JPS60168050A - ヘモグロビンの影響回避方法 - Google Patents
ヘモグロビンの影響回避方法Info
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- JPS60168050A JPS60168050A JP2486584A JP2486584A JPS60168050A JP S60168050 A JPS60168050 A JP S60168050A JP 2486584 A JP2486584 A JP 2486584A JP 2486584 A JP2486584 A JP 2486584A JP S60168050 A JPS60168050 A JP S60168050A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、臨床化学分析に於けるヘモグロビンの影響回
避方法に関する。
避方法に関する。
更に詳しくは、ヘモグロビ／の吸収又はその吸収の経時
的変動に伴なう正負の誤差全回避するために、特定の界
面活性剤を用いること全特徴とする、ヘモグロビンの影
響回避方法に関する。
的変動に伴なう正負の誤差全回避するために、特定の界
面活性剤を用いること全特徴とする、ヘモグロビンの影
響回避方法に関する。
近年、臨床化学分析に於ける技術の進歩は著しく、自動
分析機の発達と共に、ソフト面での技術開発も盛んに行
なわれている。特に、最近は目的物のみならず、測定対
象物に対し正負の誤差を与える血清中の共存物質の消去
方法についての研究も盛んである。例えば、ビリルビ／
の影響を回避する方法としては、過ヨウ素酸消去法、ビ
リルビンオキシダーゼ酸化法等が開発されており、Ｌ
−アスコルビン酸については、ヨウ素酸酸化法、Ｌ−ア
スコルビン酸オキシダーゼ酸化法等が、また、ヘモグロ
ビンから鉄の遊離全押える目的には、イミダゾールを始
めとする含窒素化合物の添加法等が開発されている。し
かしながら、ヘモグロビンの吸光度及びその吸収の経時
的変動が、目的物の測定に対して正負の誤差を与えるこ
とに対する回避技術はこれまで皆無に近かった。このよ
うなヘモグロビンの影響は、従来の測定方法、即ち、分
析する際に木栓とは別に検体盲検専用のチャンネル分設
け、別個に測定した検体盲検を本検値より差し引くとい
う方法會とっていたころは、それほど問題にはならなか
った。ところが、分析機器の発達に伴ない、例えば、試
料と、発色成分の１部ケ含むか、又は発色成分を全く含
まない第１試液との混合溶液の吸光度全初めに測定しく
第１点の吸光度）、次いで、残りの発色成分、又は全発
色成分を含む第２試液分添加して、目的成分を発色させ
、再度吸光度全測定しく第２点の吸光度）、第１点の吸
光度を最終液量に換算して、第２点測定の吸光度より差
し引き、盲検チャンネルを使用せずに検体盲検をより高
精度にキャンセルする機構（この機構を以後、２点測定
法と略称する。）が開発されるようになると、新たに、
ヘモグロビンの影響が大きな問題となってきた。即ち、
ヘモグロビンに関しては、液性、試薬組成、反応条件に
し、第１魚目の吸光度に比べ、２点目の吸光度にはヘモ
グロビンの吸光度の減少による測定値の低下が顕著に現
われ、２点測定法の機能金偏えた装置では、その演算機
構により記憶された第１魚目の吸光度を液量換算して、
第２魚目の吸光度より差し引くため、２波長測光に於け
る主波長、あるいは１波長測光に於ける測定波長が、ヘ
モグロビンの吸収帯（３４０〜６００ｎｍ）のより高い
吸光度位置にある場合は、通常、目的物の測定に負の誤
差？、また、２波長測光の副波長がヘモグロビンの吸収
帯のより高い吸光度位置にある場合は、正の誤差を与え
てしｊうことがしばしばあった。
分析機の発達と共に、ソフト面での技術開発も盛んに行
なわれている。特に、最近は目的物のみならず、測定対
象物に対し正負の誤差を与える血清中の共存物質の消去
方法についての研究も盛んである。例えば、ビリルビ／
の影響を回避する方法としては、過ヨウ素酸消去法、ビ
リルビンオキシダーゼ酸化法等が開発されており、Ｌ
−アスコルビン酸については、ヨウ素酸酸化法、Ｌ−ア
スコルビン酸オキシダーゼ酸化法等が、また、ヘモグロ
ビンから鉄の遊離全押える目的には、イミダゾールを始
めとする含窒素化合物の添加法等が開発されている。し
かしながら、ヘモグロビンの吸光度及びその吸収の経時
的変動が、目的物の測定に対して正負の誤差を与えるこ
とに対する回避技術はこれまで皆無に近かった。このよ
うなヘモグロビンの影響は、従来の測定方法、即ち、分
析する際に木栓とは別に検体盲検専用のチャンネル分設
け、別個に測定した検体盲検を本検値より差し引くとい
う方法會とっていたころは、それほど問題にはならなか
った。ところが、分析機器の発達に伴ない、例えば、試
料と、発色成分の１部ケ含むか、又は発色成分を全く含
まない第１試液との混合溶液の吸光度全初めに測定しく
第１点の吸光度）、次いで、残りの発色成分、又は全発
色成分を含む第２試液分添加して、目的成分を発色させ
、再度吸光度全測定しく第２点の吸光度）、第１点の吸
光度を最終液量に換算して、第２点測定の吸光度より差
し引き、盲検チャンネルを使用せずに検体盲検をより高
精度にキャンセルする機構（この機構を以後、２点測定
法と略称する。）が開発されるようになると、新たに、
ヘモグロビンの影響が大きな問題となってきた。即ち、
ヘモグロビンに関しては、液性、試薬組成、反応条件に
し、第１魚目の吸光度に比べ、２点目の吸光度にはヘモ
