JPS6037994A - ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 - Google Patents
ペプチド又はペプチド誘導体の合成法Info
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- JPS6037994A JPS6037994A JP58146057A JP14605783A JPS6037994A JP S6037994 A JPS6037994 A JP S6037994A JP 58146057 A JP58146057 A JP 58146057A JP 14605783 A JP14605783 A JP 14605783A JP S6037994 A JPS6037994 A JP S6037994A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- synthetase
- aminoacyl
- dye
- trna synthetase
- Prior art date
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- Granted
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ペプチド又はペプチド誘導体の新規な合成法
に関するものである。
に関するものである。
近年、ペプチドに種々の生理活性が存在することが相つ
いで知られ、治療１診断などの医薬品としての重要性並
びに呈味物質としての重要性がまずまず増大しつつある
。それに伴い、ペプチド合成法の開発も活発である。現
在までに知られているペプチド合成法の主なものとして
は１例えば。
いで知られ、治療１診断などの医薬品としての重要性並
びに呈味物質としての重要性がまずまず増大しつつある
。それに伴い、ペプチド合成法の開発も活発である。現
在までに知られているペプチド合成法の主なものとして
は１例えば。
ファルマシア、レビュー、３号、２７〜４７頁（１９８
０年）にまとめられているように、化学合成法と酵素法
の二つに大別することができる。その化学合成法として
は、アジド法、混合酸無水物法、活性エステル法、カル
ボジイミド法でアミノ酸を逐次的に縮合する方法とフラ
グメントで縮合させる方法などが代表的なものであるが
、これらどの化学合成法においても、ラセミ化及び副反
応が起きやすく反応時間が長く、末端アミン基を保護基
Ｇこて反応前にあらかじめ保護しておく必要があるなど
種々の問題がある。フラグメント縮合法の場合。
０年）にまとめられているように、化学合成法と酵素法
の二つに大別することができる。その化学合成法として
は、アジド法、混合酸無水物法、活性エステル法、カル
ボジイミド法でアミノ酸を逐次的に縮合する方法とフラ
グメントで縮合させる方法などが代表的なものであるが
、これらどの化学合成法においても、ラセミ化及び副反
応が起きやすく反応時間が長く、末端アミン基を保護基
Ｇこて反応前にあらかじめ保護しておく必要があるなど
種々の問題がある。フラグメント縮合法の場合。
特にラセミ化が起こりやずいという重大な欠点を有する
ものである。
ものである。
一方、ラセミ化の生起を極力避ける方法として。
プロテアーゼを用いる酵素法が提案されてし）るがこの
方法においてもやはり２反応時間が長く、末端アミノ基
を保護基にて保護しておく必要があるなど操作の煩雑さ
を改良するには至らなかった。
方法においてもやはり２反応時間が長く、末端アミノ基
を保護基にて保護しておく必要があるなど操作の煩雑さ
を改良するには至らなかった。
さらに、このプロテアーゼを用いる酵素法では。
用いる酵素が本来ペプチド分解活性を有してし）るため
、生じたペプチドが合成と併行して分解され。
、生じたペプチドが合成と併行して分解され。
しばしば目的のペプチドが得られないという重大な欠点
を示すものであった。特に、オリゴペプチドの合成を通
用した場合には、一部のアミノ酸が欠落した目的外のペ
プチドが得られる重大な欠点が指摘されている〔ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー誌、２５６
巻、 １３０１頁（１９８１年〕。また、酵素法による
ペプチド合成法としては、プロテア−セ法の他に、特定
なアミノ酸配列を有する単一ペプチドの合成のみを司る
特殊な酵素を用いる方法が知られている。この種の酵素
としては２例えば、グルタミン＃／システィン／グリシ
ンの配列であるトリペプチドを合成するグルタチオン合
成酵素（特開昭５４−１２２７９３号公報）やデカペプ
チドであるグラミシジンＳを合成するグラミシジンＳ合
成酵素（現代化学１９７４年１２月号１２頁）などが報
告されている。しかし、これらの酵素は特殊な酵素であ
って、この酵素によって合成しうるペプチドは、限定さ
れた一種のみのペプチドであり、目的とする任意なペプ
チドを合成することができない。このため、この方法は
一般的なペプチド合成時とはなり得ないのが現状である
。
を示すものであった。特に、オリゴペプチドの合成を通
用した場合には、一部のアミノ酸が欠落した目的外のペ
プチドが得られる重大な欠点が指摘されている〔ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー誌、２５６
巻、 １３０１頁（１９８１年〕。また、酵素法による
ペプチド合成法としては、プロテア−セ法の他に、特定
なアミノ酸配列を有する単一ペプチドの合成のみを司る
特殊な酵素を用いる方法が知られている。この種の酵素
としては２例えば、グルタミン＃／システィン／グリシ
ンの配列であるトリペプチドを合成するグルタチオン合
成酵素（特開昭５４−１２２７９３号公報）やデカペプ
チドであるグラミシジンＳを合成するグラミシジンＳ合
成酵素（現代化学１９７４年１２月号１２頁）などが報
告されている。しかし、これらの酵素は特殊な酵素であ
って、この酵素によって合成しうるペプチドは、限定さ
れた一種のみのペプチドであり、目的とする任意なペプ
チドを合成することができない。このため、この方法は
一般的なペプチド合成時とはなり得ないのが現状である
。
本発明者らは、ペプチドの有用性に鑑み、上記のような
欠点、特にラセミ化、副反応の生起５反応の煩雑さなど
の原因となり、同時に経済性を損なう保護基の必要性を
解決し、汎用性のある新規なペプチド合成法を提供する
ことを目的として鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸を核
酸の一種であるｔＲＮＡに結合させる作用を有する酵素
で、従来全くベプチ１゛結合を形成する作用が知られて
いなかったアミノアシル−ｔＲＮ八ンへテタ−ゼに驚く
べきことに、ペプチド合成能があることを見い出し。
欠点、特にラセミ化、副反応の生起５反応の煩雑さなど
の原因となり、同時に経済性を損なう保護基の必要性を
解決し、汎用性のある新規なペプチド合成法を提供する
ことを目的として鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸を核
酸の一種であるｔＲＮＡに結合させる作用を有する酵素
で、従来全くベプチ１゛結合を形成する作用が知られて
いなかったアミノアシル−ｔＲＮ八ンへテタ−ゼに驚く
べきことに、ペプチド合成能があることを見い出し。
この酵素を縮合剤として用いると、前記の目的がすべて
達成されることを見い出し、先に特許出願した（特願昭
５７−１０３３６号）。しかし、この方法は縮合剤とし
て用いるアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを高純度
に精製しており、このため操作が煩雑で所望のアミノア
シル−１ＲＮＡシンテターゼを得るに長時間を要し、ア
ミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ活性が精製中にたび
たび失われる例があり。
達成されることを見い出し、先に特許出願した（特願昭
５７−１０３３６号）。しかし、この方法は縮合剤とし
て用いるアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを高純度
に精製しており、このため操作が煩雑で所望のアミノア
シル−１ＲＮＡシンテターゼを得るに長時間を要し、ア
ミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ活性が精製中にたび
たび失われる例があり。
このため、酵素の収率の低下をきたし易い傾向があった
。これを改良するため、アミノアシル−１ＲＮＡシンテ
ターゼを２例えば微生物など自然界に広くめたとしても
、取得したアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの収率
が低い傾向にあり、上記の点を改善することばできなか
った。さらに、操作の煩雑性を改良すべく９例えば微生
物細胞などをホモジナイザーやダイノミルなどで破砕し
