JPS5945941B2 - 化学分析装置内への化学反応成分の導入の信号を発生する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、化学反応成分の検出に関し、さらに詳述すれ
ば、化学反応の開始の信号を発生するために反応ゾーン
に導入される成分の検出に関するものである。

本発明は抗原−抗体反応の成分を検出する非同位体免疫
学的検定（ＮＯｎｉｓＯｔＯｐｉｃｉｍｍｕｎＯａｓｓ
ａｙ）すなわち非放射性免疫学的検定の分野で特に有用
である。抗原および抗体を分析する普通の方法は、抗原
がそれらの体応抗体と反応して沈殿物を生成する事実に
基づいている。

抗原一抗体反応で生成される沈殿物の量は、過剰に存在
するものに依存して、抗体濃度または抗原濃度に比例す
る。すなわち、抗原が過剰に存在する場合には、沈殿物
の量は抗体濃度に比例し、抗体が過剰に存在する場合に
は、沈殿物の量は抗原濃度に比例する。生成沈殿物の量
は普通、沈殿物が抗原一抗体反応のゾーンに指向される
光のビームを散乱する程度を測定することにより、比濁
技術で決定される。しかしながら、沈殿物の量は、抗体
かまたは抗原が過剰に存在することに依存して、抗原濃
度の２つの可能な値に対応しうる。ＲＯｂｅｒｔＪ．Ａ
ｎｄｅｒｓＯｎらの氏名で本願と同時に出願された″Ａ
ＳｙｓｔｅｍＦＯｒＳｐｅｃｉｆｉｃＳｅｒｕｍＰｒＯ
ｔｅｉｎＡｎａｌｙｓｉｓ″と題する、米国特許出願第
６９２１５９号（米国特許第４１０１２７６号）には、
抗原訃よび抗体の分析装置が開示されており、抗原一抗
体反応中に沈殿物が形成？れるときに発生される散乱光
信号の変化率の最高値が測定される。

前記特許出願に開示されているように、抗原一抗体反応
の開始後このような最高変化率が起こる時点は、２つの
反応成分のうちのどちらかが過剰に存在するかを指示す
ることが見出されている。換言すれば、抗原の過剰は、
反応の開始後散乱光信号の最高変化率が起こる時点を観
察することにより、抗体の過剰から区別される。どちら
の反応成分が過剰に存在するかを知ることにより、沈殿
物の測定量を抗原濃度の２つの可能な値のうちの正しい
ものに相関させることができる。反応の開始と散乱光信
号の最高変化率との間に経過した時間を測定するために
は、反応開始時点を最初に設定することが必要である。
かくして、タイミングロツクが反応と同時に始動され、
最高変化率値までの経過時間を測定するために使用され
る。抗原一抗体の分析のほかに、化学反応の開始時間の
確認を必要とする他の分野がある。

たとえば、血漿プロトロンビンすなわち凝固時間決定に
おいては、血漿サンブルと凝固剤が混合され、血漿サン
プルが凝固するのに要する時間の測定が行なわれる。た
とえば、米国特許第３４５０５０１号（０ｂｅｒｈａｒ
ｄｔ）訃よび第３５９３５６８号（Ｓｃｈｍｉｔｚ）を
参照されたい。典型的には、凝固は、凝固体が形成する
ときに凝固体で散乱される光を検出し、凝固体形成の程
度に応じた電気信号を発生する光検出器によつて測定さ
れる。明らかに、経過した凝固時間を正確に測定するた
めには，凝固反応の開始時点を最初に設定することが必
要である。抗原一抗体反応の分析においては、前記特許
出願に記載されているように、操作者が手動ピペツトに
より抗原反応成分と抗体反応成分を、１回に１成分ずつ
反応セルに注入する。

手動ピペツト操作は前記０ｂｅｒｈａｒｄｔおよびＳｃ
ｈｍｉｔｚの特許でもプロトロンビン時間決定に使用さ
れている。０ｂｅｒｈａｒｄｔの特許では、ピペツトプ
ランジヤを押下げることによつて起動？れるスイツチに
より．反応の開始時点に訃いてタイマが始動される。