グロビンの吸光度の減少による測定値の低下が顕著に現
われ、２点測定法の機能金偏えた装置では、その演算機
構により記憶された第１魚目の吸光度を液量換算して、
第２魚目の吸光度より差し引くため、２波長測光に於け
る主波長、あるいは１波長測光に於ける測定波長が、ヘ
モグロビンの吸収帯（３４０〜６００ｎｍ）のより高い
吸光度位置にある場合は、通常、目的物の測定に負の誤
差？、また、２波長測光の副波長がヘモグロビンの吸収
帯のより高い吸光度位置にある場合は、正の誤差を与え
てしｊうことがしばしばあった。
従って、この２点測定法では、第１点の吸光度測定から
第２点の吸光度測定までのあいだに、測定対象物の吸収
以外の妨害物質の吸収が変化しないことが、より高精度
な盲検補正の絶対条件であり、かかる目的に適う、すぐ
れたヘモグロビンの影響回避方法の出現が渇望されてい
た。
第２点の吸光度測定までのあいだに、測定対象物の吸収
以外の妨害物質の吸収が変化しないことが、より高精度
な盲検補正の絶対条件であり、かかる目的に適う、すぐ
れたヘモグロビンの影響回避方法の出現が渇望されてい
た。
最近、血液中のヘモグロビンを測定するにあたり、その
ヘモグロビンの吸収を固定することを目的として、脂肪
族高級スルホ／酸塩を用いる方法が特許出願（特開昭５
６−１２０９５１号）されている。
ヘモグロビンの吸収を固定することを目的として、脂肪
族高級スルホ／酸塩を用いる方法が特許出願（特開昭５
６−１２０９５１号）されている。
しかしながら、このスルホン酸塩を、ヘモグロビン以外
の目的対象物全測定する際のヘモグロビンの影響回避の
ために、その測定系に用いるということはこれまでに全
くなされておらず、このスルホ／酸塩が目的物の測定に
影響を与えずに、ヘモグロビ／の吸収全固定することが
できるかどうかは全く不明であった。
の目的対象物全測定する際のヘモグロビンの影響回避の
ために、その測定系に用いるということはこれまでに全
くなされておらず、このスルホ／酸塩が目的物の測定に
影響を与えずに、ヘモグロビ／の吸収全固定することが
できるかどうかは全く不明であった。
本発明者らは、ヘモグロビンの影響回避方法について鋭
意研究の結果、すでに公知になっている脂肪族高級スル
ホン酸及びその塩以外にも、０１１〜ＣＩ６のアルキル
基を持つ硫酸エステル、Ｃ１１〜Ｃｕｅの１級アミン及
びその塩類、並びに第４級アンモニウム塩類の１部にも
、ヘモグロビンの吸収固定作用があること全見出し、且
つ、脂肪族高級スルホン酸及びその塩類を含めたこれら
特定の界面活性剤の内の１種又は２種以上のものを、ヘ
モグロビンの妨害をうける目的物の測定の際に、試薬安
定性や溶解性を考慮して、適宜選択して第１試液に添加
すれば、目的物の測定に影響を与えず、はぼ瞬間的にヘ
モグロビンと結合し、その吸収を固定して経時的変動全
押え、目的物の測定に対し、ヘモグロビンによる正負の
誤差をほぼ完全に回避できることを見出し、本発明全完
成するに到った。
意研究の結果、すでに公知になっている脂肪族高級スル
ホン酸及びその塩以外にも、０１１〜ＣＩ６のアルキル
基を持つ硫酸エステル、Ｃ１１〜Ｃｕｅの１級アミン及
びその塩類、並びに第４級アンモニウム塩類の１部にも
、ヘモグロビンの吸収固定作用があること全見出し、且
つ、脂肪族高級スルホン酸及びその塩類を含めたこれら
特定の界面活性剤の内の１種又は２種以上のものを、ヘ
モグロビンの妨害をうける目的物の測定の際に、試薬安
定性や溶解性を考慮して、適宜選択して第１試液に添加
すれば、目的物の測定に影響を与えず、はぼ瞬間的にヘ
モグロビンと結合し、その吸収を固定して経時的変動全
押え、目的物の測定に対し、ヘモグロビンによる正負の
誤差をほぼ完全に回避できることを見出し、本発明全完
成するに到った。
本発明は、ヘモグロビンの吸収又はその吸収の経時的変
動が、臨床化学分析に与える正負の誤差ｋ ｆｉｌ １
ｌ１４する目的で、試液中に下記一般式の、■。
動が、臨床化学分析に与える正負の誤差ｋ ｆｉｌ １
ｌ１４する目的で、試液中に下記一般式の、■。
（３）、■から成る群より選ばれた一種又は二種以上の
界面活性剤全添加することを特徴とする臨床化学分析方
法である。
界面活性剤全添加することを特徴とする臨床化学分析方
法である。
■［（、’ −８０３Ｍ
Ｑ）几’ −Ｕ Ｓ ＯｇＭ
■Ｗ −Ｎ ｉ−ｈ・Ｙ
Ｈ２Ｐｈ
■Ｒ，’ −Ｎ（ｌｌ′４３．Ｘ”
（
几２
金属、Ｙは鉱酸又は有機酸、Ｘはノ・ロゲン又は無機酸
、有機酸の残基、欠表わす。
、有機酸の残基、欠表わす。
上記式中、几１で表わされろ炭素数１１〜１６のアルキ
ル基としては、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル
基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基
が挙げられ、Ｒ２、几３で表わされる炭素数１〜３のア
ルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基が
挙げられ、Ｍで表わされるアルカリ金属イオンとしては
、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン
等が挙げられ、Ｙとしては、塩酸、硫酸等の鉱酸、又は
酢酸等の有機酸、Ｘとしては、塩素、臭素、ヨウ素等の
・・ロゲン、又は）］ Ｓ （Ｊ Ｐ等の無機酸残基、
又はＣＨ３Ｃ（Ｊ（Ｊ”等の有機酸残基が夫々挙げられ
る。
