JPS60178820A - 抗腫瘍活性物質の製造方法 - Google Patents
抗腫瘍活性物質の製造方法Info
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- JPS60178820A JPS60178820A JP59032199A JP3219984A JPS60178820A JP S60178820 A JPS60178820 A JP S60178820A JP 59032199 A JP59032199 A JP 59032199A JP 3219984 A JP3219984 A JP 3219984A JP S60178820 A JPS60178820 A JP S60178820A
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- cartilage
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗哩瘍活性物質の新税製造方法に関する。
本発明＠は、軟骨組織よりの粗抽出物Ｃユそのままで妹
抗ｊ餠瘍活性を示さないが、水性ｍｋで抽出した後、銭
水性有檄ｔ６媒で沈ｒ赦せしめ血管内皮細鉋増旭阻壱γ
６性金有する分子瀘１０〜３０刀の画分を分離したとこ
ろこれが抗叶瘍活性を示すことを見出し、この発見に基
づいて本発明を完成するに至った。すなわち、この物質
は、上記粗抽出物よシンマトメジン様成長因子ＣＤＦ
（Ｃａｒｔｉｌａｇｅ −Ｄｅｒ４ｖｅｄ Ｆａｃｔｏ
ｒ ）を分離した残渣より抽出精製されたものである。
抗ｊ餠瘍活性を示さないが、水性ｍｋで抽出した後、銭
水性有檄ｔ６媒で沈ｒ赦せしめ血管内皮細鉋増旭阻壱γ
６性金有する分子瀘１０〜３０刀の画分を分離したとこ
ろこれが抗叶瘍活性を示すことを見出し、この発見に基
づいて本発明を完成するに至った。すなわち、この物質
は、上記粗抽出物よシンマトメジン様成長因子ＣＤＦ
（Ｃａｒｔｉｌａｇｅ −Ｄｅｒ４ｖｅｄ Ｆａｃｔｏ
ｒ ）を分離した残渣より抽出精製されたものである。
本発明の出発物質として使用する動物軟骨は多着に入手
できるという点で胎児軟骨、特に牛胎児軟骨が好ましい
。
できるという点で胎児軟骨、特に牛胎児軟骨が好ましい
。
本発明の目的物質は水に可溶、親水性有機溶媒に難溶で
あるが、出発物質より抽出するには、グアニジン等塩水
溶液で一４５〜７程度の塩浴液に浴解し、これにアセト
ン、エタノール等の親水性有機溶媒を加えて再沈せしめ
分取すればよい。
あるが、出発物質より抽出するには、グアニジン等塩水
溶液で一４５〜７程度の塩浴液に浴解し、これにアセト
ン、エタノール等の親水性有機溶媒を加えて再沈せしめ
分取すればよい。
分子麓１０〜３０万の画分を分離するには例えは膜分画
法を採用すればよい。
法を採用すればよい。
血管内皮＃胞増殖阻害活性の測定は公知の測定手段を利
用すればよいが、本発明では後述の方法により行りた。
用すればよいが、本発明では後述の方法により行りた。
なお、血１゛内皮＃ｌ胞増畑１滋告粘注戟分と尻Ｊｌｊ
Ｔｈ陽活性成分が同一かどうか確認できていないが、上
記処理手段によシ得られ、かつ血管内皮細胞増殖阻害活
性を有する両分、例えば後述試料Ｆ１Ｇが抗１ｌｌＴｆ
４ｓ活性を有するものとして本発明の目的物質となる。
Ｔｈ陽活性成分が同一かどうか確認できていないが、上
記処理手段によシ得られ、かつ血管内皮細胞増殖阻害活
性を有する両分、例えば後述試料Ｆ１Ｇが抗１ｌｌＴｆ
４ｓ活性を有するものとして本発明の目的物質となる。
具体的には例えば、牛脂児軟骨をスライスし水性溶媒例
えば塩水溶液中でホモジナイズし、アセトン分ｉ＋＋＋
＋ （４５〜６５多程度沈殿）し、得られた沈澱を上記
塩水溶液中に再溶解し、膜分画（分子−縦１０〜３０万
）により分離すればよいが、さらにこれより血管内皮細
胞増殖阻害活性を有する物質を分離することもできる。
えば塩水溶液中でホモジナイズし、アセトン分ｉ＋＋＋
＋ （４５〜６５多程度沈殿）し、得られた沈澱を上記
塩水溶液中に再溶解し、膜分画（分子−縦１０〜３０万
）により分離すればよいが、さらにこれより血管内皮細
胞増殖阻害活性を有する物質を分離することもできる。
又は、さらにジエチルアミンエチル（ＤＥＡＥ ）アが
