JPS60197643A - 新規コリン誘導体 - Google Patents
新規コリン誘導体Info
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- JPS60197643A JPS60197643A JP5406684A JP5406684A JPS60197643A JP S60197643 A JPS60197643 A JP S60197643A JP 5406684 A JP5406684 A JP 5406684A JP 5406684 A JP5406684 A JP 5406684A JP S60197643 A JPS60197643 A JP S60197643A
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- dihydroxybenzoylcholine
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
- C12Q1/46—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase involving cholinesterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一般式（１）
（式中又はハロダン原子を表わす）で表わされる新規コ
リン誘導体３，４−ジヒドロキシベンゾイルコリンハラ
イドに関する。
リン誘導体３，４−ジヒドロキシベンゾイルコリンハラ
イドに関する。
実施例１に示すごとく、これらの化合物は６゜４−ジヒ
Ｖロキシ安息香酸を出発原料として合成された。まず、
３，４−ジヒＶロキシ基をカルボベンゾキシクロライｒ
を用いて、カルボベンゾキシ保護し、次いで塩化チオニ
ルまたは五酸化リン等を用いる化学合成ＫＱける一般的
な方法で酸クロライドに誘導し、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミ
ノエタノールと脱塩酸縮合し、次いで水素還元によって
保護基を脱離し、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノエチル３．４
−ジヒドロキシベンゾエートを得た。この化合物をハロ
ダン化メチルで四級化反応を行い、本発明の新規な一般
式（１）で表わされる６、４一ジヒｒロキシペンゾイル
コリンハライドヲ合成した。
Ｖロキシ安息香酸を出発原料として合成された。まず、
３，４−ジヒＶロキシ基をカルボベンゾキシクロライｒ
を用いて、カルボベンゾキシ保護し、次いで塩化チオニ
ルまたは五酸化リン等を用いる化学合成ＫＱける一般的
な方法で酸クロライドに誘導し、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミ
ノエタノールと脱塩酸縮合し、次いで水素還元によって
保護基を脱離し、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノエチル３．４
−ジヒドロキシベンゾエートを得た。この化合物をハロ
ダン化メチルで四級化反応を行い、本発明の新規な一般
式（１）で表わされる６、４一ジヒｒロキシペンゾイル
コリンハライドヲ合成した。
本発明の化合物はコリンエステラーゼ（酵素コード番号
３．１．１．８ ） （以下Ｃｈ−Ｅと記述する）の酵
素活性を測定するための合成基質として非常に有用であ
る。以下それについて詳細に説明する。
３．１．１．８ ） （以下Ｃｈ−Ｅと記述する）の酵
素活性を測定するための合成基質として非常に有用であ
る。以下それについて詳細に説明する。
従来、合成基質を使用する血液中のＣｈ−Ｅの酵素活性
の測定法は種々報告され、また日常の臨床検査に実用化
されているものもある。しかし、それらの測定法には一
長一短があり、また種々の問題もあって測定値の不正確
さの原因になっている。
の測定法は種々報告され、また日常の臨床検査に実用化
されているものもある。しかし、それらの測定法には一
長一短があり、また種々の問題もあって測定値の不正確
