JPH05262661A - 薬理活性を有する、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ体の製造方法 - Google Patents
薬理活性を有する、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ体の製造方法Info
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- JPH05262661A JPH05262661A JP3329038A JP32903891A JPH05262661A JP H05262661 A JPH05262661 A JP H05262661A JP 3329038 A JP3329038 A JP 3329038A JP 32903891 A JP32903891 A JP 32903891A JP H05262661 A JPH05262661 A JP H05262661A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 免疫調節活性及び造血回復薬理活性を有す
る、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ体を
提供する。 【構成】 本発明の組合せ体は、特定の培地中で調節し
た自然発酵／抽出処理、続いての調節した化学的−酵素
的作用による加水分解及び濃縮処理及び吸着又は徹底的
な透析による更なる精製及び乾燥処理後に種子又は種子
粉末と不活性な酵母又はそれらの乾燥抽出物から選んだ
組合せから製造される。 【効果】 適当な医薬剤型での多糖−タンパク質組合せ
体はヒト及び動物の医薬に使用される。
る、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ体を
提供する。 【構成】 本発明の組合せ体は、特定の培地中で調節し
た自然発酵／抽出処理、続いての調節した化学的−酵素
的作用による加水分解及び濃縮処理及び吸着又は徹底的
な透析による更なる精製及び乾燥処理後に種子又は種子
粉末と不活性な酵母又はそれらの乾燥抽出物から選んだ
組合せから製造される。 【効果】 適当な医薬剤型での多糖−タンパク質組合せ
体はヒト及び動物の医薬に使用される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は共有結合されていない(n
on-covalent)多糖−タンパク質組合せ体(association)
（以下ではＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡと称する）の製造方法及
びその種々の製薬形でのヒト及び動物用医薬へのそれら
の応用に関する。
on-covalent)多糖−タンパク質組合せ体(association)
（以下ではＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡと称する）の製造方法及
びその種々の製薬形でのヒト及び動物用医薬へのそれら
の応用に関する。
【０００２】
【従来の技術及び課題】科学的及び技術的文献〔チハラ
等のガン研究(Cancer Res.) ３０，２７７６、（１９７
０）：チハラ等のネーチュア(Nature)、２２２，６８
７，（１９８９）：テウカゴシのガン化学療法(Cancer
Chemotherapy) １、２５１（１９７４）：及びカメイ等
のガン化学療法、４、１６６（１９７７）〕は或る菌、
酵母及び細菌の培養から単離した多糖（Ｐｓ）の製造及
び薬理特性を記載している。有用な他の特性のうち特に
重要なのは抗腫瘍、抗ウイルス、免疫調節、低コレステ
リン血症、低脂血症、低血糖症、網内系賦活剤等の活性
である。
等のガン研究(Cancer Res.) ３０，２７７６、（１９７
０）：チハラ等のネーチュア(Nature)、２２２，６８
７，（１９８９）：テウカゴシのガン化学療法(Cancer
Chemotherapy) １、２５１（１９７４）：及びカメイ等
のガン化学療法、４、１６６（１９７７）〕は或る菌、
酵母及び細菌の培養から単離した多糖（Ｐｓ）の製造及
び薬理特性を記載している。有用な他の特性のうち特に
重要なのは抗腫瘍、抗ウイルス、免疫調節、低コレステ
リン血症、低脂血症、低血糖症、網内系賦活剤等の活性
である。
【０００３】本発明に最も関連した直接の従来技術はス
ペイン（ＥＳ）特許第５４３，８５５号であり、該特許
には窒素添加した多糖（Ｎ−Ｐｓ）の製造方法が記載さ
れており、該方法では２種類の相異なる細菌属ザイモモ
ナス(Zymomonas) 及びペジオコックス(Pediococcus) の
２種の純粋な培養物を時間的に分離した連続接種により
発酵を生成する。次いで化学的及び酵素的作用による分
解−加水分解処理、濾過及び薬理活性のあるＮ−Ｐｓ吸
着質(adsorbate) の製造を行なう。
ペイン（ＥＳ）特許第５４３，８５５号であり、該特許
には窒素添加した多糖（Ｎ−Ｐｓ）の製造方法が記載さ
れており、該方法では２種類の相異なる細菌属ザイモモ
ナス(Zymomonas) 及びペジオコックス(Pediococcus) の
２種の純粋な培養物を時間的に分離した連続接種により
発酵を生成する。次いで化学的及び酵素的作用による分
解−加水分解処理、濾過及び薬理活性のあるＮ−Ｐｓ吸
着質(adsorbate) の製造を行なう。
【０００４】既知の従来法は幾つかの欠点があり、純粋
な微生物の培養物の取扱いから生ずる欠点例えば無菌培
地を用いる必要性、汚染、菌株の遺伝保全性の保護並び
に基質の処理に関連して単一の特異的に接種した微生物
の限定された生物学的能力から生ずる欠点を有する。こ
の不都合な結果は基質転換の変異性又は生成物の生合成
の変異性であり、これによって収率再現性の欠如及び／
又は目的生成物の特性の再現性欠如を意味し、次後の分
別処理及び精製処理によっては矯正し得ないものであ
る。
な微生物の培養物の取扱いから生ずる欠点例えば無菌培
地を用いる必要性、汚染、菌株の遺伝保全性の保護並び
に基質の処理に関連して単一の特異的に接種した微生物
の限定された生物学的能力から生ずる欠点を有する。こ
の不都合な結果は基質転換の変異性又は生成物の生合成
の変異性であり、これによって収率再現性の欠如及び／
又は目的生成物の特性の再現性欠如を意味し、次後の分
別処理及び精製処理によっては矯正し得ないものであ
る。
【０００５】本発明は前記の欠点を有しない方法を記載
するものであり、何故ならば本法はHesseltine〔C.W. H
