JPS6036959A - 生物学的液体中の混濁を迅速にかつ完全に除去する方法及びそのための薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、生物学的液体、特にヒトの血清又は血しよう
中の混濁乞界面活性剤の使用下に迅速かつ完全に除去す
るための方法及び薬剤に関する。

従来の技術 ヒト血清中の混濁は、トリグリセＩＪ　ｙ分の多いり□
ボタンバク質粒子、例えばキロミクロン及びＶＬＤＬ　
（”ヱｅｒｙ　Ｌｏｗ　Ｄｅｎｓｉｔｙ　Ｌｉｐｏｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ”：超低密度リポタンパク質）の過剰含量
により惹起される。このような場合に、゛°脂肋血症性
パ又は”過リポタンパク面血症件”血清と言われる。こ
のような混濁は臨床化学的診断で血清成分ン測光分析す
る際に大きな問題である。特に、測定すべき血清中成分
、例えば微量元素の濃度が極めて低くかつ十分な測定精
度７得るために分析用試薬に比較的多量の血清を添加し
なければならない場合（血清二分析用試薬の容量比〉０
．１５）、前記のことが該当する。既に低い脂肪血症塵
で試薬中の血清により惹起される混濁により光度計の直
線性の範囲７超えこともあり、それ故その測定は著しく
妨害されるか又は不可能となる。

しかしまた、種々の免疫学的試験法、特に免疫沈降反応
により生じる混濁を比濁測定法又は濁度測定法により測
定しかつ比較的低量の血清を試験パッチで必要とするよ
うな試験法は試料物質の自己混濁により敏感に影響され
て妨害され得ることも明らかになった。この場合の例と
しては、血清アポリポタンパク質の免疫比濁測定〔０１
ｉｎ、　Ｏｈｅｍ、”、２８巻、１１５６〜１１５８頁
（１９８２年）；同第２９巻、１２０〜１２５頁（１９
８３年）〕並びに〕β−コリオゴナドトロピンび前立腺
酸性フォスファターゼの放射線免疫測定（”　Ｏ：Ｌｉ
ｎ、　Ｏｈｅｍ、　”、２８巻、２６２５頁（１９８２
年）〕が挙げられるそれ故、脂肪血症性血清中の混濁（
″澄明化”）の完全な除去は臨床分析にとって著しく重
要である。

文献からは生物学的液体中の混濁乞除去するための種々
の方法及び薬剤が公知である。

例えば、血清混濁乞有機溶剤の混合物と振出することに
より除去する方法が記載されている〔”　０１１ｎ、Ｏ
ｈｅｍ、”、２９巻、１２０〜１２５頁（１９８３年）
〕。この方法は付加的な方法工程を必要とする。しかも
特に強く脂肪血症性の血清では試料物質の調節し得ない
容量変化が起り得ることがあり、それ故測定結果の誤差
が生じ得る。最後に、この方法を適用する際に、抽出で
全部又は一部が除去される血清成分の測定はもはや可能
ではない。

混濁乞惹起するりボタンバク質粒子をリンタングステン
酸／塩化マグネ゛シウムのようなボリアニオ・の添加に
より血清ふら沈殿させかつ遠心分離する方法でも同様の
ことが言える〔６０１１ｎ、　Ｏｈｅｍ、　”、２８巻
、１１５６〜１１５８頁（１９８３年）〕。

血清の測光分析の測定精度及び経済性という理由から、
澄明化をそれぞれの血清成分の測定に使用する分析用試
薬中で直接実施し、しかも完全に、数分間で（く１０分
間）かつ一般に温度範囲１５〜４０℃で行なうことは有
利である部分的には血清又は血しようの試料中の混濁の
低下を惹起するに過ぎないそのような方法は例えば西ド
イツ国特許公開第２３２７８９４号明細書から公知であ
る。この場合、分析用試薬にポリオキシエチル化ラウリ
ン酸化合物ｔより高い濃度で添加する。

西ドイツ国特許出願公告第２７２４７５７号明細書には
、脂肪酸ポリエチレングリコールエステル並びに短鎖状
脂肪族アルコール、グリコ−／Ｌ４はポリエチレングリ
コールの緩衝処理した水溶液もしくは脂肪アルコール−
ポリグリコールエーテルから成る、血清中の混濁乞除去
するだめの薬剤が記載されている。この薬剤は、濁った
測定溶液を血清：試薬−容量比＜０．１で数分間で澄明
化するのに好適である。例えば、血清：試薬−容量比０
．１の溶液では２０〜２５°Ｃで完全な澄明化は緊密な
混合後５分間で達成される。しかし血Ｓ′：試薬−容量
比＞０．１５の場合、測定溶液の澄明化には著しく長い
時間が必要である。血清：試薬−容量比０．１６の爵液
中の混濁の除去には既に６０分間を必要とする。

