JPS60123500A - 新規カルシトニン及びその採取法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、Ｍ’＋規カルシトニン及びその採取法に関し
、更に詳しくは、トリ屹後体由来の、血中カルシウム濃
度を低下させる生理活性を有する新規カルシトニン及び
その採取法に関する。

カルシトニン（以下「ｃＴ」と称する）は、鳥類、魚類
、内口類などの鯰後体、哺乳類などの甲状腺に存在する
カルシウムの代謝に関与するペプチドホルモンである。

一般に、３２個のアミノ酸よシなる単（＋ｌ’ｌのポリ
ペプチドで、１番目と７番目のアミノ酸がジスルフィド
結合をし、カルボキシル基末端がゾロリンアミドである
。現在までのところ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヒト、ラッ
ト、サケ、ウナギからＣＴが抽出精製され、動物種にょ
シ異なるペプチド４汚造が明らかにされている。トリで
は、前記／−４：μＩＩＷ１性を示す粗分画より、近似
的なアミノ酸組成が１１Ｆ定されてはいるが（Ａ、　Ｎ
１ｅｔｏ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｂｌｏｃｈｉｍ、　ＢｉｏｐＨｙ、　Ａｃｔａ、　３２
２　、３８３　（１９７３）　）、未だアミノ酸組成と
アミノ酸配列は明らかでない。

そこで、本発明者らは、ＣＴが動物抑によシ異なるペプ
チド構造を有すること、及び、鯰後体から抽出されるカ
ルシトニンの生理活性が概して高値を示すことに着眼し
、ニワトリ鯰後体からＣＴを抽出精製し、新規ＣＴの構
造を明らかにすることを目的とし、鋭意研究を行なった
結果、ニワトす鯛後体を酸性水溶液で抽出した後、特定
の処理を施こすととによシ、新規ＣＴを単離できること
を見い出すとともに、その構造を決定することに成功し
、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、 次式（■）： Ｉ（−Ｃｙｓ−Ａｌｔ−８ｅｒ−Ｌｅｕ−８ａｒ−Ｔｈ
ｒ−ＣｙＩＩ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−０”ｙ−１“−１°”
−８ｅｒ−Ｇ、１“−０”−１°”−１“１ｓ−Ｌｙｓ
−Ｌｏ“−（Ｉ）Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ、−ＮＨＩ （式中、Ｃｙｌｌはシスティンを、Ｓｅｒはセリンを、
Ａｓｎはアスパラギンを、Ｌｓｕはロイシンを、Ｔｈｒ
はスレオニンを、Ｖａｌはバリンを、Ｇｌｙ　Ｉｄ、グ
リシンτ、Ｌｙｓはリジン’ｚ、　Ｇｉｎはグルタミン
を、Ｇｌｕはグルタミン酸ｆ、　Ｈｌｓはヒスチジンを
、Ｔｙｒはチロシンを、Ｐｒｏはゾロリンを、Ａｒｇは
アルギニンを、Ａｌａは゛アラニンを表わす。）で示さ
れる新規ＣＴＦｌびその塩； 並びに、 トリ部後体を酸性水溶液で抽出し１こ後、次の処理（、
）〜（ｄ）： （ａ）　ｒＵ的物含有水溶液に親水性有核溶媒を添加し
て高分子量体を沈澱せしめ除去する（ｂ）　カチオン交
換樹脂を用いて塩基性画分を回収する （ｃ）　ゲルクロマトグラフィーによシ分子量３０００
〜４０００の両分’ｉ−１ｎＩ　ＩＩＹする（ｄ）　高
速成体クロマトグラフ・ｒ−によシＣＴ椋生理活性をイ
イする両分を回収する のうし、少なくとｌ′Ｒの処理を施すことを特徴とする
前記式中で示される新規ＣＴ又はその塩の採取法に門す
るものである。

以下、木兄ゆＪについて詳細に説明する。

先ず、本発明に係る血中カルシウムか度を低下させる生
理活性を有する新ｉｃＴの化学的性質は次の如くである
。

■　物質の性状：白色粉末 ■　溶〃■に対する溶解性：水、特に、酸性水溶液に可
溶、クロロホルム、四塩化戻素、ベンゼン、ヘキサンな
どに不溶 ■　分子類：３，３７０．７ ■　塩基性度ニブ°ケＣＴＩ〉本発明のＣＴ〉ウナギＣ
Ｔ ■　−次構造式：前記式（１） ■　免疫学的性質：抗つナギＣＴ血清及び抗ツ。