たままの粗抽出液を用いることを検討してみたが、この
方法ではペプチド合成時に混在する他の酵素などの影響
のためか、たびたび副反応が認められて目的ペプチドの
収率を低下せしめる傾向にあり。
。これを改良するため、アミノアシル−１ＲＮＡシンテ
ターゼを２例えば微生物など自然界に広くめたとしても
、取得したアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの収率
が低い傾向にあり、上記の点を改善することばできなか
った。さらに、操作の煩雑性を改良すべく９例えば微生
物細胞などをホモジナイザーやダイノミルなどで破砕し
たままの粗抽出液を用いることを検討してみたが、この
方法ではペプチド合成時に混在する他の酵素などの影響
のためか、たびたび副反応が認められて目的ペプチドの
収率を低下せしめる傾向にあり。
かつ反応後の目的物の単離精製が十分ではなかった。
そこで９本発明者らは上記の点を改良するためにさらに
鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことに粗抽出液を染料
を官能基として有する水不溶性の担体で処理して得たア
ミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液を用
いると、上記の点をすべて解決し、ペプチド又はペプチ
ド誘導体を高収量で合成できることを見い出し１本発明
を完成した。
鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことに粗抽出液を染料
を官能基として有する水不溶性の担体で処理して得たア
ミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液を用
いると、上記の点をすべて解決し、ペプチド又はペプチ
ド誘導体を高収量で合成できることを見い出し１本発明
を完成した。
すなわち１本発明はアミノ酸からペプチド又はペプチド
誘導体を合成するに際し、生物細胞を破砕して得た粗抽
出液を染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理
してアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素
液を得、得られた粗酵素液を反応系に加えて合成するこ
とを特徴とするペプチド又はペプチド誘導体の合成法で
ある。
誘導体を合成するに際し、生物細胞を破砕して得た粗抽
出液を染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理
してアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素
液を得、得られた粗酵素液を反応系に加えて合成するこ
とを特徴とするペプチド又はペプチド誘導体の合成法で
ある。
本発明に使用されるアミノアシル−１ＲＮＡシンテター
ゼは、酵素分類６．１．１に属し１次式アミノ酸＋ Ａ
ＴＰ＋ ｔＲＮ＾→アミノアシル−ｔＲＮ八→へＡＭＰ
＋ピロリン酸 の反応を触媒する酵素であり１例えば、ウサギ。
ゼは、酵素分類６．１．１に属し１次式アミノ酸＋ Ａ
ＴＰ＋ ｔＲＮ＾→アミノアシル−ｔＲＮ八→へＡＭＰ
＋ピロリン酸 の反応を触媒する酵素であり１例えば、ウサギ。
ウマ、ウシ、ラット、ニワトリ１ヘビなどの動物組織よ
り得られるもの、イネ、イモ、トマトなどの植物組織よ
り得られるもの、カビ１酵母、キノコ、細菌、放射菌な
どの微生物及び藻類より得られるものなどがあげら゛れ
る。なかでも、酵素の取得が容易であることから、微生
物より得られるものが好ましく、さらに酵素の安定性か
らバチルス・ステアロサーモフィルス、サーマス・サー
モフィルス、サーマス・フラバス、クロストリジウム・
サーモアセチカム、サーマス・マグアティカスなどの耐
熱性細菌より得られるアミノアシル−１ＲＮＡシンテタ
ーゼが最適である。
り得られるもの、イネ、イモ、トマトなどの植物組織よ
り得られるもの、カビ１酵母、キノコ、細菌、放射菌な
どの微生物及び藻類より得られるものなどがあげら゛れ
る。なかでも、酵素の取得が容易であることから、微生
物より得られるものが好ましく、さらに酵素の安定性か
らバチルス・ステアロサーモフィルス、サーマス・サー
モフィルス、サーマス・フラバス、クロストリジウム・
サーモアセチカム、サーマス・マグアティカスなどの耐
熱性細菌より得られるアミノアシル−１ＲＮＡシンテタ
ーゼが最適である。
これら各種のアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼは１
種々のα−アミノ酸に特異性のあるものとしては、チロ
シル−１ＲＮ八シンテターゼが、またロイシンに特異性
のあるものとしては、ロイシル−ｔＲＮＡシンテターゼ
が、さらにバリンに特異性のあるものとしては、パリル
−ｔＲＮへシンテターゼ、その他イソロシルーｔＲＮ＾
シンテターゼ、フェニルアラニル−ｔＲＮＡシンテター
ゼ、アラニル−ｔＲＮＡシンテターゼ、グルタミル− ギニル−ｔＲＮ＾シンテターゼ、メチオニル−ｔＲＮ＾
シンテターゼ、ヒスチジル−ｔＲＮ八シへテターゼ、リ
ジル−ＬＲＩＩ八シンへターゼ、トレオニルーｔＲＮへ
シンテターゼ、セリル−ｔＲＮＡシンテターゼなどが具
体例としてあげられる。
種々のα−アミノ酸に特異性のあるものとしては、チロ
シル−１ＲＮ八シンテターゼが、またロイシンに特異性
のあるものとしては、ロイシル−ｔＲＮＡシンテターゼ
が、さらにバリンに特異性のあるものとしては、パリル
−ｔＲＮへシンテターゼ、その他イソロシルーｔＲＮ＾
シンテターゼ、フェニルアラニル−ｔＲＮＡシンテター
ゼ、アラニル−ｔＲＮＡシンテターゼ、グルタミル− ギニル−ｔＲＮ＾シンテターゼ、メチオニル−ｔＲＮ＾
シンテターゼ、ヒスチジル−ｔＲＮ八シへテターゼ、リ
ジル−ＬＲＩＩ八シンへターゼ、トレオニルーｔＲＮへ
シンテターゼ、セリル−ｔＲＮＡシンテターゼなどが具
体例としてあげられる。
本発明においては，これらのアミノアシル−ｔＲＮＡシ
ンテターゼを含む粗酵素液を得るには，例えば、上記組
織又は細胞をホモジナイザーやダイノミルなどで破砕し
た後，得られた粗抽出液を染料を官能基として有する水
不溶性の担体で処理することが必要である。
ンテターゼを含む粗酵素液を得るには，例えば、上記組
織又は細胞をホモジナイザーやダイノミルなどで破砕し
た後，得られた粗抽出液を染料を官能基として有する水
不溶性の担体で処理することが必要である。
この染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理す
るには，例えばｐＨ３ないしｐ ＋１１３ 、好ましく
はｐｉｅないしｐｌｌｌｏ．最適にはｐ１１７ないしｐ
１１９で。
るには，例えばｐＨ３ないしｐ ＋１１３ 、好ましく
はｐｉｅないしｐｌｌｌｏ．最適にはｐ１１７ないしｐ
１１９で。
濃度が１ｍＭないし１ ｍＭ，好ましくは２０ｍＭなＩ
，） Ｌ １００ｍＭの緩衝液で平衡化した染料を官能
基として有する水不溶性の担体に，上記粗抽出液を加え
る（）１ツチ法）か、上記樹脂をカラムにつめ．そのカ
ラムに粗抽出液を通液（カラム法）して行え番ボよＧ）
。
，） Ｌ １００ｍＭの緩衝液で平衡化した染料を官能
基として有する水不溶性の担体に，上記粗抽出液を加え
る（）１ツチ法）か、上記樹脂をカラムにつめ．そのカ
ラムに粗抽出液を通液（カラム法）して行え番ボよＧ）
。
その時の処理温度としては，アミノアシル−ＬＲＮＡシ
ンテターゼの活性を維持する温度で行えばよＧ１が５一
般には０℃から７０°Ｃが好ましく，特に０°Ｃから３
０℃が最適である。また、その時に用しする緩ｉＭｉ液
としては，アミノアシル−ｔＲＮ八シへテターゼが溶解
し，所望のｐｌ＋が得られるものであればし）力１なる
ものでもよい。そのようなものとして、例えば、トリス
塩酸緩衝液，ヘベス緩衝液，トリエタノールアミン緩衝
液，イミダゾール緩衝液，リン酸緩衝液などがあげられ
る。さらに、酵素の失活を防ぐことを主目的として．処
理用緩衝液にメルカプトエタノール、ジチオスレイトー
ルなどのスルフヒドリル化剤，フェニルメチルスルボニ
ルフルオリドなどのタンパク質分解酵素阻害剤，エチレ
ンジアミン四酢酸ナトリウムなどのキレート剤を添加し
てもよい。前記バッチ法で処理するには。
ンテターゼの活性を維持する温度で行えばよＧ１が５一
般には０℃から７０°Ｃが好ましく，特に０°Ｃから３
０℃が最適である。また、その時に用しする緩ｉＭｉ液
としては，アミノアシル−ｔＲＮ八シへテターゼが溶解
し，所望のｐｌ＋が得られるものであればし）力１なる
ものでもよい。そのようなものとして、例えば、トリス
塩酸緩衝液，ヘベス緩衝液，トリエタノールアミン緩衝
液，イミダゾール緩衝液，リン酸緩衝液などがあげられ
る。さらに、酵素の失活を防ぐことを主目的として．処
理用緩衝液にメルカプトエタノール、ジチオスレイトー
ルなどのスルフヒドリル化剤，フェニルメチルスルボニ
ルフルオリドなどのタンパク質分解酵素阻害剤，エチレ
ンジアミン四酢酸ナトリウムなどのキレート剤を添加し
