JPS601879B2

JPS601879B2 - 固定化酵素による反応物の製造方法

Info

Publication number: JPS601879B2
Application number: JP55002316A
Authority: JP
Inventors: 勝米山
Original assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 1980-01-12
Filing date: 1980-01-12
Publication date: 1985-01-17
Also published as: JPS55124498A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、固定化酵素、即ち固定化された澱質関連酵素
の製造方法と該固定化酵素による反応物の製造方法に関
するものである。

固定化酵素（不溶化酵素）は、担体結合法、架橋法また
は包括法などの固定化方法によって製造されている。

しかしながら、これらの従来法によって得られる固定化
された澱粉質関連酵素は、その基質である澱粉質が高分
子で老化を起しやすにためか、それとも高濃度を要求さ
れるためか、一般的にはその活性発現が低く、工業的に
製造し、使用されるに至っていない。

本発明者は、固定化された澱粉質関連酵素の工業的製造
法および該固定化酵素による反応物の製造法を目的に研
究した。

その結果、従釆の固定化方法、即ち未修飾澱粉質関連酵
素を直接不溶化させる方法と相違して、先づ未修飾澱粉
質関連酵素を含有する溶液を修飾剤と共存させて、澱粉
質関連酵素を実質的に不溶化させない程度に修飾反応さ
せた後、その修飾酵素を担体に吸着させ不溶化すること
によって活性発現の高い固定化された澱粉質関連酵素の
製造方法を確立し、さらに、これら澱粉質関連酵素をそ
の基質溶液に接触せしめることによって反応物を工業的
に容易に製造する方法を確立した。

本発明で言う澱粉質関連酵素とは、澱粉または澱粉部分
加水分解物を基質として、グルコシル基の転移作用を示
す酵素、例えばシクロデキストリングルカノトランス
フエラーゼ（Ｅ．Ｃ．２・４・１・１９）や、グルコシ
ド結合の加水分解作用を示す酵素、例えばＱーアミラー
ゼ（Ｅ．Ｃ．３・２・１・１）、８−アミラーゼ（Ｅ．
Ｃ．３・２・１・２）、グルコアミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３
・２・１・３）、プルラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３・２・１・
４１）、イソアミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３・２・１・６８）
などである。

そして、固定化に用いられるこれらの酵素は、微生物、
動物、植物など由来の粗酵素、部分精製酵素または精製
酵素が適宜選択される。本発明で言う修飾剤とは、澱粉
質関連酵素を極端に失活させることなく、実質的に不溶
化させない程度に架橋または修飾することのできる試薬
であって、酵素と反応し得る官能基を１箇、またはそれ
以上含有しているものである。

酵素と反応し得る官能基としては、ジアゾ基、カルポキ
シル基、酸無水基、酸アジド基、酸クロラィド基、ィソ
シアナート基、ィソチオシアナート基、カルボジィミド
基、ィミドカルボナート基、チオアミド基、マレィンィ
ミド基、アルデヒド基、メチロール基、ハロゲン基、ス
ルホニルクロリド基などがある。

また、一官能試薬としては、アセトアルデヒド、プロピ
オンアルデヒド、ブチルアルデ、ヒド、オクチルアルデ
ヒド、ラウリルアルデヒド、オレインアルデヒド、ベン
ズアルデ十ヒド、ｐーニトロベンツアルデヒド、ナフト
アルデヒドなどのモノアルデヒド化合物の他に、無水コ
ハク酸、無水マレィン酸、Ｎ−アセトキシスクシイミド
のようなァシル化剤などが使用できる。

さらには、Ｎ−アセトキシスクシィミドの代わりに酢酸
存在下で水溶一性カルボジイミドを作用させてアセチル
基を導入することもできる。また、二官能試薬としては
、グルタルアルデヒド、グリオキザール、サクシンアル
デヒドなどのジアルデヒド化合物、ヘキサメチレンジィ
ソシアナート、トルエン２・４ージイソシアナートなど
のジィソシアナート化合物、ビスアゾベンジジンなどの
ジアゾ化合物などの他に、Ｎ・Ｎ′−エチレンビスマレ
ィンィミド、水溶性カルボジィミドなどが使用できる。