ル基としては、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル
基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基
が挙げられ、Ｒ２、几３で表わされる炭素数１〜３のア
ルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基が
挙げられ、Ｍで表わされるアルカリ金属イオンとしては
、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン
等が挙げられ、Ｙとしては、塩酸、硫酸等の鉱酸、又は
酢酸等の有機酸、Ｘとしては、塩素、臭素、ヨウ素等の
・・ロゲン、又は）］ Ｓ （Ｊ Ｐ等の無機酸残基、
又はＣＨ３Ｃ（Ｊ（Ｊ”等の有機酸残基が夫々挙げられ
る。
本発明の方法によれば、オキシ−・モグロビンの吸収は
瞬時ｆ破壊されてシア／メトヘモグロビンに類似の吸収
に変わる為、ヘモグロビンの妨害金堂ける恐れのある測
定対象物の測定に於て、ヘモグロビンの吸収及びその吸
収の経時的変動によって生ずる測定誤差’２１′ｏ１糎
でき、しかも目的物の測定には何ら影響を与えず、より
正確な測定値が得られる。
瞬時ｆ破壊されてシア／メトヘモグロビンに類似の吸収
に変わる為、ヘモグロビンの妨害金堂ける恐れのある測
定対象物の測定に於て、ヘモグロビンの吸収及びその吸
収の経時的変動によって生ずる測定誤差’２１′ｏ１糎
でき、しかも目的物の測定には何ら影響を与えず、より
正確な測定値が得られる。
第１図に、ヘモグロビンの吸収曲線（ａｌ、及びヘモグ
ロビンに本発明に係る界面活性剤全添加した場合の吸収
曲線（ｂ）、並びにシアンメトヘモグロビンの吸収曲線
（Ｃ）’を示す。即ち、第１図に於て、（ａ）はヘモグ
ロビン溶液（１５９／ｄｌ）２０μＩＩＣｐ Ｈ＝８３
の０．０１Ｍ酢酸ソーダ溶液５．０−を添加した場合、
（ｂ）は同ヘモグロビン溶液に０．５チのラウリル硫酸
ソーダを含むｐ Ｈ＝ ｓ、 ３の０．０１Ｍ酢酸ソー
ダ溶液５． Ｏｍｌを添加した場合、ｔｃ＋は同じく、
ドラブキン試Ｍ （ＫＣＮｏ、００５ ％、フェリシア
ン化カリウム０．０２％、重炭酸ナトリウム０．１％）
５．０ｍｌ全添加した場合、に於ける夫々の吸収曲線を
示している。第１図から明らかな如く、ヘモグロビンに
本発明に係る特定の界面活性剤であるラウリル硫酸ソー
ダ（８Ｄ８ ）ｆ添加すると、瞬時にオキシヘモグロビ
ンの吸収（ａ）が破壊され、シア／メトヘモグロビ／（
Ｃ）に類似の吸収（ｂｌに変わる。
ロビンに本発明に係る界面活性剤全添加した場合の吸収
曲線（ｂ）、並びにシアンメトヘモグロビンの吸収曲線
（Ｃ）’を示す。即ち、第１図に於て、（ａ）はヘモグ
ロビン溶液（１５９／ｄｌ）２０μＩＩＣｐ Ｈ＝８３
の０．０１Ｍ酢酸ソーダ溶液５．０−を添加した場合、
（ｂ）は同ヘモグロビン溶液に０．５チのラウリル硫酸
ソーダを含むｐ Ｈ＝ ｓ、 ３の０．０１Ｍ酢酸ソー
ダ溶液５． Ｏｍｌを添加した場合、ｔｃ＋は同じく、
ドラブキン試Ｍ （ＫＣＮｏ、００５ ％、フェリシア
ン化カリウム０．０２％、重炭酸ナトリウム０．１％）
５．０ｍｌ全添加した場合、に於ける夫々の吸収曲線を
示している。第１図から明らかな如く、ヘモグロビンに
本発明に係る特定の界面活性剤であるラウリル硫酸ソー
ダ（８Ｄ８ ）ｆ添加すると、瞬時にオキシヘモグロビ
ンの吸収（ａ）が破壊され、シア／メトヘモグロビ／（
Ｃ）に類似の吸収（ｂｌに変わる。
本発明に係る界面活性剤とへモグａビ／の結合体の吸収
は、界面活性剤の種類により多少異なるが、いずれも第
１図の吸収曲線上はぼ同様な結果が得られる。尚、ラウ
リルスルホン酸塩のこれらの作用については既に公知で
あり、血液中のヘモグロビンの測定に利用されているが
、本発明のよ５ＶＣ１この作用ケヘモグロビン以外の物
質の測定時に、ヘモグロビンの妨害を防ぐ目的で利用し
たものは、これまでに全くなく、本発明者らが初めてで
ある。
は、界面活性剤の種類により多少異なるが、いずれも第
１図の吸収曲線上はぼ同様な結果が得られる。尚、ラウ
リルスルホン酸塩のこれらの作用については既に公知で
あり、血液中のヘモグロビンの測定に利用されているが
、本発明のよ５ＶＣ１この作用ケヘモグロビン以外の物
質の測定時に、ヘモグロビンの妨害を防ぐ目的で利用し
たものは、これまでに全くなく、本発明者らが初めてで
ある。
表１に、本発明に係る各種界面活性剤とこれら全添加し
た場合のヘモグロビンの吸収変動の関係分水す。
た場合のヘモグロビンの吸収変動の関係分水す。
表中、例えば０．１６０↓は、ヘモグロビンの吸収が当
初のものより０．１６０低下すること金示しており、本
発明に係る特定の界面活性剤を添加（−だ場合には、始
めは大きく低下し、そのあとの低下は少ないが、無添加
の場合には、４〜６分後に於ても相当量・の低下が見ら
れる。即ち、本発明に係る特定の界面活性剤を添加した
場合には極めて短時間の内にヘモグロビンが固定化され
て、以後は殆んど変化１７なくなるが、無添加の場合に
はいつまでも変化し続けていることが判る。
初のものより０．１６０低下すること金示しており、本
発明に係る特定の界面活性剤を添加（−だ場合には、始
めは大きく低下し、そのあとの低下は少ないが、無添加
の場合には、４〜６分後に於ても相当量・の低下が見ら
れる。即ち、本発明に係る特定の界面活性剤を添加した
場合には極めて短時間の内にヘモグロビンが固定化され
て、以後は殆んど変化１７なくなるが、無添加の場合に
はいつまでも変化し続けていることが判る。