てもよい。前記バッチ法で処理するには。
例えば、粗抽出液を上記緩衝液で平衡化した染料を官能
基として有する水不溶性の担体を加え．５分以上，好ま
しくは３０分以上攪拌し，さらにしばらく放置した後，
同じ緩衝液で熔出せしめるか。
基として有する水不溶性の担体を加え．５分以上，好ま
しくは３０分以上攪拌し，さらにしばらく放置した後，
同じ緩衝液で熔出せしめるか。
ｐＨの異なる上記緩衝液．？Ｈｖ変化を持たせた．ある
いは塩を含む緩衝液で吸着した酵素を溶出せしめること
により，アミノアシル−ｔＲＮ八シへテターゼを含む粗
酵素液を得ることができる。また、カラム法で処理する
には，例えばカラム内で所望の酵素の吸着・脱着１榮作
を行えばよく．原理的にばハツチ法と同じである。処理
する時間としては。
いは塩を含む緩衝液で吸着した酵素を溶出せしめること
により，アミノアシル−ｔＲＮ八シへテターゼを含む粗
酵素液を得ることができる。また、カラム法で処理する
には，例えばカラム内で所望の酵素の吸着・脱着１榮作
を行えばよく．原理的にばハツチ法と同じである。処理
する時間としては。
できるだけ迅速であることが好ましく．カラム内の線速
度がＩＣＩｌｌ−１１−１以上で行うのがよい。さらに
、分！能を考慮してカラム内の線速度としては。
度がＩＣＩｌｌ−１１−１以上で行うのがよい。さらに
、分！能を考慮してカラム内の線速度としては。
最大６０ｃｍ−ｈ−’であることがより好ましｌ，Ｍ。
このように処理して得られたアミノアシル−ｔＲＮＡシ
ンテターゼを含む粗酵素液を，そのまま用いてもよいし
９これをさらに凍結乾燥して得た固形状のものも用いら
れる。
ンテターゼを含む粗酵素液を，そのまま用いてもよいし
９これをさらに凍結乾燥して得た固形状のものも用いら
れる。
このように処理して得たアミノアシル−ｔＲＮ＾シンテ
ターゼを含む粗酵素液は，さらにＤＥＡＤ！樹脂処理を
施してペプチド合成に使用してもよい。
ターゼを含む粗酵素液は，さらにＤＥＡＤ！樹脂処理を
施してペプチド合成に使用してもよい。
本発明における染料を官能基として有する水不溶性の担
体とは．染料と水不溶性の高分子とを反応させた水に不
溶性の化合物をいい，この水不溶性の高分子としては，
例えば、セルロース、デキストラン、アガロース、デン
プン等の多糖類の誘導体，ポリ酢酸セルロース、ポリビ
ニルアルコールの誘導体，ポリスチレン、ポリプロピレ
ン、ポリエチレン、ポリビニルクロライド、ポリ （メ
チルメタクリル酸）エステル、ポリブテン、ポリペンテ
ン、ポリビニリデンクロライド、ポリアクリロニトリル
、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸。
体とは．染料と水不溶性の高分子とを反応させた水に不
溶性の化合物をいい，この水不溶性の高分子としては，
例えば、セルロース、デキストラン、アガロース、デン
プン等の多糖類の誘導体，ポリ酢酸セルロース、ポリビ
ニルアルコールの誘導体，ポリスチレン、ポリプロピレ
ン、ポリエチレン、ポリビニルクロライド、ポリ （メ
チルメタクリル酸）エステル、ポリブテン、ポリペンテ
ン、ポリビニリデンクロライド、ポリアクリロニトリル
、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸。
ポリアミノスチレン、ポリブタジェン、ポリイソプレン
、ポリマレイン酸モノエステル、架橋ポリアクリルアミ
ド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルアミン、ポリ
（ジアルキルアミノエチルメタクリル酸エステル）、ポ
リ （ジアルキルアミノメヂルスヂレン）、ポリ （ビ
ニルピリジン）、゛ポリ（ビニルピロリドン）、ポリア
クリル酸無水物。
、ポリマレイン酸モノエステル、架橋ポリアクリルアミ
ド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルアミン、ポリ
（ジアルキルアミノエチルメタクリル酸エステル）、ポ
リ （ジアルキルアミノメヂルスヂレン）、ポリ （ビ
ニルピリジン）、゛ポリ（ビニルピロリドン）、ポリア
クリル酸無水物。
ポリメタクリル酸無水物、ポリマレイン酸無水物。
ポリメタクリ口ニトリル、ポリ （［リフルオロエチレ
ン）、ポリ （テトラフルオロエチレン）、ポリ （ジ
ビニルベンゼン）、ポリ （α−メチルスチレン）、ポ
リ （Ｎ−ビニルアミン）、ポリ （テトラメチレンｊ
゛リコールジビニルエーテル）、ポリビニルスルボン、
ポリビニルスルボキシド、ポリアクロレ・イン、ポリメ
チルビニルケトンなどの不飽和炭素を含む単量体からな
る重合体、ポリフェニレンオキシド、ポリメチレンオキ
シド、ポリエチレンオキシド、ポリテトラメチレンオキ
シドなどのポリエーテル類、ポリアラニン、ポリフェニ
ルアラニンなどのポリペプチド類、ナイロン−３゜ナイ
ロン−４，ナイロン−５，ナイロン−６、ナイロン−７
、ナイロン−１１，ナイロン−１２，ナイロン−６，６
，ナイロン−６，１０，ポリ（ｍ−フェニレン−イソフ
タラミド、ポリ （ｐ−フェニレン−テレフタラミド）
などのポリアミド、テレフクル酸、イソフタル酸、アジ
ピン酸、マレイン酸、フマル酸、ｌ−リメリノト酸等の
ポリカルボン酸と。
ン）、ポリ （テトラフルオロエチレン）、ポリ （ジ
ビニルベンゼン）、ポリ （α−メチルスチレン）、ポ
リ （Ｎ−ビニルアミン）、ポリ （テトラメチレンｊ
゛リコールジビニルエーテル）、ポリビニルスルボン、
ポリビニルスルボキシド、ポリアクロレ・イン、ポリメ
チルビニルケトンなどの不飽和炭素を含む単量体からな
る重合体、ポリフェニレンオキシド、ポリメチレンオキ
シド、ポリエチレンオキシド、ポリテトラメチレンオキ
シドなどのポリエーテル類、ポリアラニン、ポリフェニ
ルアラニンなどのポリペプチド類、ナイロン−３゜ナイ
ロン−４，ナイロン−５，ナイロン−６、ナイロン−７
、ナイロン−１１，ナイロン−１２，ナイロン−６，６
，ナイロン−６，１０，ポリ（ｍ−フェニレン−イソフ
タラミド、ポリ （ｐ−フェニレン−テレフタラミド）
などのポリアミド、テレフクル酸、イソフタル酸、アジ
ピン酸、マレイン酸、フマル酸、ｌ−リメリノト酸等の
ポリカルボン酸と。
エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレン
グリコール、ペンタエリスリト−ル、ビスフェノールＡ
などのポリオールとから誘導されるポリエステル類、グ
リコール類、乳酸、ヒドロキシピリバリン酸等から誘導
されるポリエステル。
グリコール、ペンタエリスリト−ル、ビスフェノールＡ
などのポリオールとから誘導されるポリエステル類、グ
リコール類、乳酸、ヒドロキシピリバリン酸等から誘導
されるポリエステル。
ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサ
ン、メチルビニルボリシロキザン、シアノアルキルメチ
ルボリシロキザン、フルオロアルキルメチルポリシロキ
サンなどのシリコンゴム、１〜リエンジイソシアナート
、キシレンジイソシアナート、フェニレンジイワシアナ
−１，エチレンジイソシアナートジフエニルメタンジイ
ソシアナート、トルエントリイソシアナートなどのポリ
イソシアナートと、ポリエチレングリコール、ポリプロ
ピレングリコール、両末端に０１１基を有するポリエス
テルなどのポリオールとから誘導されるポリウレタン類
、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂１キシレンーボル
ムアルデヒ目Ｌ１脂、尿素−ホルムアルデヒド樹脂、メ
ラミン−ホルムアルデヒド樹脂などのホルムアルデヒド
樹脂、ボリイミ巳ポリヘンツイミダゾール、ポリチアゾ
ールなどの４員環を含むポリマー、ポリエーテル−１・
、ポリスルボンなどの合成ポリマー類及びガラス、アス
ベスト、クレイ、マイカ、ヒドロキシルアパタイト活性
炭、シリカゲル、アルミナなどの無機物の誘導体及びポ
リフォスフアゼンのような合成無機ポリマ〜などがあげ
られる。特にこれらの中でも。
ン、メチルビニルボリシロキザン、シアノアルキルメチ
ルボリシロキザン、フルオロアルキルメチルポリシロキ
サンなどのシリコンゴム、１〜リエンジイソシアナート
、キシレンジイソシアナート、フェニレンジイワシアナ
−１，エチレンジイソシアナートジフエニルメタンジイ
ソシアナート、トルエントリイソシアナートなどのポリ
イソシアナートと、ポリエチレングリコール、ポリプロ
ピレングリコール、両末端に０１１基を有するポリエス
テルなどのポリオールとから誘導されるポリウレタン類
、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂１キシレンーボル
ムアルデヒ目Ｌ１脂、尿素−ホルムアルデヒド樹脂、メ
ラミン−ホルムアルデヒド樹脂などのホルムアルデヒド
樹脂、ボリイミ巳ポリヘンツイミダゾール、ポリチアゾ
ールなどの４員環を含むポリマー、ポリエーテル−１・
、ポリスルボンなどの合成ポリマー類及びガラス、アス
ベスト、クレイ、マイカ、ヒドロキシルアパタイト活性