ロースに吸殉させ（−７〜９）た後、食塩水（０，２５
〜０．６Ｍ）で溶離すればよい。所望により透析等常法
の蛋白積装手段により梢製し凍結転球し保存することが
できる。
ロースに吸殉させ（−７〜９）た後、食塩水（０，２５
〜０．６Ｍ）で溶離すればよい。所望により透析等常法
の蛋白積装手段により梢製し凍結転球し保存することが
できる。
このようにして倚られた凍結乾燥品は淡黄色の幼木で、
水に可溶である。水浴液のｌ１ＩＩｌ値は６〜７である
。
水に可溶である。水浴液のｌ１ＩＩｌ値は６〜７である
。
本発明で得られた物質を制癌剤として使用する場合には
、そのままあるいは適当な相体とともに経口投与するか
、生理食塩水に溶解して注射膜力することが考えられる
。
、そのままあるいは適当な相体とともに経口投与するか
、生理食塩水に溶解して注射膜力することが考えられる
。
本発明品は、生体由来であるため副作用が少なく、大量
に入手可能な動物欧骨を出発原料としているので、必要
によジさらに精製して制癌剤としての実用性が期待され
る。
に入手可能な動物欧骨を出発原料としているので、必要
によジさらに精製して制癌剤としての実用性が期待され
る。
以下、実施例によｐ本発明の詳細な説明する。
実施例
血営内皮細胞、例えば牛肺動脈内皮細胞を通常の方法、
例えば直径６ＬＩ、９６穴のマルチ培養プレート径−ト
当り５Ｘ１０ 個細胞を０、ｌ Ｉｎｌの２０饅牛脂児
血清含有最少必須培＊液（ＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔ
ｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ ）中に懸濁し、播樺し、５％炭
ボガス通気下３７℃で培養した。培誉３日後培地交侯を
行ない、試料＠ｅ、（試料を平衡塩腿浴液に溶解したも
の）又は試料の浴屏に用いた前記平貧聰矩溶液（対照）
を脩加し、これより２２時１’ｔｆＪ俊、３Ｈ−チミジ
ン（終濃度１μｃ：／ｒｕｇ）添加し、さらに２時間後
ＤＮＡ画分へとり込まれた Ｈ放射能を計測し、ｒ Ｄ
ＮＡ合成」とする。試料および対照のＤＮＡ合成値より
、下記式により試料の阻害率をめる。例を第１図に示し
たＯ Ｏ：試料Ｇ 、 △：試料Ｆ １１ｎｌの培地に添加したとき阻害率５０チを示すよう
な試料を活性１単位とする。
例えば直径６ＬＩ、９６穴のマルチ培養プレート径−ト
当り５Ｘ１０ 個細胞を０、ｌ Ｉｎｌの２０饅牛脂児
血清含有最少必須培＊液（ＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔ
ｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ ）中に懸濁し、播樺し、５％炭
ボガス通気下３７℃で培養した。培誉３日後培地交侯を
行ない、試料＠ｅ、（試料を平衡塩腿浴液に溶解したも
の）又は試料の浴屏に用いた前記平貧聰矩溶液（対照）
を脩加し、これより２２時１’ｔｆＪ俊、３Ｈ−チミジ
ン（終濃度１μｃ：／ｒｕｇ）添加し、さらに２時間後
ＤＮＡ画分へとり込まれた Ｈ放射能を計測し、ｒ Ｄ
ＮＡ合成」とする。試料および対照のＤＮＡ合成値より
、下記式により試料の阻害率をめる。例を第１図に示し
たＯ Ｏ：試料Ｇ 、 △：試料Ｆ １１ｎｌの培地に添加したとき阻害率５０チを示すよう
な試料を活性１単位とする。
又、培養プレート径を１６１１１とし、１穴当９２ ｘ
１ ｏ’個細胞を播種し、１日置きに培地交換を行な
い同様に１〜２週間培養したときの増殖細ＩＪｆｊｌ数
に及ぼす。試料Ｄ（後述）の阻害作用を第２図に示した
。
１ ｏ’個細胞を播種し、１日置きに培地交換を行な
い同様に１〜２週間培養したときの増殖細ＩＪｆｊｌ数
に及ぼす。試料Ｄ（後述）の阻害作用を第２図に示した
。
・：試料Ｄ２００μｇ／ｒｎｌ （終（農度）添力■Ｏ
：対照 実施例 （１） 牛脂児軟骨２００ｇをスライスし、１Ｍグアニ
ジン塩１−０．１Ｍ６−アミノ−ｎ−カプロン酸（ｐＨ
６，０）２１中でポリトロンによりホモジナイズした。
：対照 実施例 （１） 牛脂児軟骨２００ｇをスライスし、１Ｍグアニ
ジン塩１−０．１Ｍ６−アミノ−ｎ−カプロン酸（ｐＨ
６，０）２１中でポリトロンによりホモジナイズした。