esseltine Ann. Rev. Microbiol 、３７，５７５〜６０
１（１９８３）〕によって提案された定義によりしかも
対応の利点を有する“混合培養”であり、この方法は自
然発酵法より基本的になり即ち純粋な接種材料(inocul
a) を用いずに行ない、該方法の発現は本発明に独特な
特別の培地により生成される生物学的な選択の圧力に本
質的に基づくものでありこれによって同じ天然の微生物
を同じ時間で連続的に常に生長させこれによって発酵標
準規格を定める。更には本発明は前記の培地が相異なる
前駆体の使用を可能とさせ得るように発酵標準及び抽出
特性を生ずるという利点を与える。これらの方法は常に
同じ仕方で処理され、対応の活性な目的生成物を生起す
る。それ故、得られる利点を次の如く要約できる： １．実験室菌株の純粋な接種材料の代りに“混合培養”
における選択圧により具現した天然産微生物を使用でき
る方法が達成され、これに対応して使用した菌株の遺伝
的特徴の汚染又は変性により本法の損失が起る危険を解
消するものである。
するものであり、何故ならば本法はHesseltine〔C.W. H
esseltine Ann. Rev. Microbiol 、３７，５７５〜６０
１（１９８３）〕によって提案された定義によりしかも
対応の利点を有する“混合培養”であり、この方法は自
然発酵法より基本的になり即ち純粋な接種材料(inocul
a) を用いずに行ない、該方法の発現は本発明に独特な
特別の培地により生成される生物学的な選択の圧力に本
質的に基づくものでありこれによって同じ天然の微生物
を同じ時間で連続的に常に生長させこれによって発酵標
準規格を定める。更には本発明は前記の培地が相異なる
前駆体の使用を可能とさせ得るように発酵標準及び抽出
特性を生ずるという利点を与える。これらの方法は常に
同じ仕方で処理され、対応の活性な目的生成物を生起す
る。それ故、得られる利点を次の如く要約できる： １．実験室菌株の純粋な接種材料の代りに“混合培養”
における選択圧により具現した天然産微生物を使用でき
る方法が達成され、これに対応して使用した菌株の遺伝
的特徴の汚染又は変性により本法の損失が起る危険を解
消するものである。
【０００６】２．天然産菌株の混合培養である方法によ
って、Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡとして定義された相異なる目
的生成物の多糖成分とタンパク質成分との両方の相異な
る前駆体を処理できる方法が達成される。本発明の方法
のこの多能性は純粋な接種材料に基づいた方法に対して
は可能ではなく、接種材料の特異な基質のみを有効に変
性し得るものである。即ち、種々の新規な薬理活性のあ
るＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡが製造される。
って、Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡとして定義された相異なる目
的生成物の多糖成分とタンパク質成分との両方の相異な
る前駆体を処理できる方法が達成される。本発明の方法
のこの多能性は純粋な接種材料に基づいた方法に対して
は可能ではなく、接種材料の特異な基質のみを有効に変
性し得るものである。即ち、種々の新規な薬理活性のあ
るＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡが製造される。
【０００７】３．Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡの別の精製法が開
発され、Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡを別のより有効な医薬剤型
で使用できる。
発され、Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡを別のより有効な医薬剤型
で使用できる。
【０００８】Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡはこれらをヒト及び動
物の医薬として施用し得る薬理特性を有する。
物の医薬として施用し得る薬理特性を有する。
【０００９】
【課題を解決するための手段、作用及び効果】本発明の
目的は薬理活性のあるしかも共有結合されていない多糖
−タンパク質組合せ体（Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡ）の製造方
法に関し、次の工程よりなる： ａ）特定容量の脱イオン水に金属酸化物、二価の金属
塩、静菌剤、元素態硫黄及びタンパク質フラクションと
多糖フラクションを生成する前駆体を攪拌下に添加する
ことにより培地を製造する。均質化後に得られる懸濁物
は攪拌することなく３５〜４５℃の範囲の温度に保持さ
れ、これらの条件下では３〜５のｐＨに達するまで維持
される培地の酸性化により特徴付けられる発酵が生成す
る。
目的は薬理活性のあるしかも共有結合されていない多糖
−タンパク質組合せ体（Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡ）の製造方
法に関し、次の工程よりなる： ａ）特定容量の脱イオン水に金属酸化物、二価の金属
塩、静菌剤、元素態硫黄及びタンパク質フラクションと
多糖フラクションを生成する前駆体を攪拌下に添加する
ことにより培地を製造する。均質化後に得られる懸濁物
は攪拌することなく３５〜４５℃の範囲の温度に保持さ
れ、これらの条件下では３〜５のｐＨに達するまで維持
される培地の酸性化により特徴付けられる発酵が生成す
る。
【００１０】ｂ）前もって濾過した発酵培地中に無機又
は有機の強酸（ｐＫａ０．１〜３．０）をカオトロピッ
ク剤と酸性培地中で活性なプロテアーゼとを配合するこ
とによりｐＨ１．０〜２．８で３５〜４５℃の温度で調
節した化学的及び酵素的作用の加水分解を生起して溶液
中の単独巨大分子としてＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡの成分を得
る：及び ｃ）低分子量汚染物を除去することによりＰｓ−Ｐｒ
ＮＣＡを精製し、この精製は ｉ）適当な膜を用いての
透析／徹底的な限外濾過処理により行ないこれによって
真性溶液中に純粋なＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡを与えるか又は
ii）無機のカルシウム塩の存在下に水混和性の有機溶
剤を添加することにより不溶性の吸着質形としての沈澱
