JPS6018394B2 - 微生物によるラクタ−ゼの製造法 - Google Patents
微生物によるラクタ−ゼの製造法Info
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- JPS6018394B2 JPS6018394B2 JP9824476A JP9824476A JPS6018394B2 JP S6018394 B2 JPS6018394 B2 JP S6018394B2 JP 9824476 A JP9824476 A JP 9824476A JP 9824476 A JP9824476 A JP 9824476A JP S6018394 B2 JPS6018394 B2 JP S6018394B2
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- lactase
- enzyme
- producing
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- microorganisms
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物就中酵母によるラクターゼの製造法に
関するものである。
関するものである。
なお詳しくは、クルイべ０ミセス・ラクチス（Ｋ１ｕｙ
ｖｅｒｏｍｙｃｅｓはｃｔｉｓ）Ｎｏ．０１３−２（徴
工研菌客第３５１３号）またはその自然および人工変異
株を、炭素源として槍類または有機酸、窒素源として有
機窒素化合物、および無機塩類を含む培地に俵種し好気
的に培養し、培地中に○一Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ一８
一○−鉾ｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＯＮＰＧ）
およびラクトースに対する分解活性を有し、以下に詳述
する性質をもったラクターゼを生成蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とするラクターゼの製造法にか）わ
るものである。ラクターゼは別名ｌ『８ーガラクトシダ
ーゼ』とも呼ばれ、国際生化学連合酵素委員会の分類命
名法によると、『８一Ｄーガラクトシドガラクトヒドロ
ラーゼ（ＥＣ３・２・１・２３）』と呼ばれる。
ｖｅｒｏｍｙｃｅｓはｃｔｉｓ）Ｎｏ．０１３−２（徴
工研菌客第３５１３号）またはその自然および人工変異
株を、炭素源として槍類または有機酸、窒素源として有
機窒素化合物、および無機塩類を含む培地に俵種し好気
的に培養し、培地中に○一Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ一８
一○−鉾ｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＯＮＰＧ）
およびラクトースに対する分解活性を有し、以下に詳述
する性質をもったラクターゼを生成蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とするラクターゼの製造法にか）わ
るものである。ラクターゼは別名ｌ『８ーガラクトシダ
ーゼ』とも呼ばれ、国際生化学連合酵素委員会の分類命
名法によると、『８一Ｄーガラクトシドガラクトヒドロ
ラーゼ（ＥＣ３・２・１・２３）』と呼ばれる。
その作用はラクトースの分解および合成に関与し、アル
キル乃至アリル−８−Ｄ−ガラクトシドにも作用しこれ
らを加水分解する。また、この酵素の分布はかなり広く
、微生物から高等動植物にまで及んでいるが、酵素の性
質は起源によって若干の差異がみとめられる。微生物で
この酵素を生産するものとしては、クルイベロミセス・
ラクチス、クルイベロミセス・フラギリス、トルラ・ク
レモリス、トルラ・ユーテイリス、エツシエリヒア・コ
リ、デイブロコツカス・ニューモニエ、ラクト／ゞチル
ス・ブルガリクス、アスベルギルス・オリゼ、アスベル