このアプローチにおいては、ピペツトプランジヤに機械
的スイツチが取付けられ、操作者がプランジヤを押下げ
てピペツトから反応成分を射出するときに、スイツチが
閉じられ、反応の開始信号を発生するトリガ回路を完結
する。手動スイツチトリガはある目的では満足なもので
あるが、高度の操作者誤差を生じやすい。たとえば、あ
る理由でピペツトがからになつている場合に、ピペツト
プランジヤが押下げられると実際にはピペツトから何も
射出されないにもかかわらず、トリガ動作が起こる。さ
らに、間違つた成分がピベツト内に採取されている場合
に、この成分が反応ゾーン内へ射出されるときにトリガ
動作がやはり起こる。このほかに、スイツチを偶発的に
作動し、それにより分析サイクルの間違つた過程におい
てトリガ回路を作動させることもありうる。このような
偶発的トリガ動作を防止するために．分析装置のコント
ロールパネル上に「アーミング（Ａｒｍｉｎｇ）」スイ
ッチを取付け、それによりアーミングスイツチが起動さ
れない限りトリガ動作を防止することが必要である。し
かしながら、アーミングスイツチを取りつけることは装
置の操作上および機械的複雑さを増加する。さらに、ス
イツチがサンプルの導入時にセツトされてない場合には
、トリガは働かず、分析を反復しなければならない。前
記各特許には、血液凝固反応の場合に化学反応の開始信
号を発生するための第二のアプローチも示唆されている
。

血液凝固時間の決定においては、検出器が凝固体による
光の散乱をモニタし、凝固体形成の程度を指示する値を
有する信号を発 ５生する。前記各特許においては、反
応成分が反応ゾーン内へ射出されるときに、散乱光信号
の小変化が検出されて反応の開始信号を発生する。しか
しながら、このアプローチはしばしば実行が困難である
。第一に、散乱光信号の小変化は一貫性が １なく、再
現可能な現象ではない。さらに、とくに抗原一抗体反応
の比濁分析に関しては、散乱光信号は理想的には最後の
反応成分が導入される時に認知できる程度の変化を示す
べきではない。この理由は、適正な調製の場合には、抗
原づよび抗体反応成分は本質的に透明であり、したがつ
て、光散乱をほとんど生じないからである。かくして、
散乱光信号は抗原一抗体反応の開始の正確な時間を与え
ないことが明らかである。すなわち、散乱光信号は沈殿
物が形成し始める反応の開始後ある時間が経過するまで
認知できる程度に変化しない。以上から明らかなように
、化学反応の成分をモニタしかつ反応開始信号を発生す
るための簡素で信頼性のある方法および装置が要望され
る。本発明はこれらの要望を満たすものである。本発明
は、化学反応の成分をモニタし、先行技術の欠点を克服
する要領で、反応ゾーン内への成分の導入信号を発生し
かつ化学反応の開始信号を発生するための新規な方法お
よび装置である。

これらの目的のために、反応ゾーンに導入される少なく
とも最後の反応成分に付加（Ｔａｇｇｉｎｇ）物質が添
加される。付加物質は反応ゾーン内の反応には化学的に
関与しない。付加物質の存在を関知するために反応ゾー
ンをモニタし、付加物質の検出にさいして、化学反応の
開始信号を発生するための手段が設けられる。好適な形
態では、付加物質はケイ光活物質（ＦｌｕＯｒＯｆＯｒ
）である。

光の散乱のような反応の光学特性を測定する装置におい
ては、散乱光からスベクトル的に分離された帯域幅にお
いて光を放射するケイ光付加物質が選択される。付加物
質は反応には化学的に関与せずかつそれから放射する光
ほ散乱光とはスペクトル的に分離されるから、付加物質
は散乱光の検出には干渉しない。一実施態様では．付加
物質は化学反応の１つ以上の成分に添加され、各付加物
質に関して反応ゾーンをモニタしかつ反応の全付加物質
含有成分が検出されたときにのみ反応の開始信号を発生
する装置が設けられる。第１図に示されているように、
本発明に係る化学分析装置は、絶縁材料でできたプロツ
ク１２で画成されたサンプルセル１０を有し、プロツク
１２は反応ゾーン１４を画成する垂直の穴を有し、反応
ゾーンはサンプルセルに導入された化学反応物質を受入
れる。

