JPS60258173A - ａ−〔３−タ−シヤリ−ブチル−５−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキシベンジリデン〕−γ−ブチロラクトンおよびその製造法並びにそれを有効成分とする抗炎症剤および血小板凝集阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、下記の構造式Ｉで示される、新規なα−〔８
−ターシャリ−ブチル−６−（１，１−ジメチル−２−
ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキシベンジリデン〕−
ｒ−ブチロラクトンおよびその造塩可能なものの塩、そ
の製造法、並びにこれ　１１・を有効成分とする抗炎１
剤、血小板凝集阻害剤に関するものである。

ＣＨ３ 鳥 Ｈｇ （発明が解決しようとする問題点） 本発明者等は、下記の構造式■で示されるＨｇ ＣＨ３−Ｃ−ＣＨ３ さＨ３ α−〔８，５−ジターシャリ−ブチル−４−ヒドロキシ
ベンジリデン〕−γ−ブチロラクトンから、動物の生体
内変換によって幾つかの誘導体を得ることができ、その
薬理作用を広く試験した結果、構造式Ｉで表わされる化
合物Ｉ及びその塩が優れた抗炎症及び血小板凝集阻害作
用を有することを見出した。さらに、この構造式■で表
わされる化合物■から化合物Ｉへの変換を微生物にめて
研究を重ねた結果、本発明に到達した。

（以下構造式Ｉで表わされる本発明の化合物を化合物Ｉ
、構造式■で表わされる化合物を化合物■と称すること
にする。） （問題点を解決するための手段） 以下詳細に本発明を説明する。

本発明の新規化合物は、下の構造式で表わされる。

Ｈｇ ＣＨＲ−Ｃ−ＣＨＩＩＯＨ よＨ８ 本化合物１は、水に不溶、メタノール、エタノールに難
溶で、テトラヒドロフラン、クロロホルム、アセトン、
アセトニトリル、ジメチルスルホキシドに易溶の粉末状
物質であり、その性状は次の通りである。

融点；１８８〜１９１℃ 分子ｉｎ　：　ＢＩＢ（Ｍａｓｓ分析）元素分析髄： ＣＨＯ 実験値　７１．８５　８．１８　２０．０２理論値　７
１．７０　８．１８　２０．１２（ｃ１ｇｕ雪６０４） さらに、本化合物Ｉの構造は、紫外線吸収スペクトル（
図ｉ　：　ＣＨａＣＮ溶液）、赤外線吸収スペクトル（
図２　：　Ｋｎｒ錠剤）、核磁気共鳴スペクトル（図３
　：　ＣＤＣ！！８溶液）によって確認された。

本発明による化合物の塩としては、本発明の化合物Ｉと
その塩基とから造塩可能な任意のものが対象となる。具
体的には、例えば■金属塩、特にアルカリ金属、アルカ
リ土類金属、アルミニウムとの塩、■アンモニウム塩、
■アミン塩、特にメチルアミン、エチルアミン、ジメチ
ルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ピロリ
ジン、ピペリジン、モルホリン、ヘキサメチレンイミン
、アニリン、ピリジン等との塩がある。これらの塩を抗
炎症剤、血小板凝集阻害剤として使用する場合には、生
理的に許容されるものを選ぶべきであるＯ 次に本発明の化合物の製法を説明する。

本発明者等は、化合物■の動物生体内に於ける変換によ
り得た物質中に抗炎症作用の強い物質を検索した結果、
本発明の化合物である化合物Ｉを見出すことができ、さ
らに微生物による化合物■の化合物Ｉへの変換を検削し
た結果、λ（ｕｃｏｒ属あるいはＡ＠ｐｅｒｇＨ１ｕａ
属に属する微生物が化合物■を生産し得ることを発見し
た。