により行なう。両方の精製法共種々の医薬剤型の製造に
使用される生成物を与える。
は有機の強酸（ｐＫａ０．１〜３．０）をカオトロピッ
ク剤と酸性培地中で活性なプロテアーゼとを配合するこ
とによりｐＨ１．０〜２．８で３５〜４５℃の温度で調
節した化学的及び酵素的作用の加水分解を生起して溶液
中の単独巨大分子としてＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡの成分を得
る：及び ｃ）低分子量汚染物を除去することによりＰｓ−Ｐｒ
ＮＣＡを精製し、この精製は ｉ）適当な膜を用いての
透析／徹底的な限外濾過処理により行ないこれによって
真性溶液中に純粋なＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡを与えるか又は
ii）無機のカルシウム塩の存在下に水混和性の有機溶
剤を添加することにより不溶性の吸着質形としての沈澱
により行なう。両方の精製法共種々の医薬剤型の製造に
使用される生成物を与える。
【００１１】使用した前駆体物質は目的生成物Ｐｓ−Ｐ
ｒ ＮＣＡの一部を生成する前駆体を生ずる分子を担持
する経験的に選択した生物学的材料である。前記の分子
は組織又は細胞構造の一部を形成し、該構造から前駆体
を放出して抽出され且つ変性される。タンパク質フラク
ション（Ｐｒ）生成前駆体は多数の天然産生成物よりな
り、該生成物としては１種又は数種の種子、穀粒又は堅
果例えばナタネ種子、落花生、ヒマの実、ヒマワリの種
子、大豆、米、これらの脱脂残留混合物又は荒粉から選
ばれる。多糖（Ｐｓ）フラクション生成前駆体は乾燥し
た不活性酵母であり、次の属カンジダ (Candida)属、サ
ッカロミセス(Saccharomyces) 属、ロードトルラ(Rhodo
torula) 属、スポロボロミセス(Sporobolomyces)属、ハ
ンセヌラ(Hansenula) 属、ピチア(Pichia)属又はこれら
の乾燥抽出物から選ばれる。
ｒ ＮＣＡの一部を生成する前駆体を生ずる分子を担持
する経験的に選択した生物学的材料である。前記の分子
は組織又は細胞構造の一部を形成し、該構造から前駆体
を放出して抽出され且つ変性される。タンパク質フラク
ション（Ｐｒ）生成前駆体は多数の天然産生成物よりな
り、該生成物としては１種又は数種の種子、穀粒又は堅
果例えばナタネ種子、落花生、ヒマの実、ヒマワリの種
子、大豆、米、これらの脱脂残留混合物又は荒粉から選
ばれる。多糖（Ｐｓ）フラクション生成前駆体は乾燥し
た不活性酵母であり、次の属カンジダ (Candida)属、サ
ッカロミセス(Saccharomyces) 属、ロードトルラ(Rhodo
torula) 属、スポロボロミセス(Sporobolomyces)属、ハ
ンセヌラ(Hansenula) 属、ピチア(Pichia)属又はこれら
の乾燥抽出物から選ばれる。
【００１２】本発明の目的には、何れかの可能な多糖フ
ラクション前駆体対（以下ではＰＲ−Ｐｓ）／１種又は
それ以上のタンパク質フラクション前駆体（以下ではＰ
Ｒ（ｓ）−Ｐｒ）を前記した前駆体から公平に使用でき
る。各々のＰＲ−Ｐｓ／ＰＲ（ｓ）−Ｐｒ対は培地の条
件により定義した発酵処理及び次後の精製後に対応の薬
理活性のあるＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡを与える。
ラクション前駆体対（以下ではＰＲ−Ｐｓ）／１種又は
それ以上のタンパク質フラクション前駆体（以下ではＰ
Ｒ（ｓ）−Ｐｒ）を前記した前駆体から公平に使用でき
る。各々のＰＲ−Ｐｓ／ＰＲ（ｓ）−Ｐｒ対は培地の条
件により定義した発酵処理及び次後の精製後に対応の薬
理活性のあるＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡを与える。
【００１３】本発明の目的はヒト及び動物の医薬に有用
性のある薬理活性多糖−タンパク質組合せ体の製造に関
する。この目的のため、次の技術構成により特徴付けら
れる方法が記載される： （イ）対応の目的生成物の生物学的活性に基づいて経験
的に選択したＰｓ−ＰｒＮＣＡのタンパク質フラクショ
ン及び多糖フラクションの多数の前駆体であってこれら
から該フラクションを形成する分子が得られる前駆体。
性のある薬理活性多糖−タンパク質組合せ体の製造に関
する。この目的のため、次の技術構成により特徴付けら
れる方法が記載される： （イ）対応の目的生成物の生物学的活性に基づいて経験
的に選択したＰｓ−ＰｒＮＣＡのタンパク質フラクショ
ン及び多糖フラクションの多数の前駆体であってこれら
から該フラクションを形成する分子が得られる前駆体。
【００１４】（ロ）有機成分により天然に得られた微生
物の発酵法を調節し且つＰｓ−ＰｒＮＣＡを形成する分
子を抽出且つ変性する特性により特徴付けられた発酵／
抽出培地。
物の発酵法を調節し且つＰｓ−ＰｒＮＣＡを形成する分
子を抽出且つ変性する特性により特徴付けられた発酵／
抽出培地。
【００１５】（ハ）薬理活性のあるＰｓ−Ｐｒ ＮＣＡ
の一部を形成する成分以外は抽出した全ての巨大分子成
分を加水分解する目的のため選択した調節済みの化学
的、物理的及び酵素的作用のある加水分解条件。
の一部を形成する成分以外は抽出した全ての巨大分子成
分を加水分解する目的のため選択した調節済みの化学
的、物理的及び酵素的作用のある加水分解条件。
【００１６】（ニ）透析／限外濾過によるＰｓ−Ｐｒ
ＮＣＡ精製法及び種々の医薬剤型の製造に使用される生
成物を製造する不溶性吸着質の形成。
ＮＣＡ精製法及び種々の医薬剤型の製造に使用される生
成物を製造する不溶性吸着質の形成。
【００１７】本発明の方法は次の工程によりなることを
特徴としている：第１の工程では、特定容量の脱イオン
水に金属酸化物例えば二酸化マンガンと塩酸又は硫酸か
らのアニオンとのマンガン及びコバルト塩と、既知の静
菌剤例えば樟脳と元素態硫黄と天然形のロジン（７０％
の酸含量）のアビエチン酸群の有機酸とを攪拌下に添加
することにより培地を製造する。均質化後に懸濁物を３
５〜４５℃の温度に保持する。
特徴としている：第１の工程では、特定容量の脱イオン
水に金属酸化物例えば二酸化マンガンと塩酸又は硫酸か
らのアニオンとのマンガン及びコバルト塩と、既知の静
菌剤例えば樟脳と元素態硫黄と天然形のロジン（７０％
の酸含量）のアビエチン酸群の有機酸とを攪拌下に添加
することにより培地を製造する。均質化後に懸濁物を３
５〜４５℃の温度に保持する。
【００１８】第２の工程では、Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡ前駆
