SU908359A1 - Способ получени ферментного препарата,обладающего уреазной активностью - Google Patents

Description

I

11зобретение относитс  к фармацевтической промышленности и касаетс  технологии получени  ферментных препаратов .

Известен способ получени  ферментного препарата, обладающего уреазной активностью, путем измельчени  сем н арбуза сорта Любимец хутора П тигорский , экстрагировани  сырь  водой при рН 6,9-7,2 и 18-25°С и очистки полученного экстракта ацетоном с последующим выделением целевого«продукта 11 .

Однако известный способ не обеспечивает получение ферментного препарата с высокой уреазной активностью (на 1 г препарата 350- 50 ед. Самнера ).

Цель изобретени  - расширение сырьевой базы и повышение уреазной активности целевого продукта.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе получени  ферментного препарата, обладающего уреазной активностью , включающем измельчение сем н арбуза, их экстрагирование при рН 6, и температуре 18-25 С, очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта, в качестве исходного сырь  используют измельченные семена арбуза сорта Огонек вида Cltrullus VUlgares Sohrad, экстрагирование провод т фосфатным буфером при соотношении сырье-экстрагент

10 1:3-1 и очистку полученного экстракта осуществл ют насыщенным раствором аммони  сульфата, а затем этанолом при соотношении этанол-раствор

1:1,5-1:2,5.

ts

Способ осуществл етс  следующим образом.

2 кг измельченных на вальцах сем н арбуза сорт Огонек загружают в экстрактор и экстрагируют 7 л О,1 Н

20 калий-натриевого фосфатного буфера рН 6,8-7,0 приготовленного на дистиллированной воде, содержащей 10 М ЭДТА (этилендиаминтетранатриевой со390 ли уксусной кислоты) и 10 М 1% -мер каптоэтанола в течение 1 ч 50 мин при . После освобождени  экстракта от муки центрифугированием при k°С с частотой вращени  ротора 3000 об/мин (2600 д) в полученных 5,8 л экстракта провод т первичное осаждение белков насыщенным раствором аммони  .сульфата, добавл   последнего 3,87 л. После отстаивани  в течение 6 ч образующийс  осадок отдел ют центрифугированием при 4 С с частотой вращени  ротора 3000 об/мин (2бОО д), а к надорадочной жидкости вновь добавл ют 1,93 л насыщенного раствора аммони  сульфата . Оставл ют дл  отстаивани  в течение 10 ч. Затем осадок белка, содержащий активный фермент, раствор ют в 200 мл воды, охлаждают до и осаждают этиловым спиртом в соотношении раствор-этиловый спирт 1:2. Оставл ют дл  образовани  осадка на 2 ч. Затем осадок отдел ют цен трифугированием при с частотой вращени  ротора 3000 об/мин в течение 10 мин. Насадочную жидкость сливают , а осадок раствор ют в дистиллированной воде, замораживают при -kQ С в течение 2 ч и высушивают суб лимацией в глубоком вакууме с температурой на противне +30 С в течение 8 ч. Уреазна  активность полученного продукта составл ет 1500 ед. Самнера на 1 л препарата или 120 мкмоль мочевины в 1 мин на 1 мг белка. Полученный ферментный препарат представл ет собой белый аморфный порошок, растворимый в воде, фосфатном буферном растворе рН 7,0-7,. в табл.1 представлена зависимость уреазной активности от соотношени  сырь  и экстрагента. Таблица 1 Уреазна  активность Соотношение сыв единицах самнера/ рь  и экстраген /1 г белка та

1651:5 ,0 1:,5 190,1

.k.0

250,5

Уреазна  активность в ед на 1 г белка самнера

96200

1: 1

190500

1:1,5 В табл.3 представлена зависимость уреазной активности от соотношени  этанола и раствора целевого продукта ,, Таблица 3

Продолжение табл.3 Соотношение эта Урезна  активность в ед на 1 г белка нол - раствор амнера 213000 200600 lyoioo Исследование острой токсичности выделенного целевого продукта при п падании внутрь (на животных) в концентрации 10 г на 1 кг веса показали , что уреаза не вызывает отравлени . При попадании на кожу и слизис тые оболочки не вызывает раздражени Предлагаемый способ позвол ет получить ферментный препарат, обладающий в раза большей уреазной активностью .

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ получени  ферментного препарата , обладающего уреазной активностью , путем измельчени  сем н арбуза , их экстрагировани  при рН 6,9 7,0 и температуре 18-25 0, очистки полученного экстракта и выделени  целевого продукта, отличающ и и с   тем, что, с целью расширени  сырьевой базы и повышени  активности целевого продукта, в качестве исходного сырь  используют измельченные семена арбуза сорта Огонек вида Cltrullus AilgarIs Schradi экстрагирование провод т фосфатным буфером при соотношении сырье-экстрагент 1:3-1: и очистку полученного экстракта осуществл ют насыщенным раствором аммони  сульфата, а затем этанолом при соотношении этанол-раст ,вор 1:1,5-1:2,5. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 595335, кл. В 61 К 35/78,28.02.78.