ケＣＴ　■血清を用いて、本発明ＯＣＴが前記抗血清と
交差することを利用して検出し得るＣＴ　。

■　生物活性：　３，０００〜６，０００　ＭＲＣＵ　
／”Ｐ（生物活性測定法〕 被検体を１％酢酸ナトリウム（ｐｌＩ４、ＯｉＯ，１％
牛血清アルブミン含有）溶液を用いて適当に希釈後、更
に希釈した液数種を雄幼若ラット（１０（１前後）１匹
当、６ｏ、ｉ−を尾静脈に注射し、注射ｌ時間後に心臓
よシ血液を採取し、遠心分離して血清を採取し、血清中
のカルシウム濃度を分光学的方法（試薬；フコ−カルシ
ウム測定用キット）にて測定し、ｃｔ？”濃度を１０％
低下させるのに必要なＪｌを１０ｍ　ＭＲＣ（Ｍｅｄｉ
ｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｏｕｎｃｉｌ）　Ｕと定
義する。

■　薬効持続時間　本発明０ＣＴ）ウナギＣＴ）サケＣ
ＴＩ ゛　（測定法）　２０ｍＭＲＣＵ相当のＣＴ溶液をラッ
トに静注し、血清中Ｃａ　２＋７１（度の経時変化を測
定した。

本発明ＯＣＴは、新規ポリペプチドであｐ、従来から知
られている各種動物由来ＯＣＴとは全く異なる構造を有
する。本発明ＯＣＴの生物活性は約５０００ＭＲＣＵ／
Ｗであり、ウナギＣＴやサケＣＴ　ｌのそれと同等もし
くはそれ以上を示し、ヒ）　ＣＴやラツ）ＣＴのそれに
比し１００倍以上、ウシＣＴやブタＣＴのそれに比し１
０倍以上を示すＯ更に、ペプチド医薬品として重要な要
素である薬効持続時間は生物活性の高いウナギＣＴやサ
ケＣＴ　Ｉのそれよシも、本発明ＯＣＴのそれの方が長
く、本発明ＯＣＴが医薬品として生物活性及び薬効の点
からボテンシャルが高いことが示された。従って、この
新規なＣＴは、Ｃａ代謝において極めて重要な役割を演
じているホルモンであり、医薬品として有用であると考
えられる。即ち、ＣＴは強力な骨吸収抑制作用を有する
ことから、高Ｃａ血症、骨ベージェット病、骨粗髭症の
治療、冑酸分泌及び膵液分泌抑制作用を有することから
、消化性潰瘍、急性膵炎に対する効果、抗炎症作用を有
することから慢性関節リウマチに対する効果など広範な
薬効が期待されている。更に、ｃ’ｒを臨床応用した例
として、上記の他、悪性腫瘍の骨転移、腎性骨異栄養症
、骨折、強皮症などがあり、今後作用機作の解明と共に
、ＣＴの応用範囲が広がるものと考えられる（７アルマ
シア、１９，１８７（１９８３））。

次に、本発明ＯＣＴの採取法について詳細に説明する〇 抽出原料としては、一般にはニワトリの鯰後体を用いる
。蛇後体は評化前後からその存在が認められ、甲状腺及
び上皮小体の下方において線類動脈に隣接し、成鶏では
直径１ｍｍ程度の球状の臓器である。ニワトリの週令に
よシ、−鯰後体の重量、ＣＴ含量は変化する。大量・均
質なニワトリが入手可能なこと、鯰後体が適度な大きさ
で６Ｃ摘出が容易なことなどを考慮すると、ニワトリと
しては、プ四イラーｆＩＦ１６〜８０週令のものを用い
るととが好ましい。

出発原料からＯＣＴの抽出は、次のようにして行なうこ
とができる。

例えば、出発原料をその約５〜ＩＯ倍量（重量比）の酸
性水溶泊、好ましくは、揮発性の酸性水溶液（例えば、
酢酸、ギ酸などの水溶液）中で破砕・混和し、ニワトリ
ＣＴの懸濁溶液を得る。この場合、用いる酸性水溶液は
、ｐＨ１〜５であることが好ましい。次いで、この溶液
を遠心することにより、中間層にやや透明なＣＴ抽出液
が形成される＠ことで、沈澱物は、主に鯰後体の組織片
及び不溶物であり、上層部は、主に脂肪の白色のかたま
ｐである。中間層を採取し、次の処理工程に供する。