血清中のトランスフェリン鉄測定法が知られており、そ
の際に分、折用試薬に第ニアルキルサ／ｌ／　７　エー
ト（Ｔｅｅｐｏｌ　（５１０Ｂ”、Ｓｈｅ’１ｌＡＧ製
）を高濃度で添加する（　”　Ｚ、　Ｋ１１ｎ。

Ｏｈｅｍ、　Ｋ１１ｎ、　Ｂｉｏａｈｅｍ、”、３巻、
９６〜９９頁（１９６５年）〕。血清０．５ｍｌ！及び
試薬１８４−の混合の際に完全な混濁除去は室温で１５
分−後に達成される。

ヨーロッパ特許出願公開第００４１７０４号明細書には
、水性媒体中のキロミクロンン、分枝状アルカン連鎖及
びＨＬＢ値１２、〜１４乞有するアルカノール又はアル
キルアリールアルコールのポリエチレングリコールエー
テル、分子中に０原子１０〜２０個ン有する第二アルキ
ルスルホネート並びに場合によりアルカリ−ｐ−トルエ
ンスルホχネートより成る混合物を用いて溶解すること
が提案されている。該文゛献中で特に好適なものとして
挙げられている薬剤（例２による）の試験から、強く脂
肪血症性の血清及び血清：試薬−容量比〉０．２では２
５℃で完全な澄明化乞６０分間で達成することが不可能
で。

あることが明らかになった。

それ故、生智学的液体中の混濁を除去するためのこれら
従来公知の方法はすべてなお部分的に著しい欠点を有し
ており、これは主に次のことに基因する： ａ）付加的な方法工程で血清前処理、が必要である、又
は 澄明化を直接分析用試薬中で行なう場合、ｂ）使用する
薬剤の澄明化力が限定されている、 Ｃ）澄明化速度が不十分である（〉１０分間）並びに ｄ）例えば、澄明化作用を促進するために脂肪分解作用
酵素（″′リパーゼ”）を添加する際に、適用、方法又
は薬剤が有効であるＰＨ−及び温度範囲が限定される。

更に、前記の文献のいずれにも、その都度使用した澄明
化試薬に゛おいて例えば血清アポリポタンパク質の免疫
沈降分析が妨害されずに実施可能であることは示唆され
ていない。

血清タンパク質、特にアポリポタンパク質の免疫比濁分
析測定する際に血清混濁による妨害を回避するために、
西ドイツ国特許公開第２８２９５３１号明細書に、免疫
反応ビ非常に低濃度カチオン性界面活性剤（１０−３〜
１０−１容量係）の存在か又は非常に低濃度の非イオン
性界面活性剤（１０−３〜１０−１容量ｑｂ）の存在で
か゛つ脂肪分解活性酵素の存在において実施する方法が
提案されている。その際に全く僅少量の血清を試験パッ
チに添加する必要があるに過ぎないので、使甲した薬剤
に対して高い澄明化力を要求する必要はない。

同様の免疫混濁分析測定では試験バッチ中の著しく高い
血清濃度？必要とする。この高められた血清濃度での界
面活性剤の作用性については前記の西Ｐイツ国特許公開
第２８２９５５１号明細書には言及されていない。しか
し０．１容量％を上廻る界面活性剤濃度により抗体と抗
原（本発明ではアポリポタンパク質）との間の免疫反応
が阻害されることが記載されている。

発明が解決しようとする問題点 それ故、血清二分析用試薬の容量比＞ｏ、ｉｓでも血清
混濁の完全かつ長時間の澄明化を惹起する方法及び薬剤
に対する必要性が生じている。その際に、澄明化が可能
な限り迅速に、殊に１０分間より短時間で行なわれるべ
きである。

その有効性ができる限り大きな一範囲（５く…く９）及
び温度範囲（１５くＴ＜、３７℃）にわ・たって保証す
るものであることｔ必要とする。

微量元素の正確な測定と共に１強く脂肪血症の血清を使
う際に免疫混濁分析測定法を用いてアポリボタンバク質
のようなタンパク質乞分析することも妨害されずに可能
であるべきである。

最後に、この方法が基礎とする薬剤が長時間にわたって
、即ち室温で少なくとも一年間は貯蔵安定であることが
められる。

問題点を解決するための手段その１ 本発明は、この要求を満たすという課題に基いている。

この課題は、生物学的液体中の混濁ケ界面活性剤の添加
により除去する方法により解決され、これは界面活性剤
として、場合により緩衝処理した水溶液中の ａ）　ＨＬＢ値４〜１４を有するポリエトキシル化トリ
グリセリド、 ｂ）第二ｎ−アルカンスルホネート並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤 ？使用することを特徴とする。