さの原因になっている。
それらの測定法の例をあげると、ガス分析法、−メータ
ー法、−指示薬比色法、チオコリン発色法、酵素法、Ｕ
Ｖ法等がある。
ー法、−指示薬比色法、チオコリン発色法、酵素法、Ｕ
Ｖ法等がある。
ガス分析法（Ｒ，Ａｍｍｏｎ ： Ｐｆｌｕｇｅｒ ｓ
Ａｒｃｈ、 Ｇａｓ。
Ａｒｃｈ、 Ｇａｓ。
Ｐｈｙｓｉｏｌ 、 ２３３ 、４８７ （１９３５）
）は合成基質としてアセチルコリンを用い、Ｃｈ−、
Ｂの酵素作用で生成した酢酸により炭酸水素す） ＩＪ
ウムから発生する炭酸ガスを定量する方法であるが、操
作が煩雑で多数検体の処理ができないなどの欠点がある
。
）は合成基質としてアセチルコリンを用い、Ｃｈ−、
Ｂの酵素作用で生成した酢酸により炭酸水素す） ＩＪ
ウムから発生する炭酸ガスを定量する方法であるが、操
作が煩雑で多数検体の処理ができないなどの欠点がある
。
一メーター法ＣＨ，Ｏ，Ｍｉｃｈｅｌ ： Ｊ、 Ｌａ
ｂ、 ＆ Ｃ１１ｎ。
ｂ、 ＆ Ｃ１１ｎ。
Ｍｅｄ、、 ３４ 、１５６４ （１９４９） ）もガ
ス分析法と同様にＣｈ −Ｑの酵素活性によって生じた
酢酸による−の変化な一メーターで測定する方法である
が、−メーターの精度、多数検体の処理が出来ないなど
の問題がある。
ス分析法と同様にＣｈ −Ｑの酵素活性によって生じた
酢酸による−の変化な一メーターで測定する方法である
が、−メーターの精度、多数検体の処理が出来ないなど
の問題がある。
一指示薬比色法は−メーター法とは異なり、Ｃｈ −ｇ
により生じた酢酸によるーの変化を指示薬の分子吸光度
を測定する方法で、指示薬としてはフェノールレツＶ〔
高橋浩、紫田進：医学と生物学；２０．９６（１９５１
））、ブロムチモールゾル−（Ｈ，（）、Ｂｉｇｇｓ
ｅｔ ａｌ、 ： Ａｍｅｒ、 Ｊ、 Ｃ１１ｎ。
により生じた酢酸によるーの変化を指示薬の分子吸光度
を測定する方法で、指示薬としてはフェノールレツＶ〔
高橋浩、紫田進：医学と生物学；２０．９６（１９５１
））、ブロムチモールゾル−（Ｈ，（）、Ｂｉｇｇｓ
ｅｔ ａｌ、 ： Ａｍｅｒ、 Ｊ、 Ｃ１１ｎ。
Ｐａｔｈ、、３０．１８１（１９５Ｂ））、ｍ−一トロ
フェノール〔佐々木匡秀：臨床病理、１２゜５５５ （
１９６４）、 ）などが使われている。この方法は操作
も簡便で多数検体の処理もできるが、反応時間が長く、
反応中にも−が変化し、低値と高値で再現性があまりよ
くないなどの欠点が指摘されている。
フェノール〔佐々木匡秀：臨床病理、１２゜５５５ （
１９６４）、 ）などが使われている。この方法は操作
も簡便で多数検体の処理もできるが、反応時間が長く、
反応中にも−が変化し、低値と高値で再現性があまりよ
くないなどの欠点が指摘されている。
上述したアセチルコリンを基質として用いる方法では、
アセチルコリンは非酵素的加水分解をうけやすく、また
基質特異性もあまりないので、基質そのものＫも問題が
ある。
アセチルコリンは非酵素的加水分解をうけやすく、また
基質特異性もあまりないので、基質そのものＫも問題が
ある。
チオコリン法（Ｐ、Ｇａｒｒｙ ： Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｃ
ｈｅｍ。
ｈｅｍ。
１１（２）、９１（１９６５））は基質としてアセチル
チオコリン、プロピルチオコリン、ブチルチオコリン等
が使用されている。これらの基質はＣｈ −Ｅの酵素作
用でチオコリンを生成し、それが５，５′−ジチオビス
−２−二トロ安息香酸（ＤＴＮ、Ｂ）と反応して黄色を
生じる。この黄色の吸光度を比色計で測會する方法であ
る。この方法は反応性に優れ、感度が高く、また操作も
簡単で多数検体の処理もできるとともに初速変法もでき
るなど優れた点もあるが、呈色が黄色であるため試料（
例えば血清、血漿）中のヒリルビンの影響を強く受け、
またグルタチオンのような８Ｈ基を存する化合物の影響
もまぬがれないし、さらに基質そのものが不安定である
ことも問題になっているなどいくつかの問題点がある。
チオコリン、プロピルチオコリン、ブチルチオコリン等
が使用されている。これらの基質はＣｈ −Ｅの酵素作
用でチオコリンを生成し、それが５，５′−ジチオビス