本発明に使用し得る′＆住物としては、Ｍｕｃｏｒｌｉ
ｉ４、Ａａｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　属に属するもので化合
物■を化合物Ｉへ変換しうるものであればいずれをも使
用できるが、具体的には例えばムコール・アルターナン
ス（Ｍｕｃｏｒ　ａｌｔｅｒｎａｎａ）　ＨＵＴ　１１
１５　、アスパーギルスーニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ　ｎｉｇａｒ）ＩＡＭ　８００８を用いることがで
きる。これら微　）′生物の培養には、通常、これらの
微生物が生育できる栄養培地ならばいずれをも使用し得
る。例えば炭素源としてグルコース、シュクロース等の
炭水化物；エタノール、グリセロール等のアルコール類
尋、窒素源として尿素、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム、イーストエキス、肉エキス、ペプトン等、ま
た微量金属塩、ビタミン等の通常の培養に用いられる栄
養源、ＴＷｅｅｎ　８０、コール酸ナトリウム、胆汁末
等の界面活性剤を適宜混合した培地を用いることができ
る。

培養方法としては１．栄養培地のｐＨを８．０〜１０．
０、好ましくは６．０〜９．０で好気的に１５〜４６℃
、好ましくは２０〜８５℃で１０〜２００時間培養する
。化合物Ｈに微生物を作用させて本発明の化合物■に変
換させる方法としては、微生物を上記の栄養培地で培養
し得られた培養液、あるいは培養液から得られた菌体懸
濁液等に基質を作用させて化合物ｌを得る方法、あるい
は培地に基質を添加し、培養と反応を同時に行なう等の
方法を用いることができる。反応時の温度は１０〜６０
℃で行なうことができ、好ましくは２０〜４０℃で行な
い、ｐＨは８．０〜１０．０の範囲、好ましくは６，０
〜９．０の範囲で行ない、反応時間は基質濃度に応じて
決められるが、通常４〜６０時間で行われる。この様に
して得た化合物Ｉを採取するには、一般の脂溶性化合物
を採取する方法を用いることができるが、例えば培養液
をクロロホルム、酢酸ブチル、酢酸エチル等の有機溶媒
により抽出し、溶媒層を濃縮し、濃縮物を各種のクロマ
トグラフィー、例えばシリカゲルあるいは逆相シリカゲ
ルを担体とするカラムクロマトグラフィーで精製するこ
とにより化合物■が得られる。

次に、本発明の抗炎症剤及び血小板凝集阻害剤について
説明する。

抗炎症剤及び血小板凝集阻害剤は、前記の構造式■で示
される新規な化合物Ｉ又はその塩を有効成分とするもの
である。

本化合物Ｉは、ＩＣＲ系雄性マウス（体重２０〜２５Ｉ
）を用いた急性毒性試験で、Ｌ　Ｄ　５Ｑ（ｍ、ＦＡ）
値が１０００より大きい低毒性のものであり、その薬理
作用は下記の試験例に示される通りであり、本発明によ
る化合物は優れた薬理作用を有することが明らかである
。

抗炎症作用（カラゲニン足部浮腫抑制作用）ウィスター
系雄性ラット（体重１５０〜１８０ｙ）を用い、１群５
匹とした。被検化合物を２．５％アラビアゴム水溶液に
懸濁したものを１．　ｏ　ｍＪ／１００Ｉ体重の割合で
経口投与した。１時間後、１％カラゲニンを一側後肢足
隨皮下にｏ、　ｉ　ｍ／注射し、起炎した。起炎後、２
，８．４および５時間に後肢足腫脹容積を測定し、下記
の式により抑制率をめた。

結果を表１に示す。本発明による化合物は強いカラゲニ
ン浮腫抑制作用を有することが分る。

表１　カラゲニン足隨浮腫抑制作用 血小板凝集阻害作用 以下に示す方法により血小板凝集阻害作用を試験した。

（１）多血小板血漿（ＰＲＰ液）の調製日本白色種雄性
ウサギの頚動脈から血液（血液９容＝８．８％クエン酸
ナトリウム溶液１容）を採取し、１００１０００ｒｐ分
間遠心分離を行ない、　１１：その上清をＰＲＰ液とし
て用いた。

