JPS6027675B2 - ７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリン - Google Patents
７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリンInfo
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- JPS6027675B2 JPS6027675B2 JP7474077A JP7474077A JPS6027675B2 JP S6027675 B2 JPS6027675 B2 JP S6027675B2 JP 7474077 A JP7474077 A JP 7474077A JP 7474077 A JP7474077 A JP 7474077A JP S6027675 B2 JPS6027675 B2 JP S6027675B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ァミノベプチダーゼＭの酵素活性側定用のけ
し、光性基質として使用でき、またヒトトロンピン等酵
素活性測定用のけし、光性基質となり血管内血液凝固症
候群用等の診断剤として期待される７−（Ｎーベンゾイ
ループロリルアルギニル）アミノー４メチルクマリンそ
の他べブチドの合成中間体として使用できる新規７−ア
ルギニルアミノ−４−メチルクマリンに関する。
し、光性基質として使用でき、またヒトトロンピン等酵
素活性測定用のけし、光性基質となり血管内血液凝固症
候群用等の診断剤として期待される７−（Ｎーベンゾイ
ループロリルアルギニル）アミノー４メチルクマリンそ
の他べブチドの合成中間体として使用できる新規７−ア
ルギニルアミノ−４−メチルクマリンに関する。
本発明者は構造式
で示される新規な７−アルギニルアミノ−４−メチルク
マリンの合成に成功し、さらにこの新規化合物がアミノ
ベプチダーゼＭの酵素活性測定用のけし、光性基質とし
て使用できること、及びヒトトロンビンの酵素活性測定
用のけし、光性基質となり血管内血液凝固症懐群用等の
診断剤として期待される７−（ベンゾイループロリルア
ルギニル）アミノ−４−メチルクマリンその他べプチド
けし、光性基質の合成中間体として使用できることを見
出本発明を完成するに致つた。
マリンの合成に成功し、さらにこの新規化合物がアミノ
ベプチダーゼＭの酵素活性測定用のけし、光性基質とし
て使用できること、及びヒトトロンビンの酵素活性測定
用のけし、光性基質となり血管内血液凝固症懐群用等の
診断剤として期待される７−（ベンゾイループロリルア
ルギニル）アミノ−４−メチルクマリンその他べプチド
けし、光性基質の合成中間体として使用できることを見
出本発明を完成するに致つた。
本発明の７−アルギニルアミノー４−メチルクマリンは
酸付加塩の形が安定であり、その場合の酸は塩酸、硫酸
等の鉱酸、酢酸、トルェンスルホン酸等の有機酸が採用
される。
酸付加塩の形が安定であり、その場合の酸は塩酸、硫酸
等の鉱酸、酢酸、トルェンスルホン酸等の有機酸が採用
される。
その遊離形を得るには、上記酸付加塩をアルカリで中和
すればよい。本発明の７−アルギニルアミノー４−メチ
ルクマリンを製造するには、まず、Ｑ−アミノ基（ＮＱ
）がカルボベンゾキシ基で保護され、Ｎーグアニジ／基
（ＮＧ）がニトロ又はトシル基で保護され又は保護され
ない７ーアルギニルアミノ−４−メチルクマリンを製造
する。
すればよい。本発明の７−アルギニルアミノー４−メチ
ルクマリンを製造するには、まず、Ｑ−アミノ基（ＮＱ
）がカルボベンゾキシ基で保護され、Ｎーグアニジ／基
（ＮＧ）がニトロ又はトシル基で保護され又は保護され
ない７ーアルギニルアミノ−４−メチルクマリンを製造
する。
この化合物はＮＱ−カルボベンゾキシーＮＧ−保護（ニ
トロ又はトシル）又は無保護アルギニルと７−アミノ−
４−メチルクマリン（ＭＣＡ）を反応せしめることによ
り製造できる。この反応にはジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、
クロロホルム、酢酸エチルェステル等の溶媒を用いうる
。ジシクロヘキシルカルボジィミド（ＤＣＣＤ）、Ｎー
エチルーＮ′−３−ジメチルアミノープロピルカルボジ
イミド（ＷＳＣＩ）、クロル炭酸ェステル等の縮合物を
用いる。トリェチルアミン、トリメチルアミン、ピリジ
ン等の有機塩基を存在させることもできる。なお、上記
保護基による保護方法は、ベプチド合成の際にアミノ基