体を製造し、培地に添加する。
体を製造し、培地に添加する。
【００１９】第３の工程では、発酵培地を３５〜４５℃
の温度調節下に静止保持する。３〜５のｐＨに達する
と、本法を更に４〜１３日間保持し、その後本法のこの
第３工程は終了したと考えられ、第４の工程を行なう。
第４工程では発酵処理の液体濾液は０．１〜３．０のｐ
Ｋａを有する強酸例えば塩酸、トリクロロ酢酸、トリフ
ルオロ酢酸、燐酸又は硫酸で１〜２．８のｐＨにまで処
理し且つカチトロピック剤及びペプシン、パパイン、ケ
モパパイン及びブロメリンから選択できる１〜３のｐＨ
範囲で活性な分解性(lysing)酵素で処理し、その際３５
〜４５℃の温度で６〜７２時間加水分解反応を行なう。
Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡは前記処理後には溶液中に見出され
る。
の温度調節下に静止保持する。３〜５のｐＨに達する
と、本法を更に４〜１３日間保持し、その後本法のこの
第３工程は終了したと考えられ、第４の工程を行なう。
第４工程では発酵処理の液体濾液は０．１〜３．０のｐ
Ｋａを有する強酸例えば塩酸、トリクロロ酢酸、トリフ
ルオロ酢酸、燐酸又は硫酸で１〜２．８のｐＨにまで処
理し且つカチトロピック剤及びペプシン、パパイン、ケ
モパパイン及びブロメリンから選択できる１〜３のｐＨ
範囲で活性な分解性(lysing)酵素で処理し、その際３５
〜４５℃の温度で６〜７２時間加水分解反応を行なう。
Ｐｓ−Ｐｒ ＮＣＡは前記処理後には溶液中に見出され
る。
【００２０】本法の第５の工程では前述の工程からの溶
液を濃縮することからなる。培地を清浄にする濾過後
に、１０，０００〜５０，０００ダルトンの分子遮断(c
ut-off) を有する膜を通して限外濾過を行なう。この様
にして、溶液の容量は最初の容量の１／３〜１／１８の
最終容量に減少する。
液を濃縮することからなる。培地を清浄にする濾過後
に、１０，０００〜５０，０００ダルトンの分子遮断(c
ut-off) を有する膜を通して限外濾過を行なう。この様
にして、溶液の容量は最初の容量の１／３〜１／１８の
最終容量に減少する。
【００２１】第６の工程では、生成物材料は選択的な吸
着により又は徹底的な透析により且つ次後の蒸発乾固又
は塩の存在下での乾燥により種々の仕方で精製できる：変法（ａ） ：選択的な吸着による精製は塩化カルシウム
を添加し、培地のｐＨを調節し続いてエタノール又はア
セトンの如き水混和性有機溶剤の添加により極性を変化
させることにより行ない、これによって不溶性吸着質の
形でＰｓ−ＰｒＮＣＡを分離する。
着により又は徹底的な透析により且つ次後の蒸発乾固又
は塩の存在下での乾燥により種々の仕方で精製できる：変法（ａ） ：選択的な吸着による精製は塩化カルシウム
を添加し、培地のｐＨを調節し続いてエタノール又はア
セトンの如き水混和性有機溶剤の添加により極性を変化
させることにより行ない、これによって不溶性吸着質の
形でＰｓ−ＰｒＮＣＡを分離する。
【００２２】変法（ｂ）：徹底的な透析による精製は１
０，０００〜５０，０００ダルトンの分子遮断を有する
膜を用いて脱イオン水に対して第５工程からの溶液を透
析濾過することにより行なう。凍結乾燥又は噴霧乾燥に
よる蒸発乾固を行なうと可溶形の目的生成物を得る。
０，０００〜５０，０００ダルトンの分子遮断を有する
膜を用いて脱イオン水に対して第５工程からの溶液を透
析濾過することにより行なう。凍結乾燥又は噴霧乾燥に
よる蒸発乾固を行なうと可溶形の目的生成物を得る。
【００２３】変法（ｃ）：硫酸カルシウム及び燐酸カル
シウムの如き安定化用の無機塩の存在下にマッフル中で
乾燥させると、吸着質と同様な不溶形の生成物が得られ
る。
シウムの如き安定化用の無機塩の存在下にマッフル中で
乾燥させると、吸着質と同様な不溶形の生成物が得られ
る。
【００２４】第７の工程では前述の工程で得られた生成
物を加工して種々の医薬剤型を製造する： ｉ）カプセル、匂い袋又は錠剤は無機塩で安定化した不
溶性形の生成物（変法（ａ）又は（ｃ））から製造され
る。
物を加工して種々の医薬剤型を製造する： ｉ）カプセル、匂い袋又は錠剤は無機塩で安定化した不
溶性形の生成物（変法（ａ）又は（ｃ））から製造され
る。
【００２５】ii）吸収促進剤を有する又は有しない水溶
液、懸濁液、ミクロエマルジョン、座薬、注射液又は局
所製剤は可溶形の生成物（変法（ｂ））から製造され
る。
液、懸濁液、ミクロエマルジョン、座薬、注射液又は局
所製剤は可溶形の生成物（変法（ｂ））から製造され
る。
【００２６】以下の実施例１〜４の方法に記載した如く
製造した生成物は、ヒト及び動物の医薬として治療用途
の基礎となりしかも以下に記載される多数の薬理特性を
示す。
製造した生成物は、ヒト及び動物の医薬として治療用途
の基礎となりしかも以下に記載される多数の薬理特性を
示す。
【００２７】細菌の内生毒素で処置したマイスの血清中
の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）濃度の減少 ２５μｇ／動物の大腸菌(E. coli) 内生毒素血清型０５
５ Ｂ５を静脈内投与する前に実施例１記載の生成物を
連続６日間１５０ｍｇ／ｋｇの投与濃度でバルブ(Balb)
／ｃマイスに経口投与した。実施例１記載の生成物での
処理結果によるとＬＰＳを投与してから９０分後に得ら
れる血清ＴＮＦ濃度の５０％以上の阻止を示す。ザイモ
サン(Zymosan) 又はカルメッテ−グエリン(Calmette-Gu
erin) 桿菌を用いて内生毒素で感作された供試動物でも
同様の結果が得られた。ＴＮＦの測定は細胞ラインＬ９
２９に対する血清の細胞毒性を測定することにより行な
った。
の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）濃度の減少 ２５μｇ／動物の大腸菌(E. coli) 内生毒素血清型０５
５ Ｂ５を静脈内投与する前に実施例１記載の生成物を
連続６日間１５０ｍｇ／ｋｇの投与濃度でバルブ(Balb)
／ｃマイスに経口投与した。実施例１記載の生成物での
処理結果によるとＬＰＳを投与してから９０分後に得ら
れる血清ＴＮＦ濃度の５０％以上の阻止を示す。ザイモ
サン(Zymosan) 又はカルメッテ−グエリン(Calmette-Gu
erin) 桿菌を用いて内生毒素で感作された供試動物でも
同様の結果が得られた。ＴＮＦの測定は細胞ラインＬ９
２９に対する血清の細胞毒性を測定することにより行な
った。
【００２８】トリトン(Triton)で処置した過コレステリ