炭、シリカゲル、アルミナなどの無機物の誘導体及びポ
リフォスフアゼンのような合成無機ポリマ〜などがあげ
られる。特にこれらの中でも。
セルロース、デキストラン５アガロース、デンプンなど
の多糖類の誘導体が好ましい。
の多糖類の誘導体が好ましい。
また、染料としては１例えばカラーインデックス番吋（
以下Ｃ，１，Ｎｏという。） １０３０５ （Ａｃ１ｄ
Ｄｙｅ） 。
以下Ｃ，１，Ｎｏという。） １０３０５ （Ａｃ１ｄ
Ｄｙｅ） 。
Ｃ，１，Ｎｏ、１０４１５ （Ｃ，、！、Δｃｉｄ Ｂ
ｒｏｗｎ １０３ ） ＋ Ｃ，１，Ｎ。
ｒｏｗｎ １０３ ） ＋ Ｃ，１，Ｎ。
１０４４０ （Ａｃｉｄ Ｄｙｅ）などのニトロ系染料
、 Ｃ，１，Ｎ。
、 Ｃ，１，Ｎ。
１１００５ （Ｃ，１，Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｏｒａｎｇ
ｅ ３） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、１１０４５（Ｂａｓｉｃ
Ｄｙｅ ） 、 Ｃ，１，１１に１．２０２６０ （
Ｃ，Ｔ、＾Ｃ４ｄ Ｂｒｏｉｙｎ１４３ ） 、 Ｃ，
１ｍ、 ３５４３５ （Ｃ，１，Ｄｉｒｅｃｔ Ｂｌａ
ｃｋ ２２）などのアゾ系染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５
０２４５ （Ｂａｓｉｃ Ｄｙｅ ） 。
ｅ ３） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、１１０４５（Ｂａｓｉｃ
Ｄｙｅ ） 、 Ｃ，１，１１に１．２０２６０ （
Ｃ，Ｔ、＾Ｃ４ｄ Ｂｒｏｉｙｎ１４３ ） 、 Ｃ，
１ｍ、 ３５４３５ （Ｃ，１，Ｄｉｒｅｃｔ Ｂｌａ
ｃｋ ２２）などのアゾ系染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５
０２４５ （Ｂａｓｉｃ Ｄｙｅ ） 。
Ｃ，１，Ｎｏ、 ５６３０５ （Ｃ，Ｔ、 Ｂａ５ｉｃ
Ｂｌｕｅ １４）などのアジン系染料、 Ｃ，１，Ｎ
ｏ、 ５３１７０ （Ｃ，ｒ、 ５ｕｌｐｈｕｒ Ｇｒ
ｅｅｎ ２１ ） 。
Ｂｌｕｅ １４）などのアジン系染料、 Ｃ，１，Ｎ
ｏ、 ５３１７０ （Ｃ，ｒ、 ５ｕｌｐｈｕｒ Ｇｒ
ｅｅｎ ２１ ） 。
Ｃ，ＩＪｂ、 ５３２１８ （Ｃ，［、５ｕｌｐｈｕｒ
１ｌｒｏｉｖｎ ６２ ） 、 Ｃ，ｌ。
１ｌｒｏｉｖｎ ６２ ） 、 Ｃ，ｌ。
Ｎｉｌ ５３２４７ （Ｃ，１，５ｏｌｕｂｉｌｉｓｅ
ｄ Ｓｕ！ｐＨｕｒ ロｒｏｗｎ ５）などのイオウ系
染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５ｆ３０１１ （Ｃ，１，Ｖ
ａｔＧｒｅｅｎ２３） 、 Ｃ，Ｉ、Ｎｏ、 ５６０５
０ （Ｃ，１，Ｖａｔ Ｒｅｄ ２３ ）などのアミノ
ケトン系染料、 Ｃ，［、Ｎｏ、 ５７０００ （Ｍｏ
ｒｄａｎｔ Ｄｙｅ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５７０
０５ （Ｍａｒｄａｔ＋Ｌ Ｉ）ｙｅ ） 。
ｄ Ｓｕ！ｐＨｕｒ ロｒｏｗｎ ５）などのイオウ系
染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５ｆ３０１１ （Ｃ，１，Ｖ
ａｔＧｒｅｅｎ２３） 、 Ｃ，Ｉ、Ｎｏ、 ５６０５
０ （Ｃ，１，Ｖａｔ Ｒｅｄ ２３ ）などのアミノ
ケトン系染料、 Ｃ，［、Ｎｏ、 ５７０００ （Ｍｏ
ｒｄａｎｔ Ｄｙｅ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ５７０
０５ （Ｍａｒｄａｔ＋Ｌ Ｉ）ｙｅ ） 。
Ｃ，１，Ｎｂ、 ５７０１１ （Ｍｏｒｄａｎｔ Ｄｙ
ｅ ）などのヒドロキシケトン系染料、 Ｃ，ＩＪｋ＋
、 ５８０１０ （Ｍｏｒｄａｎｔ Ｄｙｅ ） 。
ｅ ）などのヒドロキシケトン系染料、 Ｃ，ＩＪｋ＋
、 ５８０１０ （Ｍｏｒｄａｎｔ Ｄｙｅ ） 。
Ｃ，１，Ｎｏ、５８０８０ （八ｃｉｄ Ｄｙｅ） 、
Ｃ，１，Ｎｏ ５８６１０ （Ｃ，Ｉ。
Ｃ，１，Ｎｏ ５８６１０ （Ｃ，Ｉ。
Ｍｏｒｄａｎｔ Ｂｌｕｅ ２３） ＋ Ｃ，１，Ｎｏ
、 ６０７００ （Ｃ，１，Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｏｒａ
ｎｇｅ １１ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ６１２０５
（Ｃ，１，ＲｅａｃｔｉｖｅＢｌｕｅ ４） ＋ Ｃ，
１，ＮＯ，６１２１１（Ｃ，１，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｂ
ｌｕｅ ２） 。
、 ６０７００ （Ｃ，１，Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｏｒａ
ｎｇｅ １１ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ６１２０５
（Ｃ，１，ＲｅａｃｔｉｖｅＢｌｕｅ ４） ＋ Ｃ，
１，ＮＯ，６１２１１（Ｃ，１，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｂ
ｌｕｅ ２） 。
Ｃ，１，ＩＩｋ１６１５０５ （Ｄｉｓｐｅｒｓｅ １
ｌｌｕｅ ３ ） 、 Ｃ，１，ｔ＋ｉｏ、 ６４５０
０（Ｃ，Ｔ、 Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｂｌｕｅ １） 、
Ｃ，１，Ｎｏ、 ６７１１０ （Ｃ，Ｉ。
ｌｌｕｅ ３ ） 、 Ｃ，１，ｔ＋ｉｏ、 ６４５０
０（Ｃ，Ｔ、 Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｂｌｕｅ １） 、
Ｃ，１，Ｎｏ、 ６７１１０ （Ｃ，Ｉ。
Ｖａｔ Ｂｌｕｅ ３０） 、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ７１
１２５ （Ｖａｔ Ｄｙｅ ）などノアントラキノン系
染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ７３０２５ （Ｖａｔ Ｄｙ
ｅ ）Ｃ，１，Ｎｏ、 ７３０８０ （Ｖａｔ Ｄｙｅ
） 、 Ｃ，Ｔ、Ｎｏ、 ７３８３５ （Ｖａｔｌ）
ｙｅ）などのインジゴ系染料、 Ｃ，Ｉ、Ｎｏ、 ７４
１００ （Ｃ，Ｉ。
１２５ （Ｖａｔ Ｄｙｅ ）などノアントラキノン系
染料、 Ｃ，１，Ｎｏ、 ７３０２５ （Ｖａｔ Ｄｙ
ｅ ）Ｃ，１，Ｎｏ、 ７３０８０ （Ｖａｔ Ｄｙｅ
） 、 Ｃ，Ｔ、Ｎｏ、 ７３８３５ （Ｖａｔｌ）
ｙｅ）などのインジゴ系染料、 Ｃ，Ｉ、Ｎｏ、 ７４
１００ （Ｃ，Ｉ。
Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｂｌｕｅ １６） 、 Ｃ，１，Ｎｏ
、 ７４２２０ （Ｃ，１，Ａｃ１ｄＢｌｕｅ ２４９
） ＋ Ｃ，１，Ｎｏ、 ７４２５５ （Ｃ，１，Ｐｉ
ｇｍｅｎｔ Ｇｒｅｅｎ３７）などのフタロシアニン系
染料、 Ｃ，１，Ｎ［Ｌ ７５１３０（Ｃ，１，Ｎａｔ
ｕｒａｌ Ｙｅｌｌｏｗ ２６ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ
、 ７５１６０（Ｃ，１，Ｎａｔｕｒａｌ Ｙｅｌｌｏ
ｗ ３８） 、 Ｃ０１，Ｎｏ、 ７５３１０ （Ｃ，
！。
、 ７４２２０ （Ｃ，１，Ａｃ１ｄＢｌｕｅ ２４９
） ＋ Ｃ，１，Ｎｏ、 ７４２５５ （Ｃ，１，Ｐｉ
ｇｍｅｎｔ Ｇｒｅｅｎ３７）などのフタロシアニン系
染料、 Ｃ，１，Ｎ［Ｌ ７５１３０（Ｃ，１，Ｎａｔ
ｕｒａｌ Ｙｅｌｌｏｗ ２６ ） 、 Ｃ，１，Ｎｏ
、 ７５１６０（Ｃ，１，Ｎａｔｕｒａｌ Ｙｅｌｌｏ
ｗ ３８） 、 Ｃ０１，Ｎｏ、 ７５３１０ （Ｃ，
！。
Ｎａｔｕｒａｌ Ｏｒａｎｇｅ ２ ） ＩＣ，１，Ｎ
ｏ、 ７５６００ （Ｆｕｋｕｇｅｔｉｎ ）などの天
然染料があげられ、これらの中でもアゾ系染料、ア１〜
ラキノン系染料、フタＩコシアニン系染料が好ましい。
ｏ、 ７５６００ （Ｆｕｋｕｇｅｔｉｎ ）などの天
然染料があげられ、これらの中でもアゾ系染料、ア１〜
ラキノン系染料、フタＩコシアニン系染料が好ましい。
この染料を官能基として有する水不溶性の担体の好まし
い具体例として２例えば、市販のマードレックスゲルブ
ルーＡ（アントラキノン系染料。
い具体例として２例えば、市販のマードレックスゲルブ
ルーＡ（アントラキノン系染料。
アミコン社製）、マートレソクスゲルレソドＡ（アゾ系
染料、アミコン社製）、マードレックスゲルブルーＢ（
フタロシアニン系染料、アミコン社製）、アフィ・ゲル
ブルー（アン１〜ラキノン系染料、バイオランド社製）
、ブルーセファロースＣ１、−６Ｂ（アントラキノン系
染料、ファルマシア社製）があげられ、これらを用いる
と、所望のアミノアシル−ｔＲＮＡシンテクーゼを含む
粗酵素液が迅速かつ高収率で得られ、この粗酵素液を用
いると高収量でペプチド又はペプチド誘導体を合成する