ギルス・フラバス、アスベルギリス・ニガー等がある。
キル乃至アリル−８−Ｄ−ガラクトシドにも作用しこれ
らを加水分解する。また、この酵素の分布はかなり広く
、微生物から高等動植物にまで及んでいるが、酵素の性
質は起源によって若干の差異がみとめられる。微生物で
この酵素を生産するものとしては、クルイベロミセス・
ラクチス、クルイベロミセス・フラギリス、トルラ・ク
レモリス、トルラ・ユーテイリス、エツシエリヒア・コ
リ、デイブロコツカス・ニューモニエ、ラクト／ゞチル
ス・ブルガリクス、アスベルギルス・オリゼ、アスベル
ギルス・フラバス、アスベルギリス・ニガー等がある。
ラクターゼは乳製品の品質改良剤として、また乳不耐症
の予防乃至治療剤として利用され、その他乳加工業の剰
余産物の有効利用にも応用し得るものであって広い用途
が期待されている。
の予防乃至治療剤として利用され、その他乳加工業の剰
余産物の有効利用にも応用し得るものであって広い用途
が期待されている。
酵母によってラクターゼを生産しようとする場合、一般
にラクターゼは菌体内に生成される。
にラクターゼは菌体内に生成される。
したがって菌体を集収しこれによりラクターゼを抽出す
ることになるが、ラクターゼ生産菌には浮遊性の高いも
のが多く、樋過または遠心分離に長時間を要し、多量の
櫨過助剤を必要とする欠点がある。またさらに菌体の細
胞膜が強固で、ラクタ−ゼ抽出の効率を悪くしているも
のが多い。本願発明者等は、従来よりラクターゼに関す
る研究を続けて来たが、前述の欠点のない、ラクターゼ
生産に通した酵母を検索して自然界より新たにラクター
ゼ生産能のきわめて優れた菌株の分離に成功し、同定の
結果、クルィベロミセス・ラクチス（Ｋ１ｕｙｖｅｒｏ
ｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ）であることを確認し、工業技
術院微生物工業技術研究所に、「徴工研菌寄第３５１３
号」として寄託した。
ることになるが、ラクターゼ生産菌には浮遊性の高いも
のが多く、樋過または遠心分離に長時間を要し、多量の
櫨過助剤を必要とする欠点がある。またさらに菌体の細
胞膜が強固で、ラクタ−ゼ抽出の効率を悪くしているも
のが多い。本願発明者等は、従来よりラクターゼに関す
る研究を続けて来たが、前述の欠点のない、ラクターゼ
生産に通した酵母を検索して自然界より新たにラクター
ゼ生産能のきわめて優れた菌株の分離に成功し、同定の
結果、クルィベロミセス・ラクチス（Ｋ１ｕｙｖｅｒｏ
ｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ）であることを確認し、工業技
術院微生物工業技術研究所に、「徴工研菌寄第３５１３
号」として寄託した。
この酵母の菌学的性質は後に述べるが、工業的生産にお
ける特長の一つは、凝集性がきわめて高く、培養終了後
、酵母を含有する菌体を収集するにあたり、静贋のみで
も菌体は容易に分離沈降し以後の精製を簡便ならしめる
点にあるこの凝集性は菌体内に生成蓄積された酵素を抽
出する場合には特に重要な利点であって、特に大量培養
においては、櫨過助剤の不要、分離時間の短縮等工業上
有利な性質である。
ける特長の一つは、凝集性がきわめて高く、培養終了後
、酵母を含有する菌体を収集するにあたり、静贋のみで
も菌体は容易に分離沈降し以後の精製を簡便ならしめる
点にあるこの凝集性は菌体内に生成蓄積された酵素を抽
出する場合には特に重要な利点であって、特に大量培養
においては、櫨過助剤の不要、分離時間の短縮等工業上
有利な性質である。
また培養において培地中に高価な特殊成分を必要とする
ものでなく、装置についても通常の通気燈梓培養槽を使
用することができる。またさらに、本菌は自己消化によ
り、以後のラクターゼ抽出を容易ならしめる特長をも有
している。
ものでなく、装置についても通常の通気燈梓培養槽を使
用することができる。またさらに、本菌は自己消化によ
り、以後のラクターゼ抽出を容易ならしめる特長をも有
している。
前述せるごと〈、本菌は「クルイベロミセス・ラクチス