ン血症のラットにおけるコレステロール濃度の減少 ウイスター種のラットに５００ｍｇ／ｋｇの投与量で食
塩溶液に溶かしたトリトンＷＲ１２３９を腹腔内投与す
ると過コレステリン血症を誘発する。実施例１記載の生
成物をトリトン溶液に配合して５００ｍｇ／ｋｇの投与
量で投与した時には対照群に対して４０％の血清コレス
テロール濃度の低下が得られた。血清コレステロールは
生成物を腹腔内投与からから１８時間後に測定された。
ン血症のラットにおけるコレステロール濃度の減少 ウイスター種のラットに５００ｍｇ／ｋｇの投与量で食
塩溶液に溶かしたトリトンＷＲ１２３９を腹腔内投与す
ると過コレステリン血症を誘発する。実施例１記載の生
成物をトリトン溶液に配合して５００ｍｇ／ｋｇの投与
量で投与した時には対照群に対して４０％の血清コレス
テロール濃度の低下が得られた。血清コレステロールは
生成物を腹腔内投与からから１８時間後に測定された。
【００２９】マイスの塩基(base)コルチコステロン濃度
の増大 実施例１記載の生成物を１５０ｍｇ／ｋｇの投与量でバ
ルブ／ｃマイスに経口投与した時には、生成物を投与し
てから５時間後に放射線免疫分析（ラジオイム／アッセ
イ）により測定すると基底コルチコステロン血清濃度に
関して２００％以上の増大が得られた。
の増大 実施例１記載の生成物を１５０ｍｇ／ｋｇの投与量でバ
ルブ／ｃマイスに経口投与した時には、生成物を投与し
てから５時間後に放射線免疫分析（ラジオイム／アッセ
イ）により測定すると基底コルチコステロン血清濃度に
関して２００％以上の増大が得られた。
【００３０】実施例２記載の生成物を１６００ｍｇ／ｋ
ｇの投薬量で直腸経由で投与した時も同様の結果が得ら
れた。
ｇの投薬量で直腸経由で投与した時も同様の結果が得ら
れた。
【００３１】前駆体細胞（ＣＦＵ−Ｓ及びＣＦＵ−Ｇ
Ｍ）の個数により評価した造血(haema topoietic)活性の
増大 ０．４ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例３記載の生成物をＣ
５７Ｂ１／６ラットに静脈内投与すると脾臓の多能性(p
luripotent) 細胞（ＣＦＵ−Ｓ）の個数の１５０％以上
の増大と顆粒球−マクロファージライン前駆体脾臓細胞
（ＣＦＵ−ＧＭ）の個数の２００％以上の増大とを示
し、これは対照に対して投与してから５日後に測定し
た。
Ｍ）の個数により評価した造血(haema topoietic)活性の
増大 ０．４ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例３記載の生成物をＣ
５７Ｂ１／６ラットに静脈内投与すると脾臓の多能性(p
luripotent) 細胞（ＣＦＵ−Ｓ）の個数の１５０％以上
の増大と顆粒球−マクロファージライン前駆体脾臓細胞
（ＣＦＵ−ＧＭ）の個数の２００％以上の増大とを示
し、これは対照に対して投与してから５日後に測定し
た。
【００３２】致死量以下の放射後に多能性細胞（ＣＦＵ
−Ｓ）の個数増大により評価した脾臓造血活性の増大 ５．５〜６．０Ｇｙの致死量以下の放射後に連続して６
日間１５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例４記載の生成物
をＣ５７Ｂ１／６ラットに経口投与すると、対照に対し
て多能性脾臓細胞（ＣＦＵ−Ｓ）の個数の６０％の増大
を示した。
−Ｓ）の個数増大により評価した脾臓造血活性の増大 ５．５〜６．０Ｇｙの致死量以下の放射後に連続して６
日間１５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例４記載の生成物
をＣ５７Ｂ１／６ラットに経口投与すると、対照に対し
て多能性脾臓細胞（ＣＦＵ−Ｓ）の個数の６０％の増大
を示した。
【００３３】単球症リステリアに感染した免疫抑制マウ
スの生存率の増大 感染前に６日間１５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例４記
載の生成物をスイス(Swiss) マイスに経口投与すると、
シリカで免疫抑制されしかも単球症リステリア(Listeri
a monocytogenes)に感染したラットの保護を示した。免
疫抑制は感染を誘発する１日前に１２０ｍｇ／ｋｇのシ
リカで腹腔内処置することにより誘起した。ラットの保
護は処置したラットにおいても免疫抑制されていないラ
ットの保護率と同様な保護率に達したＬＤ50の増大とし
て明示される。
スの生存率の増大 感染前に６日間１５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で実施例４記
載の生成物をスイス(Swiss) マイスに経口投与すると、
シリカで免疫抑制されしかも単球症リステリア(Listeri
a monocytogenes)に感染したラットの保護を示した。免
疫抑制は感染を誘発する１日前に１２０ｍｇ／ｋｇのシ
リカで腹腔内処置することにより誘起した。ラットの保
護は処置したラットにおいても免疫抑制されていないラ
ットの保護率と同様な保護率に達したＬＤ50の増大とし
て明示される。
【００３４】致死量の放射を受けたマイスの保護効果 致死量の放射線量（７．７５Ｇｙ）を受ける１日前に
０．４ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内投薬量でＣ５７Ｂ１／
６マイスに投与した時実施例３で製造した生成物はその
後１５日後に評価して１００％の生存率を与えた。
０．４ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内投薬量でＣ５７Ｂ１／
６マイスに投与した時実施例３で製造した生成物はその
後１５日後に評価して１００％の生存率を与えた。
【００３５】実施例１〜４に記載した方法を含めて工程
６まで操作して製造した種々の生成物の分析データを表
Ｉに示す。
６まで操作して製造した種々の生成物の分析データを表
Ｉに示す。
【００３６】 （１）デュボイス（Dubois A. 等のAnal. Chem．２８，
３５０，（１９５６））の方法により測定した。
３５０，（１９５６））の方法により測定した。
【００３７】（２）ロウリー（Lowry O.H.等のJ.Biol．
Chem. １９３, ２６５, （１９５１））の方法により測
定した。
Chem. １９３, ２６５, （１９５１））の方法により測
定した。
【００３８】多糖フラクションは１０4 〜３×１０5 の
分子量を有し、１−６及び／又は１−２，１−３又は１
−４結合を有してマンノース（７０〜９０％ｗ／ｗ）、