ことができて好ましい。
染料、アミコン社製）、マードレックスゲルブルーＢ（
フタロシアニン系染料、アミコン社製）、アフィ・ゲル
ブルー（アン１〜ラキノン系染料、バイオランド社製）
、ブルーセファロースＣ１、−６Ｂ（アントラキノン系
染料、ファルマシア社製）があげられ、これらを用いる
と、所望のアミノアシル−ｔＲＮＡシンテクーゼを含む
粗酵素液が迅速かつ高収率で得られ、この粗酵素液を用
いると高収量でペプチド又はペプチド誘導体を合成する
ことができて好ましい。
次に、染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理
して得たアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗
酵素液を用いたペプチド又はペプチド誘導体の合成方法
を具体的に説明する。
して得たアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗
酵素液を用いたペプチド又はペプチド誘導体の合成方法
を具体的に説明する。
本発明によれば、アミノ酸とアミノ酸から誘導されるア
ミノ酸誘導体とをアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ
を含む粗酵素液の存在下で反応させることによってペプ
チド又はペプチド誘導体を合成することができる。さら
に本発明によれば、あらかじめアミノ酸とアミノアシル
−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液とを混合させて
混合物を得９次いで得られた混合物とアミノ酸誘導体及
び親水性有機溶媒とを反応さ・けることによってペプチ
ド又はペプチド誘導体を合成することができる。このア
ミノアシル−１ＲＮＡシンテクーセを含む）１１酵素液
とあらかじめ混合させるのに好ましく用いられるアミノ
酸としては１例えばチロシン。アラニン。
ミノ酸誘導体とをアミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ
を含む粗酵素液の存在下で反応させることによってペプ
チド又はペプチド誘導体を合成することができる。さら
に本発明によれば、あらかじめアミノ酸とアミノアシル
−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液とを混合させて
混合物を得９次いで得られた混合物とアミノ酸誘導体及
び親水性有機溶媒とを反応さ・けることによってペプチ
ド又はペプチド誘導体を合成することができる。このア
ミノアシル−１ＲＮＡシンテクーセを含む）１１酵素液
とあらかじめ混合させるのに好ましく用いられるアミノ
酸としては１例えばチロシン。アラニン。
ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニ
ン、リジン、セリン、バリンなとのα−アミノ酸があげ
られ、Ｌ体、Ｄ体のいずれでもよい。
ン、リジン、セリン、バリンなとのα−アミノ酸があげ
られ、Ｌ体、Ｄ体のいずれでもよい。
また、上記反応に好ましく用いられるアミノ酸誘導体と
しては２例えばグリシン、アラニン、ロイシン、イソロ
イシン、フェニルアラニン、グリタミン酸、グルタミン
、イルロイシン、システィン。
しては２例えばグリシン、アラニン、ロイシン、イソロ
イシン、フェニルアラニン、グリタミン酸、グルタミン
、イルロイシン、システィン。
チロシン、アルギニン、バリン、リジン、ヒスチジン、
アスパラギン酸、アスパラギン、メチオニン、トリプト
ファン、トレオニンなとのα−アミノ酸、β−アラニン
、β〜ルアミノイソ酸なとのβ−アミノ酸、クレアチン
などの含窒素γ−アミノ酸、ピペリジン酸などのＴ−ア
ミノ酸、ε−アミノカブＩコン酸などのε〜アミノ酸な
どの各種アミノ酸のエステル、チオエステル、ア＜＋：
、 ヒ１：ロキサミＦなどがあげられるが、アミノ基が
：＆ 翔ｆの形であるアミノ酸誘導体であれば、上記例
示化合物に限定されるものではない。そのエステルとし
ては９例えばメチル、エチル、プロピル、シクロヘキシ
ル、フェニル、ヘンシルなどの単純な炭化水素系のエス
テルから、ｔＲＮＡの３’ −Ｏ１＋で上記アミノ酸が
エステル化したものまで１種々のエステルを用いること
ができる。また、アミドとしては。
アスパラギン酸、アスパラギン、メチオニン、トリプト
ファン、トレオニンなとのα−アミノ酸、β−アラニン
、β〜ルアミノイソ酸なとのβ−アミノ酸、クレアチン
などの含窒素γ−アミノ酸、ピペリジン酸などのＴ−ア
ミノ酸、ε−アミノカブＩコン酸などのε〜アミノ酸な
どの各種アミノ酸のエステル、チオエステル、ア＜＋：
、 ヒ１：ロキサミＦなどがあげられるが、アミノ基が
：＆ 翔ｆの形であるアミノ酸誘導体であれば、上記例
示化合物に限定されるものではない。そのエステルとし
ては９例えばメチル、エチル、プロピル、シクロヘキシ
ル、フェニル、ヘンシルなどの単純な炭化水素系のエス
テルから、ｔＲＮＡの３’ −Ｏ１＋で上記アミノ酸が
エステル化したものまで１種々のエステルを用いること
ができる。また、アミドとしては。
遊離のアミドの他１例えば異種あるいは同種のアミノ酸
がアミド結合したオリゴペプチ１やポリペプチドを用い
ることもできる。このオリゴペプチドやポリペプチドが
さらにエステル、千オニステル、ヒドロキザミド、エー
テル化したものを用いることも可能である。また、上記
アミノ酸誘導体は水溶液の状態で用いるか、あるいは固
体のままで用いてもよい。
がアミド結合したオリゴペプチ１やポリペプチドを用い
ることもできる。このオリゴペプチドやポリペプチドが
さらにエステル、千オニステル、ヒドロキザミド、エー
テル化したものを用いることも可能である。また、上記
アミノ酸誘導体は水溶液の状態で用いるか、あるいは固
体のままで用いてもよい。
次に５混合物を得るには１例えばｐｌ（５ないしｐＨ１
１、好ましくはｐｌ＋６ないしｐＨｌＯ，最適にはｐＨ
７ないしｐＨＩＯのＢｆｉ液中、アデノシン三リン酸又
はデオキシアデノシン三リン酸存在下に、アミノ酸とア
ミノアシル〜ｔＲＮＡシンテタエゼを含む粗酵素液と混
合することによって行えばよい。そのときの混合の温度
としては、酵素活性を維持する観点がら一般に０℃から
７０℃が好ましく、最適にば０℃から３０℃で行われる
。また、そのときに用いられる緩衝液としては、アミノ
酸、アデノシン三すン酸、デオキシアデノシン三リン酸
及びアミノアシル−ｔｌ？ＮＡシンテターゼを含む１１
■酵素液が熔解し。
１、好ましくはｐｌ＋６ないしｐＨｌＯ，最適にはｐＨ
７ないしｐＨＩＯのＢｆｉ液中、アデノシン三リン酸又
はデオキシアデノシン三リン酸存在下に、アミノ酸とア
ミノアシル〜ｔＲＮＡシンテタエゼを含む粗酵素液と混
合することによって行えばよい。そのときの混合の温度
としては、酵素活性を維持する観点がら一般に０℃から
７０℃が好ましく、最適にば０℃から３０℃で行われる
。また、そのときに用いられる緩衝液としては、アミノ
酸、アデノシン三すン酸、デオキシアデノシン三リン酸
及びアミノアシル−ｔｌ？ＮＡシンテターゼを含む１１
■酵素液が熔解し。
所望のｐＨが得られるもので、あればいがなるものを使
用してもよい。例えば、トリス塩酸緩衝液。
用してもよい。例えば、トリス塩酸緩衝液。
ヘヘス緩衝液、トリエタノールアミン緩衝液、マレート
緩衝液、リン酸緩衝液などがあげられる。
緩衝液、リン酸緩衝液などがあげられる。
さらに２反応を円滑に進行させ、酵素の失活を防くこと
を主目的として２反応系にマグネシウム５マンガンなど
の二価カチオン、メルカプトエタノール、ジチオスレイ
ト−ルなどのスルフヒドリル化剤、ピロフォスファター
ゼを単独又は混合して添加してもよい。各添加剤の好適
な゛濃度としては。
を主目的として２反応系にマグネシウム５マンガンなど
の二価カチオン、メルカプトエタノール、ジチオスレイ
ト−ルなどのスルフヒドリル化剤、ピロフォスファター
ゼを単独又は混合して添加してもよい。各添加剤の好適
な゛濃度としては。
二価カチオン０．０１ｍＭ〜５００ｍＭ 、スルフヒド
リル化剤、０．００１ｍＭ〜１０（１ｍＭ 、ピロホス
ファターゼ０．００１ユニツト／ ｍｌ” １００ユニ
ツト／ｍｌであり、最適な濃度としては、それぞれ二価
カチオン０．１ｍＭ〜１０１、スルフヒドリル化剤０．
０１ｍＭ〜１ ｍＭ、ピロホスファターゼ１ユニツト／
ｍｌ〜１０ユニット／ｍｌである。また、アミノＭ、ア
ミノアシル−１ＲＮ八シンテターゼを含む粗酵素液及び
アデノシン三リン酸又はデオキシアデノシン三リン酸の
使用量は特に制限されないが５実用的な収量を得るため
には、アミノ酸１重量部に対し、アミノアシル−ｔＲＮ
＾シンテターゼを含む粗酵素液１０３〜１０６重量部（
アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの濃度としては。
リル化剤、０．００１ｍＭ〜１０（１ｍＭ 、ピロホス
ファターゼ０．００１ユニツト／ ｍｌ” １００ユニ
ツト／ｍｌであり、最適な濃度としては、それぞれ二価
カチオン０．１ｍＭ〜１０１、スルフヒドリル化剤０．