４℃下４８時間攪拌の後、８０００ ｒｐｍ 。
２０分（４℃）遠心し得られた上清にアセトンを４５％
（終う度）添加し、０℃下２０分放置したＯ次いで、８
０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠心し得られた上
清にさらにアセトンを加え終濃度６５％とし再び０℃下
２０分放置後８０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠
心した。得られた沈澱を５０ｒｔｔｌのＪ留水に溶解し
、蒸留水に対して、４℃下４８時間透析を行い、凍結乾
燥の後４ｇのアセトン画分（試料Ａ）を得た。
（終う度）添加し、０℃下２０分放置したＯ次いで、８
０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠心し得られた上
清にさらにアセトンを加え終濃度６５％とし再び０℃下
２０分放置後８０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠
心した。得られた沈澱を５０ｒｔｔｌのＪ留水に溶解し
、蒸留水に対して、４℃下４８時間透析を行い、凍結乾
燥の後４ｇのアセトン画分（試料Ａ）を得た。
試料Ａ３ｇを４Ｍグアニジノ塩酸、０．０１Ｍエチレン
ソアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．１ Ｍ ６−アミノ
−ｎ−カプロンＨ（ｐ’４６．５ ） ２００ ｎｔｌ
に溶解し、８０００ ｒｐｍ ２０分（４℃）遠心し、
得られた上清を、１．０ ＋＜９７ｃｗ’加圧下、アミ
コン社製分子箪３０万カット限外濾過膜ｒＸＭ−３００
Ｊを辿し、限外抱過漱を侍だ。さらに、２．０ψ９加圧
下、東岸ｄΦ紙社製分子届：２万カット限外濾過族ｒＵ
Ｐ２０Ｊ全通して内液（分子に３０万〜２万幽分）（試
料Ｂ）限外濾過液（試料Ｃ）を得た。試料Ｂを同様透析
し、凍結乾燥し２６６ ｍ９の試料Ｂ乾燥品を得た。
ソアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．１ Ｍ ６−アミノ
−ｎ−カプロンＨ（ｐ’４６．５ ） ２００ ｎｔｌ
に溶解し、８０００ ｒｐｍ ２０分（４℃）遠心し、
得られた上清を、１．０ ＋＜９７ｃｗ’加圧下、アミ
コン社製分子箪３０万カット限外濾過膜ｒＸＭ−３００
Ｊを辿し、限外抱過漱を侍だ。さらに、２．０ψ９加圧
下、東岸ｄΦ紙社製分子届：２万カット限外濾過族ｒＵ
Ｐ２０Ｊ全通して内液（分子に３０万〜２万幽分）（試
料Ｂ）限外濾過液（試料Ｃ）を得た。試料Ｂを同様透析
し、凍結乾燥し２６６ ｍ９の試料Ｂ乾燥品を得た。
ＩＣＲ雌マウマウス週令）の皮下にザルコーマ−１８０
腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料ＡおよびＢ乾燥
品をそれぞれ２１１１９を生理食塩水に溶解したものお
よび対照群として生理食塩水のみを２回皮下投与し、腫
瘍移植後５週間口の腫瘍の短、長径より腫瘍体積を測定
し次の式により腫瘍阻止率（１，Ｒ，）をめ、結果を表
１に示した。
腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料ＡおよびＢ乾燥
品をそれぞれ２１１１９を生理食塩水に溶解したものお
よび対照群として生理食塩水のみを２回皮下投与し、腫
瘍移植後５週間口の腫瘍の短、長径より腫瘍体積を測定
し次の式により腫瘍阻止率（１，Ｒ，）をめ、結果を表
１に示した。
表１に示すように試料Ａは抗腫瘍活性を示さなかったの
に対して、これより！Ｎ製した試料Ｂは抗腫瘍活性を示
した。
に対して、これより！Ｎ製した試料Ｂは抗腫瘍活性を示
した。
一方、試料ＢおよびＣについてツマトメノン活性（Ｙ、
Ｋａｔｏ ＋ Ｙ、Ｎｏｍｕｒａ＋ Ｍ、Ｔｓｕｊ ｉ
ｒ Ｈ，Ｏｈｍａｅ ｒ Ｍ、Ｋｉ ｎｏｓｈｉ ｔ
ａ＋Ｓ、Ｈａｍａｒｎｏｔｏ ａｎｄ Ｆ、５ｕＺｕｋ
ｉ ”Ｃａｒｔｉｌａｇｅ−ＤｅｒｉｖｅｄＦａｃｔｏ
ｒ （ＣＤＦ） ｎ。
Ｋａｔｏ ＋ Ｙ、Ｎｏｍｕｒａ＋ Ｍ、Ｔｓｕｊ ｉ
ｒ Ｈ，Ｏｈｍａｅ ｒ Ｍ、Ｋｉ ｎｏｓｈｉ ｔ
ａ＋Ｓ、Ｈａｍａｒｎｏｔｏ ａｎｄ Ｆ、５ｕＺｕｋ
ｉ ”Ｃａｒｔｉｌａｇｅ−ＤｅｒｉｖｅｄＦａｃｔｏ