反応ゾーンの底部分は円筒形ガラスライナ１６でライニ
ングされ、ガラスライナはそれを通して反応ゾーン内の
内容物へまたは収容物から光を透過させる。抗原訃よび
抗体反応成分の比濁分析の場合には、分析装置は、プロ
ツク１２の開口２０｝よびガラスライナ１６を通して光
のビームを指向させる光学励起装置１８と、反応ゾーン
の内容物で散乱された光を検出する光学検出装置２２と
を含む。励起装置１８は、白熱タングステンフイラメン
トランプのような光源２４と、ランプからの光を平行に
してサンプルセル１０へ指向させるレンズ系２６と、反
応ゾーンへ通される光をろ過する一次フイルタ２８とか
らなる。

検出装置２２はプロツク１２の穴内に支持された光パイ
プ３０を含み、パイプの一端は反応ゾーンの内容物で散
乱された光を傍受収集するために反応ゾーンに隣接して
配置され、パイプの他端はパイプで収集された光を光電
子増倍管３２のような適当な検出器へ伝達するために配
置されている。

光電子増倍管の出力は散乱光信号の適当な記録を供給す
る測定・表示回路３４に接続される。二次フイルタ３６
は光パイプと光電子増倍管との間の光路に配置され、検
出散乱光信号の波長を分離する。抗原一抗体反応の分析
に訃いては、抗原訃よび抗体成分は手動操作ピペツトに
よつてサンプルセル１０の反応ゾーン１４内へ１回に１
成分ずつ注入される。

抗原および抗体反応成分が反応ゾーン内で混合されると
、化学反応が開始され、それにより反応ゾーン内に沈殿
物が形成される。反応ゾーンに指向されたランプ２４か
らの光は沈殿物で散乱され、散乱光は光学検出装置２２
で検出され、形成沈殿物の量の測定、すなわち、目的の
反応成分の量を与える信号に変換される。しかしながら
、前述したように、沈殿物の量は、抗原かまたは抗体が
過剰に存在することに依存して、２つの可能な抗原濃度
値に対応しうる。しかしながら、抗原の過剰は抗体の過
剰から反応の開始と沈殿物測定との間で経過した時間を
測定することによつて区別することができる。本発明の
主要面に従つて、ケイ光付加物質が反応ゾーン１４に注
入される少なくとも最後の反応成分と共に添加され、反
応ゾーンが信号発生装置３８によりケイ光物質の存在に
関してモニタされる。

抗原一抗体反応は最後の反応成分の導入により開始する
から、最後に導入した成分中の付加物質の検出が反応の
開始時点を指示する。信号発生装置３８は、反応ゾーン
１４に隣接して配置されたロングパスカツトオン（１０
ｎｇｐＬｓｓｃｕｔ−０ｎ）フイルタすなわち高域フイ
ルタ４０と、フイルタ４０で通された光を受光検出する
ための、光応答性フオトダイオードのような光検出器４
２とを含む。

検出器４２からの出力信号はトリガ回 二路４４に結合
され、タイミングクロツク４６のような他の回路素子を
トリガするためのトリガ信号を発生する。かくして、ケ
イ光付加物質を含む反応成分が反応ゾーンに注入される
と、検出器４２とトリガ回路４４はケイ光物質から放射
される光 ｚに応答し、抗原一抗体反応の開始時にタイ
ミングクロツクをトリガする。トリガ回路４４は、フオ
トダイオード出力信号を増幅するための増幅器４８と、
パルス信号を発生するために増幅信号に応答する微分器
５０と、 ．−タイミングクロツク４６を始動するトリ
ガ信号を発生するために微分器からのパルス信号に応答
する論理回路５２とからなる。

微分器５０は、増幅フオトダイオード出力信号が所定値
に達したとき論理回路５２に出力パルス信号を供給する
スレシ ５ヨルドまたはレベル検出器で置換することも
できる。トリガ回路のこれらの特徴はすべて周知の設計
のものである。信号発生装置３８が適正な動作をするた
めには、ケイ光付加物質で吸収放射される光は、抗原ま
た ４は抗体成分を分析するために測定される散乱光と
干渉すべきではない。