さらには、多官能試薬としては、塩化シアヌル、ジアル
デヒド澱粉、ジアルデヒドプルランなどが使用できる。

修飾反応の条件は、澱粉質関連酵素を極端に失活させる
ことなく、かつ実質的に不溶化ごせない程度に修飾でき
ればよく、通常、次のような条件が好んで選択される。
即ち、濃度約０．０１〜５ｗ／ｖ％の澱粉質関連酵素溶
液に濃度約０．００１〜５ｗ／ｖ％の修飾剤を共存させ
、酵素の安定範囲、例えばｐＨ３〜１０、温度０〜８０
午０の範囲で約０．１〜５０時間保って酵素を実質的に
不落化させない程度に修飾すればよい。また、必要に応
じてこの修飾反応の際に、基質または塩類などの酵素安
定剤の適量を共存させて活性発現の低下を防ぐこともで
きる。本発明で言う酵素を実質的に不溶化させない程度
とは、得られる修飾酵素が透明に溶解しているか、また
はわずかに曇りを生じる程度までに溶解している状態に
修飾反応を低度に部分的にとどめることを言う。本発明
で使用する担体は、活性炭、多孔性ガラス、酸性白土、
漂白士、カオリナィト、アルミナ、シリカゲル、ベント
ナイト、セラミックス、ヒドロキシルアパタィト、リン
酸カルシウムゲル、澱粉、アミロース、プルラン、デキ
ストラン、セルロース、多孔性共重合体およびそれらの
謙導体などから選択される。

多孔性共重合体としては、スチレンなどの単量体と、メ
チルスチレン、ニトロスチレン、ハロゲン化スチレン、
アクリロニトリル、酢酸ビニル「塩化ビニル、ジビニル
ベンゼン、ブタジヱン、ィソプレンなどの単量体との共
重合体を母体とする多孔性の非イオン性吸着性樹脂など
がある。好ましい市販の吸着性樹脂としてアンバーライ
トＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アン
ノゞーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ一
７、アンバーライトＸＡＤ−８、アン／ゞーライト
ＸＡＤ−９、アンノゞーライトＸＡＤ−１１、アン／
ゞーライトＸＡＤ−１２（登録商標、Ｒｏｈｍ＆Ｈ
ａａｓ社製造）「ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイ
オンＨＰ一２０、ダイヤイオンＨＰ一３０、ダイヤイ
オンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０（登録商標
、三菱化成工業株式会社製造）、ｌｍａｃＳｙｎ−４２
、ｌｍａｃＳｙｎ−４４、ｌｍａｃＳ如−４６（登録商
標、ＩＭＡＣＴＩ社製造）などがある。実質的に不落化
しない程度に修飾された澱粉質関連酵素を前記担体に吸
着させ固定化させるには、修飾された酵素を含有する反
応液に直酸担体を接触させて固定化することもできるが
、必要に応じて、反応液から透析または塩析などの操作
で、過剰な未反応の修飾剤などを除去した後に担体を接
触させて吸着、固定化することもできる。

その担体を後触する方法は、修飾酵素を極端に失活させ
ることなく、担体に吸着、固定化できればよく、通常は
修飾酵素を含有する溶液に担体を添加するか、または挺
体をカラムに充填し、これに修飾酵素を含有する溶液を
通して固定化する。このようにして吸着された澱粉質関
連酵素は、担体乾物当り約０．００１〜５０ｗ／ｗ％の
範囲に渡り、特に多孔性共重合体を用いる場合には、酵
素吸着量が容易にｌｗ／ｗ％以上になり、比活性の著し
く高い固定化酵素が得られるので有利である。本固定化
酵素をその基質溶液に接触せしめる方法は、工業的に実
施する方法、即ちデキストロース・ィクィバレント（Ｄ
．Ｅ．）約７０以下の澱粉、または澱粉部分加水分解物
などからなる澱粉質の約５〜５０ｗ／ｗ％基質溶液を、
酵素が充分作用し得る条件、例えばｐＨ約３〜１０、温
度約２０〜８０００の範囲から選ばれる条件で約０．１
〜１００岬時間接触させて反応を行なう方法が通常採用
される。本固定化酵素は、物理的吸着法で固定化された
にもかかわらず、その吸着はきわめて強固であり、高濃
度の基質溶液中でも酵素の漏出がほとんど認められない
。使用形式は、充填カラムによる連続式でもよく、また
固定化酵素の回収が容易なのでバッチ式でもよい。本固
定化酵素は、原料酵素より熱安定性、ｐＨ安定性ともに
増大し、その活性半減期が一般に数１０〜数１０畑寺間
、さらにはそれ以上の長期に安定であることから、工業
用酵素剤として極めて有利である。