、グアニジノ基の保護方法としてそれぞれ慣用されてい
る手段を利用して行うことができる。
トロ又はトシル）又は無保護アルギニルと７−アミノ−
４−メチルクマリン（ＭＣＡ）を反応せしめることによ
り製造できる。この反応にはジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、
クロロホルム、酢酸エチルェステル等の溶媒を用いうる
。ジシクロヘキシルカルボジィミド（ＤＣＣＤ）、Ｎー
エチルーＮ′−３−ジメチルアミノープロピルカルボジ
イミド（ＷＳＣＩ）、クロル炭酸ェステル等の縮合物を
用いる。トリェチルアミン、トリメチルアミン、ピリジ
ン等の有機塩基を存在させることもできる。なお、上記
保護基による保護方法は、ベプチド合成の際にアミノ基
、グアニジノ基の保護方法としてそれぞれ慣用されてい
る手段を利用して行うことができる。
本発明の目的化合物は、前記の如くして得られた７一（
ＮＱーカルボベンゾキシーＮＧートシルーアルギニル）
アミノ−４−メチルクマリンをアニソールの存在下券化
水素と反応せしめることにより、あるいは７一（ＮＱー
カルポベンゾキシ−Ｇ−ニトロ又は無保護ーアルギニル
）アミノ−４−メチルクマリンをアニソールの存在下弗
化水素と反応せしめるか又は水、アルコールあるいは酢
酸の存在下パラジウム−炭素触媒を用いて水素ガスと反
応せしめることによって製造できる。
ＮＱーカルボベンゾキシーＮＧートシルーアルギニル）
アミノ−４−メチルクマリンをアニソールの存在下券化
水素と反応せしめることにより、あるいは７一（ＮＱー
カルポベンゾキシ−Ｇ−ニトロ又は無保護ーアルギニル
）アミノ−４−メチルクマリンをアニソールの存在下弗
化水素と反応せしめるか又は水、アルコールあるいは酢
酸の存在下パラジウム−炭素触媒を用いて水素ガスと反
応せしめることによって製造できる。
従来、分子中に結合している７−アミノー４−メチルク
マＩＪンは不安定（例えば丸善、実験化学講座２１（下
）２１５頁１９５８壬参照）と考えられていたので、そ
の保護基の実用性ある脱離方法の開発が望まれていた。
本発明者の開発した上記脱離方法そのものも産業上意義
のある方法である。本発明の目的化合物を用いて試料溶
液中のアミノベプチダーゼＭの活性量を測定するには特
に困難はなく、７ーアルギニルアミノー４ーメチルクマ
リンと試料溶液を接触せしめ次いで遊離生成する７ーア
ミノ−４ーメチルクマリンの量をそのけし、光強度を測
定し標準溶液のそれと比較することにより、あるいは、
ＵＶ吸収強度を比較することにより行うことができる。
この場合分子を構成するアルギニンがＬ一体である。７
−アルギニルアミノー４ーメチルクマリンを使用する。
マＩＪンは不安定（例えば丸善、実験化学講座２１（下
）２１５頁１９５８壬参照）と考えられていたので、そ
の保護基の実用性ある脱離方法の開発が望まれていた。
本発明者の開発した上記脱離方法そのものも産業上意義
のある方法である。本発明の目的化合物を用いて試料溶
液中のアミノベプチダーゼＭの活性量を測定するには特
に困難はなく、７ーアルギニルアミノー４ーメチルクマ
リンと試料溶液を接触せしめ次いで遊離生成する７ーア
ミノ−４ーメチルクマリンの量をそのけし、光強度を測
定し標準溶液のそれと比較することにより、あるいは、
ＵＶ吸収強度を比較することにより行うことができる。
この場合分子を構成するアルギニンがＬ一体である。７
−アルギニルアミノー４ーメチルクマリンを使用する。
また、酵素反応を阻害しない酸との塩、例えばｐ−トル
ヱンスルホン酸、塩酸、酢酸、臭化水素酸等との塩の形
で使用するのがよい。例えば、７−Ｌ−アルギニルアミ
ノ−４ーメチルクマリン塩酸塩を用いてアミノベブチダ
ーゼＭの活性測定を行うとＥｘ３８瓜仇、Ｅｍ４４仇肌
のけし、光下でその加水分解物である７−アミノ−４−
メチルクマリンは分解前の化合物の約３００倍以上とい
う相対けし、光強度を示すので測定強度を著しく向上さ
せることができる。
ヱンスルホン酸、塩酸、酢酸、臭化水素酸等との塩の形
で使用するのがよい。例えば、７−Ｌ−アルギニルアミ
ノ−４ーメチルクマリン塩酸塩を用いてアミノベブチダ
ーゼＭの活性測定を行うとＥｘ３８瓜仇、Ｅｍ４４仇肌
のけし、光下でその加水分解物である７−アミノ−４−
メチルクマリンは分解前の化合物の約３００倍以上とい
う相対けし、光強度を示すので測定強度を著しく向上さ
せることができる。
また、ＵＶ吸収により測定する場合には３７印のにおけ
る吸収強度が分解前の化合物と較べて分解物は約１０の
音と著しく異なるため充分に測定できる。