以上のようにして得られる抽出物の精製は、前述の処理
（、）〜（ｄ）のいずれか一つの方法により行なうこと
ができるが、二つ以上を組み合わせることが好ましい。

処理（ａ）においては、本発明ＯＣＴ　（分子量３，３
７０．７）を沈澱させず、それ以上の高分子素体を沈澱
させるに足る充分量の親、水性有機溶媒（例えば、低級
アルコール、アセトンなど）を前記抽出液に添加して、
高分子素体を除去する。

処理（ｂ）においては、抽出液又はその処理液をカチオ
ン交換クロマトグラフィーに付して、環基性画分を回収
する。該クロマトグラフィーは、好ましくは水溶媒にて
行なわれるが、低級アルコール、アセトンの如き親水性
有機溶媒の添加された水溶液においても行なうことがで
きる。溶離液は、通常、約ｐＨ７〜１３の塩基性溶液、
例えばピリジン及びこれを主成分とする塩基性溶液と約
２〜７の範囲のｐｉを有するもの、例えばピリジン−酢
酸、酢酸、ギ酸、塩酸及びこれらを主成分とする酸性溶
液である。

用いるカブオン交換４９↑脂としては、例えばカルボギ
ゾメチルセルｒ−＋−ス、カルボキシメチルセファデッ
クス及びｓＰ−セファデックスなどが挙げられる。

処Ｊ’ｆｆｌ　（ｃ）のゲルクロマトグラフィーは、例
えば酢酸、炭酸水素アンモニウム、ギ酸アンモニウムの
如き揮発性緩衝液中で行なうことが好ましい。カラムの
例としては、Ｂｉｏ−ｇｅｌ　ＰＩＯ及びセファデック
スＧ　５０が９ｖ゛りられる。

処理（ｄ）の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
は、常法に従って行なうととができ、ギ酸アンモニウム
（ｌ　Ｏｍ、　Ｍ　〜１．０Ｍ）−アセトニトリル、水
−アセトニトリルーｌｏ％テトラフルオロ酢酸（ＴＦＡ
）（９０：１０：１〜４０：６０：１）などの溶媒を用
いて直線型濃度勾配溶出し、カルシトニン様生理活性を
有する両分を回収する。

以上の各精製工程における各画分の検定は、抗つナギＣ
Ｔ血悄が本発明のＣＴと交差反応することを利用して、
放射性免疫検定法を用い、適宜、生物活性前［定法を併
用した。

放射性免疫検定法でケま、抗原であるウナギＣＴを用い
て、ウサギに数回免疫し、免疫後、採血して抗血清を得
る。ここで、本放射性免疫検定法とは、ウナギＣＴの抗
体（抗血清）に対し、本発明ＯＣＴと放射線標識抗原と
の競争反応により本発明のＣＴ量を検出する方法である
。−力、標識抗原は、ウナギＣＴのチロシン部分に放射
性ヨウ素（＋２５Ｉ）を結合するクロラミンＴ法によシ
作製できる。次に、本発明ＯＣＴ抽出液又は各工程の各
両分（被検体）を適宜希釈した数種の溶液と前記で得ら
れた抗つナギＣＴ血消とを良く反応させ（４℃、１夜）
、この上清液中に含まれる抗体と結合していない１２Ｊ
−ウナギＣＴの量をｒ−カウンターで測定することによ
シ、被検体中に含まれる相対的なＣＴ活性がめられる。

この放射性免疫検定法によれば、検定によって消費され
るｃＴｚが生物活性検定法に比し、約１／１００に低減
されるばか３りか、手技が筒片である、定量性・再現性
が優れている、検定の所要時間が短かい、などの利点を
有し、放射性免疫検定法は本発明における新規ＣＴの分
離・精製を容易、かつ、迅速ならしめることができる。

次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
ｙ、（明はこれらにより制限されるものではないＯ 実施例Ｉ Ａ）出発原料 １０ｉＭＩ令食肉用ニワトリ（３３８４匹）を放血し、
直ちに、鯰後体を摘出した。脂肪をできる限シ除去し、
ドライアイスで凍結した。得られた鰐後体は約１７９．
１１Ｆであった◇ Ｂ）抽出工程 一ヒＲ己方法で得られた鱈後体を小分けしく約５００匹
外）、それぞれについてＩＮ酢酸溶液（鯰後体重量の５
倍ｆｉ−（重量比））に浸漬し、ポリトロンでホモジナ
イズし、遠心分１！１ｌＦ（９，００Ｏｒｐｍ　３０分
間した。次に、脂肪を含まないように、中間層を採取し
、この抽出液の一部を凍結乾燥した。

