ｙｓｔａｃｅａｅ）、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ
）に属する直径５〜１０ミクロンの微細な単細胞緑藻で
ある。
リス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｒｅｇｕｌａｒｉｓ）であつ
て、分類上の位置は田宮博、渡辺篤編集「藻類実験法」
１９６時１１５〜１２６ページ記載によれば、緑藻綱（
Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、クロロコック目（Ｃｈ
ｌｏｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ）、オオシスチス科（Ｏｏｃ
ｙｓｔａｃｅａｅ）、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ
）に属する直径５〜１０ミクロンの微細な単細胞緑藻で
ある。
培養方法については、本出願人の出願による特公昭５０
−１１４６６号公報で開示した如き方法で培養を行なつ
たものである。
−１１４６６号公報で開示した如き方法で培養を行なつ
たものである。
即ち、グルコース、酢酸、尿素、ＫＨ２ＰＯ。、ＭｇＳ
Ｏ。・ ７Ｈ２０、、ＫＣｌ、ＦｅＳＯ。−ｓｏｌ、、
Ａ５−ｓｏｌ等を栄養源として、密閉容器内で好気的条
件の下、無菌的に培養したものである。本発明を実施す
るにあたり、クロレラは収穫直後の新鮮な細胞または、
噴霧乾燥（含水量１０％以下）したものを用いる。この
場合、クロレラはいずれも微細な単独粒子となつている
ため、そのままの状態で抽出処理することが可能である
。本発明による有効物質は、クロレラを熱水抽出し、抽
出液を減圧濃縮した後、アルコールの如き有機溶媒にて
沈澱させ、ゲルロ過、ＴＣＡ（三塩化酢酸）処理により
、低分子物質、蛋白等の不純物除去の処理を行うことに
よつて得られる。更に詳述すれば、クロレラ粉末を熱水
処理したものを遠心分離し、得られた上清を乾燥し、粉
末化する。この場合、減圧濃縮し、凍結乾燥するほうが
有効物質の変性が少ない。乾燥により灰白色・粉末にな
つたものを１００％メタノール中に還流し、着色不純物
を除き、メタノールを除去した粗抽出物をセフアデツク
スによりゲルロ過し、低分子物質を除去する。この場合
、セロファン膜のような半透膜による透析は、精製度が
低くなる。次にこれを減圧濃縮、凍結乾燥し、得られた
灰白色の粉末（フラクシヨンＩ）を１０％ＴＣＡ（王塩
化酢酸）に溶解し、遠心上清にエタノールを加え、白色
沈澱を生ぜしめる。遠心操作により、この白色沈澱を分
離し、これを再び１０％ＴＣＡに溶解後、エタノールを
加えて白色沈澱を生ぜしめ、この白色沈澱を分離した後
、エーテルによる洗浄をくり返し、凍結乾燥して灰白色
粉末（フラクシヨン■）を得る。この灰白色粉末を、更
にセフアデツクスでゲルロ過し、乾燥するこにより目的
とする白色粉末（フラクシヨン■）が得られる。このよ
うにして得られたフラクシヨン１１フラクシヨン■、フ
ラクシヨン■は、いずれも水に易溶、一般有機溶媒に不
溶であり、最終精製物の分析の結果、炭素、水素、酸素
、及び窒素からなり、又呈色反応はモーリツシユ．アン
スロン、トリプトファン硫酸、アニスアルデヒドの諸反
応において陽性を示す物質であつた。本発明の方法によ
り得られる物質の特性は、下記の通りである。
Ｏ。・ ７Ｈ２０、、ＫＣｌ、ＦｅＳＯ。−ｓｏｌ、、
Ａ５−ｓｏｌ等を栄養源として、密閉容器内で好気的条
件の下、無菌的に培養したものである。本発明を実施す
るにあたり、クロレラは収穫直後の新鮮な細胞または、
噴霧乾燥（含水量１０％以下）したものを用いる。この
場合、クロレラはいずれも微細な単独粒子となつている
ため、そのままの状態で抽出処理することが可能である
。本発明による有効物質は、クロレラを熱水抽出し、抽
出液を減圧濃縮した後、アルコールの如き有機溶媒にて
沈澱させ、ゲルロ過、ＴＣＡ（三塩化酢酸）処理により
、低分子物質、蛋白等の不純物除去の処理を行うことに
よつて得られる。更に詳述すれば、クロレラ粉末を熱水
処理したものを遠心分離し、得られた上清を乾燥し、粉
末化する。この場合、減圧濃縮し、凍結乾燥するほうが