ポリエトキシル化トリグリセリドとしては、例えばポリ
エトキシル化トリオレイン（例えばＨＬＢ値１１．３）
又はポリエトキモル化ヒマシ油（例えばＭｕｌｓｉｆａ
ｎ　ＲＴ　７又はＭｕｌｓｉｆａｎ　ＲＴ１６６、Ｆａ
、　Ｚｓｃｈｉｍｍｅｒ　＋Ｓｃｈｗａｒｚ社製、ＨＬ
Ｂ値約１０ないしは６）を使用することができる。エチ
レンオキシにとヒマシ油とをオートクレーブ中アルカリ
性触媒下に反応させることにより得られる＆　ＩＪエト
キシル化トリグリセリｒ乞使用する場合に特に良好な結
果が得られる。この方法で製造した生成物は平均１分子
当りオキシエチレンｊｌ（ｆｆ１１０個を含有しかつム
ルシファｙ　（Ｍｕｌｓｉｆａｎ　）　ＲＴ　１６３と
いう名称で市販されている。

本発明で使用可能なｙｌ？　＋）エトキシル化トリグリ
セＩＪ　ｌ’のＨＬＢ値（親水性親油性バランス）は公
知方法により測定することができる〔例えば５ｔａｃｈ
ｅ著、Ｔｅｎａｉａ　−Ｔａ５ｃｈｅｎｂｕｃｈ”、７
０〜７２頁、ｅａｒｌ−Ｈａｎｓｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ出
版、１９７９年、ミュンヘン、ウィーン在参照〕。

緩衝処理した水溶液中のポリエトキシル化トリグリセリ
ドの濃度は０．５〜１５重量悌、殊に１．０〜１２重量
係、特［２〜９重量係である。

殊に、第二ｎ−アルカンスルホネートとしては分子中に
Ｃ原子１２〜１９個を有する化合物馨純物質として又は
分子中に主にＣ原子１２〜１９個７有する種々のｎ−ア
ルカンスルホネートの混合物を使用する。第二ｎ−アル
カンスルホネートはナトリウム塩として使用すると優れ
ている。本発明で特に有利なものとしては、ｎ−パラフ
ィンのスルホ酸化により製造しかつ０連鎖分布が （０１３ｎ−パラフィン：最高１憾 Ｃ工。〜０１５−　ｎ−パラフィン：約５８係Ｃ１６〜
Ｃ〕フーｎ−パラフィン：約６９％）　０１７−　ｎ−
パラフィン；最高６％である第二ｎ−アルカンスルホネ
ート（Ｎａ　−塩）が明らかになった。そのような生成
物は、作用物質分６０チの含水ペーストとしてホスタデ
／ｌ／　（Ｈｏ５ｔａｐｕｒ　）　Ａ　Ｔの名前で市販
されている（　Ｆａ、　Ｈｏｅｃｈｓｔ　ＡＧ社製）。

本発明による第二ｎ−アルカンスルホネートは場合によ
り緩衝処理した水溶液中で純作用物質に対して濃度０．
５〜１０重量係、殊に１．０〜７重量重量時に１．２〜
４．８重量幅で含まれている。

本発明による場合により緩衝処理した水啓液中のポリエ
トキシル化トリグリセリドと第二ｎ−アルカンスルホネ
ートとからの混合物は既にそのま°キで混濁した血清の
十分に迅速な澄明化乞惹起する。しかし更に澄明化速度
を加速するために、この混合物に他の非イオン性又はア
ニオン性界面活性剤Ｚ添加すると有利であることが明ら
かになった。

場合により添加する他の非イオン性界面活注剤としては
、低いオキシエチル化度（１分子当りオキシエチレン単
位平均６〜７個）の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル−又
はアルキルア＋）　−ルーポリグリコールエーテルが該
当する。１分子当りオキシエチレン単位平均５個２有す
るインデカノールポリグリコールエーテルが優れている
（　Ｌｕｔｅｎｓｏｌ　ＯＮ　５Ｑ　、ＢＡＳＦ社製）
。

アニオン性界面活性剤としては、アルキルアリール−ス
ルホネート、第二アルキルサルフェート又は分子中にＣ
原子１６〜１５個を含有するアルカンスルホネートと第
二成分４０〜５０係との混合物（Ｍｅｒｓｏｌａｔ　Ｈ
，Ｂａｙｅｒ　ＡＧ社製）が好適である。ナトリウム−
ドデシルベンゼンスルホネートが特に優れている（例え
ば作用物質含量５０係のＥｌｆａｎ　Ｗ　Ａ　５０とし
てＦａ。

Ａｋｚｏ社から市販）。

この際、すべての例で場合により緩衝処理した水溶液中
で純作用物質に対して０．２〜５重量％、殊に０．５〜
６重量％、特に１〜２重量％の濃度が有利であることが
明らかになった。