０１ｍＭ〜１ ｍＭ、ピロホスファターゼ１ユニツト／
ｍｌ〜１０ユニット／ｍｌである。また、アミノＭ、ア
ミノアシル−１ＲＮ八シンテターゼを含む粗酵素液及び
アデノシン三リン酸又はデオキシアデノシン三リン酸の
使用量は特に制限されないが５実用的な収量を得るため
には、アミノ酸１重量部に対し、アミノアシル−ｔＲＮ
＾シンテターゼを含む粗酵素液１０３〜１０６重量部（
アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの濃度としては。
１０μｉ以上のものが好ましい。）の範囲アミノ酸とア
デノシン三リン酸又はデオキシアデノシン三リン酸との
モル比を１＝１０〜１ ： １００の範囲内で行うのが
好ましい。前記の条件で反応を実施すると２反応は円滑
に進行し、数秒から３０分以内に完結する。
デノシン三リン酸又はデオキシアデノシン三リン酸との
モル比を１＝１０〜１ ： １００の範囲内で行うのが
好ましい。前記の条件で反応を実施すると２反応は円滑
に進行し、数秒から３０分以内に完結する。
次いで、上記のようにして得られた混合物とアミノ酸誘
導体とを混合して反応させることにより目的のペプチド
又はペプチド誘導体を得ることができる（この段階を以
後ペプチド化と称する。）。
導体とを混合して反応させることにより目的のペプチド
又はペプチド誘導体を得ることができる（この段階を以
後ペプチド化と称する。）。
このときに用いる反応混合物は、そのままペプチド化反
応に用いることもできるが、Ｇ−２５（ファルマシア社
製） 、 Ｇ−７５（ファルマシア社製）などのゲルク
ロマトグラフィーを行うことによって。
応に用いることもできるが、Ｇ−２５（ファルマシア社
製） 、 Ｇ−７５（ファルマシア社製）などのゲルク
ロマトグラフィーを行うことによって。
反応後に混在するアデノシン三すン酸、アデノシンーリ
ン酸あるいはビロリン酸などを除去して用いることもで
きる。また、ペプチド化反応の温度としては、０℃から
７０’ｃが好ましく、酵素の失活防止と適正な反応速度
を得るという観点から、 １０℃から５０℃、特に２０
”Ｃがら４０℃で行うことが好ましい。ｐｌ＋としては
、既出の各種緩衝などを用いて５ないし１１．好ましく
は６ないし１０．最適にはフないし９で行えばよい。
ン酸あるいはビロリン酸などを除去して用いることもで
きる。また、ペプチド化反応の温度としては、０℃から
７０’ｃが好ましく、酵素の失活防止と適正な反応速度
を得るという観点から、 １０℃から５０℃、特に２０
”Ｃがら４０℃で行うことが好ましい。ｐｌ＋としては
、既出の各種緩衝などを用いて５ないし１１．好ましく
は６ないし１０．最適にはフないし９で行えばよい。
反応混合物とアミノ酸誘導体との混合比として。
例えば容量で１：０．１〜１ ： １００の範囲で行え
ばよい。また、この時用いるアミノ酸誘導体の濃度とし
ては１０ｍＭからＩＯＭの範囲であるが、これをさらに
低くして用いることもできる。
ばよい。また、この時用いるアミノ酸誘導体の濃度とし
ては１０ｍＭからＩＯＭの範囲であるが、これをさらに
低くして用いることもできる。
上記条件でペプチド化は、数秒から数日で完結し、目的
のペプチド又はペプチド誘導体を得ることができる。
のペプチド又はペプチド誘導体を得ることができる。
本発明によって得られるペプチド誘導体は２例えば血圧
降下作用などのあるブラジキニンや内・外分泌抑制作用
などのあるソマトスタチンなどの各種ホルモン及び抗生
物質ペプチド、呈味ペプチドのような他の生物学的活性
物質として有用である。
降下作用などのあるブラジキニンや内・外分泌抑制作用
などのあるソマトスタチンなどの各種ホルモン及び抗生
物質ペプチド、呈味ペプチドのような他の生物学的活性
物質として有用である。
本発明によれば、上記有用ペプチド又はペプチド誘導体
を保護基を用いることなく、また、高純度に酵素を精製
することなく、安価に製造することができ、さらにより
高収量で製造できるため。
を保護基を用いることなく、また、高純度に酵素を精製
することなく、安価に製造することができ、さらにより
高収量で製造できるため。
工業的に極めて有用である。
以下１本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例１．比較例１
バチルス・ステアロサーモフィルスＬＩＫ７８８ （ｍ
１研菌寄 第５１４１号）の菌体６ｋｇを２倍量の１０
０１トリス・塩酸緩衝液（ｐｌ＋ ７．５）に′ｌＢ濁
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により
不名物を除去し、チロシンに特異的なチロシル−ｔＲＮ
＾シンテクーゼを含む粗抽出液を得た。あらかじめ５ｍ
Ｍメルカプトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四酢
酸ナトリウム及び０．１ｍＭホスホフェニルスルボニル
フルオリドを含む５０Ｉｌ１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したマーＩ・レックスゲルブルーＡ（アミ
コン社製）を充填したカラムに、上記の粗抽出液をとお
し、塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度
６０ｃｍ・ｈ−１で溶出せしめると、チロシル−ｔＲＮ
Ａシンテターゼが溶出した。
１研菌寄 第５１４１号）の菌体６ｋｇを２倍量の１０
０１トリス・塩酸緩衝液（ｐｌ＋ ７．５）に′ｌＢ濁
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により
不名物を除去し、チロシンに特異的なチロシル−ｔＲＮ
＾シンテクーゼを含む粗抽出液を得た。あらかじめ５ｍ
Ｍメルカプトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四酢
酸ナトリウム及び０．１ｍＭホスホフェニルスルボニル
フルオリドを含む５０Ｉｌ１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したマーＩ・レックスゲルブルーＡ（アミ
コン社製）を充填したカラムに、上記の粗抽出液をとお
し、塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度
６０ｃｍ・ｈ−１で溶出せしめると、チロシル−ｔＲＮ
Ａシンテターゼが溶出した。
この区分を集め、濃縮、脱塩を行った結果、約７０％の
収率でチロシンに特異的なチロシル−ｔＲＮＡシンテタ
ーゼを含む粗酵素液を得た。上記操作をすべて４℃で行
った。
収率でチロシンに特異的なチロシル−ｔＲＮＡシンテタ
ーゼを含む粗酵素液を得た。上記操作をすべて４℃で行
った。
このように染料を官能基として有する水不溶性の担体で
処理して得たチロシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗
酵素液２７ｇ（純度４．１％）、塩化マグネ’ｙ’ｙム
０．４ｇ、７’７’／ シフＥす７８０．１ｇ、Ｌ−チ
ロシン１ｍｇ、 ピロホスファターゼ（ベーリンガー・
マンハイム社製）２００ユニット及びジチオスレイトー
ル０．０１ｍｇを２０Ｏｎ＋ １の２０ｍＭヘベス緩衝
液ｐＨ８，０に溶解し、４℃で１５分間混合させて混合
物を得た。得られた混合物にＬ−フェニルアラニンメチ
ルエステル４ｇを加え、よく混合し１反応温度を３０℃
に保って１日放置して反応させた。
処理して得たチロシル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗
酵素液２７ｇ（純度４．１％）、塩化マグネ’ｙ’ｙム
０．４ｇ、７’７’／ シフＥす７８０．１ｇ、Ｌ−チ
ロシン１ｍｇ、 ピロホスファターゼ（ベーリンガー・
マンハイム社製）２００ユニット及びジチオスレイトー
ル０．０１ｍｇを２０Ｏｎ＋ １の２０ｍＭヘベス緩衝
液ｐＨ８，０に溶解し、４℃で１５分間混合させて混合
物を得た。得られた混合物にＬ−フェニルアラニンメチ
ルエステル４ｇを加え、よく混合し１反応温度を３０℃
に保って１日放置して反応させた。
次いで、得られた反応液にアセトン２００ｍ１を加え１
沈殿を濾別後、上清をエバポレーターにて約２０ｍ ｌ
に濃縮し、ボンダバックｃｐｓカラム（ウォーターズ社
製）に供し、アセトニトリル１５０ｍＭリン酸カリ水溶
液、１５／ ８５． ｐｉｔ ７を展開溶媒として用い
て分離し５ Ｌ−チロシル−し−フェニルアラニンメチ
ルエステルを０．７ｍｇ７４１た。
沈殿を濾別後、上清をエバポレーターにて約２０ｍ ｌ
に濃縮し、ボンダバックｃｐｓカラム（ウォーターズ社
製）に供し、アセトニトリル１５０ｍＭリン酸カリ水溶
液、１５／ ８５． ｐｉｔ ７を展開溶媒として用い
て分離し５ Ｌ−チロシル−し−フェニルアラニンメチ
ルエステルを０．７ｍｇ７４１た。
その元素分析（Ｃｉｓ ）１２２ Ｎ ｔ Ｏ４＝ ３
４２．３９）は計算値（％） Ｃ＝６６．６５ Ｈ＝６
．４８ Ｎ＝８．１８測定値（％＞ Ｃ＝６６．８Ｌ