また、本固定化酵素から、製造に使用した担体を、必要
に応じてほぼ完全に再生することができる。本固定化酵
素を長時間使用して固定化酵素が汚染されたり、その活
性が低下したような場合にはアセトン、メタノールまた
はエタノールなどの極性溶媒、約０．１〜弧の酸または
アルカリ溶液などで洗浄することによって、蛋白質など
の汚染物質は容易に除去され、坦体が再生される。

再生された担体は、再び吸着用樹脂として使用できる。
以下、実施例で本発明の固定化酵素を説明する。実験例
１澱粉質関連酵素の調製可溶性粉２．５ｗ／ｖ％、コーンステイープリカー
０．５ｗ／ｖ％、硝酸アンモニウム０．３ｗ／ｖ％、
リン酸２カリウム０．１ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム
・７水塩０．０５ｗ／ｖ％、炭酸カルシウム０．５
ｗ′ｖ％を含む液体培地１５００夕に、バチルス・ス
テアロサーモフイラスＴＣ−９１ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．
２２２５を楯菌し、５０℃の温度で７２時間通気燈梓培
養した。

この培養液を遠心分離して得た上清には、シクロデキス
トリングルカノトランスフエラーゼを含有しており、
その活性は後に定義する活性測定方法（転移活性）で約
１２の単位／の‘を示した。

この上清を４℃に冷却し、これに硫安を６０％飽和にな
るように加えて塩折し、沈澱物を炉集した。本沈澱物を
少量の水に溶解し、一夜透析した後、凍結乾燥して約２
３山単位／収９蛋白質の粉末酵素標品を培養液の上清に
対して約８０％の活性収率で得た。シクロデキストリン
グルカノトランスフエラーゼ活性（転移活性）は、ｌ
ｗ／ｗ％ぴ−シクロデキストリン２の【に２．５ｗ′
ｗ％シユクロース２の【および所定量の酵素を加えて全
量を４．５肌とし、４０ｑｏで一定時間反応させた後、
その反応液から０．５の‘をとって市販の結晶グルコア
ミラーゼ溶液０．１の‘（５単位）を加え、４０午○
で１時間反応させ、Ｑーシクロデキストリン以外のＱ−
１・４グルコシド結合を持つオリゴ糖類をグルコースに
加水分解した後、その量をネルソン・ソモジー法で定量
した。

シクロデキストリングルカノトランスフエラーゼ活性
１単位は、この条件でＱ−シク。

デキストリンを１分間に１仏モル分解する酵素量とした
。実験例２澱粉質関連酵素の修飾反応０．０２Ｍの塩化カルシウムを含有する０．０８Ｍ酢酸
塩緩衝液（ｐＨ６．０）に、実施例１の方法で調整した
シクロデキストリングルカノトランスフエラ‐ゼ粉末
酵素標品を蛋白質濃度０．が′ｖ％になるように溶解
して澱粉質関連酵素の溶液を調製した。

本酵素溶液を４泌づつにグルタルアルデヒド水溶液を蛋
白質に対して、１、５、１０、２０、５０８０、１００
、１５０、２０肌／ｗ％になるように添加し、室温下で
ゆっくり蝿拝しつつ１時間修飾反応を行つた。

次いで、流水中で５時間透析し、過剰のグルタルアルデ
ヒドを除去した後、活性を測定してこの実験に供した原
料酵素の活性に対する活性収率（％）を求めた。

その結果は、第１表Ａに示した。なお、対照としてグル
タルアルデヒド水溶液の代りに水を用いた。また、透析
液を肉眼観察した。その結果は第１表Ｂに示した。実験
例３澱粉質関連酵素の固定化実験例２の方法で透析して得た各酵素液に、担体として
ダイヤイオンＨＰ−２０の湿潤重量１タづっを添加し
て、その酵素を吸着させ固定化された澱粉質関連酵素を
調整した。