グルコース（５〜２０％ｗ／ｗ）及びガラクトース（０
〜３％ｗ／ｗ）により生成したヘテロ多糖により生成し
た。タンパク質フラクションは１０4 〜２×１０5 の分
子量を有する。
分子量を有し、１−６及び／又は１−２，１−３又は１
−４結合を有してマンノース（７０〜９０％ｗ／ｗ）、
グルコース（５〜２０％ｗ／ｗ）及びガラクトース（０
〜３％ｗ／ｗ）により生成したヘテロ多糖により生成し
た。タンパク質フラクションは１０4 〜２×１０5 の分
子量を有する。
【００３９】実施例１〜４により製造した共有結合され
ていないＰｓ−Ｐｒ組合せ体の赤外（ＩＲ）スペクトル
（ＫＢｒ）はそれぞれ図１〜４に与えてある。これらの
赤外スペクトルは１０００ｃｍ-1で可変スロット解像度
で０．５％Ｔのスペクトルノイズで６分で４０００〜６
０００ｃｍ-1の範囲で走査しながらパーキン・エルマー
型式８８１の赤外分光光度計中で２％の検体濃度で臭化
カリウム錠剤を用いて得られた。赤外スペクトルはサビ
ツキー／ゴレー (Savitzky／Golay)法により電子的に矯
正して且つ吸光度が自動的に拡大して示してある。
ていないＰｓ−Ｐｒ組合せ体の赤外（ＩＲ）スペクトル
（ＫＢｒ）はそれぞれ図１〜４に与えてある。これらの
赤外スペクトルは１０００ｃｍ-1で可変スロット解像度
で０．５％Ｔのスペクトルノイズで６分で４０００〜６
０００ｃｍ-1の範囲で走査しながらパーキン・エルマー
型式８８１の赤外分光光度計中で２％の検体濃度で臭化
カリウム錠剤を用いて得られた。赤外スペクトルはサビ
ツキー／ゴレー (Savitzky／Golay)法により電子的に矯
正して且つ吸光度が自動的に拡大して示してある。
【００４０】
【実施例】実施例１ 第１工程：培地の製造 ２ｌの反応器に沈降した０．２〜０．４ｇの二酸化マン
ガンと５．２〜７．１ｇの硫酸マンガンと２〜５ｇのロ
ジンと２．４〜４．２ｇの塩化コバルトと４〜６ｇの樟
脳と４．５〜６．５ｇの硫黄とを１，０００ｍｌの脱イ
オン水に添加した。該混合物を３５〜４５℃の温度に保
持した。
ガンと５．２〜７．１ｇの硫酸マンガンと２〜５ｇのロ
ジンと２．４〜４．２ｇの塩化コバルトと４〜６ｇの樟
脳と４．５〜６．５ｇの硫黄とを１，０００ｍｌの脱イ
オン水に添加した。該混合物を３５〜４５℃の温度に保
持した。
【００４１】第２工程：前駆体の製造及び添加 前もって洗浄し水に浸漬させておいた大豆５〜２５ｇを
粉砕し、第１工程で製造した培地に添加した。その後３
〜１２ｇの不活性(dead)の乾燥したカンジダウチリス(C
andida utilis)を添加した。
粉砕し、第１工程で製造した培地に添加した。その後３
〜１２ｇの不活性(dead)の乾燥したカンジダウチリス(C
andida utilis)を添加した。
【００４２】第３工程：発酵−抽出 培地のｐＨが３．０〜５．０となるまで発酵混合物を３
５〜４５℃の温度で静止保持し、該処理を更に４〜１３
日間保持した。
５〜４５℃の温度で静止保持し、該処理を更に４〜１３
日間保持した。
【００４３】第４工程：化学的及び酵素的作用による加
水分解 反応媒質をケイソウ土の１層に通してブフナー漏斗中で
濾過し、８５％の燐酸を濾液に添加して１．０〜２．８
のｐＨに達しさせた。その後に６〜１２ｇの尿素と０．
１〜０．６ｇのペプシンとを添加した。均質化後に該混
合物を３５〜４５℃で６〜７２時間静止保持した。
水分解 反応媒質をケイソウ土の１層に通してブフナー漏斗中で
濾過し、８５％の燐酸を濾液に添加して１．０〜２．８
のｐＨに達しさせた。その後に６〜１２ｇの尿素と０．
１〜０．６ｇのペプシンとを添加した。均質化後に該混
合物を３５〜４５℃で６〜７２時間静止保持した。
【００４４】第５工程：濃縮 第４工程からの反応混合物をケイソウ土の１層に通して
ブフナー漏斗中で濾過し、１０，０００〜５０，０００
ダルトンの分子遮断を有するポリスルホン膜に通して限
外濾過により濃縮した。かくして反応混合物の容量は初
めの容量の約１／５に減少した。
ブフナー漏斗中で濾過し、１０，０００〜５０，０００
ダルトンの分子遮断を有するポリスルホン膜に通して限
外濾過により濃縮した。かくして反応混合物の容量は初
めの容量の約１／５に減少した。
【００４５】第６工程：変法（ａ）：吸着質 １０〜２５ｇの無水塩化カルシウムを第５工程の濃厚物
に添加し、その後ＮａＯＨの１０％溶液の添加によりｐ
Ｈを３．５〜４．４に調節した。この溶液をアセトン上
にそゝぎ、アセトンの最終割合を２５〜４０％（容量／
容量）に調節した。得られた混合物を２４時間放置さ
せ、その後上澄み液の大部分を傾シャ除去した。沈澱物
をブフナー漏斗で濾過し、２５〜４０％（容量／容量）
のアセトン／水混合物で徹底的に洗浄し、通風しながら
炉中で乾燥させた。
に添加し、その後ＮａＯＨの１０％溶液の添加によりｐ
Ｈを３．５〜４．４に調節した。この溶液をアセトン上
にそゝぎ、アセトンの最終割合を２５〜４０％（容量／
容量）に調節した。得られた混合物を２４時間放置さ
せ、その後上澄み液の大部分を傾シャ除去した。沈澱物
をブフナー漏斗で濾過し、２５〜４０％（容量／容量）
のアセトン／水混合物で徹底的に洗浄し、通風しながら
炉中で乾燥させた。
【００４６】第７工程：医薬剤型 第６工程で製造した生成物を、デュボイス法により測定
した全糖濃度が約１．２〜２．０％（ｗ／ｗ）となるま
でＣａＨＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ／ＣａＳＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ２
／１の混合物で希釈した。
した全糖濃度が約１．２〜２．０％（ｗ／ｗ）となるま
でＣａＨＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ／ＣａＳＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ２
／１の混合物で希釈した。
【００４７】実施例２ 第１工程：培地の製造 培地は実施例１に記載したものと同一であった。
【００４８】第２工程：前駆体の製造及び添加 同様に、洗浄し、水に浸漬し且つ粉砕した大豆５〜２５
ｇを使用した。この場合には、多糖供給源は３〜１２ｇ
の不活性な乾燥した麦酒酵母菌(Saccharomyces cerevisi
al) であった。
ｇを使用した。この場合には、多糖供給源は３〜１２ｇ
の不活性な乾燥した麦酒酵母菌(Saccharomyces cerevisi
al) であった。
【００４９】第３工程：発酵−抽出 発酵混合物は実施例１におけるのと同じ仕方で仕上げ
た。
た。