この凍結乾燥粉末の一部をＯ，ｌＮギ酸に溶解し、生物
活性を測定したところ、１．０〜１．２ＭＲＣＵ／Ｗで
あった。

Ｃ）精製工程 前記のようにして得た目的生理活性物質を含む酢酸水溶
液（９００ｒ＋ｉｇ）にアセトン（１８００ｍ、ｌ！　
）を徐々に添加後、−夜装置し、高分子量体を沈澱させ
た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、３０分間）後、上清液
を採取した。

この上清液を、ＳＰ−セファデックスＣ−２５を充填し
、ＩＮ酢酸溶液で平衡化したカラム（＠径３、２　ｍ　
ｘ高さ２２ｃｎ）上に注入した。このとき、酸性物質は
除去され、目的生理活性物質を含む塩基性物質がＳＰ−
セファデックスＣ−２５にイオン的に吸着される。次い
で、２Ｍピリジン溶液で溶出した。この溶出液には、相
対的に低いＣＴ活性が認められた。次いで、２Ｍピリジ
ン・酢酸溶液（ｐＨ５，０）で溶出した。この溶出液に
は、相対的に高いＣＴ活性が認められた。

これ以後の実験では、前記後者の溶出液を用いた。この
溶出液を濃縮し、ＩＮ酢酸を添加し、凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥粉末１３７０”ｆｉ’をＩＮ酢酸１５ｍＡ’
に溶解し５、予めセファデックスＧ−５０（Ｆｉｎｅ）
を充填し、ＩＮ酢酸溶液で平衡化したカラム（直径５．
　Ｉ）　（７ｎ・×高さ＋３ｏ潅）ヒに、この溶液を注
入した。とのとき、溶出条件は溶離液【Ｎ酢ｊ唆、溶出
速度２５７・ハであった。溶出液を１５ゎμずつ分画採
取し、放射性免疫検定法による活性画分（ｒｉＩｉｉ分
篇５０〜５７）を回Ｉｔ’ｄ　ｔ、た。これを凍結乾燥
し、粉末２０．８■を得た。

前記検定法から算出された免疫学的に反応した本発明Ｏ
ＣＴ限に６９２μｙ（３３８４匹相当）であった０ この粉末２Ｃ）８ノ〃りをＡ液（後述）Ｌ５ｍｌに溶解
し、仁の溶液を１−ソ、下の泪１ｊ′？争件に従いＨＰ
ＬＣに例した。

ｈ１１１定・条件： カラノ・；、東洋曹達工業（イ・：））製ＴＳＫ　ＧＥ
Ｌ　ＣＭ　２　ＳＷ（＋６ａｎφＸ２５（１ｍｍ） 流　？Ｊ　；　２．０１ｎ１．、／ｍｉｎｇ二　圧　；
　３　５　ｋ乏−し４グ 溶門１液；Ａ液（１０７７１Ｍギ酸アンモニウム：アセ
ト　、ニ　ト　リ　ル　＝９：ｌ） Ｂ液（、１，０Ｍギ酸アンモニウム：アセトニトリル−
９：１） をテンプル注入１分後、Ａ液からＢ液 へ直線型＃度勾配溶出 得うれた結果において、放射性免疫検定法に基づく活性
と吸光測定法による２　８　Ｑ　ｎｍにおけるペプチド
由来の吸光度とが一致した。更に、同様に以下の条件に
て試料を三つに分りてＨＰＬＣを繰り返したＯ 測定条件： カラム；ケムコ社製Ｃｈｅｍｃｏｓｏｒｂ　５０ＤＳ−
Ｈ（４，６聾φ×２５０論） 溶出液＋０．５ｍｌ／本 流　速＋　１．０ｍ／／ｍｌｎ 差　圧＋　１４０　ｋＷｌｃｒ＆ 溶離液；Ａ液（水ニアセトニトリル：ｌＯ％ＴＦＡ＝９
０：１０：ｌ） Ｂ液（水ニアセトニトリル：ｌＯチ ＴＦＡ＝４０：６０：１） をサンプル注入８分後、Ａ液からＢ液 へ直線型濃度勾配溶用 その結■゛：、活性画分（Ａ４ｏ）（保持時間２６分（
ブラシエンド後）〕にペプチドに基づく強い吸う０度（
Ａｚ８ｏ、ＡｚＪｏ）がＲめられた。この活性両分を凍
結乾燥して活性粉末１０６μ２を得た。この粉末の生物
活性は、５３００ＭＲＣル旬であった。