非吸着部分の活性を測定し、この酵素の固定化率（％）
を算出した。

その結果を第１表Ｃに示した。また、本固定化酵素の活
性を測定し、実験例２に供した原料酵素の活性に対する
活性収率（％）を求めた。その結果を第１表Ｄに示した
。（注）ａ■〆ｖ■：ゲルタルァルデヒド（ｗ／ｖ努）
を示す。ｂ■〆マ協）：蛋白質に対するグルタルアルデ
ヒド（ｗ／ｗ）を示す。Ａ（略）：原料酵素の活性に対
する反応後透析した酵素の活性収率（％）を示す。Ｂ
：反応後透析したものの肉眼観察した。Ｃ（努）：
反応後透析した酵素の固定化率（多）を示す。固定化率
（略）：（吸着前の全活性）−（非吸着部分の活性）Ｘ
ＩＯＯ吸着前の全活性Ｄ（紫）：固定化酵素の活性を測
定し、実験例２Ｋ供した原料酵素の活性に対する活性収
率（努）を示す。

第１表の結果から明らかなように、高い活性発現を有す
る固定化された澱粉質関連酵素を製造するには、澱粉質
関連酵素を実質的に不落化させない程度に修飾反応させ
た後、これを担体に接触させて吸着、固定化させればよ
いことが判明した。

酵素を修飾反応させることなく、直後吸着させて得た固
定化酵素は、固定化率が１００％であるにもかかわらず
、その活性発現はほとんど見られない。また、修飾反応
の度合を酵素が実質的に不落化する程度に高めると、修
飾反応後の活性収率（％）が低下し、その上、この酵素
の固定化率（％）も半減することにより、得られる固定
化酵素の活性発現は著しく減ずる。

澱粉質関連酵素を実質的に不溶化させない程度に修飾す
るには、反応時の条件、例えば酵素蛋白質濃度、反応温
度、反応時間などによって異なるが、一般的には酵素蛋
白質とほぼ同量またはそれ以下の修飾剤と反応させれば
よい。

次に、固定化酵素の製造方法と該固定化酵素による反応
物の製造方法の実施例を述べる。

実施例１固定化シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ
の製造２ｍＭの塩化カルシウムを含有する０．０９Ｍ酢
酸塩緩衝液（ｐＨ６．０）に、実験例１の本法で調整し
たバチルス属由来のシクロデキストリングルカノトラ
ンスフェラーゼ粉末標品を溶解して濃度０．４ｗ／ｖ％
の酵素液１００地を調整した。

これにグルタルアルデヒドを濃度０．０５ｗ／ｖ％にな
るように加え室温下で２時間反応させた後、ダイヤイオ
ンＨＰ−３０を湿潤重量で１０夕加えて酵素を吸着し、
水洗して固定化酵素を得た。原料酵素に対する活性収率
は約７７％であった。

本品は、固定化されたシク。デキストリングルカノト
ランスフェラーゼとして自由に利用できた。澱粉質から
のシクロデキストリンの製造用に、また澱粉部分加水分
解物と、シュクロース、ラクトース、リボフラビン、エ
スクリン、ルチンまたはステビオシドなどの糖受容体と
の混合基質からのグリコシルシユクロース、グリコシル
ラクトース、グリコシルリボフラビン、グリコシルエス
クリン、グリコシルルチンまたはグリコシルステビオシ
ドなどの各種糖転移物の製造用に好適であって、その活
性半減期は、反応温度６０００で約８０斑時間であった
。

実施例２固定化Ｑーアミラーゼの製造アスベルギルス属由来の市販Ｑ−アミラーゼ剤デナチー
ム（登録商標、長瀬産業株式会社製造）を蛋白質濃度０
．１５ｗ／ｖ％水溶液とし、その５０のＺに３００の９
の１−シクロヘキシルー３一（２ーモルホリノエチル）
力ルボジイミドメトーＰ一トルェンスルホネートを含む
ＩＭ酢酸塩緩衝液（ｐＨ６．０）２私を加え、室温下で
４時間放置し、次いで流水で８時間透析した。