−２−二トロ安息香酸（ＤＴＮ、Ｂ）と反応して黄色を
生じる。この黄色の吸光度を比色計で測會する方法であ
る。この方法は反応性に優れ、感度が高く、また操作も
簡単で多数検体の処理もできるとともに初速変法もでき
るなど優れた点もあるが、呈色が黄色であるため試料（
例えば血清、血漿）中のヒリルビンの影響を強く受け、
またグルタチオンのような８Ｈ基を存する化合物の影響
もまぬがれないし、さらに基質そのものが不安定である
ことも問題になっているなどいくつかの問題点がある。
酵素法はベンゾイルコリン〔岡部紘明、他：臨床病理、
２５，７５１（１９７７））またはオルソトルオイルコ
リン〔特開昭５４−１３８５３３１などを基質として用
い、Ｃｈ−１１ｒｉの酵素作用で生成したコリンなコリ
ンオキシダーゼによりベタインに変化させ、その時生成
する過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下で４−アミ
ノアンチピリンとフェノールなどとの酸化的縮合反応で
発色する方法である。この方法は呈色が赤色になるので
、廿籠を伽シ１、ギ畠凄 面將）山のビ１１ルーン？Ｆ
ｌ／ハ干渉を受けず、多数検体の処理もできるが、発
色系の試薬として使用するフェノールや４−アミノアン
チピリンがＣｈ −Ｅに対して拮抗阻害効果があるので
、それらの使用量が非常に限定され、十分な発色が難し
い。一般に過酸化水素を経由する □定量法は、試料（
例えば血清または血漿）中のピリルｔンやアスコルビン
酸などの還元物質による影響はまぬがれないし、リン脂
質の分解などで生じるコリンの影響も受ける。ベンゾイ
ルコリンを基質とした場合は、非酵素的加水分解性も問
題になっているなど種々の問題がある。
２５，７５１（１９７７））またはオルソトルオイルコ
リン〔特開昭５４−１３８５３３１などを基質として用
い、Ｃｈ−１１ｒｉの酵素作用で生成したコリンなコリ
ンオキシダーゼによりベタインに変化させ、その時生成
する過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下で４−アミ
ノアンチピリンとフェノールなどとの酸化的縮合反応で
発色する方法である。この方法は呈色が赤色になるので
、廿籠を伽シ１、ギ畠凄 面將）山のビ１１ルーン？Ｆ
ｌ／ハ干渉を受けず、多数検体の処理もできるが、発
色系の試薬として使用するフェノールや４−アミノアン
チピリンがＣｈ −Ｅに対して拮抗阻害効果があるので
、それらの使用量が非常に限定され、十分な発色が難し
い。一般に過酸化水素を経由する □定量法は、試料（
例えば血清または血漿）中のピリルｔンやアスコルビン
酸などの還元物質による影響はまぬがれないし、リン脂
質の分解などで生じるコリンの影響も受ける。ベンゾイ
ルコリンを基質とした場合は、非酵素的加水分解性も問
題になっているなど種々の問題がある。
ＵＶ法には２種類あり、一つはＷ、 Ｋａｌｏｖｒのベ
ンゾイルコリン（Ｗ、 Ｋａｌｏｖｒ ａｎｄ Ｋ、
Ｇｅｎｅｔ ： Ｃａｎａｄ。
ンゾイルコリン（Ｗ、 Ｋａｌｏｖｒ ａｎｄ Ｋ、
Ｇｅｎｅｔ ： Ｃａｎａｄ。
Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ＆ Ｐｈｙｓｉｏｌ、、 ３
５ 、 り ５９ （１９５７））を基質とする方法で
あり、もう一つはヒドロキシベンゾイルコリンを基質と
する方法である。前者はＣｈ −Ｅの酵素活性によって
基質が加水分解し、その基質が減少していく様子を測定
波長、２４０ｎｍで追跡していく方法である。この方法
の測定原理は直接基質の減少を測定しているので単純明
解であるが、測定波長が短いため血清または血漿成分の
干渉を受けやすいし、基質のベンゾイルコリンが基質阻
害を起すため、反応液の基質濃度が限定され、直線性の
範囲が狭い、またベンゾイルコリンの非酵素的加水分解
性があるので、Ｃｈ−Ｅの至適−で反応を行っていない
などの問題がある。
５ 、 り ５９ （１９５７））を基質とする方法で
あり、もう一つはヒドロキシベンゾイルコリンを基質と
する方法である。前者はＣｈ −Ｅの酵素活性によって
基質が加水分解し、その基質が減少していく様子を測定