Ｈ＝６．３３ Ｎ＝８．１１であった。
４２．３９）は計算値（％） Ｃ＝６６．６５ Ｈ＝６
．４８ Ｎ＝８．１８測定値（％＞ Ｃ＝６６．８Ｌ
Ｈ＝６．３３ Ｎ＝８．１１であった。
次に比較のため、バチルス・ステアロサーモフィルス６
ｋｇから、上記と同様の方法で粗抽出液を得、続いて陰
イオン交換樹脂のＤＥＡＩＥ−セルロースカラムクロマ
トグラフィー、ヒドロキシアバフィトカラムフロマクグ
ラフィー、ＤＩ！ＡＥ−セファデックスカラムクロマト
グラフィ〜、硫酸アンモニウムによる分別沈殿法、ヒド
ロキシアパタイトグラフィー、 ＤＥＡｕ−セファデッ
クスカラムクロマトグラフィー及びセファデックスＧ−
１５０カラムクロマトグラフイー法で単一に精製したチ
ロシル−ｔＲＮＡシンテターゼを用い、上記と同様にし
てＬ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
を０．１ｍｇ得た。
ｋｇから、上記と同様の方法で粗抽出液を得、続いて陰
イオン交換樹脂のＤＥＡＩＥ−セルロースカラムクロマ
トグラフィー、ヒドロキシアバフィトカラムフロマクグ
ラフィー、ＤＩ！ＡＥ−セファデックスカラムクロマト
グラフィ〜、硫酸アンモニウムによる分別沈殿法、ヒド
ロキシアパタイトグラフィー、 ＤＥＡｕ−セファデッ
クスカラムクロマトグラフィー及びセファデックスＧ−
１５０カラムクロマトグラフイー法で単一に精製したチ
ロシル−ｔＲＮＡシンテターゼを用い、上記と同様にし
てＬ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
を０．１ｍｇ得た。
実施例２．比較例２
バチルス・ステアロサーモフィルスＮＣＡ１５０ （微
工研寄 第４７７８号）の菌体１０ｋｇを用い、実施例
１と同様にして得た粗抽出液を、あらがしめ５１Ｉ＋Ｍ
メルカプトエタノール、２ｍＦＩエチレンジアミン四酢
酸ナトリウムを含む２５ｍＭ ）リス緩（ｈ液（ｐＨ７
，０）で平衡化したマートレソクスゲルレッドへ （ア
ミコン社製）を充填したカラムに、上記の粗抽出液を通
し、塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度
４０ｃｍ−ｈ−’で溶出せしめると、アスパラチＪレー
ｔｌ？ＮＡシンテターゼが溶出した。
工研寄 第４７７８号）の菌体１０ｋｇを用い、実施例
１と同様にして得た粗抽出液を、あらがしめ５１Ｉ＋Ｍ
メルカプトエタノール、２ｍＦＩエチレンジアミン四酢
酸ナトリウムを含む２５ｍＭ ）リス緩（ｈ液（ｐＨ７
，０）で平衡化したマートレソクスゲルレッドへ （ア
ミコン社製）を充填したカラムに、上記の粗抽出液を通
し、塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度
４０ｃｍ−ｈ−’で溶出せしめると、アスパラチＪレー
ｔｌ？ＮＡシンテターゼが溶出した。
上記操作をすべて３０℃下で行った。
この染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理し
て得たアスパラチル−ｔＲＮ＾シンテクーゼを含む粗酵
素４５ｇ（純度３．８％）、塩化マグネシウムｓｏｍｇ
、アデノシン三リン酸３００ｍｇ、 Ｌ−アスパラギン
酸３ ｍｇ＋ピロホスファターゼ（ベーリンガーマンハ
イム社製）２００ユニツト及びジチオスレイトール０．
０１ｍｇを ２００ｍ１の２５ｍＭリン酸緩衝液ｐｌ＋
８．０に溶解し、４℃で２０分間反応させて混合物を得
た。得られた混合物にＬ−ロイシン−も−ブチルエステ
ル２ｇを加え、よく混合し２反応温度を２５℃に保って
８時間反応させた。実施例１と同様に処理した後、ボン
ダバックＣＩ８カラム（ウォーターズ社製）に供し、ア
セトニトリル１５０ｍＭリン酸カリ水溶液、５／９５．
ｐＨ７を展開溶媒として用いて分離し、Ｌ−アスパラ
チル−Ｌ−ロイシン−も−ブチルエステルを２．２ｍｇ
得た。
て得たアスパラチル−ｔＲＮ＾シンテクーゼを含む粗酵
素４５ｇ（純度３．８％）、塩化マグネシウムｓｏｍｇ
、アデノシン三リン酸３００ｍｇ、 Ｌ−アスパラギン
酸３ ｍｇ＋ピロホスファターゼ（ベーリンガーマンハ
イム社製）２００ユニツト及びジチオスレイトール０．
０１ｍｇを ２００ｍ１の２５ｍＭリン酸緩衝液ｐｌ＋
８．０に溶解し、４℃で２０分間反応させて混合物を得
た。得られた混合物にＬ−ロイシン−も−ブチルエステ
ル２ｇを加え、よく混合し２反応温度を２５℃に保って
８時間反応させた。実施例１と同様に処理した後、ボン
ダバックＣＩ８カラム（ウォーターズ社製）に供し、ア
セトニトリル１５０ｍＭリン酸カリ水溶液、５／９５．
ｐＨ７を展開溶媒として用いて分離し、Ｌ−アスパラ
チル−Ｌ−ロイシン−も−ブチルエステルを２．２ｍｇ
得た。
その元素分析（ＣＩ４Ｈ髄Ｎ ＊ Ｏｓ ＝ ３０２．
４２）は計算値（％） Ｃ＝５５．６０ Ｈ＝８．６８
Ｎ＝９．２７測定値（％） Ｃ＝５５．４１ Ｈ＝８
．６３ Ｎ＝９．４１であった。
４２）は計算値（％） Ｃ＝５５．６０ Ｈ＝８．６８
Ｎ＝９．２７測定値（％） Ｃ＝５５．４１ Ｈ＝８
．６３ Ｎ＝９．４１であった。
次に比較のため、上記と同じ菌体量を用い、比較例１と
同様にして得たアスパラチル−ｔｌ？ＮＡシンテターセ
で反応を行ってＬ−アスパラチル−Ｌ −ロイシン−ｔ
−ブチルエステルを０．３ｍｇ得た。
同様にして得たアスパラチル−ｔｌ？ＮＡシンテターセ
で反応を行ってＬ−アスパラチル−Ｌ −ロイシン−ｔ
−ブチルエステルを０．３ｍｇ得た。
実施例３．比較例３
酵母Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ Ｒ−１４（ｆ’Ｍ］ニ研菌
寄 第３１１４号）から実施例１と同様の操作で得た粗
抽出液を、あらかじめ１０ｍＭメルカプトエタノール、
２０ｍＭエチレンジアミン四酢酸す［−リウムを含む
３０ ｎ＋ Ｍヘペス緩南液（ｐｌ＋ ７．７）で平衡
化したアフィ・ゲルブルー（ハイオラン１゛社製）に加
え、２０分間攪拌後、濾過により（’１脂を濾別した。
寄 第３１１４号）から実施例１と同様の操作で得た粗
抽出液を、あらかじめ１０ｍＭメルカプトエタノール、
２０ｍＭエチレンジアミン四酢酸す［−リウムを含む
３０ ｎ＋ Ｍヘペス緩南液（ｐｌ＋ ７．７）で平衡
化したアフィ・ゲルブルー（ハイオラン１゛社製）に加
え、２０分間攪拌後、濾過により（’１脂を濾別した。
この樹脂に塩化すｉ・リウムを含む」二記緩衝液を加え
、ロイシン−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液を得
た。これを凍結乾燥して粉末状の粗酵素標品を得た。
、ロイシン−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液を得
た。これを凍結乾燥して粉末状の粗酵素標品を得た。
この染料を官能基として有する水不溶性の担体で処理し
て得たロイシン−ｔｌｌＮｆｌシンテターゼを含む粗酵
素標品５ ｇ （純度８．０％）、塩化マグネシウム２
０ｍｇ、アデノシン三リン酸４０ｍｇ、 Ｄ−ロイシン
１ ｍｇ＋ピロボフファターゼ（ベーリンガ−・マンハ
イム社製） １０ユニツト及びメルカプトエタノール２
；ＯμＩを３０ｍ ｌの５ＱｍＭ ２．５−ジメチルイ
ミダゾール緩衝液ｐｌ＋９．０に溶解し、４℃で１０分
間反応させたのち１反応混合物をＧ−７５（ファルマシ
ア社製）カラムに供し、ヘペス緩ｆｆｊ液にて溶出し。
て得たロイシン−ｔｌｌＮｆｌシンテターゼを含む粗酵
素標品５ ｇ （純度８．０％）、塩化マグネシウム２
０ｍｇ、アデノシン三リン酸４０ｍｇ、 Ｄ−ロイシン
１ ｍｇ＋ピロボフファターゼ（ベーリンガ−・マンハ
イム社製） １０ユニツト及びメルカプトエタノール２
；ＯμＩを３０ｍ ｌの５ＱｍＭ ２．５−ジメチルイ
ミダゾール緩衝液ｐｌ＋９．０に溶解し、４℃で１０分
間反応させたのち１反応混合物をＧ−７５（ファルマシ
ア社製）カラムに供し、ヘペス緩ｆｆｊ液にて溶出し。
ボイド溶の両分４０ｍ１を集め反応混合物を単離した。
これにＬ−フェニルアラニンアミド２ｇを固体のまま加
えて４０℃で４５分間反応さ・ｌた。得られた反応物に
アセトン２０ｍ１を加え、生した沈殿を濾別し。
えて４０℃で４５分間反応さ・ｌた。得られた反応物に
アセトン２０ｍ１を加え、生した沈殿を濾別し。
エバポレーターにて約１０ｍ１に濃縮後、実施例１と同
様に分離し、Ｄ−口イシル−■、−フェニルアラニンア
ミドを １．６ｍｇ得た。
様に分離し、Ｄ−口イシル−■、−フェニルアラニンア
ミドを １．６ｍｇ得た。
その元素分析（Ｃ＋ｓ １１２３ Ｎ３０ａ ＝２７７
．４１）は計算値（％） Ｃ＝６４．９４ Ｈ＝８．３
７ Ｎ＝１５．１５測定値（％） Ｃ＝ ６４．９２
Ｈ＝ ８．４０ Ｎ ＝ １５．１．８であった。
．４１）は計算値（％） Ｃ＝６４．９４ Ｈ＝８．３
７ Ｎ＝１５．１５測定値（％） Ｃ＝ ６４．９２
Ｈ＝ ８．４０ Ｎ ＝ １５．１．８であった。
次に比較のため、上記で得た粗抽出液をアフイ・ゲルブ
ルー（ハイオラソＩ′社製）で処理することなくそのま
ま用い、上記と同様の方法で反応を行ったところ、粗抽