」と同定されるが、ビタミン要求性でピリドキシンをも
要求する点、並びにグルコースの醗蓮鞍が緩慢である点
で他のクルィベロミセス・ラクチスと区別される。
」と同定されるが、ビタミン要求性でピリドキシンをも
要求する点、並びにグルコースの醗蓮鞍が緩慢である点
で他のクルィベロミセス・ラクチスと区別される。
以下に本発明の菌の諸性質を述べる。
ａ 各塔地における生育状態
‘１｝ ＭＹ液体培地：（２〜５）×（２〜６）山の小
球状で多極出芽により増殖ｔ２｝ ＭＹ寒天塔地：２０
℃１ケ月培養後、則線培養のコロニーは褐色がかったク
リーム色で、平滑、敏質、錨光、周緑は全縁状である。
球状で多極出芽により増殖ｔ２｝ ＭＹ寒天塔地：２０
℃１ケ月培養後、則線培養のコロニーは褐色がかったク
リーム色で、平滑、敏質、錨光、周緑は全縁状である。
【３１バレィショ抽出液寒天塔地によるスライド培養：
仮性菌糸を生成しない。
仮性菌糸を生成しない。
ｂ 子葬胞子の形成
バレィシュ片塔地にて、球状の胞子を形成し胞子は培地
上に遊離する。
上に遊離する。
ｃ 射出胞子の形成
Ｍ忙寒天培養では射出胞子の形成なし。
ｄ 各生理的性質
○｝最適生育条件 温度２５〜３０℃、斑５〜７｛２１
生育の範囲 温度５〜３７０、舟４〜９【３１ 硝酸
塩の同化 同化せず‘４１ 脂肪の分解 分解せず ‘５１ 尿素の分解 分解せず ｛６１ ゼラチンの液化 液化せず 【７１ 好浸透圧性または耐浸透圧性 なし■ カロチ
ノィドの生成 生成せず‘９１ 顕著な有機酸の生成
生成せず ００ デンプン様物質の生成 生成せず ＯＵ ビタミンの要求性 ナィァシンおよびピリドキシ
ン各種炭素源の同化性と醗酵性 以上の如き諸性質を有する本願発明の酵母を、炭素源と
して糖類または有機酸、窒素源として有機窒素化合物お
よび無機塩類その他要すれば若干のビタミン類を含有す
る培地に接種し、３０℃前後の温度で通気燈梓培養する
と、２０〜３即時間の培養で、ラクターゼを菌体内に生
成蓄積する。
生育の範囲 温度５〜３７０、舟４〜９【３１ 硝酸
塩の同化 同化せず‘４１ 脂肪の分解 分解せず ‘５１ 尿素の分解 分解せず ｛６１ ゼラチンの液化 液化せず 【７１ 好浸透圧性または耐浸透圧性 なし■ カロチ
ノィドの生成 生成せず‘９１ 顕著な有機酸の生成
生成せず ００ デンプン様物質の生成 生成せず ＯＵ ビタミンの要求性 ナィァシンおよびピリドキシ
ン各種炭素源の同化性と醗酵性 以上の如き諸性質を有する本願発明の酵母を、炭素源と
して糖類または有機酸、窒素源として有機窒素化合物お
よび無機塩類その他要すれば若干のビタミン類を含有す
る培地に接種し、３０℃前後の温度で通気燈梓培養する
と、２０〜３即時間の培養で、ラクターゼを菌体内に生
成蓄積する。
培地に用いる窒素源として、糠機態の窒素は不適当であ
り、殺菌前のｐＨは５．５〜６．０また、消泡剤の使用
が望ましい。
り、殺菌前のｐＨは５．５〜６．０また、消泡剤の使用
が望ましい。
醗酵を終了した培養液は、静鷹すると容易に菌体は沈降
し母液を分離する。
し母液を分離する。
菌体を集め、洗糠し、トルェン存在下で自己消化させ、
後に酵素の精製法の項に於いて述べる方法によって精製
して、ラクターゼを得ることができる。こ）に得られる
ラクターゼは、その明らかにされた諸性質より、新規な
酵素と判断され、利用上いくつかの特長をもち、食品工
業乃至医薬として有用で且つ幾多の利便を提供するもの
と期待される。
後に酵素の精製法の項に於いて述べる方法によって精製
して、ラクターゼを得ることができる。こ）に得られる
ラクターゼは、その明らかにされた諸性質より、新規な
酵素と判断され、利用上いくつかの特長をもち、食品工
業乃至医薬として有用で且つ幾多の利便を提供するもの
と期待される。
以下に本願発明の酵素の諸性質について述べる。ａ作用
牛乳中、あるいはチーズ製造におけるスイ−トホェー中
のラクトースを分解して、グルコースとガラクトースに
する。
のラクトースを分解して、グルコースとガラクトースに
する。
ｂ 基質特異性
８ーガラクトシド結合を加水分解する。