る吸収強度が分解前の化合物と較べて分解物は約１０の
音と著しく異なるため充分に測定できる。
以下、実施例及び参考例により本発明をさりこ詳細に説
明する。
明する。
実施例 １
Ｗ ＮＱ−カルボベンゾキシーＮＧーニトローＬ−アル
ギニン４．２４夕（１２ミリモル）、ＭＣＡＩ．７５夕
（１０ミリモル）及び１−ヒドロキシベンットリアゾー
ル１．４９夕（１１ミリモル）ごジメチルホルムアミド
２０の‘に溶かした。
ギニン４．２４夕（１２ミリモル）、ＭＣＡＩ．７５夕
（１０ミリモル）及び１−ヒドロキシベンットリアゾー
ル１．４９夕（１１ミリモル）ごジメチルホルムアミド
２０の‘に溶かした。
これに氷裕上かきまぜながらＷＳＣＩ塩酸塩２．１０夕
（１１ミリモル）を加えた。混合物を一液かきまぜた後
ジメチルホルムアミドを減圧溜去し、得られた残澄にク
ロロホルム５０の【を加え、クロロホルム溶液を１規定
塩酸１００Ｍ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液１００叫
、次いで水１００の‘で洗浄した後、無水苦硝で乾燥し
た。
（１１ミリモル）を加えた。混合物を一液かきまぜた後
ジメチルホルムアミドを減圧溜去し、得られた残澄にク
ロロホルム５０の【を加え、クロロホルム溶液を１規定
塩酸１００Ｍ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液１００叫
、次いで水１００の‘で洗浄した後、無水苦硝で乾燥し
た。
クロロホルムを減圧溜去した後、残澄をメタノール１０
の‘に溶かし、これにエーテル５０の上を加えるとゲル
状物質が析出した。ゲル状物４．０夕をメタノール１０
の（で再結晶し７−（ＮＱーカルポベンゾキシーＮＧー
ニトローＬーアルギニル）アミノー４ーメチルクマリン
結晶２．１夕（収率４１％）を得た。融点 １９４．０
〜１９６．００（ｄ）〔Ｑ〕も８十９．７（Ｃ＝０．印
ＭＦ）Ｑこの結晶はシリカゲル薄層クロマトグラフィー
（クロロホルム：メタノール：酢酸＝９５：５：３）で
単一スポット（Ｒｆ＝０．２）を与えた。
の‘に溶かし、これにエーテル５０の上を加えるとゲル
状物質が析出した。ゲル状物４．０夕をメタノール１０
の（で再結晶し７−（ＮＱーカルポベンゾキシーＮＧー
ニトローＬーアルギニル）アミノー４ーメチルクマリン
結晶２．１夕（収率４１％）を得た。融点 １９４．０
〜１９６．００（ｄ）〔Ｑ〕も８十９．７（Ｃ＝０．印
ＭＦ）Ｑこの結晶はシリカゲル薄層クロマトグラフィー
（クロロホルム：メタノール：酢酸＝９５：５：３）で
単一スポット（Ｒｆ＝０．２）を与えた。
元素分析：測定値 Ｃ：５６．４６落日：５．１３発Ｎ
：１６．４７％Ｃ２４日２６Ｎ６０７としての計算値
Ｃ：５６．２５※Ｈ：５．０４％Ｎ：１６．２７繁（ｏ
｝ ７．（ＮＱ−カルボベンゾキシ−ＮＧーニトローＬ
ーアルギニル）アミノ−４−メチルクマリン５００のｃ
にアニソール０．５私を加え、無水弗化水素１０の‘を
−７０ｑｏで加えた後氷裕上６０分かきまぜ反応を完結
させた。
：１６．４７％Ｃ２４日２６Ｎ６０７としての計算値
Ｃ：５６．２５※Ｈ：５．０４％Ｎ：１６．２７繁（ｏ
｝ ７．（ＮＱ−カルボベンゾキシ−ＮＧーニトローＬ
ーアルギニル）アミノ−４−メチルクマリン５００のｃ
にアニソール０．５私を加え、無水弗化水素１０の‘を
−７０ｑｏで加えた後氷裕上６０分かきまぜ反応を完結
させた。
反応混合物より弗化水素を減圧溜去した後、残澄に水、
５泌を加えた。水溶液はエーテル２０の【で洗浄した後
、ダゥケミカル社製イオン交換樹脂ダゥェックス１×２
（Ｃ拡ＣＯＯ‐型）５Ｍを通過させャー水１０の‘で洗
い出した。
５泌を加えた。水溶液はエーテル２０の【で洗浄した後
、ダゥケミカル社製イオン交換樹脂ダゥェックス１×２
（Ｃ拡ＣＯＯ‐型）５Ｍを通過させャー水１０の‘で洗
い出した。
水層は減圧下濃縮乾固し得られた残燈約３５０ｍｇをメ
タノール５の‘にとかし、これにエーテルを加え７−Ｌ
ーアルギニルアミノ−４ーメチルクマリン酢酸塩の沈澱
２８０雌（収率７３％）を得た。
タノール５の‘にとかし、これにエーテルを加え７−Ｌ
ーアルギニルアミノ−４ーメチルクマリン酢酸塩の沈澱
２８０雌（収率７３％）を得た。
融点 ２０９．５〜２１４．５０（ｄ）〔Ｑ〕も８十８
２．３０（Ｃ＝０．５５０％Ａ ＣＯＨ）この化合物は
シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎ−ブチルアルコ
ール：酢酸：水＝４：１：１）で単一スポット（Ｒｆ＝
０．１５）を与えた。
２．３０（Ｃ＝０．５５０％Ａ ＣＯＨ）この化合物は
シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎ−ブチルアルコ
ール：酢酸：水＝４：１：１）で単一スポット（Ｒｆ＝
０．１５）を与えた。
元素分析：測定値Ｃ：５３．４６紫Ｈ：６．３７％Ｎ：
１７．６７彩ＣＩ６日２ｌＮ５０３畑３Ｃｏｏ日・杉日
２０としての計算値Ｃ：５３‐９８％Ｈ：６‐５４※Ｎ
：１７．４９彩し一 ７一（ＮＱーカルボベンゾキシ−
ＮＧーニトｏ−Ｌーアルギニル）アミノー４ーメチルク
マリン５００の９をメタノール５０泌と酢酸５の‘に溶
かしこれに５％パラジウム炭素触媒８０の夕を加えた後
水素ガスを６時間通じた。
１７．６７彩ＣＩ６日２ｌＮ５０３畑３Ｃｏｏ日・杉日
２０としての計算値Ｃ：５３‐９８％Ｈ：６‐５４※Ｎ
：１７．４９彩し一 ７一（ＮＱーカルボベンゾキシ−
ＮＧーニトｏ−Ｌーアルギニル）アミノー４ーメチルク
マリン５００の９をメタノール５０泌と酢酸５の‘に溶
かしこれに５％パラジウム炭素触媒８０の夕を加えた後
水素ガスを６時間通じた。
反応混合物より触媒を櫨別した後、溶媒を減圧溜去し残
溝約３５０柵をメタノール５の‘にとかしエーテルを加
え７一Ｌーアルギニルアミノ−４−メチルクマリン酢酸
塩の沈澱２９５のｏ（収率７７％）を得た。融点 ２０
６．５〜２１１．５ｏ（ｄ）この化合物は【ローで得た
化合物と同じシリカゲル薄層クロマト系で同じＲｆ値を
示し単一のスポットを与えた。
溝約３５０柵をメタノール５の‘にとかしエーテルを加
え７一Ｌーアルギニルアミノ−４−メチルクマリン酢酸
塩の沈澱２９５のｏ（収率７７％）を得た。融点 ２０
６．５〜２１１．５ｏ（ｄ）この化合物は【ローで得た
化合物と同じシリカゲル薄層クロマト系で同じＲｆ値を
示し単一のスポットを与えた。
元素分析：測定値 Ｃ：５２．７２孫Ｈ：６．３９％Ｎ
：１６．８１多Ｃ，６日２，Ｎ５０３ＣＨ３ＣＯＯ日・
日２０としての計算値Ｃ：５２．８０多Ｈ：６．６５孫
Ｎ：１７．１１鱗実施例 ２Ｎｑーカルボベンゾキシー
Ｎ０ートシルーＬ−アルギニル６．０夕（１３ミリモル
）をＤＭｍ２０の‘に溶かし、ＭＣＡＩ．７５夕（１０
ミリモル）を加えた。
：１６．８１多Ｃ，６日２，Ｎ５０３ＣＨ３ＣＯＯ日・
日２０としての計算値Ｃ：５２．８０多Ｈ：６．６５孫
Ｎ：１７．１１鱗実施例 ２Ｎｑーカルボベンゾキシー
Ｎ０ートシルーＬ−アルギニル６．０夕（１３ミリモル
）をＤＭｍ２０の‘に溶かし、ＭＣＡＩ．７５夕（１０
ミリモル）を加えた。
氷裕上ＤＣＣ○２．４７夕（１２ミリモル）を加えた。
混合物を室温で一夜かきまぜた後析出したジシクロヘキ
シルウレアを猿別した。ＤＭＦを減伍溜去し残澄にクロ
ロホルム２００の‘を加え、クロロホルム層を１規定塩
酸、５％炭酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄後無水
若硝で乾燥した。クロロホルムを減圧溜去後残澄をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸
エチル＝２：１）で精製した。主溜物を濃縮し、クロロ
ホルム１０のとにとかしエーテルを加えて７−（ＮＱー
カルボベンゾキシーＮＧ−トシル−Ｌ−アルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリンの沈澱２．３１夕（収率３７
．０％）を得た。融点 １５５．０〜１６２．５ｏ（ｄ
）〔Ｑ〕も８十１１．〆（Ｃ＝０．印ＭＦ）この化合物
はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：
メタノール：酢酸＝９５：５：３）で単一スポット（Ｒ
ｆ＝０．４）を与えた。
混合物を室温で一夜かきまぜた後析出したジシクロヘキ
シルウレアを猿別した。ＤＭＦを減伍溜去し残澄にクロ
ロホルム２００の‘を加え、クロロホルム層を１規定塩
酸、５％炭酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄後無水
若硝で乾燥した。クロロホルムを減圧溜去後残澄をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸
エチル＝２：１）で精製した。主溜物を濃縮し、クロロ
ホルム１０のとにとかしエーテルを加えて７−（ＮＱー
カルボベンゾキシーＮＧ−トシル−Ｌ−アルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリンの沈澱２．３１夕（収率３７