本発明方法は、それぞれの成分、即ち水又は場合により
水性緩＠溶液、界面活性剤及び生物学的液体を順次混合
することにより実施することができる。しかし前調製し
た、場合により緩衝処理した水溶液中の界面活性剤の混
合物を使用し、これを生物学的液体と、混濁の迅速かつ
完全な除去を惹起する量で添加すると有利である。一般
に、血清０．２ｒｎｌ中の混濁の完全な除去には本発明
による薬剤０．５〜２　ｍｌの量が十分である。

混合物のＰＨ値は広範囲に選択することができる。本発
明方法により、混濁’＆ｐＨ３〜９で直ちに除去するこ
とができる。、Ｈ値ｗＲＰ１節するために、ｐｌｔｌ、
ｏ〜１０．０であるすべての常用の緩・荷物質ン使用す
ることができる。スクシネート−、アセテート−、ホス
フェート−又はトリス緩衝液乞使用すると特に優れてい
る。緩衝濃度は有利に５〜２５０　ミＩＪモル、特に１
０〜１７０ミリモルである。

澄明化速度は場合により緩衝処理した水性媒体中のイオ
ン濃度を高めることにより一定範囲までは左右すること
ができる。それ故、緩衝物質の不存在又は低い緩衝液濃
度（５〜２０ミリモル）では生物学的液体もしくは洗浄
剤混合物に塩、例えば塩化す）　ＩＪウム、又は数種の
塩を添加することが有利であることが明らかになつた。

添加する塩の濃度は殊に５０〜２００　ミＩＪモル、特
に５０〜１５０ミリモルである。

本発明方法により混濁の除去は広い温度範囲（１５くＴ
く４０°Ｃ）で達成され、温度２０〜６７℃で作業する
と優れている。

問題点を解決するための手段その２ 本発明の他の目的は、生物学的液体、特にヒトの血清又
は血しよう中の混濁を迅速かつ完全に除去するための薬
剤であり、この薬剤が、場合により緩衝処理した水溶液
中の ａ）　ＨＬＢ値４〜１４のポリエトキシル化トリグリセ
リド、 ｂ）第二ｎアルカンスルホネート並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤 を含有することＹ’Ｆｔ徴とする。

本発明による薬剤は、有利に緩衝処理した水溶液中に、 ｔＬ）ＴＴＴ、Ｒ４ｉＭＡ〜１Ａσ）１２１１丁に４シ
ルイにト１）グリセリＰ０．５〜１５重量％、殊に１．
０〜１２重量％、 ｂ）第二ｎ−アルカンスルホネート０．５〜１０重量％
、殊に１．０〜７重量％、並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤０．２〜
５重量％、殊に０．５〜ｌ［ｌ乞含有する。

次の組成の薬剤が特に優れている： 場合により緩衝処理した水溶液中の ａ）ポリエトキシル化トリオレイン又はヒマシ油２〜９
重を係、 ｂ）分子中にＯ原子１６〜１５個乞有する第二ｎ−アル
カンスルホネート又は分子中にＣ原子主に１２〜１９個
ン有する種々のｎ−アルカンスルホネートの混合物１．
２〜４゜８重量％及び場合により ０）　１分子当りオキシエチレン単位平均６〜７個を有
する直鎖状又は分枝鎖状のアルキル−又はアルキルアリ
ールポリグリコールエーテル、アルキルアリールスルホ
ネート、第二アルキルサルフェートもしくは分子中にＯ
原子１６〜１５個７有するアルカンスルホネートと第二
成分４０〜５０係とからの混合物１〜２重量重 量光明による薬剤は緩衝族としてｐＫ値２．０〜１０．
０である一般に公知の緩衝物質を含有してよい。特に優
れているのはスクシネート−、アセテート−、ホスフェ
ート又はトリス緩衝物質である。緩衝物質濃度は５〜２
５０６１７モル、殊に１０〜１７０ミリモルである。

更に、本発明による薬剤はイオン濃度を高めるために塩
、例えば塩化ナトリウム又は数種の塩乞含有してよい。

塩蹟度は殊に５０〜２００ミリモル、特に５０〜１５０
ミリモルである。

本試薬は前記の成分に加えて、一定の血清成分の測光分
析に必要である他の物質暑含有してよい。例えば血清ト
ランスフェリン鉄のような微量元素分析の場合に、これ
はアスコルビン酸のような還元剤並びに色素錯体ビルグ
ー、例えばパトフエナントロリンージスルホン酸、フエ
ロチーネ（ＦｅｒｒｏＺｉｎｅ　）又はフェロイン型の
他の化合物であってよい。