（２）アラキドン酸液の調製 アラキドン酸ナトリウムを生理食塩水に溶解し、アラキ
ドン酸２　ｍｌ／ｒｕｔ溶欣を調製した。

（３）測定 血小板凝集針のキュベツトにＰＲＰ液０．９４　ｍｌ！
と被検化合物のエタノール溶液０．０１ｍ／とを入れ、
８７℃で１分間インキュベートした後、血小板凝集惹起
剤であるアラキドン酸０．０５ｍ１！を添加した。血小
板凝集に伴う透過度の変化を追跡し、被検化合物の血小
板凝集阻害能を測定した。

被検化合物の濃度を種々変えて測定を行い、血小板凝集
を完全に阻害する濃度をめた。結果を表２に示す。本発
明による化合物は強い血小板凝集阻害作用を有すること
が分る。

表２　血小板凝集阻害作用 本化合物は、プロスタグランジン合成酵素、５−リポキ
シゲナーゼに対して強い阻害作用を有し、抗炎症剤、血
小板凝集阻害剤以外に抗アレルギー剤に有効であること
が推察される。

調剤及び投与量 この発明の化合物及びその造塩可能なものの塩は、所望
の投与方法に応じて、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、
粉剤、液剤、けんだく剤等の固体又は液体の投与形態に
することができる。

投与にあたっては、この発明の化合物及びその造塩可能
なものの塩に加えて、慣用される医薬用担体又は賦形剤
を含み、さらに他の医薬を含むことができるが、その製
剤中の主要成分でなくてもよいことはいうまでもない。

本発明の化合物は、一般に所望の作用が副作用を伴なう
ことなく達成される投与量で投与される。

その具体的な値は、医師の判断で決定されるべきである
が、一般に成人１日当りｔｏｍｙ〜１０Ｉｉ。

好ましくは２０ｍ１−５ｐ程度で投与されるのが普通で
あろう。なお、本発明化合物は有効化合物としてｉｍｐ
ｉ５Ｉ、好ましくは８ｍｌ〜ＩＩの単位量の薬学的製剤
として投与す′るたとができる。

（実施例及び発明の効果） 次に、本発明化合物の製造例をあげて本発明を具体的に
説明するが、これら実施例は本発明を制限するものでは
ない。

実施例１ 寒天斜面培地上に培養したＭｕｃｏｒ　ａｌｔｅｒｎａ
ｎｓＨＵＴ　１１１５を、グルコース８．０％、ペプト
ン１．０％、イーストエキス０．６％、肉エキス０．６
％を含む液体培地（ｐＨ６，８に調整、５００ｍ１／容
坂ロフラスコにｔ　ｏ　ｏ　ｍ／ずつ分注）に接種し、
２８℃で２４時間振とう培＊（毎分１８０回転）して種
培養を得た。この種培養液１０ｍＪをグルコース８．０
％、ペプトン１．０％、イーストエキス０．５％、肉エ
キス０．５％、胆汁末１．０％、化合物■０．１％を含
む液体培地（ｐＨ６，８に調製、坂ロフラスコにｉ　ｏ
　ｏ　ｍｔずつ分注）計４゜Ｏｌに接種し２８℃で４８
時間振とう培養（毎分１８０回転）した。

この培養液を合わせ（８，６Ｉり、８．Ｏｌのクロロホ
ルムで２回抽出し、クロロホルム層を濃縮して５．７ｙ
の油状物を得た。この油状物をトルエン５ｏｎＩ！に溶
解してシリカゲル（ワコーゲルＣ−２００、和光紬薬製
、ａｏｏｙ）を含む塔に通過吸着させ、トルエン−アセ
トン（８０：１）４．０１で洗浄後、トルエン−アセト
ン（２０：１）２、Ｏ１！で溶出した。溶出液中の化合
物Ｉの検出はキーゼルゲルＦ２５４（ドイツ、メルク社
製、Ａｒｔ５７１５）を用いトルエン−酢酸エチル（１
：１）混合液を展開溶媒としたシリカゲル薄層クロマト
グラム上のＲｆＯ，４Ｂの化合物Ｉのスポットを紫外線
２５４　ｆｌｍで検出することにより行なった。