得られた修飾酵素液にアンバーライトＸＡＤ−１を湿
潤重量で５タ添加し、室温下で一夜ゆっくり櫨拝するこ
とにより固定化されたＱ−アミラーゼを得た。

原料酵素に対する活性収率は約６０％であった。

なお、活性測定は、次の通り行った。即ち、０．１Ｍ酢
酸塩緩衝液（ｐＨ６．０）にワキシコーンスターチの酸
部分加水分解物（Ｄ．Ｅ．５０）５ｗ′ｗ％を含有した
基質溶液２の‘に所定量の酵素を混合して全量を２．５
叫とし、４０ｑｏで１び分間反応させた後、生じる還元
力をネルソン・ソモジー法でグルコ−スとして測定する
。活性１単位は、この条件で１分間にグルコースとして
１ムモル生成する酵素量とする。本品は、固定化された
Ｑーアミラーゼとして自由に利用できた。

澱粉質からの水飴、グルコースまたはマルトースの製造
用に好適であって、その活性半減期は、反応温度６０Ｃ
Ｏで約４０畑時間であった。

実施例３固定化Ｂーアミラーゼの製造脱脂大豆から常法に従って抽出し、塩折して得たＢーア
ミラーゼ標品を、０．０１Ｍマルトースを含有する０．
８ＭＩＪン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）で蛋白質濃度０．
１ｗ／ｖ％に溶解し、その５０の【に０．１ｗ／ｖ％の
塩化シアヌルーアセトン溶液２０の‘を加え、ｐＨ変化
を防ぎつつ４℃で３時間放置し、次いで流水で５時間透
析した。

得られた修飾酵素液にダイヤイオンＨＰ−１０を湿潤
重量で５夕加え、４℃で一夜ゆっくり蝿拝することによ
り固定化された３ーアミラーゼを得た。

原料酵素に対する活性収率は約６８％であった。

なお、活性は実施例２と同機に測定した。本品は、固定
化された３ーアミラーゼとして目由に利用できた。

澱粉費からのハイマルトースシラツプまたはマルトース
の製造用に好適であって、その活性半減期は、反応温度
５ぴ○で約２０Ｇ時間であった。

実施例４固定化グルコアミラーゼの製造アスベルギルス属由来の市販グルコアミラーゼ液ＸＬ
−１２８（登録商標、長瀬産業株式会社製造）を０．０
２Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５．０）で蛋白質濃度０．１５
ｗ／ｖ％水溶液に希釈し、その５０泌に０．柵／ｖ％ト
ルエン２・４ージイソシアナートジオキサン溶液２０の
‘を加え、４℃で一夜放置し、次いで流水で５時間透析
した。

得られた修飾酵素液にｌｍａｃＳｙｎ−４６を湿潤重量
で５タ添加して、４℃で一夜ゆっくり燭拝し、水洗する
ことにより固定化されたグルコアミラーゼを得た。

原料酵素に対する活性収率は約７０％であった。

なお、活性は実施例２に記載する方法のうちｐＨを４．
５として同様に測定した。本品は、固定化されたグルコ
アミラーゼとして自由に利用できた。

澱粉質からの高糖度シラップまたはグルコースの製造用
に好適であって、その活性半減期は、反応温度５０ｏｏ
で約３０凪時間であった。

実施例５固定化プルラナーゼの製造アェロバクター属由来の市販粗ブルラナーゼ（株式会社
林原生物化学研究所製造）を０．０２Ｍリン酸塩緩衝液
（ｐＨ７．５）で蛋白質濃度０．１５ｗ／ｖ％水溶液と
し、その５０の‘に０．１ｗ′ｖ％へキサメチレンジィ
ソシアナートジオキサン溶液２５の‘を加え、室温下
で３時間放置し、次いで流水で５時間透析した。