例えばアポリポタンパク質及びその下部単位並びに免疫
学的に活性なアポリポタンパク質の分解片のような血清
成分の免疫濁度測定又は免疫比濁測定には試薬は、付加
的な成分として抗体、例えば抗血清、それから得られた
γ−グロブリンー又は工ｇＧ−フラクションの形で、モ
ノクロン抗体並びに免疫沈降反ＵｉＹ促進する物質、例
えば分子址１０００〜１００００．殊に６０００のポリ
エチレングリコールを濃度１〜６重量重量法に６〜４重
量係で含有してよい。

作用 生物学的液体中の混濁り迅速かつ完全に除去するための
本発明による方法及び試薬はその澄明化作用の点で公知
の方法もしくは使用可能な薬剤よりも、特に血清：試薬
−容量比＞ｏ、ｉｓで明らかに優れている。この優秀さ
は特に血清中の微量元素の分析で、例えば血清中の鉄の
測定で明らかである。この際に十分な測定精度乞達成す
るために、分析用試薬に対して高い血清量乞使用すべき
であり、つまり測定溶液中に高い脂質含量、それ故強い
混濁現象を見込むことができる。高い澄明化速度により
著しい脂肪血症血清においても特定成分の分析は血清と
試薬と乞混合して最高１０分後には実施することができ
、これは特に自動的な分析忙とって重要である。

更に、西−イッ国特許公開第２８２９５３１号明細書に
より特許請求された薬剤に比べて記載の試薬における洗
浄剤濃度が高いにもかかわらず抗原抗体沈降反応による
血清成分の免疫学的測定も完全に実施できるのは驚異的
である。

それ数本発明による方法及び試薬ｔそのような免疫沈降
反応で、例えば血清−ア、１１：　１７ボタンパク質も
しくはその下部単位の免疫学的測定又は免疫学的に活性
のアポリポタンパク質分解片の免疫学的測定でも有利に
使用することができる添付図面から本発明による薬剤の
作用性が明らかである。

第１図では顕著な脂肪血症の血清中の混濁が後記の例１
による種々の澄明化剤で除去される速度が示されており
、この際に、 ＡＳｊＸ薬Ａ−ヨーロッパ特許出願公開第００４１７０
４号明細書、 Ｂ：試薬Ｂ＝本発明による薬剤 Ｃ：盲検値用試薬 血清：分析用試薬−容量比＝ｏ、２ 温度　２５℃ λ”　５７８　ｎｍ ノー厚　１　（ンｍ である。

第２図乃至第４図には後記の例６に相応してそれぞれ血
清−アポリポタンパク質Ａ−１（ＡＰＯＡ　−１）、Ａ
　−１（ＡＰＯ−１）並びＫＢ（ＡＰＯＢ）乞標準血清
稀釈列を介して測定した免疫濁度測定の検量線が示され
ている。

次に本発明を実施例につき詳説する。

例　１ 界面活性剤を含有する種々の試薬による脂肪血症血清の
澄明化速度 １、試薬 試薬Ａ（ヨーロッパ特許出願公開第００４１７０４号明
細書による薬剤） 内容物質　濃　度 メルソラート（Ｍａｒｓｏｌａｔ　） Ｈ１水中、６０係　１５０ｍ１／ｌ ト　リ　ト　ｙ　（Ｔｒｉｔｏｎ　）　Ｘ１５１、水中
６０幅　２００ｍ１／ｌ ｐ−トルエンスルホン酸 、Ｎａ塩　２５８ミリモル／ｌ メルソラート　ＨはＣ原子１６〜１５個を有しかつ第二
成分４０〜５０係の第、ニアルカンスルホネートの市販
されている混合物 トリトン　Ｘ１５１はインオクチルフェノール−ポリエ
チレンクリコールエーテルである。

内容物質　濃　度 ムルシファｙ（Ｍｕｌｓｉｆａｎ　）　９０．００　ｇ
／　１−ＲＴｌ　６３　（＝９．０重量％） ホスｌ　テＡ／　（Ｈｏ５ｔ、ａｐｕｒＲ）　８０．ｏ
Ｏｇ、／ｚＡＴ　（＝４．８重−凌係） エルファｙ　（ｇｌｆａｎ　）　４０．００　＆／ＬＷ
　Ａ　５０　（＝２．０重量’ｌ＝　）酢酸ナトリウム
緩衝剤 （ｐＨ５，４）　１７０ミリモ／Ｌ／／１２、試験の実
施 １ｃｍキュベツト中で顕著忙脂肪血症の血清０゜２ｄと
試薬人ないしは試薬Ｂ１ｒｎｌとＹ２５℃で混合する。

５７　Ｆ３　ｎｍでの透過性の変化を時間との相関関係
で測定する。得られた結果は第１図に図示されている。

３、評価 第１図に図示した透過性の変化から、血清二分析用試薬
−容を比０．２で本発明による薬剤（試薬Ｂ、＞により
既に２分後には混濁の完全な除去が達成されることが明
らかである。ヨーロッパ特許出願公開第００４１７０４
号明細書による試薬Ａでは６０分後でもまだ完全には混
濁は除去されない。