一般１ａ、殆んどのアニオン系又はカチオン系界面活性
剤は、オキシヘモグロビンの吸収全シアンメトヘモグロ
ビン類似の吸収に移動させる能力をもつが、しかしなが
ら、実際この作用を臨床検査に利用するとなると、試料
と第１試［ｋ混合してから第１点測定（Ｅｌ）８１：で
は２〜５分、第１点測定から第２点測定（Ｅ２）まで２
〜５分程度要するのが通常の装置の反応条件であること
がら、シアンメトヘモグロビン類似の吸収には、少なく
とも２分以内にほぼ完全に移動することが必要となり、
この条件を満足する界面活性剤は本発明のものに限られ
、又その添加歇はＯＯ１〜５．０係の範囲が好ましい。
剤は、オキシヘモグロビンの吸収全シアンメトヘモグロ
ビン類似の吸収に移動させる能力をもつが、しかしなが
ら、実際この作用を臨床検査に利用するとなると、試料
と第１試［ｋ混合してから第１点測定（Ｅｌ）８１：で
は２〜５分、第１点測定から第２点測定（Ｅ２）まで２
〜５分程度要するのが通常の装置の反応条件であること
がら、シアンメトヘモグロビン類似の吸収には、少なく
とも２分以内にほぼ完全に移動することが必要となり、
この条件を満足する界面活性剤は本発明のものに限られ
、又その添加歇はＯＯ１〜５．０係の範囲が好ましい。
また、本発明の特定の界面活性剤全添加すると、ヘモグ
ロビンの吸収が５４０〜５９０ｎｍＶＣかけて約１／２
に低下するため、２点測定法のみならず１点ケ（す定法
でも、ヘモグロビンの影響全豹半減することができるの
で好ましい。
ロビンの吸収が５４０〜５９０ｎｍＶＣかけて約１／２
に低下するため、２点測定法のみならず１点ケ（す定法
でも、ヘモグロビンの影響全豹半減することができるの
で好ましい。
本発明は、ヘモグロビンの吸収又はその吸収の経時的変
動により測定誤差を生ずる恐れのある臨床化学分析に於
て、試液中に特定の界面活性剤を添加することにより、
目的とする測定対象物の測定には何ら影響金与えずに、
ヘモグロビンの影響ケ回避でき、従って、それによる測
定誤差も回避できるという点に特徴を有する発明であり
、ヘモグロビンによる妨害を受ける恐れのある臨床化学
分析に於て、より正確な測定値が得られる測定方法ｆｍ
供するものであって、斯業に貢献するところ甚だ大な小
ものである。
動により測定誤差を生ずる恐れのある臨床化学分析に於
て、試液中に特定の界面活性剤を添加することにより、
目的とする測定対象物の測定には何ら影響金与えずに、
ヘモグロビンの影響ケ回避でき、従って、それによる測
定誤差も回避できるという点に特徴を有する発明であり
、ヘモグロビンによる妨害を受ける恐れのある臨床化学
分析に於て、より正確な測定値が得られる測定方法ｆｍ
供するものであって、斯業に貢献するところ甚だ大な小
ものである。
以下に本発明に係る実施例を示すが、本発明はこれらに
限定されるものではない。
限定されるものではない。
実施例１．総ビリルビンの測定（ラウリル硫酸ナトリウ
ム使用） 〔試料〕 プール血清１ ｍｌ、及びプール血清各０．９ＷＬｌに
各ｆＩＩｉ度のヘモグロビン？０．１πｌ−ｆつ添加し
、ヘモグロビン濃度全天々０’、５０，１００，１５０
’。
ム使用） 〔試料〕 プール血清１ ｍｌ、及びプール血清各０．９ＷＬｌに
各ｆＩＩｉ度のヘモグロビン？０．１πｌ−ｆつ添加し
、ヘモグロビン濃度全天々０’、５０，１００，１５０
’。
２００．２５０．３００．３５０．４００．４５０゜５
０（］ 、７００．１０００ｍｇ／ｄｌ としｆｃ モ
（Ｄ ｋ使用。
０（］ 、７００．１０００ｍｇ／ｄｌ としｆｃ モ
（Ｄ ｋ使用。
■第１試液
カフェイン ２，５係
安息香酸ソーダ ３．８ｔＩ。
酢酸ソーダ ６．３係
ｆ（Ｄ Ｔ Ａ −４Ｎａ Ｏ，ｌ １％Ｂｒ１ｊ −
３５（花王アトラス■商品名）０．２％ラウリル硫酸ソ
ーダ Ｑ、５チ ■第２′試液 スルファニル酸 ０，１係 塩酸 ０．ＩＮ これらを、使用時に０．２％の亜硝酸ソーダ溶液と１０
：１に混合する。
３５（花王アトラス■商品名）０．２％ラウリル硫酸ソ
ーダ Ｑ、５チ ■第２′試液 スルファニル酸 ０，１係 塩酸 ０．ＩＮ これらを、使用時に０．２％の亜硝酸ソーダ溶液と１０
：１に混合する。
〔測定方法１
日立製作所自動分析機７３６型全使用。
試料１０μｌ に第１試液４００μｌを１１口え、３７
°Ｃに３．２分（１９２秒）放置して、λ２ ＝５４６
ｎｍ、λ１＝６００ｎｍの２波長で吸光度を測定した
後、第２試液１００μＩｙ添加して、３７℃で４分間反
応し、λ２ ＝ ５４６ ｎｍ、ハ＝６００ｎｍの２波
長で吸光度全測定する。第１点の吸光度差（Ｅｌ）を肘
若倍して第２点吸光度差（Ｅ２）から差し引き、同様の
操作で得た標準の吸光度より、試料中のビリルビン濃度
を算出する。
°Ｃに３．２分（１９２秒）放置して、λ２ ＝５４６
ｎｍ、λ１＝６００ｎｍの２波長で吸光度を測定した
後、第２試液１００μＩｙ添加して、３７℃で４分間反
応し、λ２ ＝ ５４６ ｎｍ、ハ＝６００ｎｍの２波
長で吸光度全測定する。第１点の吸光度差（Ｅｌ）を肘
若倍して第２点吸光度差（Ｅ２）から差し引き、同様の
操作で得た標準の吸光度より、試料中のビリルビン濃度
を算出する。
比較例１゜
〔試料〕
実施例１．に同じ。
■第１試液
実施例１．の第１試液からラウリル硫酸ソーダを除いた
もの。
もの。
■第２試液
実施例１．に同じ。
実施例１．に同じ。
実施例１．及び比較例１．の総ビリルビン濃度の測定結
果全表２に示す。
果全表２に示す。
表 ２
表２より明らかな如く、本発明の方法、即ちラウリル硫