ｒ （ＣＤＦ） ｎ。
Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ−Ｌｉｋｅ Ａｃｔｉｏｎ ｏ
ｎ Ｃｕｔｕｒｅｄ ｃｈｏｄｒｏｃｙｔｅｓ ”Ｅｘ
ｐ Ｃｅ１ｌ Ｒｅａ、 ｖｏｌ、 １３２ Ｐ３３９
−３４７（１９８１） ）を測定したところ、試料Ｃに
のみ活性が詔められた。
ｎ Ｃｕｔｕｒｅｄ ｃｈｏｄｒｏｃｙｔｅｓ ”Ｅｘ
ｐ Ｃｅ１ｌ Ｒｅａ、 ｖｏｌ、 １３２ Ｐ３３９
−３４７（１９８１） ）を測定したところ、試料Ｃに
のみ活性が詔められた。
表 １
※Ｉ Ｒ瘍体積において対照群（ｎ＝７）に対してＰ（
０，０１ （２） 牛胎児軟骨１５０．９１ Ｍグアニシン塩酸０
．１Ｍ６−アミノ−ｎ−カシロン酸（Ｓｉ、０）１．５
１中でミキサーによりホモｒナイズした。４℃４８時間
攪拌の（４８００Ｏｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠心し
得られた上清にアセトンを終邊度４５％龜加し、０℃丁
２０分放置した。次いで８０００ ｒｐｍ２０分（４℃
）遠心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終謳度
６５％とし０℃下２０分於Ｈした。８０００ ｒｐｍ
２０分（４Ｃ）遠心後、得られた沈澱を５０４ｔの蒸留
水に溶解し蒸留水に則して４℃下４８時間透析の後凍結
乾燥した。これτ２００ｍ１の４Ｍグアニジン頃酸、０
．０１ Ｍ ＥＤＴＡ。
０，０１ （２） 牛胎児軟骨１５０．９１ Ｍグアニシン塩酸０
．１Ｍ６−アミノ−ｎ−カシロン酸（Ｓｉ、０）１．５
１中でミキサーによりホモｒナイズした。４℃４８時間
攪拌の（４８００Ｏｒｐｍ 、 ２０分（４℃）遠心し
得られた上清にアセトンを終邊度４５％龜加し、０℃丁
２０分放置した。次いで８０００ ｒｐｍ２０分（４℃
）遠心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終謳度
６５％とし０℃下２０分於Ｈした。８０００ ｒｐｍ
２０分（４Ｃ）遠心後、得られた沈澱を５０４ｔの蒸留
水に溶解し蒸留水に則して４℃下４８時間透析の後凍結
乾燥した。これτ２００ｍ１の４Ｍグアニジン頃酸、０
．０１ Ｍ ＥＤＴＡ。
０、１ Ｍ ６−アミノ−ｎ−カプロン酸（ｐ）１６．
５）に溶解し、１．０ ｋｌ？ｚＧｍ”加圧下、限外濾
過膜ｒＸＭ−３００Ｊに通し、得られた限外濾過液を１
．５ ｋ！？、〜２加圧下、限外濾過膜ｒＵＰ ２０
Ｊに通し、内液を採取し同様蒸留水に対して透析の後凍
結乾燥し、１７２ｍＱの粉末（試料Ｄ）を得た。蛋白を
重量比で６４．５チ（フォリン法）含有する。
５）に溶解し、１．０ ｋｌ？ｚＧｍ”加圧下、限外濾
過膜ｒＸＭ−３００Ｊに通し、得られた限外濾過液を１
．５ ｋ！？、〜２加圧下、限外濾過膜ｒＵＰ ２０
Ｊに通し、内液を採取し同様蒸留水に対して透析の後凍
結乾燥し、１７２ｍＱの粉末（試料Ｄ）を得た。蛋白を
重量比で６４．５チ（フォリン法）含有する。
ＩＣＲ雌マウマウス週令）の皮下にザルコーマ−１８０
腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料Ｄ２ヤを生理食
塩水に溶解したものおよび対照群として、生理食塩水の
みを４回皮下投与し、ｌｉ ＪＬ４移植抜５週間目の１
１４錫体積を測定し腫瘍阻止率をめ、結果を表２に示し
た。
腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料Ｄ２ヤを生理食
塩水に溶解したものおよび対照群として、生理食塩水の
みを４回皮下投与し、ｌｉ ＪＬ４移植抜５週間目の１
１４錫体積を測定し腫瘍阻止率をめ、結果を表２に示し
た。
表 ２
※２：１厘瘍体槓において対照群（ｎ＝７）に対してＰ
（０，０１ 表２よシ試料りは著しい抗哩瘍活性を示し、その結果、
７匹中３匹はｌ！ｌｉ瘍が完全に退縮していることが理
解される。
（０，０１ 表２よシ試料りは著しい抗哩瘍活性を示し、その結果、
７匹中３匹はｌ！ｌｉ瘍が完全に退縮していることが理
解される。
（３） 牛胎児軟骨３５０ＪＪＩＭグアニジン堪酸０、
１ Ｍ ６−アミノ−ｎ−カシロン酸（、ｐＨ６，０）
３．５１中でミキサーによりホモグテイズした。４℃下