波長、２４０ｎｍで追跡していく方法である。この方法
の測定原理は直接基質の減少を測定しているので単純明
解であるが、測定波長が短いため血清または血漿成分の
干渉を受けやすいし、基質のベンゾイルコリンが基質阻
害を起すため、反応液の基質濃度が限定され、直線性の
範囲が狭い、またベンゾイルコリンの非酵素的加水分解
性があるので、Ｃｈ−Ｅの至適−で反応を行っていない
などの問題がある。
後者（％開昭５７−、ｉ １０１９ Ｂ 、特開昭５８
−１５２５００）は基質としてｐ−ヒドロキシベンゾイ
ルコリンを使用亡１． Ｃｈ −Ｅの酵素作用によって
生成するｐ−ヒドロキシ安息香酸な補酵素ＮＡＤ Ｐ）
（の存在下でｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作用
により補酵素ＮＡＤＰＨが酸化されＮＡＤＰ に変化す
る際の吸光度の減少を波長３４゜ｎｍで測定追跡する方
法である。この方法は至適−で反応を行っているし、過
酸化水素−発色系における欠点、即ちビリルビンやアス
コルビン酸すどの還元物質による影響やリン物質の分解
で生じるコリンの干渉を除くことができ、チオコリン法
の欠点もなく更に多数検体処理が可能な自動分析装置に
適した優れたＣｈ −Ｅ活性の測定法である。
−１５２５００）は基質としてｐ−ヒドロキシベンゾイ
ルコリンを使用亡１． Ｃｈ −Ｅの酵素作用によって
生成するｐ−ヒドロキシ安息香酸な補酵素ＮＡＤ Ｐ）
（の存在下でｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作用
により補酵素ＮＡＤＰＨが酸化されＮＡＤＰ に変化す
る際の吸光度の減少を波長３４゜ｎｍで測定追跡する方
法である。この方法は至適−で反応を行っているし、過
酸化水素−発色系における欠点、即ちビリルビンやアス
コルビン酸すどの還元物質による影響やリン物質の分解
で生じるコリンの干渉を除くことができ、チオコリン法
の欠点もなく更に多数検体処理が可能な自動分析装置に
適した優れたＣｈ −Ｅ活性の測定法である。
しかしながら、使用する補酵素ＮＡＤＰＨは高価で不安
定な試薬であり、一定の品質に維持及び管理スルノがむ
ずかしい。また酵素としてｐ−ヒＰ 。
定な試薬であり、一定の品質に維持及び管理スルノがむ
ずかしい。また酵素としてｐ−ヒＰ 。
キシ安息香酸水酸化酵素やプロトカテキン酸−６゜４−
ジオキシデナーゼなどを使用し、測定原理としては前者
に比較して大分複雑であり、測定値の誤差要因が多い。
ジオキシデナーゼなどを使用し、測定原理としては前者
に比較して大分複雑であり、測定値の誤差要因が多い。
以上Ｃｈ −Ｅの酵素活性の測定法について述べたごと
く、従来の測定法または使用する合成基質には問題が多
い。我々は従来法の欠点を解決すべく鋭意研究し、新規
な３．４−ジヒドロキシベンゾイルコリンハライドがａ
ｈ −Ｅの活性を測定するのに非常に有用な基質である
ことを見い出し、血中のＣｈ −Ｅ活性を簡便且つ正確
に一測定する方法を発明するに至った。以下この基質の
信用性について述べる、 第１図ＦＣ５，Ａ−ジヒドロキシベンゾイルコリンアイ
オダイＶ（以下Ｄ’ＨＢＣＩと記す）と６．４−ヒトミ
キシ安息香酸のＵＶスペクトルを示した。
く、従来の測定法または使用する合成基質には問題が多
い。我々は従来法の欠点を解決すべく鋭意研究し、新規
な３．４−ジヒドロキシベンゾイルコリンハライドがａ
ｈ −Ｅの活性を測定するのに非常に有用な基質である
ことを見い出し、血中のＣｈ −Ｅ活性を簡便且つ正確
に一測定する方法を発明するに至った。以下この基質の
信用性について述べる、 第１図ＦＣ５，Ａ−ジヒドロキシベンゾイルコリンアイ
オダイＶ（以下Ｄ’ＨＢＣＩと記す）と６．４−ヒトミ
キシ安息香酸のＵＶスペクトルを示した。
ＤＨＢＣＩがＣｈ−Ｆｉの作用で加水分解するとコリア
と５．１１−ジヒｐロキシ安息香酸を生成する。
と５．１１−ジヒｐロキシ安息香酸を生成する。
前者コリンは波長が３４０ ｎｍ以上ではＵＶ吸収は見
らレナい。後者３．４−ジヒＰロキシ安息香酸は波長が
３４ （３，ｎｍ以下ではＵＶ吸収はほとんどない。