すなわち、付加物質は抗原一抗体散乱光信号を測定する
ために使用さわるスペクトル帯域の光を吸収も放射もし
てはならない。さらに、付加物質から放射される光を正
確に測定するためには、このような光が付加物質を励起
するために使用されるスペクトル帯域から分離されたス
ペクトル帯域で検出されるようにしなけわばならない。
これらの目的を達成するために、ケイ光付加物質、一次
フイルタ２８、二次フイルタ３６訃よび高域フイルタ４
０は、３つの分離したスペクトル帯域を画定するように
選択される。第一のスペクトル帯域は沈殿物から散乱光
を励起測定するために使用される。第二のスペクトル帯
域はケイ光付加物質の吸収帯域を画定する。第三のスペ
クトル帯域は付加物質からのケイ光放射の帯域を画定す
る。一次フイルタ２８は、反応ゾーンに入射して沈殿物
により散乱される光のスペクトル帯域を決定する。

さらに、フイルタ２８はケイ光付加物質を励起するスペ
クトル帯域を設定する。好適実施態様においては、第２
図に示すように、一次フイルタ２８は約４００ｎｍと６
８０ｎｍ間の波長の光を透過させる。この帯域外の光、
すなわち、４００ｎｍ以下または６８０ｎｍ以上の波長
を有する光は、フイルタ２８で排除され、反応ゾーンに
到達しない。光電子増倍管３２に隣接する二次フイルタ
３６は、光電子増倍管３２で検出される散乱光の波長を
分離する。

第２図に示すように、二次フイルタは約５５０ｎｍのカ
ツトオフ波長を有し、この値より大きい波長の光は二次
フイルタで排除され、光電子増倍管に到達しない。信号
発生装置３８の高域フイルタ４０は約７００ｎｍの高い
カツトオン波長を有し、この値より低い波長の光はフイ
ルタで排除され、フオトダイオード４２に到達しない。

第３図は上記各フイルタを使用するときの光電子増倍管
３２お・よびフオトダイオード４２のレスポンスを示す
。

スペクトル分離は、形成沈殿物の量を測定する光電子増
倍管のレスポンスと、ケイ光付加物質の存在を指示する
フオトダイオードのレスポンスとで達成される。散乱光
信号を測定する光電子増倍管のレスポンスとケイ光付加
物質を測定するフオトダイオードのレスポンスとの間の
スペクトル分離に加えて、付加物質が抗原一抗体反応に
は化学的に不活性で、付加物質が沈殿物の形成に影響を
及ぼさず、したがつて散乱光信号の値に影響を及ぼさな
いようにすることが重要である。

さらに、付加物質自体は、散乱光信号に影響を及ぼしう
る実質的な濁りを反応ゾーンに導入すべきではない。第
２図のフイルタと共に使用するのに適した１つのケイ光
付加物質はオキサジン一１一過塩素酸塩（０−１−Ｐ）
であり、こわは４２３．９０の分子量および６４５ｎｍ
におけるξ＝１２．５×１０４ｔ／ＭＯｔｃｍの分子吸
光係数を有する。

この物質の吸収訃よびケイ光放射特性は第４図に示され
ている。図示のように、オキサジン一１一過塩素酸塩は
約５５０ｎｍと６５０ｎｍ間のスペクトル帯域の光を吸
収し、約６５０ｎｍと８００ｎｍ間の帯域のケイ光を放
射する。この物質の吸収帯域はスベクトル的に互に分離
されているのみならず、散乱光信号を検出する帯域から
も分離されていることに注目すべきである。かくして、
付加物質の吸収および放射は散乱光信号と干渉またはオ
ーバラツプせずかつ付加物質は反応ゾーンに実質的な濁
りを導入しない。さらに、付加物質は抗原一抗体反応に
関して化学的に不活性である。したがつて、付加物質は
散乱光信号の検出に訃いて千渉源にならない。実施例 ５０巧のオキサジン一１一過塩素酸塩を１００ｍ１の脱
イオン水に溶解することにより（すなわち、１．１８×
１０−３Ｍ／ｔ）、Ｏ−１−Ｐ（７）原蒋液を調製した
。