【００５０】第４工程：化学的及び酵素的作用による加
水分解 濾過、酸性化及び加水分解は実施例１に記載した方法と
同一に行なった。
水分解 濾過、酸性化及び加水分解は実施例１に記載した方法と
同一に行なった。
【００５１】第５工程：濃縮 濾過した反応媒質は実施例１に記載したのと同じ条件下
で限外濾過により濃縮した。最終容量は初めの容量の１
／５であった。
で限外濾過により濃縮した。最終容量は初めの容量の１
／５であった。
【００５２】第６工程：変法（ｂ）：可溶性の生成物 第５工程からの濃縮物を、限外濾過及び元の容量まで脱
イオン水の添加による濃縮周期により徹底的な透析にか
けた。透析は透過物の導電度が脱イオン水の導電度値と
同様な値を有するまで進行させた。次いで得られた溶液
を元の容量の１／６〜１／１０の容量となるまで限外濾
過により濃縮し、最後に凍結乾燥した。
イオン水の添加による濃縮周期により徹底的な透析にか
けた。透析は透過物の導電度が脱イオン水の導電度値と
同様な値を有するまで進行させた。次いで得られた溶液
を元の容量の１／６〜１／１０の容量となるまで限外濾
過により濃縮し、最後に凍結乾燥した。
【００５３】第７工程：医薬剤型 スポシア(Supocire)ＢＰ、ラブラフィル(labrafil)型賦
形剤中に０．１２５％（ｗ／ｗ）含有する座薬をこの凍
結乾燥生成物から製造した。
形剤中に０．１２５％（ｗ／ｗ）含有する座薬をこの凍
結乾燥生成物から製造した。
【００５４】実施例３ 第１工程：培地の製造 実施例１及び２に記載した方法と同一であった。
【００５５】第２工程：前駆体の製造及び添加 洗浄し且つ水に浸漬した後に粉砕した大豆２．９〜１
４．６ｇとヒマの実２．１〜１０．４ｇと不活性な乾燥
カンジダ ウチリス(Candida utilis)との混合物を使用
した。
４．６ｇとヒマの実２．１〜１０．４ｇと不活性な乾燥
カンジダ ウチリス(Candida utilis)との混合物を使用
した。
【００５６】第３工程：発酵−抽出 発酵混合物は実施例１と同様に仕上げた。
【００５７】第４工程：化学的及び酵素的作用による加
水分解 実施例１及び２に記載したのと同一であった。
水分解 実施例１及び２に記載したのと同一であった。
【００５８】第５工程：濃縮 実施例１に記載したのと同じ仕方で行ない、溶液は６回
濃縮した。
濃縮した。
【００５９】第６工程、変法（ｂ）：可溶性生成物 実施例２に記載したのと同じであった。
【００６０】第７工程：医薬剤型 第６工程からの生成物を即座に静脈注射用に塩の血清溶
液に溶解させた。
液に溶解させた。
【００６１】実施例４ 第１〜第５工程 実施例３と同じ仕方で元の容量の１／６にまで濃縮し
た。
た。
【００６２】第６工程、変法（ａ）：吸着質 実施例１と同じであった。
【００６３】第７工程：医薬剤型 実施例１に記載した如くであった。
【図１】図１は実施例１により製造した本発明の共有結
合されていないＰｓ−Ｐｒ組合せ体の赤外スペクトル曲
線を表わすグラフである。
合されていないＰｓ−Ｐｒ組合せ体の赤外スペクトル曲
線を表わすグラフである。
【図２】図２は実施例２により製造した本発明のＰｓ−
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
【図３】図３は実施例３により製造した本発明のＰｓ−
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
【図４】図４は実施例４により製造した本発明のＰｓ−
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
Ｐｒ ＮＣＡの赤外スペクトル曲線を表わすグラフであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/78 Ｔ 7180−4Ｃ Ｕ 7180−4Ｃ Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｂ 7432−4Ｂ 21/06 8214−4Ｂ //(Ａ６１Ｋ 31/715 37:02） (Ａ６１Ｋ 35/72 35:78） 7180−4Ｃ (72)発明者 ラフアエル・ド・ラシイ・ボビル スペイン国．28042・マドリツド．カノア. ８ (72)発明者 ヨセ・アントニオ・マツチ・ツデユリ スペイン国．28043・マドリツド．セラ・ マグナ．８ (72)発明者 ジユアン・パブロ・リベル・ラニエリ スペイン国．28014・マドリツド．グーテ ンベルク．８
Claims (12)
- 【請求項１】 次の工程即ち （ａ）油性の種子、穀粒又は堅果から選んだタンパク質
フラクション（Ｐｒ）の１種又は数種の前駆体と、酵母
又はその抽出物から選んだ多糖フラクション（Ｐｓ）の
１種又は数種の前駆体とを３５〜４５℃の温度で互いに
反応させ、その際コバルト及びマンガン化合物と元素態
硫黄とアビエチン酸又はアビエチン酸塩と静菌剤とより
なる、選択的に調節した抽出−発酵用の水性媒質を用い
ながら前記の反応を行なうものとし、得られる混合物は
細菌接種材料を存在させずに静止保持するものとし： （ｂ）しかる後に、ｐＫａ０．１〜２．０を有する酸
と、カオトロピック剤と、ペプシン、パパイン、ケモパ
パイン又はブロメリンよりなる群から選んだ酵素とを配
合しながら、得られるＰｓ−Ｐｒ溶液を１．０〜３．０
のｐＨで且つ３５〜４５℃の温度で選択的に調節した化
学的且つ酵素的作用による加水分解にかけ：しかも （ｃ）反応媒質にプロトン系又は非プロトン系で水混和
性の有機溶剤を添加することにより又は透析−限外濾過
により、Ｐｓ−Ｐｒ吸着質を塩の存在下に濾過済み濃厚
液から沈澱させて純粋なＰｓ−Ｐｒ組合せ体を単離し且
つ種々の医薬製剤を製造することからなる、共有結合さ
れていない新規な多糖−タンパク質（Ｐｓ−Ｐｒ）組合
せ体の製造方法。 - 【請求項２】 次の組成：金属酸化物特に０．２〜０．
４ｇ／ｌの濃度での二酸化マンガン：それぞれ１．９〜
２．６ｇ／ｌ及び４．０〜６．０ｇ／ｌの濃度で塩酸又
は硫酸からのアニオンとのマンガン及びコバルト塩：
４．５〜６．５ｇ／ｌの濃度の元素態硫黄及び２．０〜
５．０ｇ／ｌの濃度で７０％の酸含量を有するロジンの
天然形でのアビエチン酸よりなる群からの有機酸を有す
る抽出−発酵用水性媒質を調製する請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 タンパク質フラクションを生成する天然
産の前駆体生成物としてナタネ種子、落花生、ヒマの
実、ヒマワリの種子、大豆、米、脱脂残渣又はその荒粉
よりなる群からの種子、穀粒又は堅果を選択し、多糖フ