らレナい。後者３．４−ジヒＰロキシ安息香酸は波長が
３４ （３，ｎｍ以下ではＵＶ吸収はほとんどない。
したがって、本発明の新規化合物であるＤＨＢＣＩをＣ
ｈ −Ｅの酵素活性測定用の基質として使用し、測定波
長６４０〜３６０ ｎｍで反応を追跡すれば、基質ＤＨ
ＢＣＩの減少を正確に追うことができる。
ｈ −Ｅの酵素活性測定用の基質として使用し、測定波
長６４０〜３６０ ｎｍで反応を追跡すれば、基質ＤＨ
ＢＣＩの減少を正確に追うことができる。
前述のＷ、 Ｋａｌｏｖｒの方法では測定波長２ ’４
０ ｎｍであるので初期吸収において血液成分の干渉を
大分受けるが、測定波長が６４０〜３６０ ｎｍでは非
常に小さいので、測定条件の設定が容易である。
０ ｎｍであるので初期吸収において血液成分の干渉を
大分受けるが、測定波長が６４０〜３６０ ｎｍでは非
常に小さいので、測定条件の設定が容易である。
この基質ＤＨＢＣＩは非酵素的加水分解に非常に安定で
あり、１／１５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，２０）中６
７℃の条件では９０分ではほとんど加水分解は起きなか
った。この結果は測定中の非酵素的加水分解は無視でき
ることを示している。Ｋｍ値はベンゾイルコリンとあま
り変らず、５０ｍＭ）リス−マレイン酸緩衝液（ｐ）１
８，２０）では２．６ Ｘ １０−’Ｍであった。基質
Ｄ）ＩＰＣＩのｂ値は十分小さいので、反応系では十分
な基質濃度で反応ができ、経時的直線範囲が広くなり、
血液中のＣｈ’ −Ｅの活性は十分測定可能である。
あり、１／１５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，２０）中６
７℃の条件では９０分ではほとんど加水分解は起きなか
った。この結果は測定中の非酵素的加水分解は無視でき
ることを示している。Ｋｍ値はベンゾイルコリンとあま
り変らず、５０ｍＭ）リス−マレイン酸緩衝液（ｐ）１
８，２０）では２．６ Ｘ １０−’Ｍであった。基質
Ｄ）ＩＰＣＩのｂ値は十分小さいので、反応系では十分
な基質濃度で反応ができ、経時的直線範囲が広くなり、
血液中のＣｈ’ −Ｅの活性は十分測定可能である。
以下に更に本発明の新規化合物が有用であることを参考
例により説明する。
例により説明する。
参考例１
タイムコースな第２図に示した。測定法は５０ｍＭ）リ
ス−マレイン酸緩衝液（ｐｉ−１８，２０）で基質濃度
０．２５ ｍＭ Ｋ調製し、その２．０−を取り６７℃
になるまで予備加温（５分間程度）シ、これに血清２０
０μ刀を加えて、直ちに３７℃で６４゜ｎｍにおける吸
光度の減少を測定した。血清はコンセーラｌ（白水製薬
社製）を使用した。ｃｈ−Ｅ活性値は下記の式により計
算される。
ス−マレイン酸緩衝液（ｐｉ−１８，２０）で基質濃度
０．２５ ｍＭ Ｋ調製し、その２．０−を取り６７℃
になるまで予備加温（５分間程度）シ、これに血清２０
０μ刀を加えて、直ちに３７℃で６４゜ｎｍにおける吸
光度の減少を測定した。血清はコンセーラｌ（白水製薬
社製）を使用した。ｃｈ−Ｅ活性値は下記の式により計
算される。
＊△Ｏ，Ｄ、は測定波長３１１０ ｎｍにおける１分間
当りの吸光度の変化量 ＊＊波長５４０ ｎｍ Ｋおける分子吸光度は２９６０
である。
当りの吸光度の変化量 ＊＊波長５４０ ｎｍ Ｋおける分子吸光度は２９６０
である。
上式より使用した血清は２１６（ＩＵ／４）単位であっ
た。第１図に示したごと＜、ａｈ−ｇの単位２１６（Ｉ
Ｕ／−６）では６分間経時的に直線であった。これは自
動分析装置が使用可能なことを示している。
た。第１図に示したごと＜、ａｈ−ｇの単位２１６（Ｉ
Ｕ／−６）では６分間経時的に直線であった。これは自
動分析装置が使用可能なことを示している。
参考例２
第３図に血清の希釈率と酵素活性の関係を示した。測定
条件は下記のごとくである。
条件は下記のごとくである。
イ）基質 ： ＤＨＢＣＩ
口）緩衝液＝５０ｍＭトリスーマレイン酸（ｐＨ８，２
０） ハン血清 ： （１）コｙセ−ラｉ ： １００ ｔｔ
ｌＪ（２）コンセーラ１ ２００μ！ 血清希釈は生理食塩水で行った。基質濃度は緩衝液で０