ＤＪ、ヒのＪ：９に（−で１°１られた活性粉末のアミ
ノ酸分イノ［イｉ１４をシ９１に示ず。

測定法は、活性粉末３．５μ２を６Ｎ塩酸を用いて１　
］　（１℃で２２時間加水分解し、脱塩酸後５０μｌの
０．２Ｎクエン酸緩衝液（ＰＨ３，２５）に溶解し、全
量を分析に供した。

ｆｆｙに、常法によ！）、主としてエドマン分解し、公
知の蛋白決定法によりアミン基末端より順次アミノｒｔ
９配列が決定され、同時に、カルポキンペブヴダーゼを
用いてカルボキシ基末端が決定され、ｉ’ＮＩ　Ｍｌ−
ｉ式（１）に示−Ｊ−’ｔＦ１７；１１．カルシトニン
のアミノ酸配列が決５１：°さ１１女。

表１　本発、明のカルシトニンのアミノ酸組成＊チロシ
ン（Ｔｙｒｌを１．００に換算してめた。

＊　＊　Ｃｙｓの測定法：過ギ酸酸化後のアミノ酸分析
（Ｓ、　Ｍｏｏｒｓ、　Ｊ、　Ｂｌｏｌ、　Ｃｈｅｍ、
、　２３８．２３５（１９６３）〕実施例２ 実施・１７１４１と同１玉にして、ニワトリ鯉後体（５
ｏ。

匹）より不発９］のＣ′［を含む抽出酢酸・訂液６２５
４１を・１！７た。

このｈ”ｔｌ或を、予めＩＮ酢１１２で性徴化したＳｒ
−セファデックスＣ−２５カラム（直径２．　（ｌψｔ
×高さ１７薗）に１１人した。次いで、２Ｍピリジン溶
液で溶出し、ｒノＬに、２１１４ビリジｙ−酢ｆｉｊ２
　ｉ容ｎｌ　（ｐＩＴ　５．０　）で溶出し／こ。この
１７Ｓ者の６ダ出液中にオ’　Ｊｉ’ｉ明のＣＴが含ま
れていた。

この溶出液１２０　ｍｌにアセトン２４０ｒｎｌを添加
し、−夜放散後、遠心外１’Ｊ（９０００ｒｐ＋ｎ、３
０分間）し、上清液を採取し、凍結乾燥して粉末２００
πグを得た０ この凍結乾燥粉末をＩＮ酢酸に溶解して約１０　（Ｉｆ
ＩＪの溶液とし、セファデックスＧ’−５０（Ｆｉｎｅ
　）カラム（直径１．２爆×高さ１０３ｃｍ）に注入し
た〇このとき、溶出条件は溶離゛液ＩＮ酢酸、溶出速度
５、７　ｍｇｚ’ｈであった。放射性免疫検定法による
活性画分を回収し、これを凍結乾燥して凍結乾燥粉末３
、０７’１ｇを得た。１１１Ｓ記検定法から算出された
急便学的に反応し／こ本発明の（：Ｔ引はｌ’ｌ、　０
１１１９でおった。

この粉末を実施例１と同様の方法にて高速済体クロマト
グラフィー操作を実施し、ＣＴの活性粉末２４μ７を得
た。このわ〕末のＩｆＩ：物情性は４８００　Ｐｉり４
２Ｃ明〜であった。

更に、アミノ酸分析を行なうとともに、アくノ酸配列を
決定し、この活１り：粉末が不発Φ」のＣＴであること
を確認した。

実施例３ 実施例１と同様にして、ニワトリ＃ｉ後体（５００匹）
より、水弁、明のＣＴを含む抽出酢酸溶液６　：）、、
５　ｍｌを得、凍結乾燥して粉末１．５７を得た。

この粉末全ＩＮ酢酸１５ｍ、！に溶１・Ｊイし／こ後、
へ９心分ｔｄ　（３０００ｒｐｍ、　２０５ｊ間）して
、その上渭′敢をセファデックスＧ　−５０（Ｆ’＋ｎ
ｅ　）カラム（肉径］、、　２椿×高さ１０３ｍ）に注
入した。