有効物質の変性が少ない。乾燥により灰白色・粉末にな
つたものを１００％メタノール中に還流し、着色不純物
を除き、メタノールを除去した粗抽出物をセフアデツク
スによりゲルロ過し、低分子物質を除去する。この場合
、セロファン膜のような半透膜による透析は、精製度が
低くなる。次にこれを減圧濃縮、凍結乾燥し、得られた
灰白色の粉末（フラクシヨンＩ）を１０％ＴＣＡ（王塩
化酢酸）に溶解し、遠心上清にエタノールを加え、白色
沈澱を生ぜしめる。遠心操作により、この白色沈澱を分
離し、これを再び１０％ＴＣＡに溶解後、エタノールを
加えて白色沈澱を生ぜしめ、この白色沈澱を分離した後
、エーテルによる洗浄をくり返し、凍結乾燥して灰白色
粉末（フラクシヨン■）を得る。この灰白色粉末を、更
にセフアデツクスでゲルロ過し、乾燥するこにより目的
とする白色粉末（フラクシヨン■）が得られる。このよ
うにして得られたフラクシヨン１１フラクシヨン■、フ
ラクシヨン■は、いずれも水に易溶、一般有機溶媒に不
溶であり、最終精製物の分析の結果、炭素、水素、酸素
、及び窒素からなり、又呈色反応はモーリツシユ．アン
スロン、トリプトファン硫酸、アニスアルデヒドの諸反
応において陽性を示す物質であつた。本発明の方法によ
り得られる物質の特性は、下記の通りである。
（イ）紫外部吸収スペクトル１％水溶液で紫外部に特性
を認めず。
を認めず。
（ロ）含有糖量、蛋白量及び構成糖組成を第１表に示す
。
。
（ハ）赤外線吸収スペクトル 第１図参照以上、（口）
、（ハ）より本物質がグルコースを主成分とする多糖体
であり、その結合やα−１・４結合であることが判明し
た。
、（ハ）より本物質がグルコースを主成分とする多糖体
であり、その結合やα−１・４結合であることが判明し
た。
尚、糖含量はフェノール硫酸法を用いてグルコース換算
を行なつて求め、構成糖組成はメタノリシスシリル化後
、２０％ＳＥ−５２含有クロモソルダブリユカラムを用
いて、１８０℃にてガスクロマトグラフィーを行つて測
定した。
を行なつて求め、構成糖組成はメタノリシスシリル化後
、２０％ＳＥ−５２含有クロモソルダブリユカラムを用
いて、１８０℃にてガスクロマトグラフィーを行つて測
定した。
本発明により得られた多糖体の制癌作用は、次一に示す
ザルコーマ１８０．固形肉種を用いる方法により確認さ
れた。
ザルコーマ１８０．固形肉種を用いる方法により確認さ
れた。
すなわち体重約２５ｙのマウス（ＤｄＹ系）にザルコー
マ１８０の腹水細胞を腹腔に接種し２週間増殖させた後
、その癌細胞を同系の他のマウスに１匹当り１Ｃｆ′個
の割合で腋下部皮下に移殖し、１０匹を１群とし本物質
投与群と非投与群とに分けて観察を行なつた。投与方法
は、癌細胞接種後２橋間目より１日１回５日間にわたり
計５回、第２表に示す投与量を尾静脈に注射し、４週間
観察した。
マ１８０の腹水細胞を腹腔に接種し２週間増殖させた後
、その癌細胞を同系の他のマウスに１匹当り１Ｃｆ′個
の割合で腋下部皮下に移殖し、１０匹を１群とし本物質
投与群と非投与群とに分けて観察を行なつた。投与方法
は、癌細胞接種後２橋間目より１日１回５日間にわたり
計５回、第２表に示す投与量を尾静脈に注射し、４週間
観察した。
この結果を第２表に示す。この結果から明らかなように
、本発明により得られる物質は確実な制癌作用を示し、
投与開始後、４週間目頃になると大部分の癌細胞は消失
するか、或は小さな結締組塊を残すのみとなる。
、本発明により得られる物質は確実な制癌作用を示し、
投与開始後、４週間目頃になると大部分の癌細胞は消失
するか、或は小さな結締組塊を残すのみとなる。
又、投与群について観察した結果、順調に発育し、食浴
の減退等の副作用は認められなかつた。尚、急性毒性に
ついてＤｄＹ系マウス、雌、体重２０〜２５ｙを使用し
た結果、以下の通りである。経口投与 急性毒性値２
００００ｍ９１ｋ９以上尾静脈注射 〃 ５０
０ｍｇＩｋｇ〃かくして、本発明にる物質は、強力な制
癌作用を有するばかりは、その生産に用いられるクロレ
ラが、大量かつ安定に供給せられるため、工業的生産が
可能である。実施例 クロレラ粉末１ｋｇを８０℃６時間にて熱水抽出し、抽
出液を６０００ｒｐｍ１紛間遠心分離し、得られた上清
を減圧濃縮し、凍結乾燥した。