４８時間攪拌の後８０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃
）遠心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終濃度
６５％とし０℃下２０分間放置した。８０００ｒｐｍ
２０分（４℃）遠心後、得られた沈ａｆ：５゜ｒｙｔｌ
の蒸留水に溶解し蒸留水に対して４℃下４８時間透析の
後凍結乾燥した。これを２００ｍ／の４Ｍグアニジノ塩
酸、０．０１ ＭＥＤＴＡ、０．１ Ｍ６−アミノ−ｎ
−カブｏ ：ｙ敵（ｐＨ６，５）に溶解しＬ Ｏｋ！？
／ｚ”加圧下、限外濾過膜ｒＸＭ−３００Ｊに通し、得
られた限外濾過液を１，５ψ讐加圧下、限外症過膜ｒＵ
Ｐ２０Ｊに通し、内液を採取し、さらにこれを１す贋
加圧下、限外濾過膜「スペクトロフィルターＵＦ（Ａ）
（スペクトロボア社製；分子−７ｉｏｏ、ｏｏｏカット
）」に通して内液を採取し、次いで、同様に蒸留水に対
して透析の後凍結乾燥し２７０ ｍ９の試料Ｅを取得し
、これを１０ｍＭ燐酸ナトリウム緩晴液（ｐＨ８，０）
３０ｍｌに溶解し、不溶物を遠心除去し試料Ｆを得た（
蛋白１３８＃Ｉ９）、これをｒ ＤＥＡＥ ４７７ ｏ
−スＣＬ−６ＢＪ （ＤＥＡＥアがロース；７アルマシ
ア社製）カラム（径１．５ｍＸ １３ｃｒｎ、 ２３ｓ
＋／ ） （１０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐｉ（８
，０）に平衡化した）に通流し、次いで上記同一緩衝液
０〜０．６Ｍ塩化ナトリウムを含有した溶液でグラシュ
エンド溶出し、溶離液を分画採取した（１分画１３ ｒ
ｎｌ ）。
１ Ｍ ６−アミノ−ｎ−カシロン酸（、ｐＨ６，０）
３．５１中でミキサーによりホモグテイズした。４℃下
４８時間攪拌の後８０００ ｒｐｍ 、 ２０分（４℃
）遠心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終濃度
６５％とし０℃下２０分間放置した。８０００ｒｐｍ
２０分（４℃）遠心後、得られた沈ａｆ：５゜ｒｙｔｌ
の蒸留水に溶解し蒸留水に対して４℃下４８時間透析の
後凍結乾燥した。これを２００ｍ／の４Ｍグアニジノ塩
酸、０．０１ ＭＥＤＴＡ、０．１ Ｍ６−アミノ−ｎ
−カブｏ ：ｙ敵（ｐＨ６，５）に溶解しＬ Ｏｋ！？
／ｚ”加圧下、限外濾過膜ｒＸＭ−３００Ｊに通し、得
られた限外濾過液を１，５ψ讐加圧下、限外症過膜ｒＵ
Ｐ２０Ｊに通し、内液を採取し、さらにこれを１す贋
加圧下、限外濾過膜「スペクトロフィルターＵＦ（Ａ）
（スペクトロボア社製；分子−７ｉｏｏ、ｏｏｏカット
）」に通して内液を採取し、次いで、同様に蒸留水に対
して透析の後凍結乾燥し２７０ ｍ９の試料Ｅを取得し
、これを１０ｍＭ燐酸ナトリウム緩晴液（ｐＨ８，０）
３０ｍｌに溶解し、不溶物を遠心除去し試料Ｆを得た（
蛋白１３８＃Ｉ９）、これをｒ ＤＥＡＥ ４７７ ｏ
−スＣＬ−６ＢＪ （ＤＥＡＥアがロース；７アルマシ
ア社製）カラム（径１．５ｍＸ １３ｃｒｎ、 ２３ｓ
＋／ ） （１０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐｉ（８
，０）に平衡化した）に通流し、次いで上記同一緩衝液
０〜０．６Ｍ塩化ナトリウムを含有した溶液でグラシュ
エンド溶出し、溶離液を分画採取した（１分画１３ ｒ
ｎｌ ）。
溶離・やターン（２８０ｎｍ吸光度、血管内皮細胞増殖
阻害活性）を第３図に示した。分画番号１９〜２１（塩
化ナトリウム０．２６〜０．３３Ｍ溶離分両）に血管内
皮細胞増殖阻害活性を回収した（活性回収率１０３％、
比活性６４００単位ＡＩ蛋白。
阻害活性）を第３図に示した。分画番号１９〜２１（塩
化ナトリウム０．２６〜０．３３Ｍ溶離分両）に血管内
皮細胞増殖阻害活性を回収した（活性回収率１０３％、
比活性６４００単位ＡＩ蛋白。
Ｘ７０．４倍精製）。これを試料Ｇとした。
Ｃ５７ＢＬ＃マウスの足底に８１６メラノーマ腫瘍細胞
（３Ｘ １０ １１７ ＞を移植し、担癌とした後、試
料Ｅ （０，５１１９）を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮下投与し