．２５ ｍＭ Ｋ調製した。測定は基質液に血清および
希釈血清な（１１、（３）は１００ ｐｉ３、（２１ハ
２００紹を用いて、参考例１と同様な方法で行った。
０） ハン血清 ： （１）コｙセ−ラｉ ： １００ ｔｔ
ｌＪ（２）コンセーラ１ ２００μ！ 血清希釈は生理食塩水で行った。基質濃度は緩衝液で０
．２５ ｍＭ Ｋ調製した。測定は基質液に血清および
希釈血清な（１１、（３）は１００ ｐｉ３、（２１ハ
２００紹を用いて、参考例１と同様な方法で行った。
第３図に示したごとく、３種共に、血清の希釈率と酵素
活性は非常に良く直線的な比例関係があった。
活性は非常に良く直線的な比例関係があった。
参考例１および２の結果から、ＤＨＢｃＩは単純な反応
機構と簡単な操作により、血液中のＣｈ −Ｅ活性が低
単位から高単位まで幅広く測定できることが明らかにな
り、本発明の３．４−ジヒＶロキシペンゾイルコリンが
血液中のＣｈ −Ｅ活性測定用の基質として非常に有用
であることが示された。
機構と簡単な操作により、血液中のＣｈ −Ｅ活性が低
単位から高単位まで幅広く測定できることが明らかにな
り、本発明の３．４−ジヒＶロキシペンゾイルコリンが
血液中のＣｈ −Ｅ活性測定用の基質として非常に有用
であることが示された。
実施例１に本発明の新規な６．４−ジヒドロキンベンゾ
イルコリンアイオダイドの合成を記した。
イルコリンアイオダイドの合成を記した。
必要ならアイオダイドは合成化学の一般的な方法で他の
ハロダンに交換できる。
ハロダンに交換できる。
実施例１
３．４−ジヒドロキ７安息香酸１０，９を２．７６Ｎ
ＮａＯＨ７１ｙｎｌ Ｋ溶解し、０〜５℃に氷冷し、は
げしく攪拌しなからカルボベンゾキシクロライド２２１
Ｒ１を滴下した。−を９〜１ｏに保つように２．７３
Ｎ ＮａＯＨも同時に滴下した。約１時間で−は一定に
なり、次いで室温で３時間攪拌下反応させ、冷５ ＮＵ
ヴで−２に調製し、酢酸エチル２００ｍ、１００ｍｊで
２回順次抽出し、２回の酢酸エチル相を合せ、食塩水で
洗浄後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を減圧
留去し、油状物２５ｇを得た。これをシリカゲルクロマ
トで精製し、０、Ｏ′−ジカルポペンゾキシー３，４−
ジヒＶロキシ−安息香酸９．２ｇを得た。この４ｇを防
湿下エーテル５０−に懸濁し、５塩化リン粉末２ｇを加
え、室温で攪拌下５時間反応させた。反応終了後溶媒を
減圧留去し、油状物４．５ｇを得た。これをベンゼン２
０ｍ１に溶解した液を、ジメチルアミノエタノール２ゴ
をベンゼン３０Ｔｎｌに溶解した液に５〜１０℃の冷却
下で滴下した。滴下後室温で一晩攪拌反応を行った後、
ベンゼン５０ＴＬｌを加え、水、次いで飽和食塩水で洗
浄を行い、ベンゼン相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥
し、溶媒を減圧留去し、Ａ、９９の油状物を得た。これ
をエタノール２６０Ｔｎｌに溶解し、パラジウム−黒２
ｇを加え、接触還元を５時間行い、反応後触媒を濾別し
てエタノールを減圧留去し、油状物６ｇを得た。これを
アセトン９Ｑ＋＋＋ｊに溶解し、ヨウ化メチル２ｇの酢
酸エチル溶液を加え室温で一晩放置すると結晶が析出し
た。この結晶を濾取し、アセトンで良く洗浄後、五酸化
リン上で一晩減圧乾燥し、本発明の新規化合物３．４−
ジヒドロキンベンゾイルコリンアイオダイド２．５９を
得た。
ＮａＯＨ７１ｙｎｌ Ｋ溶解し、０〜５℃に氷冷し、は
げしく攪拌しなからカルボベンゾキシクロライド２２１
Ｒ１を滴下した。−を９〜１ｏに保つように２．７３
Ｎ ＮａＯＨも同時に滴下した。約１時間で−は一定に
なり、次いで室温で３時間攪拌下反応させ、冷５ ＮＵ
ヴで−２に調製し、酢酸エチル２００ｍ、１００ｍｊで
２回順次抽出し、２回の酢酸エチル相を合せ、食塩水で
洗浄後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を減圧
留去し、油状物２５ｇを得た。これをシリカゲルクロマ
トで精製し、０、Ｏ′−ジカルポペンゾキシー３，４−
ジヒＶロキシ−安息香酸９．２ｇを得た。この４ｇを防