の減退等の副作用は認められなかつた。尚、急性毒性に
ついてＤｄＹ系マウス、雌、体重２０〜２５ｙを使用し
た結果、以下の通りである。経口投与 急性毒性値２
００００ｍ９１ｋ９以上尾静脈注射 〃 ５０
０ｍｇＩｋｇ〃かくして、本発明にる物質は、強力な制
癌作用を有するばかりは、その生産に用いられるクロレ
ラが、大量かつ安定に供給せられるため、工業的生産が
可能である。実施例 クロレラ粉末１ｋｇを８０℃６時間にて熱水抽出し、抽
出液を６０００ｒｐｍ１紛間遠心分離し、得られた上清
を減圧濃縮し、凍結乾燥した。
この乾燥粉末を７５℃、１００％メタノール中に１時間
還流して着色不純物を除去し、セフアデツクスＧ５Ｏを
通過させ、ゲルロ過を行い、減圧濃縮、凍結乾燥後、灰
白色粉末２８ｙを得た。
還流して着色不純物を除去し、セフアデツクスＧ５Ｏを
通過させ、ゲルロ過を行い、減圧濃縮、凍結乾燥後、灰
白色粉末２８ｙを得た。
この粉末を１０％ＴＣＡに溶解し、その遠心上清にエタ
ノールを加え、生じた沈澱物を再び１０％ＴＣＡに溶解
し、その遠心上清にエタノールを加え、生じた沈澱物を
エーテルにより洗浄し、凍結乾燥して灰白色の粉末を得
た。この粉末をセフアデツクスＧ−７５でゲルロ過した
後、凍結乾燥して目的とする最終精製物の白色粉末４．
５ｙを得た。
ノールを加え、生じた沈澱物を再び１０％ＴＣＡに溶解
し、その遠心上清にエタノールを加え、生じた沈澱物を
エーテルにより洗浄し、凍結乾燥して灰白色の粉末を得
た。この粉末をセフアデツクスＧ−７５でゲルロ過した
後、凍結乾燥して目的とする最終精製物の白色粉末４．
５ｙを得た。
第１図は、本発明目的物の赤外線吸収スペクトルである
。
。
Claims (1)
- １ クロレラ属に属するクロレラを熱水抽出し、該抽出
液につきゲルロ過、三塩化酢酸による除蛋白処理を施し
て、制癌物質を分離精製することを特徴とする制癌剤の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP50141611A JPS6044287B2 (ja) | 1975-11-28 | 1975-11-28 | 制癌剤の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP50141611A JPS6044287B2 (ja) | 1975-11-28 | 1975-11-28 | 制癌剤の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5279016A JPS5279016A (en) | 1977-07-02 |
| JPS6044287B2 true JPS6044287B2 (ja) | 1985-10-02 |
Family
ID=15296037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50141611A Expired JPS6044287B2 (ja) | 1975-11-28 | 1975-11-28 | 制癌剤の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6044287B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5750921A (en) * | 1980-09-12 | 1982-03-25 | Yakult Honsha Co Ltd | Carcinostatic agent for oral administration |
| JP2004505925A (ja) | 2000-08-10 | 2004-02-26 | オーシャン、ニュートリッション、カナダ、リミテッド | 免疫調節特性を示すクロレラ調製物 |
-
1975
- 1975-11-28 JP JP50141611A patent/JPS6044287B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5279016A (en) | 1977-07-02 |
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