JPS6028931A - ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 - Google Patents

ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法

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JPS6028931A
JPS6028931A JP58136794A JP13679483A JPS6028931A JP S6028931 A JPS6028931 A JP S6028931A JP 58136794 A JP58136794 A JP 58136794A JP 13679483 A JP13679483 A JP 13679483A JP S6028931 A JPS6028931 A JP S6028931A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、人を含む動物の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤
の濃縮方法に関する。
本出願人は、すでに動物の悪性腫瘍細胞の培養後培地よ
り悪性腫瘍細胞を除いて抽出したものからなる動物の悪
性腫瘍細胞増殖抑制剤を提案した。
この悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、正常細胞に対して致死
効果がなく、悪性腫瘍１１１胞に対して増殖抑制や致死
効果を特異に有している。
この発明の目的は、より少ない投与量で悪性腫瘍細胞に
対し、より著しい増殖抑制効果を有す増殖抑制剤を得る
ためにこれを濃縮することしある。
この発明は、動物の悪性腫瘍細胞を成長用培地にて培養
器に飽和状態になるまで増殖し、次にこれを抽出培地に
て培養する時に血清蛋、自’−’に−ｒ、：はアルブミ
ンを添加し、その後、悪性腫瘍細胞を除いて培地を採取
し、さらに、アミコンフィルタにて限外源・過を行ない
、分子量１万以上の分画に存在する物質を採取するもの
である。
この発明によれば、悪性Ｍ瘍細胞に対する増殖抑１１Ｊ
物質が血清またはアルブミンと結合し、結合体としてし
て高分子化でき、先に提案した悪（’Ｉ腫瘍細胞の増殖
抑制剤と比べ、］−数倍に濃縮した悪性腫瘍細胞に対す
る増殖抑制剤を得ることができる。
そして、この発明により得られた悪性腫瘍細胞の増殖抑
制剤は士数倍に濃縮しているので、僅かの投与量で悪性
腫瘍細胞に対し著しい増殖抑制効果を得ることができる
。
次に、この発明の実施例について述べる。
（実施例１） １）使用した細胞 ヒ１−腎細胞癌由来樹立株細ｎ’＆　Ｉ−Ｉ　ＲＣ２）
培養方法 まず、１０％新生仔牛１６１消を添加した１３ａｓａ１
Ｍｅｄｉｕｍ　［：ａｇｌｅ（３ＭＥ　）を成長用培地
として用い、ヒト腎Ｉｌｌ胞癌由来樹立株ｍ胞１−Ｉ　
ＲＣを加え、培養器に飽和状態になるまで、この悪性腫
瘍細胞を増殖さＵる。その後１回）入って而）ｉ’ｉを
除き、これを抽出培地に移し、′１０％生新生児血清を
添加したＢＭＥにて、３０°−３７゛Ｃの温度条件の下
で１週間培養を行なう。
３）採取方法 培養したｊ８地を３００Ｏｒｌ１ｍ　、　１０ｍ１ｌｌ
　ニＴ遠沈した後、０．４５μのミリポアフィルタに（
ｉ１ｍ過し、悪性ｎφ瘍細胞成分を除去りる。次にアミ
コン社製の分子量１０４のフィルタを用い、１万以Ｆの
分画（ｆ１゛≧１０４）と１万未満の分画（ｆｒ＜１０
４＞とにわけて採取づる。
次に、実施例１の効果を確認ツ゛るための実験について
述べる。
１）悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の検定法 ｉ５ａ＋ｍ径のプラスチックシャーレに入れた１０％新
生仔牛血清を添加したＢＥＭの培地にヒト腎細胞癌由来
樹立株細胞１−＋　ＲＣを１０４１１Ｍ＋植え込み、２
４時間培養した後、前記実施例１の方法で製造された物
質を含む培地等の実験用培地と交換し、１日おきに同培
地で３８地交換を行ない、細胞の増殖状態を６日目に測
定する。
限外濾過において、分子ｍ１万以上の分画（ｒｒ≧１０
４）に存在する物質を含む培地は、分子ｍ１万以上の分
画に存在覆る物質がかなり濃縮されているので、元のｅ
ｒａに補正するために１０％または２０％の新生仔牛面
清を添加した。この発明の対照とする分子間１万未満の
分画（ｆｒ＜１０’）より採取したものを含む」８地は
、抽出培養時に潤貸された栄養を補う意味でＢＭＥに含
有されているのと同じ成分、ａ＊ＩＩのアミノ酸ビタミ
ン、グルコースを添加して栄養的に補正したものに１０
％または２０％新生仔牛血清を添加したものを用いた。
また、この発明の効果を未処理のものや分子量１万未満
の分画より採取したものと比べるために、６日目の培養
した悪性腫瘍細胞の生存数を数え、検定の始めに植えた
細胞数に基づき、生存率を百分比で示した。また、比活
性は１００から生存率を引いて死亡率をめ、死亡率を投
与量で割った単位投与聞当りの化Ｃ率を締出し、未処理
のものを１として比較しＩごものである。
２）実験結果 （表　１） 表１Ｊ、す、この発明により４【１られたものは先に提
案した未処理のものど比へ、士数倍に濃縮することがで
き、士数分の−の僅かの投与量で、同様ト悪性腫瘍細胞
の増殖抑制効果を得ることができることがわかる。
（実施例２） １）使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細１１２１　＋−Ｉ　ＲＣ２）
培養方法 まず、１０％新生仔牛血清を添加したＩ３ａｓａ１Ｍｅ
ｄｉｕｍ　Ｅａｇｌｅ　（ＢＭ　Ｅ　）にヒト腎細胞癌
由来樹立株細胞ＨＲＣを加え、培養器に飽和状態になる
までこの悪性腫瘍細胞を増殖させる。次に、この培養後
培地に適当量の牛面消または牛アルブミンを添加し、４
℃の温度条件下で２４　ｈｒｓ放置する。
３）採取方法 実施例１と同様である。
また、検定法及び実験結果の考察についても実施例１と
同様であり、以下に実験結果を表２に示す。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 動物の悪性ｌ！瘍細胞を培養し、イの培地に血清蛋白ま
    たはアルブミンを添加してさらに培養し、その後前記悪
    性腫瘍細胞を除い“Ｃ培地を採取し、次にＭ培地を分子
    量１万のフィルタにて限外罐過し、分子ｍ１万以−ヒの
    分画に存在する物質を採取づることを特徴とする動物の
    悪性腫瘍細胞のＪＩ１１殖抑制剤の濃縮方法
JP58136794A 1983-07-28 1983-07-28 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 Granted JPS6028931A (ja)

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EP0133029B1 (en) 1990-12-27
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