酸ナトリウムを添加した場合には、ヘモグロビンがかな
りの量混入していても、測定値にさほどの整置は認めら
れないが、ラウリル硫酸ナトリウム全添加しない場合に
は、ヘモグロビンによる負の誤差が極めて太ぎく、ヘモ
グロビンの量によっては、測定値がマイナスの値をとる
。
酸ナトリウムを添加した場合には、ヘモグロビンがかな
りの量混入していても、測定値にさほどの整置は認めら
れないが、ラウリル硫酸ナトリウム全添加しない場合に
は、ヘモグロビンによる負の誤差が極めて太ぎく、ヘモ
グロビンの量によっては、測定値がマイナスの値をとる
。
また、実施例１．及び比較例１．に於て、ヘモグロビン
濃度（ｌｎｙ ／ ｄｌ） Ｏ（（１）及び（１１′）
、５００（（２）及び（２ど）、１０’ＯＯ（（３）及
び（３ｆ）の場合の各々の反応タイＪ・コース金、夫々
第２図及び第３図に示す。
濃度（ｌｎｙ ／ ｄｌ） Ｏ（（１）及び（１１′）
、５００（（２）及び（２ど）、１０’ＯＯ（（３）及
び（３ｆ）の場合の各々の反応タイＪ・コース金、夫々
第２図及び第３図に示す。
即ち、第３図では、添加したヘモグロビンが徐々に退色
し、第１ＩｌＩｌｌ定点で得た検体盲検値から液量換算
１〜た理論盲検値を、第２測定点の吸光度Ｅ２より差し
引くと負の値となり、大幅な負誤差となるのに対し、第
２図に示す如く、ラウリル硫酸ナトリウムｉ ０．５チ
添加した試薬全使用した場合には、第１試液を混合後、
１分以内に吸光度は安定し第１測５ご点と第２測定点の
あいだのヘモグロビンの吸光度変化が殆んどなくなり、
正確な測定結果が得られることがわかる。
し、第１ＩｌＩｌｌ定点で得た検体盲検値から液量換算
１〜た理論盲検値を、第２測定点の吸光度Ｅ２より差し
引くと負の値となり、大幅な負誤差となるのに対し、第
２図に示す如く、ラウリル硫酸ナトリウムｉ ０．５チ
添加した試薬全使用した場合には、第１試液を混合後、
１分以内に吸光度は安定し第１測５ご点と第２測定点の
あいだのヘモグロビンの吸光度変化が殆んどなくなり、
正確な測定結果が得られることがわかる。
このように、ビリルビンの測定に於て、本発明に係る特
定の界面活性剤であるラウリル硫酸ナトリウム全添加す
ることにより、容易に且つ効果的にヘモグロビンの影響
全回避できる。
定の界面活性剤であるラウリル硫酸ナトリウム全添加す
ることにより、容易に且つ効果的にヘモグロビンの影響
全回避できる。
実施例２．総ビリルビンの測定（塩化ベンザルコニウム
使用） 〔試薬〕 ■第１試液 カフェイン ２．５係 安息香酸ソーダ ３．８係 酢酸ソーダ ６．３％ ＥＤＴＡ−４Ｎａ □、１％ Ｈｒｉｊ −３５０，２％ 塩化ベンザルコニウム ０．２％ ■第２試液 スルファニル酸 ｏ、１チ 塩酸 ｏＩＮ これらを、使用時に０．２係の亜硝酸ソーダ溶液と１０
：１に混合する。
使用） 〔試薬〕 ■第１試液 カフェイン ２．５係 安息香酸ソーダ ３．８係 酢酸ソーダ ６．３％ ＥＤＴＡ−４Ｎａ □、１％ Ｈｒｉｊ −３５０，２％ 塩化ベンザルコニウム ０．２％ ■第２試液 スルファニル酸 ｏ、１チ 塩酸 ｏＩＮ これらを、使用時に０．２係の亜硝酸ソーダ溶液と１０
：１に混合する。
日本電子クリナライザーＶＸ−１０００に使用。
試料１５μｍに（１試液４００μｍ會加え、これを水１
６５μｍ で反応管に導き、３７℃に２．５分放置して
、第１点吸光度（１階）を５４Ｑｎｍで測定した後、第
２試薬１００μｌを水１００μｍで押し出し、３７℃で
２３分放置した後、第２点吸光度（Ｅｚ）同様の操作で
得た標準の吸光度より、試料中のビリルビン濃度全算出
する。
６５μｍ で反応管に導き、３７℃に２．５分放置して
、第１点吸光度（１階）を５４Ｑｎｍで測定した後、第
２試薬１００μｌを水１００μｍで押し出し、３７℃で
２３分放置した後、第２点吸光度（Ｅｚ）同様の操作で
得た標準の吸光度より、試料中のビリルビン濃度全算出
する。
本′実施例に於ける検針線會第４図に示す。
実ＩＰｌ！ｉ例３．総ビリルビンの測定（塩化ベンザル
コニウム使用） 〔試薬〕 実施例２．に同じ。
コニウム使用） 〔試薬〕 実施例２．に同じ。
〔測定方法］
試料溶液として、人血清中に各種濃度のヘモグロビン全
添加したもの全各１５μｌ 用いる◎以下の測定方法は
実施例２．に同じ。
添加したもの全各１５μｌ 用いる◎以下の測定方法は
実施例２．に同じ。
比較例２゜
〔試料〕
実施例３．に同じ。
第１試液として、実施例３．の第１試液から塩化ベンザ
ルコニウム金除いたもの金柑いる。第２試液は実施例３
．に同じ。
ルコニウム金除いたもの金柑いる。第２試液は実施例３
．に同じ。
実施例３．に同じ。
実施例３．及び比較例２．０総ビリルビン濃度の測定結
果を表３に示す。
果を表３に示す。
表 ３
表３より明らかな如く、ビリルビンの測定に於て、本発
明に係る特定の界面活性剤である塩化ベンザ７１／ ：
Ｉニウムに添加することにより、ヘモグロビンの負誤差
が大幅に改善されていることがわかる。
明に係る特定の界面活性剤である塩化ベンザ７１／ ：
Ｉニウムに添加することにより、ヘモグロビンの負誤差
が大幅に改善されていることがわかる。
実施例４．総ビリルビ／の測定（同時再現性）試料とし
てブール血清及び高値プール血清を使用し、実施例２．
と同じ試薬（塩化ベンザルコニウム使用）を用い、実施
例２．と同じ測定方法（日本電子クリナライザーＶＸ−
１０００使用）により繰り返し聡ビリルビンの測定ケ行
う。結果全表４に示す。
てブール血清及び高値プール血清を使用し、実施例２．
と同じ試薬（塩化ベンザルコニウム使用）を用い、実施