得られた修飾酵素液にダイヤイオンＨＰ−３０を湿潤
重量で５タ添加して、室温下で一夜ゆっくり縄拝し、水
洗することにより固定化されたプルラナーゼを得た。

原料酵素に対する活性収率は約５５％であった。

なお、活性は実施例２と同様に測定した。本品は、固定
化されたブルラナーゼとして自由に利用できた。

澱粉費からの水飴、ハイマルトースシラップ、グルコー
スまたはマルトースの製造用に好適であつて、その活性
半減期は、反応温度５０ｑｏで約３００時間であった。

実施例６固定化ィソアミラーゼの製造シュードモナス属由来の市販精製ィソアミラーゼ（株式
会社林原生物化学研究所製造）を０．１Ｍ酢酸塩緩衝液
（ｐＨ４．５）で蛋白濃度０．１ｗ／ｖ％水溶液とし、
その５０肌に０．５ｗ／ｖ％のグルタルアルデヒド水溶
液１０の‘を加え、室温下に２時間放置した後、多孔性
ガラスを湿潤重量で２５タ添加して、４℃で一夜ゆっく
り櫨拝することにより固定化されたィソアミラーゼを得
た。

原料酵素に対する活性収率は約６５％であった。

なお、活性は実施例４と同様に測定した。本品は、固定
化されたィソアミラーゼとして自由に利用できた。

水飴、ハイマルトースシラツプ、グルコースまたはマル
トースの製造用に好適であって、その活性半減期は、反
応温度５０００で約２００時間であった。

実施例７オリゴグルコシルフラクトシド含有水飴の製造約２柵／
ｗ％タピオ力澱粉乳液２０夕を、市販の液化酵素ネオ
スピターゼ（登録商標、長瀬産業株式会社製造）を使用
して、常法によりＤ．Ｅ．約７．０に液化した後、１２
０ｏｏに加熱して該酵素を失活させ、次いで８０〜９０
００にて脱色、炉過し、得た約２４ｗ／ｗ％液化澱粉液
にシュクロースと塩化カルシウムとをそれぞれ約１２ｗ
／ｗ％、１０３Ｍになるよう溶解して基質溶液を調製し
た。

本基質溶液をｐＨ６．５温度６５ｑ０に保ちつつ、
実施例１の方法で調製した固定化シクロデキストリング
ルカノトランスフヱラーゼ２０夕を充填したプラスチ
ック製カラムにＳＶ６で通液して反応させた。

この反応液を粒状炭を充填したカラムに通して脱色し、
さらにＨ型イオン交換樹脂とＯＨ型イオン交換樹脂とを
充填したカラムに通して脱塩精製した。

この精製溶液を減圧濃縮して、水分２０％の水飴を収率
固形物当り約９３％で得た。

本品は、無色透明で無臭の非結晶性シラップ状甘味料で
あって、比較的に高粘度でまろやかな高甘味を有してい
る。

また、本品は、オリゴクルコシルフラクトシドを主成分
としていることから、低う員虫性甘味料として好適であ
り、飲食物などの甘味付、物性改良などに有利に利用で
きる。実施例８オリゴグルコシルフラクトシド含有粉
末水飴の製造実施例７と同様に作用させて得た反応液
１０〆を５０００に下げ、これを実施例２の方法で調製
した固定化Ｑ−アミラーゼ２０夕を充填したプラスチ
ック製カラムにＳＶＩＯで通液し、さらに反応させてそ
の粘度を約２′３に低下させた。

この反応液を実施例７と同様に精製し、さらに減圧濃縮
、噴霧乾燥することにより、水分約２％の粉末水飴を収
率固形物当り約９０％で得た。

本品は、白色で無臭の非結晶性、易水落性の粉末状甘味
料であって、高甘味を有している。また、本品は、オリ
ゴグルコシルフラクトシドを主成分としていることから
低う蝕性甘味料として好適であり、飲食物などの甘味付
、物性改良などに有利に利用できる。実施例９シクロデキストリン含有粉末水飴の製造約３肌／ｗ％コーンスターチ乳液４５〆を常法により
Ｄ．Ｅ．約１０に酸液化した後、８０〜９０ｏｏに冷却
すると同時にｐＨ６．０に中和し、さらに活性炭で脱色
し、６５ｑｏに冷却して基質溶液とした。

本基質溶液を、実施例１の方法で調整した固定化シクロ
デキストリングルカノトランスフヱラーゼ５０夕を充
填したステンレス製カラムにＳＶ３で通液して反応させ
た。この反応液を実施例７と同様に精製し、さらに減圧
濃縮、頃霧乾燥することにより、水分約１％の粉末デキ
ストリンを固形物当り約９０％の収率で得た。