．０％）を得た。融点 １５５．０〜１６２．５ｏ（ｄ
）〔Ｑ〕も８十１１．〆（Ｃ＝０．印ＭＦ）この化合物
はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：
メタノール：酢酸＝９５：５：３）で単一スポット（Ｒ
ｆ＝０．４）を与えた。
元素分析：測定値 Ｃ：５９．１５％Ｈ：５２９発Ｎ：
１１２７多Ｃ３１日３３Ｎ５０７Ｓ・杉日２０としての
計算値 Ｃ：５９．２２孫Ｈ：５．４５多Ｎ：１１．１４多７−
（ＮＱーカルボベンゾキシーＮＧートシルーＬーアルギ
ニル）アミノー４ーメチルクマリン５００ｍｏ（０．８
ミリモル）にアニソール０．５Ｍを加えた後、一７０℃
で無水弗化水素１０の‘を加え氷裕上６０分間かきまぜ
反応を終了させた。
１１２７多Ｃ３１日３３Ｎ５０７Ｓ・杉日２０としての
計算値 Ｃ：５９．２２孫Ｈ：５．４５多Ｎ：１１．１４多７−
（ＮＱーカルボベンゾキシーＮＧートシルーＬーアルギ
ニル）アミノー４ーメチルクマリン５００ｍｏ（０．８
ミリモル）にアニソール０．５Ｍを加えた後、一７０℃
で無水弗化水素１０の‘を加え氷裕上６０分間かきまぜ
反応を終了させた。
無水弗化水素を減圧溜去した後、残澄に水５Ｍを加えた
。
。
水層はエーテル２０の‘で洗浄した後、ダゥェックス社
製イオン交換樹脂ダゥェックス１×２（ＣＱＣＯＯ‐型
）５の【を通過させ水１０泌で洗い出した。
製イオン交換樹脂ダゥェックス１×２（ＣＱＣＯＯ‐型
）５の【を通過させ水１０泌で洗い出した。
水を減圧溜去し残澄約３００雌をメタ／ール５の‘にと
かしエーテルを加えることにより７一Ｌーアルギニルア
ミノ−４−メチルクマリン酢酸塩２７０雌（収率８５％
）を得た。融′点 ２１０．５〜２１７．００（ｄ）〔
Ｑ〕も８十７６．６０（Ｃ＝０．５５０％ＡＣＯＨ）こ
の化合物はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎーブ
チルアルコール：酢酸：水＝４：１：１）で単一のスポ
ット（Ｒｆ＝０．１５）を与えた。
かしエーテルを加えることにより７一Ｌーアルギニルア
ミノ−４−メチルクマリン酢酸塩２７０雌（収率８５％
）を得た。融′点 ２１０．５〜２１７．００（ｄ）〔
Ｑ〕も８十７６．６０（Ｃ＝０．５５０％ＡＣＯＨ）こ
の化合物はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎーブ
チルアルコール：酢酸：水＝４：１：１）で単一のスポ
ット（Ｒｆ＝０．１５）を与えた。
元素分析：測定値 Ｃ：５２．７４多Ｈ：６．２８多Ｎ
：１７．５９多ＣＩ６日２，Ｎ５０３０日３ＣＯＯ日・
日２０としての計算値Ｃ：５２‐８０％Ｈ：６‐６５％
Ｎ：１７‐１０％実施例 ３ＮＱーカルボベンゾキシ−
Ｌ−アルギニル塩酸塩６９．０夕（０．２モル）にＭＣ
Ａ１７．５夕（０．１モル）を加えＤＭＦ３００の上に
溶かし、室温でかさまぜながらＤＣＣＤ２１夕（０．１
モル）を加えた。
：１７．５９多ＣＩ６日２，Ｎ５０３０日３ＣＯＯ日・
日２０としての計算値Ｃ：５２‐８０％Ｈ：６‐６５％
Ｎ：１７‐１０％実施例 ３ＮＱーカルボベンゾキシ−
Ｌ−アルギニル塩酸塩６９．０夕（０．２モル）にＭＣ
Ａ１７．５夕（０．１モル）を加えＤＭＦ３００の上に
溶かし、室温でかさまぜながらＤＣＣＤ２１夕（０．１
モル）を加えた。
室温で１夜かきまぜた後ジシクロヘキシルウレァを濃別
し櫨液を減圧濃縮した。
し櫨液を減圧濃縮した。
残留物にメタ／ール５０の‘と酢酸エチル５００Ｍを加
えて粗結晶１９夕を得た。この結晶を熱ＣＭＦ３０の‘
と熱メタノール１００のＺにとかし不落物を渡別した後
、猿液に酢酸エチル４００泌を加えることにより７一（
ＮＱ−カルボベンゾキシーＬーアルギニル）アミノー４
ーメチルクマリン塩酸塩の白色結晶１４．５夕（収率２
９％）を得た。融点 ２１０〜２１１ｏ（分解〔Ｑ〕も
５一１７．０ｏ（Ｃ＝２．３印ＭＦ）元素分析：測定値
Ｃ：５７．６１％Ｈ：５．６９多Ｎ：１３．９４％Ｃ
２４日２８Ｎ５０５ＣＣとしての計算値 Ｃ：５７．４２％Ｈ：５‐６２％Ｎ：１３．９６略７一
（ＮＱーカルボベンゾキシ−Ｌーアルギニル）アミノー
４−メチルクマリン塩酸塩２５１の９（０．５ミリモル
）をメタノール５０私、酢酸５の【及び水１０Ｍの混合
物にとかし５％パラジウム炭素触媒２５のｏを加え水素
ガスを通じながら室温で３時間かきまぜた後触媒を渡別
し溶媒を減圧溜去した、残薄にエーテル５０の‘を加え
生成した粉末を猿取した。
えて粗結晶１９夕を得た。この結晶を熱ＣＭＦ３０の‘
と熱メタノール１００のＺにとかし不落物を渡別した後