例２．と同じ測定方法（日本電子クリナライザーＶＸ−
１０００使用）により繰り返し聡ビリルビンの測定ケ行
う。結果全表４に示す。
衣 ４
表４より明らかな如く、本測定法は非常にバラツキが少
ない。
ない。
実施例５．総ビリルビ／の測定（相関）〔試料〕
人血清３０検体使用
［試薬］
実施例２．に同じ。
実施例２．に同じ。
比較例３゜
〔試料〕
実施例５と同じ検体（人血清３０検体）〔試薬１
実施例５の試薬から塩化ベンザルコニウムを除いたもの
〔測定方法〕
実施例５に同じ、
ノ１（発明の測定方法である実施例５．（塩化ベンザル
コニウム使用）と、従来法である比較例３．の相関全表
５及び第５図に示す。
コニウム使用）と、従来法である比較例３．の相関全表
５及び第５図に示す。
表 ５
、＋猶２７は溶面試料
表５及び第５図より明らかなように、溶血のない検体に
於て、水沫は従来法と良い相関全示してイ２．＞、、（
Ｙ＝１．０１１ ｘ＋ｏ、ｏ ５４８ 、 ｒ＝０．９
９９）
於て、水沫は従来法と良い相関全示してイ２．＞、、（
Ｙ＝１．０１１ ｘ＋ｏ、ｏ ５４８ 、 ｒ＝０．９
９９）
２目１図ｄ５、ヘモグロビン溶液（１５、！９ ／ｄ＋
）中に、 （ａ）ｒ＋Ｈ−＝ｓ、３ｔｖｏ、ｏ ｔＭ酢
酸ソーター溶Ｗ’ＪＪＩＢ加した場合、（ｂ） ０．５
チのラウリル硫酸ソーダ金倉むＩｄ（＝ ８．３の０．
ＯＩＭ酢酸ソーダ溶液を添加した場合、（Ｃｌドラブキ
ン試液（ＫＣＮｏ、Ｏ０５チ、］壬リすアン化カリウム
０．０２％、重炭酸ナトリウムＯ，１，４） ’に添加
した場合に於ける夫々の吸収曲線全示し、横軸は吸収波
長（ｎｍ）？、縦軸は吸光１１！ｌ（ｌ：（（Ｊｌ））
’に表わす。 第２図は、実施例１．に於ける反応タイムコース分水し
たもので、（１）、（２）、（３）は、夫々ヘモグロビ
ン濃１８ｉ（〜／ｄｉ）０．５００．１０００の場合の
反応タイムコースであり、縦軸は５４６ ｎ ｍの吸光
度と６ＱＱｎｍの吸光度の吸光度差（ＯＤ）ｘ１０４を
示し、横軸は時間（秒）全表わす。また、Ｒ＋は第１試
薬添加点、ＥＩは第１測定点、Ｒｚは第２試薬添カロ点
、Ｅｚは第２測定点を示し、Ｅｚ（１）、Ｅｚ（銖Ｆｉ
ｚ（３１は、夫々（ＩＪ、（２）、（３）のＥｚ点に於
ける理論盲検値（Ｅ＋に於ける盲検値全数１？ト補正し
たもの）全示している。 第３図ｔユ、比較例ｉ、 ’に於ける反応タイムコース
を示したもので、（１）、（２）、 ＋３３は、夫々ヘ
モグロビン濃度（〃Ｖ／旧、１０，５００．１０００の
場合の反応タイムコースであり、縦軸は５４６ｎｍの吸
光就と６００ ｎｍの吸光度の吸光度差（ＵＩ））Ｘ１
０４を示し、横軸は時間（秒）ケ表わす、、また、山は
第１試薬添加点、Ｅｌは第１測定点、Ｒｚは第２試薬添
加点、Ｅｚは第２測定点を示し、Ｅｚ （１１′、Ｅｚ
（２）、’Ｅ２（３）’は、夫々（１）’、 ｔ２ｔ
′、（３）’ の８２点に於ける理論盲検値（’Ｅ＋に
於ける盲倹値會液量補正したもの）乞示している。 第４図は、実施例２．に於ける検量線を示し、横軸はビ
リルビン標準液の希釈産金、縦軸はビリルビン濃度（ｍ
９／ｄｌ）を表わす。 第５図は、本発明の方法である実施例５．（塩化ベンザ
ルコニウム使用）と従来法である比較例３゜（塩化ベン
ザルコニウム使用せず）との相関全示したもので、縦ｌ
１１ｈＹは本庄に於けるビリルビン測足値（ｍｑ ／
ｄｉ）、’（ｒ７、横−１１Ｘは従来法に於けるビリル
ビン測定値Ｃｍ９／ｄｌ）ｋ表わす。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 波 長 （ｎｍ） （ｌ／ｄ ｌ） 第 ４ ［図 ０２／１゜昂 贅。普。 ４゜ ビリルビン七′Ｐ準液の希釈、１ｂ′
）中に、 （ａ）ｒ＋Ｈ−＝ｓ、３ｔｖｏ、ｏ ｔＭ酢
酸ソーター溶Ｗ’ＪＪＩＢ加した場合、（ｂ） ０．５
チのラウリル硫酸ソーダ金倉むＩｄ（＝ ８．３の０．
ＯＩＭ酢酸ソーダ溶液を添加した場合、（Ｃｌドラブキ
ン試液（ＫＣＮｏ、Ｏ０５チ、］壬リすアン化カリウム
０．０２％、重炭酸ナトリウムＯ，１，４） ’に添加
した場合に於ける夫々の吸収曲線全示し、横軸は吸収波
長（ｎｍ）？、縦軸は吸光１１！ｌ（ｌ：（（Ｊｌ））
’に表わす。 第２図は、実施例１．に於ける反応タイムコース分水し
たもので、（１）、（２）、（３）は、夫々ヘモグロビ
ン濃１８ｉ（〜／ｄｉ）０．５００．１０００の場合の
反応タイムコースであり、縦軸は５４６ ｎ ｍの吸光
度と６ＱＱｎｍの吸光度の吸光度差（ＯＤ）ｘ１０４を
示し、横軸は時間（秒）全表わす。また、Ｒ＋は第１試
薬添加点、ＥＩは第１測定点、Ｒｚは第２試薬添カロ点
、Ｅｚは第２測定点を示し、Ｅｚ（１）、Ｅｚ（銖Ｆｉ
ｚ（３１は、夫々（ＩＪ、（２）、（３）のＥｚ点に於
ける理論盲検値（Ｅ＋に於ける盲検値全数１？ト補正し
たもの）全示している。 第３図ｔユ、比較例ｉ、 ’に於ける反応タイムコース
を示したもので、（１）、（２）、 ＋３３は、夫々ヘ
モグロビン濃度（〃Ｖ／旧、１０，５００．１０００の
場合の反応タイムコースであり、縦軸は５４６ｎｍの吸
光就と６００ ｎｍの吸光度の吸光度差（ＵＩ））Ｘ１
０４を示し、横軸は時間（秒）ケ表わす、、また、山は
第１試薬添加点、Ｅｌは第１測定点、Ｒｚは第２試薬添
加点、Ｅｚは第２測定点を示し、Ｅｚ （１１′、Ｅｚ
（２）、’Ｅ２（３）’は、夫々（１）’、 ｔ２ｔ
′、（３）’ の８２点に於ける理論盲検値（’Ｅ＋に
於ける盲倹値會液量補正したもの）乞示している。 第４図は、実施例２．に於ける検量線を示し、横軸はビ
リルビン標準液の希釈産金、縦軸はビリルビン濃度（ｍ