湿下エーテル５０−に懸濁し、５塩化リン粉末２ｇを加
え、室温で攪拌下５時間反応させた。反応終了後溶媒を
減圧留去し、油状物４．５ｇを得た。これをベンゼン２
０ｍ１に溶解した液を、ジメチルアミノエタノール２ゴ
をベンゼン３０Ｔｎｌに溶解した液に５〜１０℃の冷却
下で滴下した。滴下後室温で一晩攪拌反応を行った後、
ベンゼン５０ＴＬｌを加え、水、次いで飽和食塩水で洗
浄を行い、ベンゼン相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥
し、溶媒を減圧留去し、Ａ、９９の油状物を得た。これ
をエタノール２６０Ｔｎｌに溶解し、パラジウム−黒２
ｇを加え、接触還元を５時間行い、反応後触媒を濾別し
てエタノールを減圧留去し、油状物６ｇを得た。これを
アセトン９Ｑ＋＋＋ｊに溶解し、ヨウ化メチル２ｇの酢
酸エチル溶液を加え室温で一晩放置すると結晶が析出し
た。この結晶を濾取し、アセトンで良く洗浄後、五酸化
リン上で一晩減圧乾燥し、本発明の新規化合物３．４−
ジヒドロキンベンゾイルコリンアイオダイド２．５９を
得た。
融点 ２０５〜２０９℃
この結晶はシリカゲル薄層クロットグラフィ−（ｎ−ブ
タノール：酢酸：水＝４ニー１：２）で単一のスポット
（Ｒ，−０，３１）を与えた。
タノール：酢酸：水＝４ニー１：２）で単一のスポット
（Ｒ，−０，３１）を与えた。
元素分析値： Ｃｌ２Ｈ１ＢＮ１０４Ｉ （Ｍ、Ｗ、
３６７ 、１６６）として 実測値開Ｃ： ３９．３４ Ｈ： ５．０７ Ｎ ：
３．９０計算値開ｃ ： ３９．２５ Ｈ： Ａ、９４
Ｎ ： ３．８１赤外スペクトルは第４図に示した。
３６７ 、１６６）として 実測値開Ｃ： ３９．３４ Ｈ： ５．０７ Ｎ ：
３．９０計算値開ｃ ： ３９．２５ Ｈ： Ａ、９４
Ｎ ： ３．８１赤外スペクトルは第４図に示した。
第１図はｌ／ＩＩ、Ｍリン酸緩衝液中（ｐｉ−１８，２
０）における（ａｌ ３ 、４−ジヒＶロキシペンゾイ
ルコリンアイオダイｒと（ｂｌ ３ 、４−ジヒドロキ
７安息香酸のＵＶスペクトルを示す。第２図および第６
図はジヒドロキシベンゾイルコリンアイオダイドを基質
とした場合の血清中のＣｈ −Ｅ活性によるタイムコー
スと血清の希釈率とＣｈ−Ｅ活性の関係を示す。第４図
は３．４−ジヒドロキシベンゾイルコリンアイオダイド
のＩＲスペクトルを示ス。 代理人 浅 村 皓
０）における（ａｌ ３ 、４−ジヒＶロキシペンゾイ
ルコリンアイオダイｒと（ｂｌ ３ 、４−ジヒドロキ
７安息香酸のＵＶスペクトルを示す。第２図および第６
図はジヒドロキシベンゾイルコリンアイオダイドを基質
とした場合の血清中のＣｈ −Ｅ活性によるタイムコー
スと血清の希釈率とＣｈ−Ｅ活性の関係を示す。第４図
は３．４−ジヒドロキシベンゾイルコリンアイオダイド
のＩＲスペクトルを示ス。 代理人 浅 村 皓
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 一般式（１） （式中Ｘはハロダン原子を表わす）で表わされる６、４
−ジヒドロキシベンゾイルコリンハライド
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5406684A JPS60197643A (ja) | 1984-03-21 | 1984-03-21 | 新規コリン誘導体 |
| EP85301793A EP0155825A3 (en) | 1984-03-21 | 1985-03-14 | Novel choline derivatives |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5406684A JPS60197643A (ja) | 1984-03-21 | 1984-03-21 | 新規コリン誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60197643A true JPS60197643A (ja) | 1985-10-07 |
| JPS6131096B2 JPS6131096B2 (ja) | 1986-07-17 |