この活性画分′ｆＬＳＰ−セフブテツクスＣ−２５カラ
ムに注入し、火’１ｊｆｉｉ例１と四柾にして、ＣＴ？
ｉ′？げｔ：をイ４する粉末８０μ２を得た。

この粉末（ｆ−実施例１と同様の方１７ｋにて高速液体
クロマトグラフ（−・・■作を実％ｆ（し、ＣＴの活性
粉末１３μ２を１坪だ。この粉末の生物活性は５１００
　ＭＢ、ＣＵ／〜であった。

更に、゛アミノ酸分析を行なうとともに、アミノ酸配列
を決定し、この活性粉末が本発明のＣＴであることを僅
、値しまた。

手続補正書 ａ８和５９年７　月２０日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 ＱＩ　Ｉｌａ和５８　年　特　Ｉｆ　ａｍ　２３０５９
３　号。

２、発明の名称 新規カルシトニン及びその採取法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名　称　（６０１５）三菱油化株式会社（氏名）株式会
社　自　黒　研　死所 ５、補正命令の１コイ」　自　発 ６、補正により増加する発明の数　な　し７、補正の対
象ｆ明細書の特許請求の範囲及び発明の詳細な説明の各
欄 ８、補正の内容 ■、明細書の特許請求の範囲の欄を別紙のとおり補正す
る。

■、明細書の発明の詳細な説明の欄を以下のとお如補正
ナーる。

（１）明細書第５頁下から４行目の「少なくと１種」を
「少なくとも１種」と補正する。

（２）明細書第１１頁下から８行目の「テトラフルオロ
酢酸（ＴＦＡ）」を「トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）Ｊと
補正する。

（３）明Ｉｌ！ＩＩＩ　：ｓ第１７貞３行目の［吸光度
（Ａ２８０　。

Ａ２１０）Ｊを１吸光度（Ａｌ２Ｏ＊　Ａｔｔｏ　）　
Ｊと補ＩＥする。

特許請求の範囲 １　次　式　： ％式％ （ （式中、Ｃｙｓけシスティンを、Ｓｅｒはセリンを、Ａ
ｓｎはアスパラギンを、Ｌｅｕはロイシンを、Ｔｈｒは
スレオニンを、Ｖａｌはバリンを、Ｇｌｙはグリシンヲ
、ＬｙＳはリジンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ｇｌｕは
グルタミン酸を、Ｈｉｓはヒスチジンを、′ｌ１ｙｒは
チロシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｒｇはアルギニン
を、Ａｌａはアラニンを表わす。） で示される新規カルシトニン及びその塩。

２　トリ鯰後体を酸性水溶液で抽出した後、次の処理（
ａ）〜（ｄ）： （→　目的物含有水溶液に親水性有機溶媒を添加して高
分子量体を沈澱せしめ除去する（ｂ）　カチオン交換樹
脂を用いて塩基性画分を回収する （Ｃ）　ゲルクロマトグラフィーにより分子量３０００
〜４０００の両分を回収する （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーによυカルシトニ
ン様生理活性を有する両分を回収するのうち、少なくと
も１ｍの処理を施すことを特徴と″する 次式： ％式％ （式中、Ｃｙｓはシスティンを、Ｓｅｔはセリンを、Ａ
、ｓｎはアスパラギンを、Ｌｅｕはロイシンを、　Ｔｈ
ｒはスレオニンを、Ｖａｌはバリンを、Ｇｌｙはグリシ
ンを、Ｌｙｓはリジンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ｇｌ
ｕはグルタミン酸を、Ｉｒ１ｓはヒスデシンを、Ｔｙｒ
はチロシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｒｇはアルギニ
ンを、ＡＩａはアラニンを表わす。） で示される新規カルシトニン又はその塩の採取法。

手続補正力 昭和５８年　７月　４日 特許庁長官　志　賀　学　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第２３０５９．３号 ２、発明の名称 新規カルシトニン及びその採取法 ３、補正をする者 ｉバ件との関係　特許出願人 ４　代　理　人 ５、補ｉＥ命令の日刊　自発 ６、補正により増加する発明の数　なし７、補正の対象
　明細書の特許請求の範囲及び発明の詳細な説明の各欄 ８、補正の内容 ■、明細書の特許請求の範囲の欄を別紙のとおり補正す
る。

＋１　、明細書の発明の詳細な説明の欄において、明細
書第４頁下から２行目の「Ａｓｎはアスパラギンを、」
をｒ　Ａｓｐはアスパラキン酸を、」と補正する。

特許請求の範囲 １　次式・ ０ Ｌｙｓ−Ｌｅ　ｕ−５ｅ　ｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　Ｉ　ｕ−
Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ　−Ｇ　１ｎ−Ｔｈ　
ｒ　−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−＾５ｐ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｈ２ （式中、Ｃｙｓはシスティンを、　Ｓｅｔはセリンを、
Ａｓｐはアスパラギン酸を、Ｌｅｕはロイシンを、Ｔｌ
Ｉｒはスレオニンを、Ｖａｔはバリンを、Ｇｌｙはグリ
シンを、Ｌｙｓはリジンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ｇ
ｌｕはグルタミン酸を、Ｈｉｓはヒスチジンを、Ｔｙｒ
ハチロジンを、Ｐｒｏはブロリンヲ、Ａｒｇはアルキニ
ンを、Ａｌａはアラニンを表わす。）で示される新規カ
ルシトニン及びそノ塩。

２１・り鱈後体を酸性水溶液で抽出した後、次の処理（
ａ）〜（ｄ）： （８）　目的物含有水溶液に親水性有機溶媒を添加して
高分子電体を沈澱せしめ除去する（ｂ）　カチオン交換
樹脂を用いて塩基性画分を回収する （Ｃ）　ゲルクロマトグラフィーにより分子部３００Ω
〜４０００の両分を回収する （ｄ）　高速液体クロブトグラフィーによりカルシトニ
ン様生理活性を有する両分を回収するのうち、少なくと
も１種の処理を施すことを特徴とする 次式： ％式％ ［（２ （式中、Ｃｙｓはシスティンを、Ｓｅｒはセリンを、Ａ
ｓｚはアスパラキン−酸を、Ｌ３ｕはロイシンを、Ｔｈ
ｒはスレオニンを、Ｖａｌはへリンを、Ｇｌｙはグリシ
ンを、Ｌｙｓはリジンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ｇｌ
ｕはグルタミン酸を、旧Ｓはヒスチジンを、Ｔｙｒはチ
ロシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｒｇはアルギニンを
、Ａｌａはアラニンを表わす。）で示される新規カルシ
トニン又はその塩の採取ｖ４゜

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次　式　： （式中、Ｃｙｇはシスティンを、Ｓｅｔはセリンを、Ａ
   ｓｎはアスパラギンを、Ｌｅｕはロイシンを、Ｔｈｒは
   スレオニンを、Ｖａｌはバリンを、　ＧＩＦはグリシン
   を、Ｌｙｓはリジンを、Ｇｉｎはグルタミンを、Ｇｉｎ
   はグルタミン酸を、ＩＩｇはヒスチジンを、Ｔｙｒはチ
   ロシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｒｇはアルギニンを
   、Ａｌａはアラニンを表わす。） で示される新規カルシトニン及びその塩。 ２　トリ鯰後体を酸性水溶液で抽出した後、次の処理（
   ａ）〜（ｄ）： （ａ）　目的物含有水溶液に親水性有機溶媒を添加して
   高分子量体を沈澱せしめ除去する（ｂ）　カチオン交換
   樹脂を用いて塩基性画分を回収する （ｃ）　ゲルクロマトグラフィーにより分子量３０００
   〜４０００の両分を回収する （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーによシカルシトニ
   ン様生理活性を有する両分を回収するのうち、少なくと
   １種の処理を施すことを特徴とする 次　式： ％式％ （式中、Ｃｙｓはシスティンを、Ｓｅｒはセリンを、Ａ
   ａｎはアスパラギンを、Ｌｅｕはロイシンを、Ｔｈｒは
   スレオニンを、Ｖａｌはバリンを、Ｇｌｙはグリシンを
   、Ｌｙｓはリジンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ｇｌｕは
   グルタミン酸を、Ｈｌｍはヒスチジンを、Ｔｙｒはチル
   シンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｒｇはアルギニンを、
   Ａｌａはアラニンを表わす。） で示される新規カルシトニン又はその塩の採取法。