例　２（適用例） 血清中の鉄の測定 １ｏ試薬 １．１盲検値用試薬 内容物質　濃　度 ムルシ７７　ン（Ｍｕ’ｌｓ：ＬｆａｎＲ）　９０．０
０　ｇ／　ＬＲＴ１６３　（＝９．０重量％） ホスタデｔｖ（Ｈｏ５ｔａｐｕｒＲ）　８０．００１　
／　ＬＡＴ　（＝４Ｊ３４重４） エルファｙ　（ｌｆａｎ　）　４０．００．！ｉ’／１
ＷＡ５０　（＝２．０重量％） 酢酸ナトリウム緩衝剤 （ｐＨ５，４）　１７０ミリモル／ｌ アスコルビン酸　１０ミリモルフを 内容物質　濃　度 ム／Ｉ／　−、／　７７７（Ｍｕｌｓｉｆａｎ　）　９
０．００１１　／　ｔＲ’Ｉ’　１６３　（＝９．０＊
１４）ホスタデ／ｌ／　（Ｈｏ５ｔａｐｕｒ　）　８０
．００９　／　ＬＡＴ　（＝４．８重量％） ｘｙ７７　ｙ　（Ｋｌｆａｎ　）　４０．００＃／／−
ＷＡ５０　（＝２．０重量％） 酢酸ナトリウム緩衝剤 （ｐＨ５，４）　１７０ミリモル／Ｌ アスコル♂ン酸　１０ミリモルフｔ フエロチーネ （ＦｅｒｒｏＺｉｎｅ”）　１）　１．６ミリモ／ｌ／
／　Ｌｌ）バッフ拳ケミカル　Ｏｏ、　（ＨａｃｈＣｈ
ｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ａｍｅｓ　、工ｏｗａ　在、　
ＵＳＡ）社の登録商標 ２、試験パッチ 温度３７”０．波長５７８ｎｍ、層厚１Ｑ　ｎｍ鉄分を
含まない反応容器中に次の溶液をピペット添加する： 試　料　盲検値用試料 呈色試薬　１．ＯＯｍノ　− 盲倹値用試薬　１．００属 血清０．２０ｍ１０．２０ｍ／！ それぞれ混合し、１０分間恒温保持し、その後で呈色試
薬１．０ＯｒｒＬｅとＨ２Ｏ０，２Ｑ　ｍｌとからの混
合物に対する試料の吸収（△へ〇）並びに盲検値用試薬
ｉ、ｏｏｉとＨ２Ｏ０，２’Ｑ　ｍｅとからの混合物に
対する盲検値用試料の吸収（ΔＡ２）を測定する。そこ
から△Ａ＝△Ａ、−△Ａ２　Ｙ計算する。

６、評価 血清中の鉄の濃度は次式： 血清中の鉄の濃度（μｇ／１００ｍ１）−ΔＡＸ１３３
０より計算する。

試薬１．１及び１．２中でムルシファン　ＲＴ１６６の
代りにムルシファン　ＲＴ７Ｙ同量で使用することがで
き、その際に結果は変らない。同様に、エルファン　ｗ
Ａ５Ｑ（Ｎａ−ｐデシルベンペンスルホネ−１−、水溶
液中の作用物質分５０％）ｖ同濃度（作用物質分に関し
て）の第二アルキルサルフェート（Ｔθｅｐｏ１６１０
６！　、　Ｆａ、５ｈｅｌ１社製、分子中のＣ原子８〜
１８個）に代えることができる。すべての場合に、脂肪
血症性血清の使用で澄明化は恒温保持時間で終結しかつ
完全である。

