JPS603837B2 - コリンエステラ−ゼの活性測定法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はコリンェステラーゼの活性測定法に関し、式
−を有するヒドロキシベンゾィルコリンを合成基質
として用い、ヒドロキシベンゾイルコリン、ｏ−ヒドロ
キシ安息香酸水酸化酵素およびＮＡＤＨ（ニコチンアミ
ド アデニン ジヌクレオチド還元型）を含有する溶液
を、コリンェステラーゼを含有する液体に混合し、コリ
ンェステラーゼの作用によってヒドロキシベンゾィルコ
リンから生成されるｏ−ヒドロキシ安息香酸を、ＮＡＤ
Ｈの存在下でｏーヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作用
によって、カテコールに変化させ、その際に、消費され
るＮＡＤＨの量を、ＮＡＤＨの吸光度の減少を分光法に
よって測定することによって求め、その値からコリンェ
ステラーゼ活性を測定することからなるものである。

コリンエステラーゼ（Ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ）
には、赤血球、神経組織などに存在するコリンェステラ
ーゼ１と、血清、膝脳などに存在するコリンェステラー
ゼロとがあり、コリンエステラーゼはアシル化コリンを
コリンと酸（アシル）に分解する。

生体において低コリンェステラーゼ血症は、肝疾患や貧
血などの疾患にみられ、高ェステラーゼ血症は、ネフロ
ーゼや糖尿病、神経系障害の疾患にみられる。コリンェ
ステラーゼの血中でのレベルを知ることは、上記のよう
な疾患を診断する場合に有益である。従ってコリンェス
テラーゼの活性を測定することは、生理的あるいは臨床
的に有意義であり、従来その測定法としては、‘１｝ア
セチルコリンを基質とし、分解によるｐＨの変化を測定
する高橋、柴田らの方法、‘２｝ペンゾイルコリンを基
質として用い、遊離するコリンをコリンオキシダーゼに
よって酸化し、これにより遊離する日２０２を、ベルオ
キシダーゼによってフェノールおよび４ーアミノアンチ
ピリンと反応せしめ、生成するキノンイミン色素を比色
定量する方法などが知られているが、上記‘１）の方法
は複雑な操作を必要とし、｛２）の方法は、血清中に含
有されているいろいろの物質の影響を受けて精度に欠け
るものである。

本発明は上記のような欠点を排除することを目的として
開発されたものであって、本発明の方法によれば、少量
の試料を用いて短時間に、試料中に含有されているコリ
ンェステラーゼの活性を測定することができる。

本発明に用いるｏ−ヒドロキシベンゾィルコリ＊ンの合
成法を下記に示す。

ｏーヒドロキシ安息香酸ナトリウム０．１モルに塩化チ
オニル０．３モルを加え、水浴上で３時間加熱還流した
後、減圧下で、禾反応の塩化チオニルおよび二酸化ィオ
ウを蟹去し、エーテルを加えて炉過する。

炉液を減圧下で濃縮し、これに塩化コリン０．１モルを
加え、１０ぴ０に３時間加熱し、この反応液をシリカゲ
ル クロマトグラフィーによって分離、精製し、ｏーヒ
ドロキシベンゾィルコリンを得る。下記に、実施例とし
て、血清中に含有されているコリンェステラーゼの活性
を測定した場合を示す。

ｏ−ヒドロキシベンゾイルコリン３のＭ、ｏーヒドロキ
シ安息香酸水酸化酵素３Ｕ、ＮＡＤＨＯ．２ｍＭ、リン
酸１００ｍＭを含有する溶液（ｐＨ７．５）１の【に対
して、血清５ム〆を加え、温度３で０において、波長３
４血のの光を用い、吸光度の減少を測定した。

測定はタイムラグを５秒とし、反応時間を５分とした。
コリンェステラーゼの活性単位Ｕは下記式によって求め
ることができる。Ｕ＝柳机の激励度の減少Ｘ好感係数（
才物志職×総×ＩぴＳｈｉｎご＝６．２２×１ぴ ３Ｍ団測定を行なった結果は、次に示す通りであつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するヒドロキシベンゾイルコリン、ｏ−ヒドロキシ
   安息香酸水酸化酵素およびＮＡＤＨ（ニコチンアミドア
   デニンジヌクレオチド還元型）を含有する溶液を、コリ
   ンエステラーゼを含有する液体に混合し、消費されるＮ
   ＡＤＨの吸光度を分光法によつて測定する段階を含むこ
   とを特徴とするコリンエステラーゼの活性測定法。