、猿液に酢酸エチル４００泌を加えることにより７一（
ＮＱ−カルボベンゾキシーＬーアルギニル）アミノー４
ーメチルクマリン塩酸塩の白色結晶１４．５夕（収率２
９％）を得た。融点 ２１０〜２１１ｏ（分解〔Ｑ〕も
５一１７．０ｏ（Ｃ＝２．３印ＭＦ）元素分析：測定値
Ｃ：５７．６１％Ｈ：５．６９多Ｎ：１３．９４％Ｃ
２４日２８Ｎ５０５ＣＣとしての計算値 Ｃ：５７．４２％Ｈ：５‐６２％Ｎ：１３．９６略７一
（ＮＱーカルボベンゾキシ−Ｌーアルギニル）アミノー
４−メチルクマリン塩酸塩２５１の９（０．５ミリモル
）をメタノール５０私、酢酸５の【及び水１０Ｍの混合
物にとかし５％パラジウム炭素触媒２５のｏを加え水素
ガスを通じながら室温で３時間かきまぜた後触媒を渡別
し溶媒を減圧溜去した、残薄にエーテル５０の‘を加え
生成した粉末を猿取した。
この粉末は７−Ｌ−アルギニルアミノ−４−メチルクマ
リン、塩酸塩２分の１水和物であり、収量１磯雌（収率
１００％）融点 ２７５ｏ（分解）〔Ｑ〕も５十９１．
９ｏ（Ｃ＝１．０１、２５％酢酸水溶液）元素分析：測
定値 Ｃ：５１．０２％Ｈ：６．１１％Ｎ：１８．４１
賂ＣＩ６日２２Ｎ５０３Ｃム・髪日２０としての計算値 Ｃ：５０‐９９％Ｈ：６‐１５多Ｎ：１８５９孫この化
合物はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎーブチル
アルコール：酢酸：水＝４：１：１）で単一のスポット
を与え、又実施例１の‘。
リン、塩酸塩２分の１水和物であり、収量１磯雌（収率
１００％）融点 ２７５ｏ（分解）〔Ｑ〕も５十９１．
９ｏ（Ｃ＝１．０１、２５％酢酸水溶液）元素分析：測
定値 Ｃ：５１．０２％Ｈ：６．１１％Ｎ：１８．４１
賂ＣＩ６日２２Ｎ５０３Ｃム・髪日２０としての計算値 Ｃ：５０‐９９％Ｈ：６‐１５多Ｎ：１８５９孫この化
合物はシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ｎーブチル
アルコール：酢酸：水＝４：１：１）で単一のスポット
を与え、又実施例１の‘。
｝及びし一実施例２において得られた化合物と同じＲｆ
値を示した。次に本発明の７一Ｌーアルギニルアミノ−
４−メチルクマリンを用い、アミノベプチダーゼＭの活
性測定を行った結果を示す。
値を示した。次に本発明の７一Ｌーアルギニルアミノ−
４−メチルクマリンを用い、アミノベプチダーゼＭの活
性測定を行った結果を示す。
｛１１ 緩衝液：０．１Ｍトリス−塩酸（ｐＨ７．８）
｛２１ 基質溶液：７一Ｌーアルギニルアミノー４−メ
チルクマリン塩酸塩２分の１水和物１８．９のｐを５０
％ジメチルホルムアミドに溶解し５泌とする（１０ミリ
モル濃度）。
｛２１ 基質溶液：７一Ｌーアルギニルアミノー４−メ
チルクマリン塩酸塩２分の１水和物１８．９のｐを５０
％ジメチルホルムアミドに溶解し５泌とする（１０ミリ
モル濃度）。
‘３’酵素溶液：
ローム アンド ハース（Ｌ６ａｍ ＆
舷ａｓ）社製ァミノベプチダーゼＭＩＯュニットを上記
緩衝液に溶解し１の‘とする（１０ユニット／私）。
緩衝液に溶解し１の‘とする（１０ユニット／私）。
‘４’測定方法：
０．０２〜２．０ミリモル濃度の基質溶液各２．５Ｍに
０．２〜２ユニット／のとの酵素溶液各１００ムクを加
え２５℃でインキュベーションし、紫外線吸収スペクト
ル３７加川で吸収の増大を測定する。
０．２〜２ユニット／のとの酵素溶液各１００ムクを加
え２５℃でインキュベーションし、紫外線吸収スペクト
ル３７加川で吸収の増大を測定する。
‘５｝ 結果：紫外線吸収は反応時間に対し、１び分間
直線関係であり、また酵素濃度が１Ｍ音の範囲（０．０
２〜０．２ユニット）で直線関係であった。
直線関係であり、また酵素濃度が１Ｍ音の範囲（０．０
２〜０．２ユニット）で直線関係であった。
ラインウイーバ＝パークプロットから物＝０．０８ＭＭ
比活性は０．５２仏ｍｏｌｅｓ／の９酵素／分であった
。
比活性は０．５２仏ｍｏｌｅｓ／の９酵素／分であった
。
なお、７一（ＮＱカルボベンゾキシ−Ｌーアルギニル）
アミノー４−メチルクマリンは、アミノベプチダーゼＭ
の基質とはならず、その活性測定には使用できない。
アミノー４−メチルクマリンは、アミノベプチダーゼＭ
の基質とはならず、その活性測定には使用できない。
以上の結果から、本発明品がアミノベプチダーゼＭの徴
量活性測定ができることがわかる。
量活性測定ができることがわかる。
参考例 １７−Ｌーアルギニルアミノー４−メチルクマ
リン塩酸塩・１／２水和物３７７の２（１ミリモル）を
ＤＭＦＩＯの‘と水１０の‘に溶解し、この中にカルボ