例　６（適用例） 血清中のア＋］−？　ＩＪボタンバク質（Ａ−１，Ａ−
ＩＩ、Ｂ）の測定 １、試薬 １．１羊−抗一ヒトＡｐｏ　−Ａ　−１−抗血７Ｋ（γ
−グロブリンフラクション、ＢｏｅｈｒｌｎｇｅｒＭａ
ｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ社、目録番号７２６４７８） １．２羊−抗−ヒトＡｐｏ　−Ａ　−１［−抗血７Ｈ（
γ−グロブリンフラクション、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭ
ａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ社、目録番号７２６４８６） １．６羊−抗一ヒトＡｐｏ　−Ｂ−抗血ｔＮ　（γ−グ
ロブリンフラクシ”３７、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎ
ｎｈｅｉｍ　Ｇｍｂ　Ｈ社、目録番号７２６４９４　） １．４抗血清稀釈剤 組成 内容物質　濃　度 ムル身ファ７（Ｍｕｌｓｉｆａｎ　）　２０１１　／　
ＩＲＴＩ　６３　（＝２．０重量係） ホスタデ／ｌ／　（ＨＯ８ｔａｐｕｒ　）　２０　、！
ｉ’　／　ＬＡＴ　（＝１．２重量係） ルーテンゾ／ｌ／（Ｌｕｔｅｎｓｏｌ　）　１０　ｇ／
　ＬＯＮ５０　（−１，０重量係） リン酸カリウム緩衝剤 （ｐＨ７，４）　１０ミリモル Ｎａ１ｌ　１５０ミリモル ポリエチレングリコール ６０００　４０ｇ／１ １．５試料稀釈剤（血清及び標準用）ニリン酸カリウム
緩衝剤（ｐＨ７，４）１０ミリモル／ｌ、　Ｎａ１ｌ　
１　５　０　ミ　リ　モ／ｌ／　／　Ｌ１．６標準血清
（工ｍｍｕｎｏｎｅｐｈ　対照標巡、工ｍｍｕｎｏ　Ｇ
ｍｂＨ、目録番号４３８０１０５　） ２、抗血清−１標準血清−及び血清稀釈２．１抗血清稀
釈液 抗血清（１，１，１，２又は１．３）ｙａｌ−それぞれ
血清稀釈剤１．４で１０倍に稀釈する。使用前に２０〜
２５℃で１５分間放置する。

２．２標準血清稀釈液 標準血清（１，６）ン試料稀釈剤（１，５）で５．１０
，２０．４０及び８０倍に稀釈する。

２．６血清稀釈液 Ａｐｏ　Ａ　−１測定のため血清Ｚ試料稀釈剤（１，５
）で２０倍に、Ａｐｏ　Ａ　７　［又はＡｐＯＢ測定の
ため血清を試料稀釈剤（１゜５）で１０倍に稀釈する。

６、試験バッチ（Ａｐｏ　Ａ　−１，Ａｐｏ　Ａ−■又
はＡｐｏ　−Ｂ　） 温度２５”Ｏ，波長３６６ｎｍ、層厚１Ｑｍｍ反応容器
中にピペット装入する： 試　料　盲検値用試料 抗血清稀釈液　２．００ｍ１　− 抗血清稀釈剤　２．００１Ｌｌ 血清−又は標 準血清稀釈液　０．１０ｍ１　Ｏ，１０ｄ混合し、２．
５時間恒温保持し、短時間振盪しかつ抗血清稀釈液２．
００　ＷＬｌと試料稀釈剤０．１０−とからの混合物に
対する試料の吸収（ΔＡよ）並びに抗血清稀釈剤２．０
０７ｄと血清−又は標準血清稀釈液０．１０ｄとからの
混合物に対する盲検値用試料の吸収（△Ａ２）Ｙ測定す
る。それらからΔＡ＝ΔＡ１−ΔＡ２　ン計算する。

４、評価 Ａｐｏ　Ａ　−１、Ａｐｏ　Ａ　−１又はＡｐｏ　Ｂの
濃度（ΔＡ　）は標準稀釈列で作成した基準線により明
らかである。

この試験法により得られた代表的な基準線は第２図乃至
第４図に図示されている。

ムルシファン　ＲＴ１６３の代りに抗血清稀釈剤１．４
中で、ムルシファン　ＲＴ７又はポリエトキシル化トリ
オレイン（例えばＴａｇａｔ　Ｔ。

）を同量で使用することもでき、その際に結果は変らな
い。すべてで脂肪血症性血清の澄明化は、盲検値用試料
バッチについて認められると同様に短時間（約１分間）
で完全に終結した。