出液中に存在する他の酵素などの影響による副反応のた
めか、Ｄ−ロイシル〜Ｌ−フェニルアラニンアミドの収
率は非常に低く＋１ＰＬＣでわずかに検出できる程度で
あった。
ルー（ハイオラソＩ′社製）で処理することなくそのま
ま用い、上記と同様の方法で反応を行ったところ、粗抽
出液中に存在する他の酵素などの影響による副反応のた
めか、Ｄ−ロイシル〜Ｌ−フェニルアラニンアミドの収
率は非常に低く＋１ＰＬＣでわずかに検出できる程度で
あった。
実施例４．比較例４
ウサギ（北山うヘス、１（Ｂｌ、：ＪＷＩＥ１本白色種
）の肝臓からホモジナイザ〜を使って、実施例１と同様
の操作でヒスチジル−ＬＩ？ＮＡシンテターセを含む粗
抽出液を得た。あらかじめ、１ｍＭジチオスレイトール
、２ｍＭエチレンジアミン四Ｉ！ｉｌ：酸ナトリウム及
ヒ０．１ｍＭボスポフェニルスルボニルフルオリドを含
む２５ｍ旧・リス緩ＩＭｊ液（ｐｌ＋ ８．０）で平衡
化したブルーかファロース ＣＬ−６Ｂ （ファルマシ
ア社製）に」二記粗抽出液を加え、１時間攪拌し、静置
後。
）の肝臓からホモジナイザ〜を使って、実施例１と同様
の操作でヒスチジル−ＬＩ？ＮＡシンテターセを含む粗
抽出液を得た。あらかじめ、１ｍＭジチオスレイトール
、２ｍＭエチレンジアミン四Ｉ！ｉｌ：酸ナトリウム及
ヒ０．１ｍＭボスポフェニルスルボニルフルオリドを含
む２５ｍ旧・リス緩ＩＭｊ液（ｐｌ＋ ８．０）で平衡
化したブルーかファロース ＣＬ−６Ｂ （ファルマシ
ア社製）に」二記粗抽出液を加え、１時間攪拌し、静置
後。
上清を除去した。これを塩化カリウムを上記緩衝液に加
えた／８液で溶出・ｌしめると、ヒスチジル−ｔＲＮＡ
シンテターゼが溶出した。
えた／８液で溶出・ｌしめると、ヒスチジル−ｔＲＮＡ
シンテターゼが溶出した。
こうして得たヒスナシル−ｔ １１ Ｉｔ八へンテター
ゼを含む１１酵素液３ｇ（純度１８％）、塩化マグネシ
ウム５０ｍｇ、デオキシアデノシン三リン酸５０ｍｇ、
Ｔ−−ヒスチジン１ｍｇ＋ ピロホスファターゼ（ヘ
ーリンガーマンハイム７１）２００ユニソ１〜及びジチ
オスレイト〜ル０．０１ｍｇを用いて、実施例３と同様
に反応させ、Ｇ−２５（ファルマシア社製）カラムを用
いて反応混合物を得た。次いで、これにＬ−プロリンア
ミド２ｇを加え、混合し、０°Ｃで３０分間反応させた
。得られた反応液をボンダバックＣＩ８カラムにより実
施例１と同様に分離し、Ｌ−ヒスチジル−し−プロリン
アミド １．５ｍｇを得た。
ゼを含む１１酵素液３ｇ（純度１８％）、塩化マグネシ
ウム５０ｍｇ、デオキシアデノシン三リン酸５０ｍｇ、
Ｔ−−ヒスチジン１ｍｇ＋ ピロホスファターゼ（ヘ
ーリンガーマンハイム７１）２００ユニソ１〜及びジチ
オスレイト〜ル０．０１ｍｇを用いて、実施例３と同様
に反応させ、Ｇ−２５（ファルマシア社製）カラムを用
いて反応混合物を得た。次いで、これにＬ−プロリンア
ミド２ｇを加え、混合し、０°Ｃで３０分間反応させた
。得られた反応液をボンダバックＣＩ８カラムにより実
施例１と同様に分離し、Ｌ−ヒスチジル−し−プロリン
アミド １．５ｍｇを得た。
その元素分析（ＣＩｌ ＨＩＴ Ｎ５０２ ＝２５１．
３３）は計算値（％） Ｃ＝５２．５６ Ｈ＝６．８３
Ｎ＝２７．８７測定値（％） Ｃ＝５２．５５ Ｈ＝
６．７８ Ｎ＝２７．９０であった。
３３）は計算値（％） Ｃ＝５２．５６ Ｈ＝６．８３
Ｎ＝２７．８７測定値（％） Ｃ＝５２．５５ Ｈ＝
６．７８ Ｎ＝２７．９０であった。
次に比較のため、上記で得た粗抽出液をブルーセファロ
ースＣＬ−６Ｂで処理することなくそのまま用いて、上
記と同様の方法で反応を行ってＬ−ヒスチジル−Ｌ−プ
ロリンアミド０．１ ｍｇを得た。
ースＣＬ−６Ｂで処理することなくそのまま用いて、上
記と同様の方法で反応を行ってＬ−ヒスチジル−Ｌ−プ
ロリンアミド０．１ ｍｇを得た。
実施例４に比べると５収率ば低下する傾向にあった。
代理人 児 玉 雄 三
手／ｒ；−／ｓ １ｉｆｔ Ｊ］、：ｚ ？） （自Ｒ
） ６．ｈｌｉ（１１ 昭和５８年１２刀／＆１」 １、事件の表示 特願昭５８−１４６０５７号 ２、発明の名称 ベゾチＩＳ又（ｊペゾチト′誘導体の合成法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 イマ ポリ カス ］フモ 氏 名 今 堀 和 友 （他２名）（４）明１ｔｌｌ
ｌ ｆＩ′ｒの発明のＡ’ｌ： ＆＋１＋な説明の１開
明イＩｌｌ書第７頁第３行目の１サ−マス・°ｒグアテ
ィカス」を１サーマス・アクアティカス」とδＪ正する
。
） ６．ｈｌｉ（１１ 昭和５８年１２刀／＆１」 １、事件の表示 特願昭５８−１４６０５７号 ２、発明の名称 ベゾチＩＳ又（ｊペゾチト′誘導体の合成法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 イマ ポリ カス ］フモ 氏 名 今 堀 和 友 （他２名）（４）明１ｔｌｌ
ｌ ｆＩ′ｒの発明のＡ’ｌ： ＆＋１＋な説明の１開
明イＩｌｌ書第７頁第３行目の１サ−マス・°ｒグアテ
ィカス」を１サーマス・アクアティカス」とδＪ正する
。
同書同頁下第３行目の［セルリート１へ八シンヲ・ター
ゼ］の後に１−、アスパラチル−ｔＲＮ八シへテターゼ
、グルタミニルー ターゼ、システイニル−ｔＲＮ八シへテターセ、ブｒＪ
リルーｔＲＮへシンテターセ，グリシル−Ｌ ＲｔｌＡ
ンンケターセ −ｆ ／Ｉ／ギニルーｔＲＮΔシンテ
ターゼ、トリプトファニル−ｔＲＮ八シへテターゼ」を
挿入する。
ゼ］の後に１−、アスパラチル−ｔＲＮ八シへテターゼ
、グルタミニルー ターゼ、システイニル−ｔＲＮ八シへテターセ、ブｒＪ
リルーｔＲＮへシンテターセ，グリシル−Ｌ ＲｔｌＡ
ンンケターセ −ｆ ／Ｉ／ギニルーｔＲＮΔシンテ
ターゼ、トリプトファニル−ｔＲＮ八シへテターゼ」を
挿入する。
同書第８頁第９１ｊ目のｒｌｍ．Ｈないし１ｍ？Ｌ−ｌ
をｌ− １ ｍ ＭないしＩＭＪとＩＩ’ ｉｌ（する
。
をｌ− １ ｍ ＭないしＩＭＪとＩＩ’ ｉｌ（する
。
同前ｆｔ’１４頁第７行１」のｒ ５６３０５−ｌをＩ
５０３（１５ ＪとδＪ正する。
５０３（１５ ＪとδＪ正する。
同書第１７頁第１２〜１３行目の１−グルタミン酸１を
「グルタミン酸−１と６＋正する。
「グルタミン酸−１と６＋正する。
同書第２５頁第１２〜１３行目のｒＮＣ八 １５０（機
工ＩＪ寄ｆｆｉ ４１１８ ％） Ｊ ’ｒｉ： Ｉ−
ＮＧＡ １５（１３ （ｉＬＩ研ｔｉｌｔ寄第４７７８
号）」とδＩ正する。
工ＩＪ寄ｆｆｉ ４１１８ ％） Ｊ ’ｒｉ： Ｉ−
ＮＧＡ １５（１３ （ｉＬＩ研ｔｉｌｔ寄第４７７８
号）」とδＩ正する。
Claims (1)
- （１）アミノ酸からペプチド又はペプチド誘導体を合成
するに際し、生物細胞を破砕して得た粗抽出液を染料を
官能基として有する水不溶性の担体で処理してアミノア
シル−ｔＲＮＡシンテターゼを含む粗酵素液を得、得ら
れた粗酵素液を反応系に加えて合成することを特徴とす
るペプチド又はペプチド誘導体の合成法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58146057A JPS6037994A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58146057A JPS6037994A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6037994A true JPS6037994A (ja) | 1985-02-27 |
| JPH0453513B2 JPH0453513B2 (ja) | 1992-08-26 |
Family
ID=15399107
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58146057A Granted JPS6037994A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6037994A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62228296A (ja) * | 1986-03-28 | 1987-10-07 | Unitika Ltd | ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 |
-
1983
- 1983-08-10 JP JP58146057A patent/JPS6037994A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62228296A (ja) * | 1986-03-28 | 1987-10-07 | Unitika Ltd | ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0453513B2 (ja) | 1992-08-26 |
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