ｃ 至適ｐＨおよび安定母範囲
【１１ 至通ｐＨ：
本酵素を各ｐＨの溶液（１０‐４ＭＭ船ｏ４を含む０．
１Ｍリン酸緩衝液）中において、ラクトースおよびＯＮ
ＰＧを基質にして活性を測定し、第１図のような舟活性
曲線を得た。
１Ｍリン酸緩衝液）中において、ラクトースおよびＯＮ
ＰＧを基質にして活性を測定し、第１図のような舟活性
曲線を得た。
ラクトース基質の場合餌６．以 ＯＮＰＧ基質の場合Ｐ
Ｈ６．５にその至適ｐＨを有する。‘２） 安定−範囲
： 本酵素を各州の溶液（１０‐４ＭＭｎＳｏ４を合む０．
１Ｍリン酸緩衝液）中に加え、３０００で２０時間放置
した後活性を測定した。
Ｈ６．５にその至適ｐＨを有する。‘２） 安定−範囲
： 本酵素を各州の溶液（１０‐４ＭＭｎＳｏ４を合む０．
１Ｍリン酸緩衝液）中に加え、３０００で２０時間放置
した後活性を測定した。
第２図に示すように曲６〜８で安定である。ｄ 力価の
測定法 ＯＮＰＧ溶液から３０ｏｏで１分間にｌＡｍｏｌｅのＯ
ＮＰを生成せしめる酵素量を、１単位とする。
測定法 ＯＮＰＧ溶液から３０ｏｏで１分間にｌＡｍｏｌｅのＯ
ＮＰを生成せしめる酵素量を、１単位とする。
即ち、１０‐４Ｍ ＭｍＳｏ４を含む、０．１ＭＫＨ２
Ｐ０４−ＮａＯＨ緩衝液液（ｐＨ６．５）に熔解された
ＯＮＰＧおよび酵素を３０ｑｏで１０分保温し生成され
たＯＮＰを４２０机仏の吸光度により測定した。ラクト
ース基質の場合は、生成されたグルコースをグルコース
オキシダーゼ法により定量した。ｅ 作用適温の範囲 ５〜５ぴ○で作用するが、最適温度は４０〜５０ｑｏで
ある。
Ｐ０４−ＮａＯＨ緩衝液液（ｐＨ６．５）に熔解された
ＯＮＰＧおよび酵素を３０ｑｏで１０分保温し生成され
たＯＮＰを４２０机仏の吸光度により測定した。ラクト
ース基質の場合は、生成されたグルコースをグルコース
オキシダーゼ法により定量した。ｅ 作用適温の範囲 ５〜５ぴ○で作用するが、最適温度は４０〜５０ｑｏで
ある。
ｆ 餌、温度などによる失活の条件（溶液）ＰＨ７．０
において、５０℃、１０分間で４５％、５５℃、１０分
間で１００％失活した。
において、５０℃、１０分間で４５％、５５℃、１０分
間で１００％失活した。
ｇ 阻害、活性化および安定化
ＡｇＮ０３、日や１２、ＣｕＳｏ４などの重金属塩、パ
クラロロマーキユリベンゾエイト（Ｐ−ＣＭＢ）などの
ＳＨ阻害剤、およびＥＤＴＡなどのキレート剤で阻害さ
れ、ＭｎＨ、ＭｇＨ、ＣＯ十十、ＮｊＨ、Ｋ＋、Ｎがな
どの金属イオンで活性化される。
クラロロマーキユリベンゾエイト（Ｐ−ＣＭＢ）などの
ＳＨ阻害剤、およびＥＤＴＡなどのキレート剤で阻害さ
れ、ＭｎＨ、ＭｇＨ、ＣＯ十十、ＮｊＨ、Ｋ＋、Ｎがな
どの金属イオンで活性化される。
ｈ 精製方法
培養終了し収集洗練した酵母菌体を、トルェン存在下で
自己消化せしめ、渡過または遠心分離により得られた酵
素抽出液を、プロタミン沈澱処理を行い粗酵素溶液とす
る。
自己消化せしめ、渡過または遠心分離により得られた酵
素抽出液を、プロタミン沈澱処理を行い粗酵素溶液とす
る。
このものをＤＥＡＥセルロース・カラムに吸着させ、食
塩濃度勾配による溶出を行なうと、２つの活性区分Ａ、
Ｂが得られる。（第４図参照）ついでそれぞれをＰＨ３
．５〜１０のキャリアをもつ焦点電気激動により精製し
、ラクターゼＡ、及びラクターゼＢを得る。なお、本酵
素は結晶化に未だ到っておらず、また元素分析に供する
程の極度精製した標品を必要量得てし、ないので、この
測定結果は未だ得られていないが、焦ｖ点電気泳動法に
よる等蝿点は、第３図に示すとおり、ラクターゼＡがＰ
Ｈ５．ｕ ラクターゼＢはＰＨ４．６であった。
塩濃度勾配による溶出を行なうと、２つの活性区分Ａ、
Ｂが得られる。（第４図参照）ついでそれぞれをＰＨ３
．５〜１０のキャリアをもつ焦点電気激動により精製し
、ラクターゼＡ、及びラクターゼＢを得る。なお、本酵
素は結晶化に未だ到っておらず、また元素分析に供する
程の極度精製した標品を必要量得てし、ないので、この
測定結果は未だ得られていないが、焦ｖ点電気泳動法に