１５０ｍｍ０ｔの塩化ナトリウムと４ｙのポリエチレン
グリコール６０００を１００ｍｅの脱イオン水に溶解す
ることにより原緩衝溶液を調製した。

０−１−Ｐ原溶液と原緩衝溶液の組合せにより原躊液対
全溶液の希釈比が、１：４０、１：１０１．１：２０１
になるような３種の作用溶液を調製した。

人間のＣ３一補体（または他のタンパク質、たとえば．
Ｉ７Ｇ，Ｉ７Ａ，ＩｔＭなど）に対して調製された、
１００ｍ１当り１２０〜１４０ｍ７の抗原力価を有する
単種のやぎの抗血清（抗体）を、０−１−Ｐ付加物質を
含有する３種の作用溶液のおのおので１部の抗血清対３
部の作用溶液の比になるように希釈した。

血清（抗原）サンプルを希釈するために１５０ｍＭの塩
化ナトリウムを脱イオン水に溶解して、０−１−Ｐを含
まない新作用溶液とした。

コントロール血清（ＲＳＣ−１９）を新作用溶液で１：
１９９、１：３９、１：１４および１：６の血清対作用
溶液の比になるように希釈した。

（ＲＳＣ−１９は３５０巧／１００ｍｅ０Ｃ５３一補体
を含有することが知られている）。付加物質０−１−Ｐ
を含有する３種の抗体溶液のおのおのを反応セル内で血
清溶液のおの訃のと混合した。

各抗体および抗原成分がこのように混合された後、反応
セルを７００μｔの原緩衝溶液で充填し、抗原溶液と抗
体溶液の各５０μｔを手動ピペツトにより１回に１成分
ずつセル内の原緩衝溶液に注入した。抗体溶液を最後に
注入し、フオトダイオード４２で供給される電圧変化を
測定した。６４０ｎｍの一次フイルタ２８を使用した場
合には、１：４０、１；１０１．および１：２０１の抗
体希釈溶液の電圧変化はそれぞれ５ボルト、２ボルトお
よび１．１ボルトであつた。

６２０ｎｍの一次フイルタ２８の場合には、同希釈溶液
の電圧変化はそれぞれ２．８ボルト、１．１ボルトおよ
び０．５ボルトであつた。

上記実施例に訃いては，ケイ光付加物質は抗体反応成分
中に含まれ、抗体成分は抗原一抗体反応の開始を指示す
るために最後に反応ゾーンに導入された。

別の実施例においては、コントロール血清（抗原）が各
種の０−１−Ｐ作用溶液で希釈され、抗原成分が最後に
反応ゾーンに導入された。この実施例では、抗原反応成
分中の０−１−Ｐ付加物質が、前記の付加物質を含む抗
体反応成分の場合と同様な電圧変化をフオトダイオード
４２の出力に示した。かくして、付加物質は抗原反応成
分と抗体反応成分の両方において同等に良く作用し、し
たがつて何れのものにも導入しうる。両反応成分が反応
ゾーン内に存在することを確実にするために、付加物質
は、反応ゾーンに注入される最後の反応成分のみに含ま
れるようにする代りに、抗原および抗体反応成分の両方
に含まれるようにすることもできる。この実施例に訃い
ては、信号発生装置３８は各反応成分中の付加物質から
のケイ光放射線を検出する。これは第５図に破線で示さ
れており、２つの反応成分の別個の導入にさいして検出
されるケイ光信号が増加する。この実施例の場合には、
微分器５０は前述した通常のレベル検出器で置換される
。レベル検出器は、ケイ光信号が第一｝よび第二の注入
が起こつたことを指示するレベルに達したときにのみ、
クロツク４６をトリガするために出力パルスを論理回路
５２に供給するように設定される。かくして、クロツク
４６は２つの付加物質含有反応成分が反応ゾーンに導入
されない限りトリガされない。第５図の実線は、微分器
５０がトリガ回路４４に使用される場合に第一訃よび第
二注入に対するケイ光信号の導関数を示す。このような
場合には、論理回路５２は通常の二段カウンタからなり
、微分器５０からの第一のパルスと第二のパルスの結合
にのみ応答してクロツク４６をトリガし、第一｝よび第
二反応成分が反応ゾーンに注入されたことを指示する。
もちろん、カウンタはクロツク４６がトリガするときお
よび入力パルス間で所定時間が経過したときに自動的に
りセツトされる。上記実施態様において同一反応成分の
第一および第二の注入がクロツク４６をトリガしないよ
うにするために、各成分に異なつた量の付加物質が含ま
れるようにすることができる。すなわち、たとえば、抗
原成分が１単位の付加物質を含み、抗体成分が２単位の
付加物質を含む場合には、反応ゾーン内への抗原訃よび
抗体反応成分の注入は、反応ゾーン内に合計で３単位の
付加物質が存在することになる。２つの抗原成分が誤つ
て注入された場合には、２単位のみの付加物質が存在す
ることになる。

