SU663405A1 - Способ получени аллергена - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к мшфобиологии, а именно к способам получени  аллергенов, оно может быть использовано дл  диагностик особо опасных глубоких микозов у людей и животных.

Известен способ получени  аллергена дл  диагностики кокцидиоидоза путем выращивани  кокцидиоидного гриба на питательной cgeде с последующим выделением целевого продукта 1.

Однако известный способ не обеспечивает получени  аллергена с высокими активностью и специфичностью (активность его составл ет 26 мкг в 1 кожной дозе по сухому весу).

Цель изобретени   вл етс  повышение активности и специфичности аллергена.

Эта цель достигаетс  тем, что гриб вьфащивают на плотной питательной среде в артроспоровой фазе, целевой продукт выдел ют экстракцией из среды, затем концентрируют высаливанием, концентрат диализуют и лиофилизирутег :----2

Способ осуществл ют следующим образом. Гриб Coccidfofdes immitis 36-S (Сильвейра) выращивают в течение 29-35 дней при 2830°С в матрицах на плотной среде Сабуро. Выросшую грибницу и артроспоры удал ют,

смыва  водой и соскаблива  шпателем. Полное удаление артроспор с агара не об зательно .

Внеклеточный материал артроспор гриба экстрагируют КЗ разрушенного шпателем на

мелкие кусочки агара 0,9%-ным раствором хлористого натри  в течение. 6 суток при 2830 С периодически встр хива .

Экстракт отдел ют от агара на марлевом фильтре и обезвреживают формалином

(0,5%-ным) в течение 48 ч. После высева на стерильность и подщелачивани  экстракта до рН 8,5 антиген высаливают сернокислым аммонием (516 г на I л экстракта). Осадок раствор ют в дистиллированной воде, примесь

сернокислого аммони . удал ют диализом сначала против водопроводной воды (4 суток), а затем дистшшированной (24 ч). Препарат лиофилизируют, провер ют на активность.

-:,esS35se testea i

специфи о|(;ть, безвредность и стерилизуют, фппьтру  через миллипоровые фильтры (днаметр пор 0,4-0,6 мкм), ж разливают в ампулы по iO кожиых доз. Одиа козкна  человёкб-дрза составл ет 10 едиииц общего азота или 1 мкг сухого препгфата.

Полученный описанным способом аллерген вызывает у зараженных кокщщиоидным грибом морских свинок аллергические реакции 1фив;нутрикс жном введении в минимально активной дозе 1 мкг/0,1 мл. У заражённых возбудител ми гистоплазмоза и бластомикоза, а также у контрольных животиых кожные пробы были отрицательными.

Аллерген в сухом виде представл ет собой аморфный йброшоксветло желтогойрета, легко растворимый в воде, содержание белков,

1уш шгашгтшЬ етгжш 

дов соответственио 25, 24 и 47%. Остаточна  влахшость составл ет 4%. Препарат нетоксичен при внутрикожном и внутрибрюшйнном введении (белым мышам и морским свинкам). При испытании на люд х (53 добровольца) аллерген в дозе 10 мкг в 0,1 мл 0,9% хлористого натри  на апирогенной воде не вызывает неспецифических реакций.

ПрёдлагаёмьЖ способ 66ecne4imaieir получе ,ние специфического аллергена, активность которого в 10-20 раз превышает активность

известного, а стоимость производства меньще в 3 раза. Возможность лиофильного высушивани  1федаагаемого аллергена упрощает его ,концентр1фоваш1е, стабилизацию и стандарти5 зааЙю по чужому весу и в единицах общего азота в 1 кожной дозе. Предлагаемый аллерген можно использовать дл  аллергических реакций как in vivo, так и in vitro.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  аллергена дл  диагностики кокцидиоидоза путем выращивани  кокцидиоидаого гриба на питательной среде с последующшл В1 щеле}й ем целевого продукта, о тдичающий с   тем, что, с целью повышени  Активности и специфичности аллергена , гриб выращивают на плотной питательной среде в фтрЬспоровой фазе, целевой продукт вьздел ют экстракцией из среды, затем концентрируют высаливанием, концентрат диалйзу Ебт и лиофилизируют.

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе.

   Т. Smitfi С. Е., Saito Е. Т., Beard R.R,, Rosenberg Э. G., Beard R. R. and Saito M. M. The use of coccidioidin. Amer, Rey.Tuberc 1948, 54,4, p: 330-360.