よる等蝿点は、第３図に示すとおり、ラクターゼＡがＰ
Ｈ５．ｕ ラクターゼＢはＰＨ４．６であった。
以上に述べた如く、本発明の菌株は、等鰭点の異なる少
なくとも２種のラクターゼを生産する。しかしながら、
これらは、第２図に示すように、ｐＨ安定性においてわ
ずかに差異が認められる他は、前記ａ〜ｇの性質にほと
んど差異は認められない。従って、酵素製剤がこれらの
混合物からなっているとしても、その製剤の性質に何ら
悪影響はないと思われる。またさらに、本願発明の酵素
の特筆すべき性質を挙げるならば、それは粉束状での保
存安定性が良好である点である。
なくとも２種のラクターゼを生産する。しかしながら、
これらは、第２図に示すように、ｐＨ安定性においてわ
ずかに差異が認められる他は、前記ａ〜ｇの性質にほと
んど差異は認められない。従って、酵素製剤がこれらの
混合物からなっているとしても、その製剤の性質に何ら
悪影響はないと思われる。またさらに、本願発明の酵素
の特筆すべき性質を挙げるならば、それは粉束状での保
存安定性が良好である点である。
従釆酵母のラクターゼは保存性に欠ける点が多く、あま
たの工夫を必要としていたが、本願発明の酵素はその貯
蔵試験において優れた成績を示している。即ち、２０℃
、ＲＨ５４％の貯蔵で残存活性は、６ケ月９２％、１２
ケ月磯％を示し、既存ラクターゼの遠く及ぽないところ
である。以下実施例によりさらに詳細に説明する。
たの工夫を必要としていたが、本願発明の酵素はその貯
蔵試験において優れた成績を示している。即ち、２０℃
、ＲＨ５４％の貯蔵で残存活性は、６ケ月９２％、１２
ケ月磯％を示し、既存ラクターゼの遠く及ぽないところ
である。以下実施例によりさらに詳細に説明する。
実施例 １
コーン・ステイーブ・リカー７％、ラクトース２％を含
有する液体培地１２私を２４も１容培養タンクに入れ加
圧殺菌後（殺菌後のｐＨ５．５）クルベロミセス・ラク
チスＮＯ．０１３一２（徴工研菌寄第３５１３号）を槍
菌し、３０℃にて２蝿時間、１２０００Ｌ／ｍｉｎの通
気で培養した。
有する液体培地１２私を２４も１容培養タンクに入れ加
圧殺菌後（殺菌後のｐＨ５．５）クルベロミセス・ラク
チスＮＯ．０１３一２（徴工研菌寄第３５１３号）を槍
菌し、３０℃にて２蝿時間、１２０００Ｌ／ｍｉｎの通
気で培養した。
培養終了後冷却しながら４時間放置後、タンク上部から
上澄液を除き、タンク底部に凝集沈降した菌体１５００
ｋｇを得た。次いでここに得られた菌体のうち１５００
夕を水で洗糠後、トルエン８０肌【を加えこん和後、１
５００の【のＭ／２０リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加
え櫨梓均一化し、密栓をほどこして３ぴ○、１虫時間放
直し自己消化せしめた。この消化液を遠心分離して得た
上清２５００の‘に等客の冷アセトンを加え一夜放直し
た。
上澄液を除き、タンク底部に凝集沈降した菌体１５００
ｋｇを得た。次いでここに得られた菌体のうち１５００
夕を水で洗糠後、トルエン８０肌【を加えこん和後、１
５００の【のＭ／２０リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加
え櫨梓均一化し、密栓をほどこして３ぴ○、１虫時間放
直し自己消化せしめた。この消化液を遠心分離して得た
上清２５００の‘に等客の冷アセトンを加え一夜放直し
た。
生じた沈毅を遠心分離にて集め６００机の井水に溶かし
、プロタミソを加えて生じる沈澱を除き５００泌の酵素
溶液を得た。この液の活性は２０００Ｕ／凧【であった
。これをＭ／１０雌仏Ｐ０４‐ＮａＯＨ緩衝液餌７．０
（１０‐４ＭのＭｈＳ０４を含む）を外液として透析し
、同緩衝液で緩衝化されたＤＥＡＥセルロースカラム（
６×４技柵）に吸着させ、同緩衝液で、食塩の直線的濃
度勾配を与えながら溶出を行い、Ａ、Ｂ２成分の酵素に
分け（第４図参照）各綾出区分を集め、等容の冷アセト
ンを加えて沈澱せしめ、遠○分離により得た沈澱を少量
の水に溶かし凍結乾燥した。このようにして、２００Ｕ