、腫瘍移植ｖｊ６週間目の腫瘍体積を測定し［ｔ４阻止
率をめ、結果を表３に示した。
（３Ｘ １０ １１７ ＞を移植し、担癌とした後、試
料Ｅ （０，５１１９）を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮下投与し
、腫瘍移植ｖｊ６週間目の腫瘍体積を測定し［ｔ４阻止
率をめ、結果を表３に示した。
表 ３
※３ ： Ｉｌｉ、ｉ瘍体積において対照群（ｎ＝７
）に対してＰ（０，０１ 表３より試料Ｅは著しい抗腫瘍活性を示していることが
理解される。
）に対してＰ（０，０１ 表３より試料Ｅは著しい抗腫瘍活性を示していることが
理解される。
Ｃ５７ＢＬ雌マウスの足底に８１６メラノーマ唾瘍細胞
（３Ｘ１０ 個）を移植し、担癌とした後、試料Ｆ２３
０μＩＩ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、および試料
ＧＩＯμｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、および対
照群として、生理食頃水のみを６回皮下投与し、腫瘍移
植後２．５週間目の膝鴫体４Ａを測定し線傷阻止率をめ
、粕釆を表４に示した０表 ４ ※４：Ｑ瘍体積において対照群（ｎ＝５）に対してＰ＜
０．０１ 表４より、試料Ｆ、Ｇは著しい抗呻瘍活性を示している
ことが理解される。
（３Ｘ１０ 個）を移植し、担癌とした後、試料Ｆ２３
０μＩＩ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、および試料
ＧＩＯμｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、および対
照群として、生理食頃水のみを６回皮下投与し、腫瘍移
植後２．５週間目の膝鴫体４Ａを測定し線傷阻止率をめ
、粕釆を表４に示した０表 ４ ※４：Ｑ瘍体積において対照群（ｎ＝５）に対してＰ＜
０．０１ 表４より、試料Ｆ、Ｇは著しい抗呻瘍活性を示している
ことが理解される。
なお試料Ｆ、Ｇの１回投与曾中の血管内皮細胞増殖阻害
活性は、各々２１単位、６５単位であった。
活性は、各々２１単位、６５単位であった。
第１図はＤＮＡ合成阻害率測定例を、第２図は試料りの
血管内皮細胞増殖阻害活性作用ｒ１第３図はＤ ＥＡＥ
アガロースカラム浴離溶離−ン（２８０ｎｍ吸光度、血
管内皮細Ｉ１１．増旭阻害活性）を示す。 ％許出願人 味の累株式会社
血管内皮細胞増殖阻害活性作用ｒ１第３図はＤ ＥＡＥ
アガロースカラム浴離溶離−ン（２８０ｎｍ吸光度、血
管内皮細Ｉ１１．増旭阻害活性）を示す。 ％許出願人 味の累株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ｔｇｈ物軟骨より、水性溶媒で抽出した後、親水性
有機溶媒で沈ρせしめ、梅管内皮細胞増殖阻害活性を有
する限外濾過法で測定したときに分子彊１０〜３０万の
画分を分離することを特徴とする抗肺瘍活性物質の製造
方法。 ２、抗肺ｊ→活性物質が、ジエチルアミノエチルアがロ
ースに吸着し０．２５〜０．６Ｍ食頃水で溶離できるも
のである特許請求の範囲第１項記載の方法０
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59032199A JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59032199A JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60178820A true JPS60178820A (ja) | 1985-09-12 |
| JPH0573760B2 JPH0573760B2 (ja) | 1993-10-15 |
Family
ID=12352232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59032199A Granted JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60178820A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5242692A (en) * | 1990-07-10 | 1993-09-07 | Bar Ilan University | Anti-metastatic factor |