９／ｄｌ）を表わす。 第５図は、本発明の方法である実施例５．（塩化ベンザ
ルコニウム使用）と従来法である比較例３゜（塩化ベン
ザルコニウム使用せず）との相関全示したもので、縦ｌ
１１ｈＹは本庄に於けるビリルビン測足値（ｍｑ ／
ｄｉ）、’（ｒ７、横−１１Ｘは従来法に於けるビリル
ビン測定値Ｃｍ９／ｄｌ）ｋ表わす。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 波 長 （ｎｍ） （ｌ／ｄ ｌ） 第 ４ ［図 ０２／１゜昂 贅。普。 ４゜ ビリルビン七′Ｐ準液の希釈、１ｂ′
Claims (1)
- （１）ヘモグロビンの吸収又はその吸収の経時的変動が
臨床化学分析に与える正負の誤差金回避する目的で、試
液中に下記一般式の、■、■、■から成る群より選ばれ
た一種又は二種以上の界゛面活性剤全添加すること全特
徴とする臨床化学分析方法。 ■ｋＬｌ−８０３Ｍ ■ｌ（’ −０８０３Ｍ ■Ｒ’ −Ｎ Ｈ２−Ｙ
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2486584A JPS60168050A (ja) | 1984-02-10 | 1984-02-10 | ヘモグロビンの影響回避方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2486584A JPS60168050A (ja) | 1984-02-10 | 1984-02-10 | ヘモグロビンの影響回避方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60168050A true JPS60168050A (ja) | 1985-08-31 |
| JPH0358467B2 JPH0358467B2 (ja) | 1991-09-05 |
Family
ID=12150104
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2486584A Granted JPS60168050A (ja) | 1984-02-10 | 1984-02-10 | ヘモグロビンの影響回避方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60168050A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0402094A2 (en) * | 1989-06-09 | 1990-12-12 | Wako Pure Chemical Industries Ltd | Process for measuring body fluid components |
| EP0927884A2 (en) * | 1997-12-29 | 1999-07-07 | TAIYO YUDEN KABUSHIKI KAISHA (also trading as TAIYO YUDEN CO., LTD.) | Ion sensor and ion sensor plate |
| WO2005049858A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2005-06-02 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | ヘモグロビン含有試料中の基質の測定方法 |
| JP2007147630A (ja) * | 2002-06-14 | 2007-06-14 | Arkray Inc | スルホン酸化合物およびニトロ化合物を用いた測定方法 |
| US7354732B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-04-08 | Arkray, Inc. | Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound |
| US7407774B2 (en) | 2004-01-27 | 2008-08-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for reducing influence of hemoglobin with albumin in an assay |
| WO2010001619A1 (ja) | 2008-07-04 | 2010-01-07 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定における感度増強方法又はヘモグロビンの影響回避方法 |
| US8021855B2 (en) | 2002-07-17 | 2011-09-20 | Arkray Inc. | Method of decomposing protein with sulfonic acid compound |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50113290A (ja) * | 1974-02-14 | 1975-09-05 | ||
| JPS56120951A (en) * | 1980-02-28 | 1981-09-22 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Measuring method for blood hemoglobin |