／の９のＡ区分３．６夕と、５０Ｕ／の夕のＢ区分１．
６夕を得た。実施例 ２ラクトース２％、酵母エキス２
％、 ＫＨ２Ｐ０４０．２５％よりなる液体培地２０泌づつを
１００の【客三角フラスコ２本に分注し、綿栓をして加
圧殺菌後（殺菌後のｐＨ６．５）、クルィベロミセス・
ラクチスＮｏ．０１３一２（徴工研菌寄第３５１３号）
を棺菌し３０℃にて３ｑ時間振蜜培養し、沈降菌体３．
６２を得た。
、プロタミソを加えて生じる沈澱を除き５００泌の酵素
溶液を得た。この液の活性は２０００Ｕ／凧【であった
。これをＭ／１０雌仏Ｐ０４‐ＮａＯＨ緩衝液餌７．０
（１０‐４ＭのＭｈＳ０４を含む）を外液として透析し
、同緩衝液で緩衝化されたＤＥＡＥセルロースカラム（
６×４技柵）に吸着させ、同緩衝液で、食塩の直線的濃
度勾配を与えながら溶出を行い、Ａ、Ｂ２成分の酵素に
分け（第４図参照）各綾出区分を集め、等容の冷アセト
ンを加えて沈澱せしめ、遠○分離により得た沈澱を少量
の水に溶かし凍結乾燥した。このようにして、２００Ｕ
／の９のＡ区分３．６夕と、５０Ｕ／の夕のＢ区分１．
６夕を得た。実施例 ２ラクトース２％、酵母エキス２
％、 ＫＨ２Ｐ０４０．２５％よりなる液体培地２０泌づつを
１００の【客三角フラスコ２本に分注し、綿栓をして加
圧殺菌後（殺菌後のｐＨ６．５）、クルィベロミセス・
ラクチスＮｏ．０１３一２（徴工研菌寄第３５１３号）
を棺菌し３０℃にて３ｑ時間振蜜培養し、沈降菌体３．
６２を得た。
このものを井水にて洗総後、トルェン０．２泌を加え礎
梓均一化しＭ／２０リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４舷を
加え密栓をほどこして、３０℃、１２時間、自己消化せ
しめた。この消化液を遠心分離し、得られた上清６の‘
に等客の袷インプロピルアルコールを加え一夜放置した
。生じた沈澱を遠０分離にて集め少量の水に溶かし、プ
ロタミンを加えて生じる沈澱を除き、１０００Ｕ／肌【
酵素溶液２泌を得た。このものをセフアデツクスＧ一２
００を用いてゲル櫨過る行い（第５図参照）Ａ区分１５
０山単位、Ｂ区分１７０単位を得た。
梓均一化しＭ／２０リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４舷を
加え密栓をほどこして、３０℃、１２時間、自己消化せ
しめた。この消化液を遠心分離し、得られた上清６の‘
に等客の袷インプロピルアルコールを加え一夜放置した
。生じた沈澱を遠０分離にて集め少量の水に溶かし、プ
ロタミンを加えて生じる沈澱を除き、１０００Ｕ／肌【
酵素溶液２泌を得た。このものをセフアデツクスＧ一２
００を用いてゲル櫨過る行い（第５図参照）Ａ区分１５
０山単位、Ｂ区分１７０単位を得た。
第１図は本願発明の酵素のｐＨと活性の関係を示し、第
２図は斑安定性、第３図は．篤点電気泳動の結果を示し
、第４図はＤＥＡＥセルロースカラムによるクロマトグ
ラフィを示し、第６図はセフアデツクスＧ−２００によ
るゲル渡週の結果を示す。 第１図第２図 第３図 第４図 第５図
２図は斑安定性、第３図は．篤点電気泳動の結果を示し
、第４図はＤＥＡＥセルロースカラムによるクロマトグ
ラフィを示し、第６図はセフアデツクスＧ−２００によ
るゲル渡週の結果を示す。 第１図第２図 第３図 第４図 第５図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ クルイベロミセス・ラクチス （ＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓＬａｃｔｉｓ）Ｎｏ．０
１３−２（微工研菌寄第３５１３号）またはその自然お
よび人工変異株を、炭素源として糖類または有機酸、窒
素源として有機窒素化合物、および無機塩類を含む培地
に接種し好気的に培養し、培地中にＯＮＰＧおよびラク
トースに対する分解活性を有し、本文中に詳記せるごと
く至適ｐＨ６〜７、至適温度が４０〜５０℃であり、ｐ
Ｈ６〜８および４０℃以下で安定であるラクターゼ（３
・２・１・２３−β−Ｄ−ガラクトシドガラクトヒドロ