本物質を含む溶出液１，６１をＤ縮し、５１ｍＪＩの濃
縮物を得た。この濃縮物は下記の条件で高速液体クロマ
トグラフィーにより定量して６０％の純度を示した。　
１ カラム：　ファインパックＣ−１８（日本分光社製）　
内径４．６關　長さ ２５０ｊＩｊ＋ 溶媒系：　アセトニトリル−メタノール（１：１ 検　出：　紫外部吸収　８１０　ｎｍ 流　速：　毎分　１．５　ｍｊ９ ゛　上記条件で化合物Ｉは１８〜１５分にピークが得ら
れ、そのピーク面積を積算して化合物■標品と比較する
ことにより定量した。

得られた濃縮物５ｏｍｙを下記の条件で高速液体クロマ
トグラフィーにかけ、１８〜１５分に現われるピークの
両分を分取した。

カラム二　マイクロ−ボンダパックＣ−１８（米国ウォ
ーターズ社製）内径 ９、５　ｗｇ長さ８０．５ｃｍ 溶媒系：　アセトニトリル−水（１：１）流　ｉｉ：　
毎分２ｍ／ 検　出：　紫外部８１０　ｔｌｌｎ 試　料：　２０　ｍｌ／ｍｌアセトニトリル溶液を毎回
０．５　ｍ、ｇ使用 分取した画分２８　ｍｌ！を濃縮乾固し、純粋な化合物
Ｉの粉末２７ｍ１／を得た。この粉末を融点。

元素分析、マススペクトル、ＵＶ、ＩＲ，ＮＭＲの測定
に使用し、前記の結果を得た。なあ、化合物Ｉであるこ
とは、赤外線吸収スペクトル詔よびプロトン棟磁気共鳴
スペクトルの測定結果から確認された。

実施例２ 実施例１　ノＭｕＣＯｒ　ａｌｌｅｒｎａｎｓ　ＨＵＴ
　１１１５に代えテＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕａ　ｎｉｇｅ
ｒ　ＩＡＭ　８００８を用いて、以下同様に培養し、抽
出４Ｗｕを行なった。化合物１１４，９から２０ｍｇの
化合物工を得た。

【図面の簡単な説明】

図１は、本発明による化合物Ｉの紫外線吸収スペクトル
、図２は同じく赤外線吸収スペクトル、図８は同じくプ
ロトン枳磁気共鳴スペクトルである。 特許出願人　鐘淵化学工業株式会社 代理人　弁理士　浅　野　興　− 手続補正書（自制 １　事件の表示 事件との関係　°特許出願人 任　所　大阪市北区中之島三丁目２番４号に″壱（名称
＞　（０９り鐘淵化学］二業株式会社代表者　高１）敞 ４代理人

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）構造式Ｉ ？Ｈ３ で示されるα−〔８−ターシャリ−ブチル−５−（１，
   １−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキ
   シベンジリデン）−ｒ−ブチロラクトンおよびその造塩
   可能なものの塩。
2. （２）　構造式■ ＣＨ。 で示される４　−［８，５−ジターシャリ−ブチル−４
   −ヒドロキシベンジリデン］−ｒ−ブチロラクトンのタ
   ーシャリ−ブチル基を微生物を用いて水酸化することを
   特徴とする構造式１ で示されるα−〔８−ターシャリ−ブチル−６−（１，
   １−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキ
   シベンジリデン〕−γ−ブチロラクトンの製造法。
3. （３）微生物としてムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、　ある
   いはアスパーギルス（Ａｓｐｅｒｇ％１１ｕｓ）属に属
   するものを用いる特許請求の範囲第２項記載の製造法。
4. （４）構造式１ で示されるα−〔８−ターシャリ−ブチル−５（１，１
   −ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキシ
   ベンジリデン〕−γ−ブチロラクトンおよびその造塩可
   能なものの塩を傅効成分とする抗炎症剤。
5. （５）　構造式１ で示されるα−〔８−ターシャリ−ブチル−５−（１，
   １−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−４−ヒドロキ
   シベンジリデン〕−γ−ブチロラクトンおよび七〇造塩
   可能なものの塩を有効成分とする血小板凝集阻害剤。