ベンゾキシーＬープロリンのＮーヒドロキシスクシンイ
ミドエステル４５０雌（１．３ミリモル））を加えた。
リン塩酸塩・１／２水和物３７７の２（１ミリモル）を
ＤＭＦＩＯの‘と水１０の‘に溶解し、この中にカルボ
ベンゾキシーＬープロリンのＮーヒドロキシスクシンイ
ミドエステル４５０雌（１．３ミリモル））を加えた。
室温にて１５時間かきまぜた後、濃縮乾固した。この残
留物を、溶媒としてクロロホルム／メチルアルコール／
酢酸（９５／５／３〜８５／２０／５）の混合物を用い
てシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２×１反汝）
で精製し、主留分を濃縮乾固した後、酢酸１０泌に溶解
し凍結乾燥することにより、７一（ＮＱーカルボベンゾ
キシ−Ｌ一プロリルーアルギニル）アミノー４ーメチル
クマリン塩酸塩５３０の９を得た。このものは旋光度〔
Ｑ〕汐＝−７７．０ｏ（Ｃ＝０．６、ＤＭＦ）を示し、
加熱すると１弊。○より徐々に分解した。元素分析： Ｃ２虹３５Ｎ６ＣＩ・ＣはＣＯＯ日としての計算値 Ｃ
５６．４８％、日５．９６％、Ｎ１２．７５％実測値
Ｃ５６．２１％、日５．７４％、Ｎ１３．０７％ここで
得られた化合物のカルポベンゾキシ基はアルコール中水
添反応を付すことにより除去される。
留物を、溶媒としてクロロホルム／メチルアルコール／
酢酸（９５／５／３〜８５／２０／５）の混合物を用い
てシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２×１反汝）
で精製し、主留分を濃縮乾固した後、酢酸１０泌に溶解
し凍結乾燥することにより、７一（ＮＱーカルボベンゾ
キシ−Ｌ一プロリルーアルギニル）アミノー４ーメチル
クマリン塩酸塩５３０の９を得た。このものは旋光度〔
Ｑ〕汐＝−７７．０ｏ（Ｃ＝０．６、ＤＭＦ）を示し、
加熱すると１弊。○より徐々に分解した。元素分析： Ｃ２虹３５Ｎ６ＣＩ・ＣはＣＯＯ日としての計算値 Ｃ
５６．４８％、日５．９６％、Ｎ１２．７５％実測値
Ｃ５６．２１％、日５．７４％、Ｎ１３．０７％ここで
得られた化合物のカルポベンゾキシ基はアルコール中水
添反応を付すことにより除去される。
参考例 ２７一Ｌーアルギニルアミノー４ーメチルクマ
リン塩酸塩・１／２水和物３７７のｏ（１ミリモル）を
ＤＭＦ５の‘と水５の‘との混合物中に溶解し、この中
にｔ−ブチルオキシカルボニルーＬ−バリル−Ｌ−プロ
リンーＰーニトロフエニルエステル５６６の９（１．３
ミリモル）を加えて、室温にて１即時間かきまぜた後濃
縦乾圏した。
リン塩酸塩・１／２水和物３７７のｏ（１ミリモル）を
ＤＭＦ５の‘と水５の‘との混合物中に溶解し、この中
にｔ−ブチルオキシカルボニルーＬ−バリル−Ｌ−プロ
リンーＰーニトロフエニルエステル５６６の９（１．３
ミリモル）を加えて、室温にて１即時間かきまぜた後濃
縦乾圏した。
この残留物を、溶媒としてクロロホルムノメチルアルコ
ール／酢酸（９５／５／３〜８５／２０／５）の混合物
を用いてシリカゲルクロマトグラフィー（２弧×１暴れ
）で精製し主留分を濃縮乾固した後、酢酸１０机上に溶
解し凍結乾燥することにより、７−（ＮＱ一ｔーブチル
オキシカルボニルーＬーバリル−Ｌープロリル−Ｌ−ア
ルギニル）アミノ−４−メチルクマリンの塩酸塩３２肋
９を得た。このものは、旋光度〔Ｑ〕も５＝−６４．８
０（Ｃ＝０．６脚ＭＦ）を示し、加熱すると１５？０よ
り徐々に分解した。
ール／酢酸（９５／５／３〜８５／２０／５）の混合物
を用いてシリカゲルクロマトグラフィー（２弧×１暴れ
）で精製し主留分を濃縮乾固した後、酢酸１０机上に溶
解し凍結乾燥することにより、７−（ＮＱ一ｔーブチル
オキシカルボニルーＬーバリル−Ｌープロリル−Ｌ−ア
ルギニル）アミノ−４−メチルクマリンの塩酸塩３２肋
９を得た。このものは、旋光度〔Ｑ〕も５＝−６４．８
０（Ｃ＝０．６脚ＭＦ）を示し、加熱すると１５？０よ
り徐々に分解した。
元素分析：
Ｃ３，日４６Ｎ７０７ＣＩ・２日２０・２ＣＨ３ＣＯＯ
日としての計算値 Ｃ５１．２４％、日７．１３％、Ｎ
Ｉｌ．９５％実測値 Ｃ５１．３８％、日６．８１％、
ＮＩｌ．８６％次に、ここで製造したべプチドが酵素の
けし、光性基質となることを示す実験を行った。
日としての計算値 Ｃ５１．２４％、日７．１３％、Ｎ
Ｉｌ．９５％実測値 Ｃ５１．３８％、日６．８１％、
ＮＩｌ．８６％次に、ここで製造したべプチドが酵素の
けし、光性基質となることを示す実験を行った。
前記参考例１および２で製造したププチド０．１ミリモ
ルをジメチルスルホキシド５の‘と水５の‘の混合物を