【図面の簡単な説明】

第１図は脂肪血症性血清の吸光度と澄明化速　、度との
相関関係を示す線図、第２図は血清−アポリボタンバク
質Ａ−■の免疫濁度測定による検量線の図、第６図は血
清−リボタンバク質Ａ−■の免疫濁度測定による検量線
の図、第４図は血清リポタンパク質Ｂの免疫濁度測定に
よる検量線の図である。 第１頁の続き ０発　明　者　ジョニイ・ステーペル　ドイス ［相］発　明　者　ヨアヒム・ツイーゲン　トイホルン
　エー ソ連邦共和国シュタルンベルク・ヤーンシュラ−上２０
ソ連邦共り国シュタルンベルク・イナーザイデルーヴク
　１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　界面活性剤を添加することにより生物学的液体中
   の混濁を迅速にかつ完全に除去する方法において、界面
   活性剤として、緩衝処理されていてよい水溶液中の ａ）　ＨＬＢ値４〜１４のポリエトキシル化トリグリセ
   リド、 ｂ）第二ｎ−アルカンスルホネート 並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤 を使用すること乞特徴とする生物学的液体中の混濁を迅
   速にかつ完全に除去する方法。 ２、緩衝処理されていてよい水溶液中のａ）　ＨＬＢ値
   ４〜１４のポリエトキモル化ト＋Ｉ　）ｌ”　ＩＩ　Ｊ
   ｖ　ＩＩ　Ｖ　ｎ只−−１２１ｆ　番４ｂ）第二ｎ−ア
   ルカンスルホネート ０．５〜１０重−ＷＦチ 並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤　０．２
   〜５重量係 を使用する特許請求の範囲第１項記載の方法６、緩衝処
   理されていてよい水溶液中のａ）ポリエトキシル化トリ
   オレイン又はヒマシ油　２〜９重量重 量係号子中にＣ原子１２〜１９個を有する第二ｎ−アル
   カンスルホネート又は分子中に主にＣ原子１２〜１９個
   乞有する異なる第二ｎ−アルカンスルホネートの混合物
   　１．２〜４．８重ψ係 並びに場合により Ｃ）１分子当りオキシエチレン単位平均６〜７個を有す
   る直鎖状又は分枝鎖状のアルキル−又はアルキルアリー
   ル−ポリグリコールエーテル、アルキルーアリール−ス
   ルホネート、第ニアルキルサルフエζへ〜へ亀＼瓢飄へ
   の混合物 １〜２重量％ を使用する特許請求の範囲第１項記載の方法４、ｐＫ値
   ２．０〜１０．０乞有する緩衝液を使用する特許請求の
   範囲第１項から第６項までのいずれか１項記載の方法。 ５、緩衝液としてスクシネート−、アセテート−、ホス
   フェート−又はトリス緩衝液を濃度５〜２５０　ミＩＪ
   モルで使用する特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、イオン濃度を高めるために塩少なくとも１種を添加
   する特許請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１
   項記載の方法。 Ｚ　塩として塩化ナトリウム％ａ度５０〜２００ミリモ
   ルで添加する／ｉ許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、生物学的液体中の混濁を迅速にかつ完全に除去する
   ための薬剤において、該薬剤が緩衝処理されていてよい
   水溶液中に ａ）　ＨＬＢ値４〜１４のポリエトキシル化トリグリセ
   リＰ１ ｂ）第二ｎ−アルカンスルホネート 並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤 Ｚ含有することＺ％徴とする生物学的液体中の混濁を迅
   速にかつ完全に除去するための薬剤。 ９　緩衝処理されていてよい水浴液中にａ）　ＨＬＢ値
   ４〜１４のポリエトキシル化トリグリセリド　０．５〜
   １５重量係 ｂ）第二ｎ−アルカンスルホネート ０．５〜１０重量係 並びに場合により Ｃ）他の非イオン性又はアニオン性界面活性剤　０．２
   −？　５重量％ を含有する特許請求の範囲第８項記載の薬剤１０、緩衝
   処理されていてよい水溶液中にａ）ポリエトキシル化ト
   リオレイン又はヒマシ油　２〜９重量係 ｂ）分子中に０原子１２〜１９個を有する第二ｎ−アル
   カンスルホネート又は分子中に主に０原子１２〜１９個
   を有する異なる第二ｎ−アルカンスルホネートの混合物
   　１．２〜４．８重量循 並びに場合により Ｃ）１分子当りオキシエチレン単位平均６〜７個を有す
   る直鎖状又は分枝鎖状のアルキル−又はアルキルアリー
   ル−ポリグリコールエーテル、アルキル−アリール−ス
   ルホネート、第二アルキルサルフェート又は１分子中に
   Ｏ原子１６〜１５個を有するアルカンスルホネートと第
   二成分４０〜５０幅とからの混合物 を含有する特許請求の範囲第８項又は第９項記載の薬剤
   。 １１、ｐＫ値２．０〜１０．０を有する緩衝液を含有す
   る特許請求の範囲第８項から第１０項までのいずれか１
   項記載の薬剤。 １２、緩衝液としてスクシネート−、アセテート−、ホ
   スフェート−又はトリス緩衝液を濃度５〜２５０ミリモ
   ルで含有する特許請求の範囲＠１１項記載の薬剤。 １６、イオン濃度を高めるために塩少なくとも１種を含
   有する特許請求の範囲第８項から第１２項までのいずれ
   か１項記載の薬剤。 １４、塩として塩化ナトリウムを濃度５，０〜２００ミ
   リモルで含有する特許請求の範囲第１１項記載の薬剤。 １５、血清アポリポタンパク質の免疫学的測定忙使用す
   る特許請求の範囲第８項から第１４項までのいずれか１
   項記載の薬剤。 １６、免疫学測定はアポリポタンパク質とその抗仕との
   間の俤橙沈隆反広の咥に生じる７昆濁を濁度測定法又は
   比濁測定法により行なう特許請求の範囲第１５項記載の
   薬剤。