| US6168807B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-01-02 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof |
| US6380366B1 (en) | 1994-04-28 | 2002-04-30 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Shark cartilage extract:process of making, methods of using and compositions thereof |
| US6383522B1 (en) | 1997-03-11 | 2002-05-07 | Les Laboratoires Aeterna, Inc. | Toxicity reduced composition containing an anti-neoplastic agent and a shark cartilage extract |
-
1984
- 1984-02-22 JP JP59032199A patent/JPS60178820A/ja active Granted
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5242692A (en) * | 1990-07-10 | 1993-09-07 | Bar Ilan University | Anti-metastatic factor |
| US6380366B1 (en) | 1994-04-28 | 2002-04-30 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Shark cartilage extract:process of making, methods of using and compositions thereof |
| US6635285B2 (en) | 1994-04-28 | 2003-10-21 | Les Laboratoires Aeterna, Inc. | Shark cartilage extract: process of making, methods of using, and compositions thereof |
| US6383522B1 (en) | 1997-03-11 | 2002-05-07 | Les Laboratoires Aeterna, Inc. | Toxicity reduced composition containing an anti-neoplastic agent and a shark cartilage extract |
| US6855338B2 (en) | 1997-03-11 | 2005-02-15 | Les Laboratoires Aeterna, Inc. | Anti-tumor therapies comprising a combination of a cartilage extract and an anti-neoplastic agent providing high efficacy and low toxic side effects |
| US6168807B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-01-02 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof |
| US6506414B2 (en) | 1998-07-23 | 2003-01-14 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0573760B2 (ja) | 1993-10-15 |
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