溶解し、緩衝液（０．０９Ｍトリス−塩酸（ｐＨ８．０
）（０．１ＭＮａｃｌと１０のＭ ＣａＣ１２を含む）
）で全量を５００の【に希釈し、基質溶液を調整した。
ルをジメチルスルホキシド５の‘と水５の‘の混合物を
溶解し、緩衝液（０．０９Ｍトリス−塩酸（ｐＨ８．０
）（０．１ＭＮａｃｌと１０のＭ ＣａＣ１２を含む）
）で全量を５００の【に希釈し、基質溶液を調整した。
次に各基質溶液２の‘を試験管に探り、３７０に５分間
静直後、各酵素溶液２０仏〆を加えた。３７０で２０分
間ふりまぜた後、１００％を酢酸０．５の‘を加え反応
を停止させた。
静直後、各酵素溶液２０仏〆を加えた。３７０で２０分
間ふりまぜた後、１００％を酢酸０．５の‘を加え反応
を停止させた。
このようにして得た各試料について、けし、光スペクト
ルのＥＸ３８仇机、Ｅｍ４６仇机の波長を用いてけし、
光の増大を測定し、加水分解の程度を求め、その結果を
次表に示した。各値はけし、光強度比であり７ーアミノ
ー４ーメチルクマリンの４０仏Ｍ（４０ムｍｏｌｅ／夕
）溶液のけい光強度を１００として示した。なお、※印
の値については７ーアミノー４ーメチルクマリンの２０
０ムＭ（２００山ｍｏｌｅ／〆）溶液のけし、光強度を
１００として示した。この実験において各酵素は上記緩
衛液に適当に溶解して使用した。
ルのＥＸ３８仇机、Ｅｍ４６仇机の波長を用いてけし、
光の増大を測定し、加水分解の程度を求め、その結果を
次表に示した。各値はけし、光強度比であり７ーアミノ
ー４ーメチルクマリンの４０仏Ｍ（４０ムｍｏｌｅ／夕
）溶液のけい光強度を１００として示した。なお、※印
の値については７ーアミノー４ーメチルクマリンの２０
０ムＭ（２００山ｍｏｌｅ／〆）溶液のけし、光強度を
１００として示した。この実験において各酵素は上記緩
衛液に適当に溶解して使用した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリン
。 ２ 酸付加塩の形を有する特許請求の範囲第１項記載の
化合物。 ３ 分子を構成するアルギニンがＬ−体である特許請求
の範囲第１項記載の化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7474077A JPS6027675B2 (ja) | 1977-06-23 | 1977-06-23 | ７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7474077A JPS6027675B2 (ja) | 1977-06-23 | 1977-06-23 | ７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS549273A JPS549273A (en) | 1979-01-24 |
| JPS6027675B2 true JPS6027675B2 (ja) | 1985-06-29 |
Family
ID=13555932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7474077A Expired JPS6027675B2 (ja) | 1977-06-23 | 1977-06-23 | ７−アルギニルアミノ−４−メチルクマリン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6027675B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2516365B2 (ja) * | 1987-05-09 | 1996-07-24 | サンスタ−株式会社 | 歯周疾患検査薬 |
| JP5261710B2 (ja) * | 2007-02-15 | 2013-08-14 | 国立大学法人秋田大学 | アルギニンとクーマリン色素から合成した蛍光性化合物 |
| JP5294299B2 (ja) * | 2008-02-01 | 2013-09-18 | 国立大学法人秋田大学 | アルギニンとクーマリン色素から合成した蛍光性化合物 |
-
1977
- 1977-06-23 JP JP7474077A patent/JPS6027675B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS549273A (en) | 1979-01-24 |
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