ラーゼ）を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とするラクターゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9824476A JPS6018394B2 (ja) | 1976-08-19 | 1976-08-19 | 微生物によるラクタ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9824476A JPS6018394B2 (ja) | 1976-08-19 | 1976-08-19 | 微生物によるラクタ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5324094A JPS5324094A (en) | 1978-03-06 |
| JPS6018394B2 true JPS6018394B2 (ja) | 1985-05-10 |
Family
ID=14214535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9824476A Expired JPS6018394B2 (ja) | 1976-08-19 | 1976-08-19 | 微生物によるラクタ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6018394B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017159723A1 (ja) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | 合同酒精株式会社 | プロテイナーゼｂ並びにその性質を利用したラクターゼ溶液及びその製造方法。 |
| US10368558B2 (en) | 2014-12-05 | 2019-08-06 | Godo Shusei Co., Ltd. | Lactase solution and dairy product using same |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2788170B2 (ja) * | 1993-11-19 | 1998-08-20 | 鹿島建設株式会社 | 自動走行式コンクリートバケット着床位置調整装置 |
| ES2102975B1 (es) * | 1996-02-01 | 1998-04-01 | Univ De A Coruna | Procedimiento para la produccion de la enzima b-galactosidasa. |
| CN110951630B (zh) * | 2019-12-10 | 2021-06-18 | 刘建蔚 | 乳酸克鲁维酵母突变株xt82及其应用 |
-
1976
- 1976-08-19 JP JP9824476A patent/JPS6018394B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10368558B2 (en) | 2014-12-05 | 2019-08-06 | Godo Shusei Co., Ltd. | Lactase solution and dairy product using same |
| WO2017159723A1 (ja) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | 合同酒精株式会社 | プロテイナーゼｂ並びにその性質を利用したラクターゼ溶液及びその製造方法。 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5324094A (en) | 1978-03-06 |
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