JPS603839B2 - コリンエステラ−ゼの活性測定法 - Google Patents

コリンエステラ−ゼの活性測定法

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JPS603839B2
JPS603839B2 JP56051708A JP5170881A JPS603839B2 JP S603839 B2 JPS603839 B2 JP S603839B2 JP 56051708 A JP56051708 A JP 56051708A JP 5170881 A JP5170881 A JP 5170881A JP S603839 B2 JPS603839 B2 JP S603839B2
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JP
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cholinesterase
measuring
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methoxybenzoylcholine
cholinesterase activity
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義弘 芦原
靖 笠原
正己 杉山
孝博 原田
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Fuji Rebio Kk
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Fuji Rebio Kk
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C12Q1/46—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase involving cholinesterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases

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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はコリンェステラーゼの活性測定法に関し、式を
有するメトキシベンゾィルコリンを合成基質として用い
、メトキシベンゾイルコリン、ｐーメトキシ安息香酸水
酸化酵素およびＮＡＤＨ（ニコチンアミド アデニン
ジヌクレオチド還元型）を含有する溶液を、コリンェス
テラーゼを含有する液体に混合し、コリンェステラーゼ
の作用によってメトキシベンゾィルコリンから生成され
るｐ−メトキシ安息香酸を、ＮＡＤＨの存在下でｐーメ
トキシ安息香酸水酸化酵素の作用によって、４−メトキ
シ−６−ヒドロキシ安息香酸に変化させ、その際に、消
費されるＮＡＤＨの量を、ＮＡＤＨの吸光度の減少を分
光法によって測定することによって求め、その値からコ
リンェステラーゼ活性を測定することからなるものであ
る。
コリンエステラーゼ（Ｃｈｏｉｉｍｅｓｔｅｒａｓｅ）
には、赤血球、神経組織などに存在するコリンェステラ
ーゼ１と、血清、隣豚などに存在するコリンェステラー
ゼロとがあり、コリンエステラーゼはアシル化コリンを
コリンと酸（アシル）に分解する。
生体において低コリソェステラーゼ血症は、肝疾患や貧
血などの疾患にみられ、高ェステラーゼ血症は、ネフロ
ーゼや糖尿病、神経系障害の疾患にみられる。コリンェ
ステラーゼの血中でのレベルを知ることは、上記のよう
な疾患を診断する場合に有益である。従ってコリンェス
テラーゼの活性を測定することは、生理的あるいは臨床
的に有意義であり、従来その測定法としては、‘１｝ア
セチルコリンを基質とし、分解による−の変化を測定す
る高橋、柴田らの方法、ｔ２）ペンゾィルコリンを基質
として用い、遊離するコリンをコリンオキシダーゼによ
って酸化し、これにより遊離する日２０２を、ベンオキ
シダ−ゼによってフェノールおよび４ーアミノアンチピ
リンを反応せしめ、生成するキノンィミン色素を比色定
量する方法などが知られているが、上記｛１）の方法は
複雑な操作を必要とし、【２｝の方法は、血清中に含有
されているいろいろの物質の影響を受けて精度に欠ける
ものである。
本発明は上記のような欠点を排除することを目＊対均と
して開発されたものであって、本発明の方法によれば、
少量の試料を用いて短時間に、試料中に含有されている
コリンェステラーゼの活性を測定することができる。
本発明に用いるｐーメトキシベンゾィルコリンの合成法
を下記に示す。
ｐーメトキシ安息香酸５のこ塩化チオニル２５夕を加え
、７０℃において６時間加熱還流した後、減圧下で加熱
して未反応の塩化チオニルを除き、残澄をベンゼンに溶
かして濃縮した後、冷却し、生じた沈澱を再度ベンゼン
を用いて再結晶してｐーメトキシベンゾイルクロライド
を得る。
このｐーメトキシベンゾイルクロライド１０モルに塩化
コリン１０モルを加え、減圧下で１２０℃において５時
間加熱し、残澄をシリカゲルクロマトグラフィーによっ
て分離、精製し、ｐーメトキシベンゾィルコリンを得る
。下記に、実施例として、血清中に含有されているコリ
ンェステラーゼの活性を測定した場合を示す。
ｐ−メトキシベンゾイルコリン２肌Ｍ、ｐーメトキシ安
息香酸水酸化酵素３Ｕ、ＮＡＤＨＯ．２ｍＭ、リン酸１
００のＭを含有する溶液（ｐＨ７．５）１肌に対して、
血清５ムそを加え、温度３７０において、波長３４瓜仇
の光を用い、吸光度の減少を測定した。
測定はタイムラグを５秒とし、反応時間を５分とした。
コリンェステラーゼの活性単位Ｕは下記式によって求め
ることができる。Ｕ＝３４血のの光の吸光度微少Ｘ分冊
素数ｗＸ机の蕗長Ｘ織洲８ｈｍご＝６．２２×１ぴ ３０回測定を行なった結果は、次に示す通りであつた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するメトキシベンゾイルコリン、ｐ−メトキシ安息
    香酸水酸化酵素およびＮＡＤＨ（ニチコンアミドアデニ
    ンジヌクレオチド還元型）を含有する溶液を、コリンエ
    ステラーゼを含有する液体に混合し、消費されるＮＡＤ
    Ｈの吸光度を分光法によって測定する段階を含むことを
    特徴とするコリンエステラーゼの活性測定法。
JP56051708A 1981-04-08 1981-04-08 コリンエステラ−ゼの活性測定法 Expired JPS603839B2 (ja)

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