本品は、白色、無臭、ほとんど無味、易水溶性の粉末で
あって、シクロデキストリンが固形物当り約２０％含有
されていることから保香剤、安定剤、増量剤、賦形剤な
どとして飲食物、香料、化粧品、医薬品などの製造に有
利に利用できる。

実施例１０低粘度粉末水飴の製造約３５ｗ／ｗ％コーンスターチ乳液５０夕を、常法に
よりＤ．Ｅ．約２０に酸液化した後、８０〜９０ｑｏに
冷却すると同時にｐＨ５．０に中和し、さらに活性炭で
脱色し、５０ｑｏに冷却して基質溶液とした。

本基質溶液を、実施例６の方法で調整した固定化ィソア
ミラーゼ１５０夕を充填したステンレス製カラムをＳ
ＶＩで通液して反応させた。その結果、反応後のＤ．Ｅ
．はほとんど増化せずに、その粘度は約１／２に低下し
た。

この反応液を実施例７と同機に精製し、さらに減圧濃縮
、噴霧乾燥することにより、水分約２％のデキストリン
粉末を収率固形物当り約９０％で得た。

本品は、白色、無臭、ほとんど無味、易水溶性であり、
低粘度であることから安定剤、増量剤、結合剤などとし
て飲食物などの製造に有利に利用できる。

実施例１１マルトースシラップの製造約１５ｗ／ｗ％ポテトスターチ乳液１００夕を、常法
によりＤ．Ｅ．約４に酸液化した後、８０〜９００のこ
冷却すると同時にｐＨ６．０に中和し、次いで活性炭で
脱色し、５０００に急冷した基質溶液を実施例３の方法
で調製した固定化６ーアミラーゼ２００夕と、実施例
５の方法で調製した固定化プルラナーゼ１００夕とを
混合して充填したプラスチック製カラムをＳＶ２で通液
して反応させた。

この反応液を実施例７の方法で精製、濃縮して水分２５
％の無色透明なマルトースラシップを収率固形物当り約
９５％で得た。本品は、その固形物当り約８３％のマル
トースを含有しており、比較的結晶の析出しやすい低甘
味シラツプである。

従って、本甘味料は減圧剤として好適である。

即ち、従来シュクロースが多量に使用され甘すぎる飲食
物の場合に、その製造に際してシュクロ−スの使用を本
甘味料に一部ないし全部層換えることにより、製造され
る飲食物の物性にほとんど変化を与えることなく、その
置換量に応じて所望の低甘味飲食物を容易に製造し得る
のである。実施例１２マルトース結晶粉末の製造実施例１１と同様に作用させて得た反応液５００〆を
、実施例２の方法で調製した固定化Ｑーアミラーゼ２
００夕を充填したプラスチック製カラムにＳＶ５で通
液してさらに反応させた。

その結果、この反応液中のマルトース含量が固形物当り
約８６％に上昇した。この反応液を実施例７と同様に精
製し、次いで水分約３０％まで濃縮して結晶缶に注入し
、結晶マルトースの種晶を２％添加して、縄拝しつつ２
日間で４０午○より約２５ｏｏに冷却し、晶出率約４３
％のマスキットを得た。

本マスキツトを高圧ポンプにて圧力を１５０ｋ９′ｃ椎
とし、口径１．５机／肌のノズルより乾燥塔の上より噂
露した。

そして、８５００の熱風を乾燥塔の上部が順風にて送風
し底部の移動金網コンベア上に捕集した。さらにそのコ
ンベアの下側より４０ｏｏの温風を送りつつ乾燥塔外に
徐々に移動させ、４０分を要して取り出した結晶粉末を
熟生塔に集めて温風を通気しつつ６時間保ち、結晶化と
乾燥を完了させ、水分６％のマルトース結晶粉末を収率
固形物当り約８５％で得た。本品は、吸湿性が低く固結
する恐れがない。

Claims

【特許請求の範囲】

１澱粉質関連酵素を含有する溶液を修飾剤と共存させ
て、澱粉質関連酵素を実質的に不溶化させない程度に修
飾反応させた後、その修飾酵素を担体に吸着させて得ら
れる固定化酵素をその基質溶液に接触せしめることを特
徴とする反応物の製造方法。