-
1984
- 1984-02-10 JP JP2486584A patent/JPS60168050A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50113290A (ja) * | 1974-02-14 | 1975-09-05 | ||
| JPS56120951A (en) * | 1980-02-28 | 1981-09-22 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Measuring method for blood hemoglobin |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0402094A2 (en) * | 1989-06-09 | 1990-12-12 | Wako Pure Chemical Industries Ltd | Process for measuring body fluid components |
| US5384248A (en) * | 1989-06-09 | 1995-01-24 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring an analyte with an oxidase and an oxidizable color reagent and surfactants |
| EP0927884A2 (en) * | 1997-12-29 | 1999-07-07 | TAIYO YUDEN KABUSHIKI KAISHA (also trading as TAIYO YUDEN CO., LTD.) | Ion sensor and ion sensor plate |
| EP0927884A3 (en) * | 1997-12-29 | 2001-07-04 | TAIYO YUDEN KABUSHIKI KAISHA (also trading as TAIYO YUDEN CO., LTD.) | Ion sensor and ion sensor plate |
| US6328866B1 (en) | 1997-12-29 | 2001-12-11 | Taiyo Yuden Co., Ltd. | Ion sensor and ion sensor plate |
| JP2007147630A (ja) * | 2002-06-14 | 2007-06-14 | Arkray Inc | スルホン酸化合物およびニトロ化合物を用いた測定方法 |
| US7354732B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-04-08 | Arkray, Inc. | Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound |
| US8021855B2 (en) | 2002-07-17 | 2011-09-20 | Arkray Inc. | Method of decomposing protein with sulfonic acid compound |
| WO2005049858A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2005-06-02 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | ヘモグロビン含有試料中の基質の測定方法 |
| US7407774B2 (en) | 2004-01-27 | 2008-08-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for reducing influence of hemoglobin with albumin in an assay |
| WO2010001619A1 (ja) | 2008-07-04 | 2010-01-07 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定における感度増強方法又はヘモグロビンの影響回避方法 |
| US8722342B2 (en) | 2008-07-04 | 2014-05-13 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for enhancing sensitivity or method for avoiding influence of hemoglobin in immunological measurement |
| EP3062104A1 (en) | 2008-07-04 | 2016-08-31 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for enhancing sensitivity or method for avoiding influence of hemoglobin in immunological measurement |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0358467B2 (ja) | 1991-09-05 |
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