ラクションを生成する前駆体としてカンジダ属、サッカ
ロミセス属、ロードトルラ属、スポロボロミセス属、ハ
ンセヌラ属、ピチア属からの不活性乾燥酵母又はそれら
の乾燥生抽出物を選択する請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 抽出−発酵媒質に添加される前駆体物質
の量は種子について及び荒粉の乾燥重量同等物について
５．０〜２５ｇ／ｌであり、多糖フラクションの前駆体
物質については３．０〜１２．０ｇ／ｌである請求項１
記載の方法。 - 【請求項５】 抽出−発酵媒質は攪拌せずに静止させて
３５〜４５℃の温度で保持され、発酵処理はｐＨを３．
０〜５．０に調節しながら４〜１３日間保持するものと
しこうして共有結合されていない多糖−タンパク質組合
せ体を生成する分子を含有する溶液を得る請求項１記載
の方法。 - 【請求項６】 化学的作用及び酵素的作用による加水分
解は濾過済み媒質に次の成分：ｐＨを１〜２．８とする
ように塩酸、燐酸、硫酸、トリクロロ酢酸又はトリフル
オロメタンスルホン酸よりなる群から選んだ酸：６．０
〜１２．０ｇ／ｌの濃度で尿素よりなるカオトロピック
剤：０．１〜０．６ｇ／ｌの量でパパイン、ケモパパイ
ン、ペプシン又はブロメリンよりなる群から選んだ分解
性酵素を添加することにより行ない：加水分解反応は３
５〜４５℃の温度で６〜７２時間進行するものとする請
求項１記載の方法。 - 【請求項７】 反応液の濃縮は１０，０００〜５０，０
００ダルトンの範囲の分子遮断を有する膜によって行な
う請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 共有結合されていない多糖−タンパク質
組合せ体は不溶性の吸着質形で精製し、その時分解で用
いた酸は燐酸であるものとし、塩化カルシウムを１０．
０〜２５．０ｇ／ｌの最終濃度にまで添加し、水酸化ナ
トリウム溶液を３．５〜４．４のｐＨにまで添加し、エ
タノール又はアセトンの如き水混和性の溶剤を２５〜４
０重量／重量％の最終濃度にまで添加しながら前記の精
製を行なう請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 共有結合されていない多糖−タンパク質
組合せ体は１０，０００〜５０，０００の分子遮断を有
する膜を通して徹底的な透析により精製し、その後に蒸
発乾固、凍結乾燥、噴霧乾燥又は濃縮及び硫酸カルシウ
ム及び燐酸カルシウムの如き塩の存在下での乾燥により
単離する請求項１記載の方法。 - 【請求項１０】 免疫調節活性及び造血回復薬理活性を
有する、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ
体はヒト及び動物用医薬としてそれらを用いるために選
択した医薬製剤形で投与される請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 共有結合されていない多糖−タンパク
質組合せ体は１種又はそれ以上の選択したタンパク質フ
ラクション前駆体と選択した多糖フラクションとの組合
せに応じて製造されて所望の薬理活性のある組合せ体を
得る請求項１記載の方法。 - 【請求項１２】 次の群： カンジダ属−大豆 カンジダ属−ヒマ カンジダ属−大豆：ヒマ サッカロミセス属−大豆 サッカロミセス属−ヒマ サッカロミセス属−ヒマ：大豆 のＰｓ−Ｐｒ組合せ体、それらの吸着質及び塩との混合
物を選択する請求項１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES909003173A ES2027518A6 (es) | 1990-12-18 | 1990-12-18 | Procedimiento para la preparacion de nuevas asociaciones no covalentes polisacarido-proteina con actividad farmacologica. |
| ES9003173 | 1990-12-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05262661A true JPH05262661A (ja) | 1993-10-12 |
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ID=8270013
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP3329038A Pending JPH05262661A (ja) | 1990-12-12 | 1991-12-12 | 薬理活性を有する、共有結合されていない多糖−タンパク質組合せ体の製造方法 |
Country Status (4)
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| JP (1) | JPH05262661A (ja) |
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| ES (1) | ES2027518A6 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06166631A (ja) * | 1991-02-22 | 1994-06-14 | King Jozo Kk | 脱変異原剤 |
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- 1991-07-22 EP EP91112217A patent/EP0491114B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-12 JP JP3329038A patent/JPH05262661A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06166631A (ja) * | 1991-02-22 | 1994-06-14 | King Jozo Kk | 脱変異原剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69107815D1 (de) | 1995-04-06 |
| EP0491114A1 (en) | 1992-06-24 |
| DE69107815T2 (de) | 1996-07-25 |
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