Family
ID=12960241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5406684A Granted JPS60197643A (ja) | 1984-03-21 | 1984-03-21 | 新規コリン誘導体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0155825A3 (ja) |
| JP (1) | JPS60197643A (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60238000A (ja) * | 1984-05-10 | 1985-11-26 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規なコリンエステラ−ゼ活性測定法 |
| CA2095495C (en) * | 1992-06-01 | 2002-06-04 | Stephen Carl Hasselberg | Assay for serum cholinesterase |
| IT1271737B (it) * | 1993-12-29 | 1997-06-09 | Aktsionernoe Obschestvo Zakryt | N,n-dimetilamminoetil-beta-(4-idrossi-3,5-di-terzbutilfenil)- propionati |
| US5516616A (en) * | 1994-12-21 | 1996-05-14 | Eastman Kodak Company | Quaternary ammonium salts as charge-control agents for toners and developers |
| CA2826972C (en) | 2011-02-10 | 2020-01-07 | The Cleveland Clinic Foundation | Treatment and prevention of cardiovascular disease and thrombosis |
| BR112014031086A2 (pt) | 2012-06-11 | 2017-06-27 | Cleveland Clinic Found | tratamento e prevenção de doenças cardiovasculares e trombose |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2096989B (en) * | 1978-04-17 | 1983-04-20 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Choline derivatives and a process for their preparation |
| JPS5721352A (en) * | 1980-07-11 | 1982-02-04 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | Novel substance for measuring cholineesterase activity and method thereof |
-
1984
- 1984-03-21 JP JP5406684A patent/JPS60197643A/ja active Granted
-
1985
- 1985-03-14 EP EP85301793A patent/EP0155825A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0155825A3 (en) | 1986-09-17 |
| JPS6131096B2 (ja) | 1986-07-17 |
| EP0155825A2 (en) | 1985-09-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |