JPS60122372A - アクラルピシン定量用試薬 - Google Patents
アクラルピシン定量用試薬Info
- Publication number
- JPS60122372A JPS60122372A JP23036983A JP23036983A JPS60122372A JP S60122372 A JPS60122372 A JP S60122372A JP 23036983 A JP23036983 A JP 23036983A JP 23036983 A JP23036983 A JP 23036983A JP S60122372 A JPS60122372 A JP S60122372A
- Authority
- JP
- Japan
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- acralvicine
- labeled
- serum
- added
- aclarubicin
- Prior art date
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/9446—Antibacterials
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- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、酵素免疫測定法による抗Ｈ瘍性抗生物質アク
ラルビシンの定量用試薬に関する。
ラルビシンの定量用試薬に関する。
アクラルビシンは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ
ｉｌａｅｕｇＭ＾１４４ Ｍｌの培養液から単離された
新しいアントラサイクリン系抗生物質で、下記構造式で
表わされる。本剤は種々の動物及び人Ｗｉ瘍に対して抗
Ｈ瘍作用を示し、制癌剤として急性白血病、悪性リンパ
腫、胃・肺Φ乳癌等の治療に用いられている。副作用を
最小限に抑え、十分な薬効を維持するのに必要な投与量
を決定するためには、各患者の血中アクラルビシン濃度
を測定する必要がある。
ｉｌａｅｕｇＭ＾１４４ Ｍｌの培養液から単離された
新しいアントラサイクリン系抗生物質で、下記構造式で
表わされる。本剤は種々の動物及び人Ｗｉ瘍に対して抗
Ｈ瘍作用を示し、制癌剤として急性白血病、悪性リンパ
腫、胃・肺Φ乳癌等の治療に用いられている。副作用を
最小限に抑え、十分な薬効を維持するのに必要な投与量
を決定するためには、各患者の血中アクラルビシン濃度
を測定する必要がある。
従来、アクラルビシンの定量は、微生物学的定量法、蛍
光分析、高速液体クロマトグラフィ又はラジオイムノア
ッセイ（ＲＩ Ａ）を使って行われているが、微生物学
的定量法は感度が低い、効力検定菌の培養に時間がかか
る等の欠点を有しており、蛍光分析、高速液体クロマト
グラフィ又はＲＩＡを用いる方法は、高価な設備を必要
とする等の欠点を有している。更にＲＩＡは廃棄物処理
の問題もある。
光分析、高速液体クロマトグラフィ又はラジオイムノア
ッセイ（ＲＩ Ａ）を使って行われているが、微生物学
的定量法は感度が低い、効力検定菌の培養に時間がかか
る等の欠点を有しており、蛍光分析、高速液体クロマト
グラフィ又はＲＩＡを用いる方法は、高価な設備を必要
とする等の欠点を有している。更にＲＩＡは廃棄物処理
の問題もある。
本発明者は迅速、正確かつ簡便なアクラルビシンの定量
法をめて種々検討した結果、酵素免疫測定法によるアク
ラルビシン定量用試薬を見出し本発明婆完成した。
法をめて種々検討した結果、酵素免疫測定法によるアク
ラルビシン定量用試薬を見出し本発明婆完成した。
本発明は、少なくとも次の成分を含むことを特徴とする
アクラルビシン定量用試薬に関する。
アクラルビシン定量用試薬に関する。
成分（＾）；４−デオキソ−４“′−アミノアクラルビ
シンと蛋白との結合体を動物に投与して生成せしめた抗
体 成分（ｎ）；酵素標識された４ −デオキソ−４／／／
−アミノアクラルビシンからなる抗原 本試薬は成分（＾＞、 （Ｂ）以外に必要に応じて、検
量線作成用の標準アクラルビシン含有溶液、酵素活性測
定用試薬（例えば、基質、基質溶解液、酵素反応停止液
等）、第２抗体、緩衝化剤等から構成される。
シンと蛋白との結合体を動物に投与して生成せしめた抗
体 成分（ｎ）；酵素標識された４ −デオキソ−４／／／
−アミノアクラルビシンからなる抗原 本試薬は成分（＾＞、 （Ｂ）以外に必要に応じて、検
量線作成用の標準アクラルビシン含有溶液、酵素活性測
定用試薬（例えば、基質、基質溶解液、酵素反応停止液
等）、第２抗体、緩衝化剤等から構成される。
成分（＾）における結合体は、Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａ
ｔ、。
ｔ、。
Ｊ、＾ｎｔｉｂ＋ｏｔ、、３４，８５０〜５５（１９８
１）の方法によって得られる４ −デオキソ−４−アミ
ノアクラルビシン（以下［アミノアクラルビシン］とい
う）のアミノ基を蛋白との結合に関与せしめて製造され
る。適当な蛋白としては、アルブミン、グロブリン、サ
イログロブリン、貝ヘモシアニン、エデスチン等がある
。アミノアクラルビシンと蛋白との結合剤としては、蛋
白の種類に応じて、アミノアクラルビシンのアミノ基と
蛋白のアミ７基との間を化学的に結合するグルタルアル
デヒド、トルエンジイソシアネート、ジハロゲン化ニト
ロベンゼン等及びアミノアクラルビシンのアミン基と蛋
白のメルカプト基との間を架橋できる下記構造式で表わ
されるマレイミド化合物又はそのカルボキシル基におけ
る反応性誘導体（例えば混合酸無水物、活性エステル）
等が用いられる。
１）の方法によって得られる４ −デオキソ−４−アミ
ノアクラルビシン（以下［アミノアクラルビシン］とい
う）のアミノ基を蛋白との結合に関与せしめて製造され
る。適当な蛋白としては、アルブミン、グロブリン、サ
イログロブリン、貝ヘモシアニン、エデスチン等がある
。アミノアクラルビシンと蛋白との結合剤としては、蛋
白の種類に応じて、アミノアクラルビシンのアミノ基と
蛋白のアミ７基との間を化学的に結合するグルタルアル
デヒド、トルエンジイソシアネート、ジハロゲン化ニト
ロベンゼン等及びアミノアクラルビシンのアミン基と蛋
白のメルカプト基との間を架橋できる下記構造式で表わ
されるマレイミド化合物又はそのカルボキシル基におけ
る反応性誘導体（例えば混合酸無水物、活性エステル）
等が用いられる。
（式中、Ｒは低級アルキレン又はフェニレンを意味する
。） 更にメルカプト基を存しないか又はほとんど有していな
い蛋白についてはＳ−アセチルメルカプトコハク酸無水
物のようなメルカプト基導入剤が用いられる。この方法
は、蛋白のアミン基にＳ−アセチルメルカプトコハク酸
無水物を作用させて２−アセチルチオ−３−カルボキシ
プロピオニル化蛋白としたのち、ヒドロキシルアミンで
脱アセチル化して２−メルカプト−３−カルボキシプロ
ピオニル化蛋白とする。これに、上記マレイミド誘導体
を用いて別に調製したマレイミド基導入アミノアクラル
ビシンを反応させる。上記式においてＲがトリメチレン
であるγ〜マレイミド酪酸の反応性誘導体を用いて調製
したγ−マレイミドブチリルアミノアクラルビシンと２
−メルカプト−３−カルボキシプロピオ二ル化牛血清ア
ルブミンとを反応させて得た結合体が特に好ましい。
。） 更にメルカプト基を存しないか又はほとんど有していな
い蛋白についてはＳ−アセチルメルカプトコハク酸無水
物のようなメルカプト基導入剤が用いられる。この方法
は、蛋白のアミン基にＳ−アセチルメルカプトコハク酸
無水物を作用させて２−アセチルチオ−３−カルボキシ
プロピオニル化蛋白としたのち、ヒドロキシルアミンで
脱アセチル化して２−メルカプト−３−カルボキシプロ
ピオニル化蛋白とする。これに、上記マレイミド誘導体
を用いて別に調製したマレイミド基導入アミノアクラル
ビシンを反応させる。上記式においてＲがトリメチレン
であるγ〜マレイミド酪酸の反応性誘導体を用いて調製
したγ−マレイミドブチリルアミノアクラルビシンと２
−メルカプト−３−カルボキシプロピオ二ル化牛血清ア
ルブミンとを反応させて得た結合体が特に好ましい。
このようにして作製した結合体を適当なアジュバントと
混合してウサギ、モルモット、ヤギ、羊等の動物の皮下
又は筋肉内に投与し、血清を採取し公知の処理をなすこ
とによって成分（八）の抗体が得られる。
混合してウサギ、モルモット、ヤギ、羊等の動物の皮下
又は筋肉内に投与し、血清を採取し公知の処理をなすこ
とによって成分（八）の抗体が得られる。
なお成分（＾）は後に説明するようにＢ／Ｐ分離のため
に細菌の細胞壁、天然の不溶性多糖類。
に細菌の細胞壁、天然の不溶性多糖類。
化学処理したデキストランゲル、寒天ゲル。
プラスチックビーズ、アクリルアミドゲル。
ガラスピーズ、微細金属粉末、合成ゴムチューブ等によ
って不溶化しておくときができる。
って不溶化しておくときができる。
成分（Ｂ）の標識抗原は、アミノアクラルビシンを酵素
で標識→′るととによって製造される。適当な酵素とし
ては、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキシダーゼ、
リパーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−
ホスフェートデヒドロゲナーゼ等がある。β−り一ガラ
クトシダーゼで標識する場合には、そのメルカプト基と
アミノアクラルビシンのアミン基の間を架橋する結合剤
（ｍ−マレイミド安息香酸又はその反応性誘導体のよう
なマレイミド誘導体等）を用いる。酵素標識抗原として
は、ｍ−マレイミド安息香酸によってアミノアクラルビ
シンとβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとを結合したものが特
に好ましい。
で標識→′るととによって製造される。適当な酵素とし
ては、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキシダーゼ、
リパーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−
ホスフェートデヒドロゲナーゼ等がある。β−り一ガラ
クトシダーゼで標識する場合には、そのメルカプト基と
アミノアクラルビシンのアミン基の間を架橋する結合剤
（ｍ−マレイミド安息香酸又はその反応性誘導体のよう
なマレイミド誘導体等）を用いる。酵素標識抗原として
は、ｍ−マレイミド安息香酸によってアミノアクラルビ
シンとβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとを結合したものが特
に好ましい。
分析を実施するにあたって、被検体中のアクラルビシン
と成分（Ｂ）とを成分（＾）に対して競合的に抗原抗体
反応せしめた後、成分（八）と結合している成分（Ｂ）
と成分（Ａ＞と結合していない成分（１１）とを口／Ｆ
分離する必要がある。
と成分（Ｂ）とを成分（＾）に対して競合的に抗原抗体
反応せしめた後、成分（八）と結合している成分（Ｂ）
と成分（Ａ＞と結合していない成分（１１）とを口／Ｆ
分離する必要がある。
本Ｂ／ｌ’分離には二方法がある。一つは、成分（Ａ）
を予め細菌の細胞壁等で不溶化しておき、抗原抗体反応
を行わせる方法である。もう一つは、抗原抗体反応の前
後又は同時に成分（＾）とγ−グロブリン（ＩｇＧ＞に
対する抗体（第２抗体）とを反応せしめて不溶化する方
法である。
を予め細菌の細胞壁等で不溶化しておき、抗原抗体反応
を行わせる方法である。もう一つは、抗原抗体反応の前
後又は同時に成分（＾）とγ−グロブリン（ＩｇＧ＞に
対する抗体（第２抗体）とを反応せしめて不溶化する方
法である。
第２抗体は通常、溶液杖態で用いられるが、前もって第
２抗体を細菌の細胞壁等で不溶化しておくと、その使用
量が少な（、反応時間が短時間ですむ利点がある。［１
７Ｆ分離を行った後、沈殿又は］二澄のいずれがの酵素
活性を標識酵素に応じた公知の方法で測定する。
２抗体を細菌の細胞壁等で不溶化しておくと、その使用
量が少な（、反応時間が短時間ですむ利点がある。［１
７Ｆ分離を行った後、沈殿又は］二澄のいずれがの酵素
活性を標識酵素に応じた公知の方法で測定する。
本発明の定量用試薬によれば、血中アクラルビシンを簡
便な操作法で迅速に精度よく、かつ再現性よく定量する
ことができる。
便な操作法で迅速に精度よく、かつ再現性よく定量する
ことができる。
本発明を更に詳細に説明するため、以下に実施例を示す
が、勿論、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、勿論、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
アクラルビシン塩酸塩のシネルロースＡ部分のカルボニ
ル基をＴａｎａｋａ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、＾ｎｔ＋−
ｂ＋ｏｔ、、３４，８５０〜’５５（＋９８１）の方法
によってアミノ化してアミノアクラルビシン塩酸塩を調
製した。
ル基をＴａｎａｋａ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、＾ｎｔ＋−
ｂ＋ｏｔ、、３４，８５０〜’５５（＋９８１）の方法
によってアミノ化してアミノアクラルビシン塩酸塩を調
製した。
２．２５■ｇのγ−マレイミド酪酸及び１．２４μｍの
Ｎ−メチ１シ ドロフラン（以下ｒ ＴＨＦＪという：Ｃａ１（＋を加
え用時蒸留したもの）に溶かした溶液を０℃に冷却し、
激しく撹拌しながら１．６８μｍのクロルギ酸イソブチ
ルエステルを加えた。１分後、４００μＩのＴＨＦに溶
解した１０−ｇのアミノアクラルビシン塩酸塩を加え室
温で２時間撹拌した。減圧下に溶媒を留去し、残渣に４
１のクロロホルム及び４１の１７３Ｍクエン酸を加え、
激しく振盪した。水層を捨て有機層を水、ＩＮ重炭酸ナ
トリウム及び飽和塩化ナトリウムで順に洗い、無水硫酸
ナトリウムで乾燥したのち減圧濃縮して、γーマレイミ
ドプチリルアミノアクラルビシ／を得た。
Ｎ−メチ１シ ドロフラン（以下ｒ ＴＨＦＪという：Ｃａ１（＋を加
え用時蒸留したもの）に溶かした溶液を０℃に冷却し、
激しく撹拌しながら１．６８μｍのクロルギ酸イソブチ
ルエステルを加えた。１分後、４００μＩのＴＨＦに溶
解した１０−ｇのアミノアクラルビシン塩酸塩を加え室
温で２時間撹拌した。減圧下に溶媒を留去し、残渣に４
１のクロロホルム及び４１の１７３Ｍクエン酸を加え、
激しく振盪した。水層を捨て有機層を水、ＩＮ重炭酸ナ
トリウム及び飽和塩化ナトリウムで順に洗い、無水硫酸
ナトリウムで乾燥したのち減圧濃縮して、γーマレイミ
ドプチリルアミノアクラルビシ／を得た。
別に、に１ｏｔｚ ｅｔ ａｌ．、＾ｒｃｈ．ｔｌｉｏ
ｃｈｅｗ．ｌ１ｉｏｐｈｙｓ。
ｃｈｅｗ．ｌ１ｉｏｐｈｙｓ。
８２ 、 ７０〜７７（１９１３２）の方法によって合
成した２−アセチルチオ−３−カルボキシプロピオニル
化ｌ３ｓＡを、０．２ｍｌの０．１Ｍヒドロキシルアミ
ン（ｐＨ７、２＞中、２５°Ｃで３０分間温装した。生
じた２−メルカプト−３−カルボキシプロピオニル化Ｕ
ＳＡ（ＢＳＡＩ分子につき１７個のメルカプト基を含む
ことを確認）を３１の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、
０）で希釈し、直ちにγーマレイミドブチリルアミノア
クラルビシン溶液に加え、３０分間激しく撹拌した。混
合物を３Ｍ尿素含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、０
）で平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１００（ファル
マシア社，スウェーデン）をつめたカラム（φ２．８ｃ
ｍＸ ４５ｃｍ）に通し、同上緩衝液で展開した。精製
したアクタルビシン−ｌ３ＳＡ結合体を分光学的に検査
し、ｌ３ＳＡ１分子あたり６．８分子のアクラルビシン
を含むことがわかった。
成した２−アセチルチオ−３−カルボキシプロピオニル
化ｌ３ｓＡを、０．２ｍｌの０．１Ｍヒドロキシルアミ
ン（ｐＨ７、２＞中、２５°Ｃで３０分間温装した。生
じた２−メルカプト−３−カルボキシプロピオニル化Ｕ
ＳＡ（ＢＳＡＩ分子につき１７個のメルカプト基を含む
ことを確認）を３１の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、
０）で希釈し、直ちにγーマレイミドブチリルアミノア
クラルビシン溶液に加え、３０分間激しく撹拌した。混
合物を３Ｍ尿素含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、０
）で平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１００（ファル
マシア社，スウェーデン）をつめたカラム（φ２．８ｃ
ｍＸ ４５ｃｍ）に通し、同上緩衝液で展開した。精製
したアクタルビシン−ｌ３ＳＡ結合体を分光学的に検査
し、ｌ３ＳＡ１分子あたり６．８分子のアクラルビシン
を含むことがわかった。
実施例２
アクラルビシン抗体の調製
実施例１で調製したアクラルビシンーＢＳＡ結合体約１
．０ｍｇを含む溶液を等量のフロイントの完全アジュバ
ントで乳濁化し、それを白色雌兎の背部両側１０か所に
注射し、更に２遡同筒に３回、最初の免疫量の半量ずつ
注射した。最初の免疫から８週間後に耳の血管から採血
し、遠心分離（５００Ｘ ｇ、 １０分間）により血清
を分離し、−３０°Ｃで保存した。
．０ｍｇを含む溶液を等量のフロイントの完全アジュバ
ントで乳濁化し、それを白色雌兎の背部両側１０か所に
注射し、更に２遡同筒に３回、最初の免疫量の半量ずつ
注射した。最初の免疫から８週間後に耳の血管から採血
し、遠心分離（５００Ｘ ｇ、 １０分間）により血清
を分離し、−３０°Ｃで保存した。
実施例３
酵素標識アクラルビシンのＲ［
アミノアクラルビシン５．０ｍｇとｍ−マレイミド安息
香＃１．Ｏｑを用い、実施例１の第２バラグラフ（γ−
マレイミドブチリルアミノアクラルビシン合成の項）と
同様に反応・処理して、ｍ−マレイミドベンゾイルアミ
ンアクラルビシンを得た。そのうちの１０Ｍｇをとり５
０μＩのメタノールに溶解したものを、７８μｇのβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベーリンガー社、西独）を０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）１．Ｏｍｌに溶かした
ものに加え３０分間撹拌した。次いで反応液を０．ＩＭ
ＮａＣ１−１ｍＭＭｇｃ １２−０．１％ＢＳＡ−０
，１％Ｎ ａＮ３含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）（以下ｒ ｌ１ｕｆｆｅｒＡ Ｊという）で平衡
化した５ｅｐｈａｒｏｓｅ ８１１ （ファルマシア社
、スウェーデン）をつめたカラム（φ１．５ｃ■×４２
ｃ■）に通し同上緩衝液で溶出し、３．Ｏｍｌずつ分画
した。
香＃１．Ｏｑを用い、実施例１の第２バラグラフ（γ−
マレイミドブチリルアミノアクラルビシン合成の項）と
同様に反応・処理して、ｍ−マレイミドベンゾイルアミ
ンアクラルビシンを得た。そのうちの１０Ｍｇをとり５
０μＩのメタノールに溶解したものを、７８μｇのβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベーリンガー社、西独）を０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）１．Ｏｍｌに溶かした
ものに加え３０分間撹拌した。次いで反応液を０．ＩＭ
ＮａＣ１−１ｍＭＭｇｃ １２−０．１％ＢＳＡ−０
，１％Ｎ ａＮ３含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）（以下ｒ ｌ１ｕｆｆｅｒＡ Ｊという）で平衡
化した５ｅｐｈａｒｏｓｅ ８１１ （ファルマシア社
、スウェーデン）をつめたカラム（φ１．５ｃ■×４２
ｃ■）に通し同上緩衝液で溶出し、３．Ｏｍｌずつ分画
した。
酵素活性の高いＦｒａｃｔｉｏｎ Ｎｏ、１８〜２０を
集め、酵素標識抗原外液とし４℃で保存した。
集め、酵素標識抗原外液とし４℃で保存した。
実施例４
血中アクラルビシン測定キットの！！！造（１キット１
００回分） ０）標準溶液 ７ クラＪレヒシｙ １０＋＋ｇを０．０１Ｍ ＥＤＴ
Ａ−０，１％ＢＳＡ含有０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４） （以下ｒ ＢｕＨｅｒＢ Ｊという）に溶か
し１００μｇ／ｍＨＤ溶液を調製した。これを更にＢｕ
ｆｆｅｒＢで希釈してアクラルビシンをそれぞれ２００
、００ 、２０ 、６ 。
００回分） ０）標準溶液 ７ クラＪレヒシｙ １０＋＋ｇを０．０１Ｍ ＥＤＴ
Ａ−０，１％ＢＳＡ含有０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４） （以下ｒ ＢｕＨｅｒＢ Ｊという）に溶か
し１００μｇ／ｍＨＤ溶液を調製した。これを更にＢｕ
ｆｆｅｒＢで希釈してアクラルビシンをそれぞれ２００
、００ 、２０ 、６ 。
２．０．８ｎｇ／ｍｌ含む６種の標準アクラルビシン溶
液を各１■１調製した。
液を各１■１調製した。
（２） 酵素標識抗原
実施例３で調製した標識抗原原液を［１ｕｆｆｅｒＢテ
４００倍希釈シタも０） ５．５ｍ１（１２１００μＵ
（７）酵素を含む；ＩＵは１分間に基質１μ■ｏ１を加
水分解する量）を褐色びんに詰めた。
４００倍希釈シタも０） ５．５ｍ１（１２１００μＵ
（７）酵素を含む；ＩＵは１分間に基質１μ■ｏ１を加
水分解する量）を褐色びんに詰めた。
（３） 抗体
実施例２で調製した抗体原液をＢｕｆｆｅｒＢで１００
００倍希釈したもの５．５１を褐色びんに詰めた。
００倍希釈したもの５．５１を褐色びんに詰めた。
（４） 第２抗体
抗つサギＩｇＧヤギ血清（マイルス社、米国）を８ｕｆ
ｒｅｒＢで１０倍希釈したもの５．５１を褐色びんに詰
めた。
ｒｅｒＢで１０倍希釈したもの５．５１を褐色びんに詰
めた。
（５） Ｂ ｕ ｆ ｒ ｅ ｒ Ａ
ＢｕｆｆｅｒＡ ２５０ｍ１をプラスチックびんに詰め
た。
た。
（６） 基質
７−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ−４−メチルク
マリン３３．３ｍｇを８ｕＮｅｒＡ ｌ ｌに溶かした
もの２２１を褐色びんに詰めた。
マリン３３．３ｍｇを８ｕＮｅｒＡ ｌ ｌに溶かした
もの２２１を褐色びんに詰めた。
（７）反応停止液
０．２Ｍグリシｙ −ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨＩＯ，３）
３００閣１をプラスチックびんに詰めた。
３００閣１をプラスチックびんに詰めた。
実施例５
アクラルビシンの定量
実施例４で調製したキットを用いてアクラルビシンの定
量を以下のように行った。
量を以下のように行った。
別々の試験管に入れた被検体及び標準溶液５０μｍにそ
れぞれ標識抗原５０μｍ、次いで抗体５０μｍを加え２
５℃で８時間インキュベートした。次に１￥２抗体５０
μｍｌ正常ウサギ血清希釈液５０μｍを加え、更に３時
間インキュベートした。各試験管に［１ｕｆｆｅｒＡ
１ｍｌを加え、２５０Ｏｒ、ｐ、ｍ、、１５分間遠心分
離した。上清をデカンテーションによって除去し、 Ｂ
ｕｆｆａｒＡ １ｍｌを加え、混和後、同上の条件で再
度遠心分離し上清を除いて沈殿を得た。各試験管に基質
溶液０．２１を加え、３０℃で１時間インキュベートし
た後反応停止液２．５１を加え酵素反応を停止した。酵
素反応によって生成した７−ヒドロキシ−４−メチルク
マリンの蛍光強度を蛍光比色計（励起波長３６５ｎｍ
、蛍光波長４４８ｒｖ）で測定した。
れぞれ標識抗原５０μｍ、次いで抗体５０μｍを加え２
５℃で８時間インキュベートした。次に１￥２抗体５０
μｍｌ正常ウサギ血清希釈液５０μｍを加え、更に３時
間インキュベートした。各試験管に［１ｕｆｆｅｒＡ
１ｍｌを加え、２５０Ｏｒ、ｐ、ｍ、、１５分間遠心分
離した。上清をデカンテーションによって除去し、 Ｂ
ｕｆｆａｒＡ １ｍｌを加え、混和後、同上の条件で再
度遠心分離し上清を除いて沈殿を得た。各試験管に基質
溶液０．２１を加え、３０℃で１時間インキュベートし
た後反応停止液２．５１を加え酵素反応を停止した。酵
素反応によって生成した７−ヒドロキシ−４−メチルク
マリンの蛍光強度を蛍光比色計（励起波長３６５ｎｍ
、蛍光波長４４８ｒｖ）で測定した。
片対数グラフの縦軸に蛍光強度（ＩｏｇｉｔＢ／ｌ１ｏ
）をとり、横軸に標準溶液のアクラルビシン濃度（ｎｇ
／１ｕｂｅ）をとってプロットし検量線を作成した。な
お各濃度について６検体用いた。
）をとり、横軸に標準溶液のアクラルビシン濃度（ｎｇ
／１ｕｂｅ）をとってプロットし検量線を作成した。な
お各濃度について６検体用いた。
・１
試験管あたり０．１〜Ｉ’Ｏｎｇのアクラルビシンの測
定が可能であった。
定が可能であった。
図は本発明定量用試薬を用いて作成したアクラルビシン
の検量線であり、各点は各々の平均値、縦線は標準偏差
を表わす。 特許出願人 北 川 常 廣 藤 朋 邦 雄 代 理 人 小 島 −晃
の検量線であり、各点は各々の平均値、縦線は標準偏差
を表わす。 特許出願人 北 川 常 廣 藤 朋 邦 雄 代 理 人 小 島 −晃
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 少なくとも次の成分を含むことを特徴とするアククルビ
シ／定量用試薬 成分（＾）；４″′−デオキソ−４”′−アミノアクラ
ルビンンと蛋白との結合体を動物に投与して生成せしめ
た抗体 成分（Ｂ）：酵素標識された４ −デオキソ−４７−ア
ミツアクラルビシンからなる抗原
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036983A JPS60122372A (ja) | 1983-12-05 | 1983-12-05 | アクラルピシン定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036983A JPS60122372A (ja) | 1983-12-05 | 1983-12-05 | アクラルピシン定量用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60122372A true JPS60122372A (ja) | 1985-06-29 |
Family
ID=16906774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23036983A Pending JPS60122372A (ja) | 1983-12-05 | 1983-12-05 | アクラルピシン定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60122372A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0316776A2 (en) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Istituto Nazionale Per Lo Studio E La Cura Dei Tumori | Monoclonal antibodies to anthracyclines |
-
1983
- 1983-12-05 JP JP23036983A patent/JPS60122372A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0316776A2 (en) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Istituto Nazionale Per Lo Studio E La Cura Dei Tumori | Monoclonal antibodies to anthracyclines |
| JPH022394A (ja) * | 1987-11-17 | 1990-01-08 | Ist Nazi Per Lo Studio & La Cura Dei Tumori | アンスラサイクリン化合物に対するモノクロナール抗体 |
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