２つの抗体成分が誤つて注入された場合には、４単位の
付加物質が存在することになる。

したがつて、２つの注入の場合に、３単位の付加物質の
正しい組合せは、１つの注入が正しい抗原成分でありか
つ他の注入が正しい抗体成分である場合にのみ存在する
。この実施態様では、所定の動作「窓」を有するレベル
検出器５０が使用され、３単位の付加物質に対応するフ
オトダイオード４２の電圧レスポンスに応じてのみ出力
パルスを発生するように設定される。以上から理解され
るように、本発明は．反応ゾーン内への化学反応成分の
導入をモニタしかつ化学反応の開始の信号を発生するた
めに従来使用された方法および装置の改良を提供するも
のである。

反応成分の少なくとも１つに付加物質を添加することに
より、成分の導入にさいしてトリガ回路を手動で操作す
る必要性が解消される。さらに、化学反応物質と付加物
質問の化学的分離を維持することにより、反応生成物に
よる光の散乱のような反応の特性を付加物質からの干渉
を受けることなしに測定することができる。さらに、こ
のような散乱光信号に依存して反応成分導入の信号をさ
らに発生する必要性が解消される。ケイ光付加物質が使
用されるときには、付加物質から放射される光と散乱光
との間にスペクトル分離を維持することにより、付加物
質と測定散乱光信号の干渉が解消される。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗原一抗体分析装置の反応セルの水平断面図お
よび反応開始信号を発生する装置のプロツク線図である
。 第２図は本発明装置におけるフイルタの帯域特性を示す
光透過対波長のグラフである。第３図は本発明装置にお
ける光電子増倍管およびフオトダイオードのレスポンス
間のスペクトル分離を示す光レスポンス対波長のグラフ
である。第４図は１ケイ光付加物質に対する光吸収およ
びケイ光放射対波長のグラフである。第５図は第一於よ
び第二反応成分の注入に対応するケイ光信号の時間的変
化を示すケイ光信号対時間のグラフである。１０：サン
プルセル、１２：ブロツク，１４：反応ゾーン、１６：
ガラスライナ、１８：光学励起装置、２０：開口、２２
：光学検出装置、２４：光源、２６：レンズ、２８：フ
イルタ、３０：パイプ、３２：光電子増倍管、３４：測
定・表示回路、３６：フイルタ、３８：信号発生装置、
４０：フイルタ、４２：フオトダイオード、４４：トリ
ガ回路、４６：タイミングクロツク、４８：増幅器、５
０：微分器、５２：論理回路。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 化学反応を開始するために反応ゾーンに反応成分を
   導入する工程と反応の特性を測定する工程とを含む化学
   反応の成分を混合する方法において、化学反応を開始す
   る前に反応ゾーンに導入される少なくとも最後の成分に
   付加物質を添加し、付加物質が反応から化学的に隔離さ
   れるようにする工程；付加物質の存在に関して反応ゾー
   ンをモニタし、付加物質を検出したとき化学反応の開始
   を指示する信号を発生する工程；からなる改良を加えた
   化学反応の開始の信号を発生する方法。 ２ 前記最後に導入される反応成分に加うるに第二の反
   応成分に付加物質を添加する工程；各付加物質の存在に
   関して反応ゾーンをモニタし、両付加物質が検出された
   とき化学反応の開始を指示する信号を発生する工程；を
   含む特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 付加物質が第一および第二反応成分に異なる相対量
   で添加され、反応ゾーンが付加物質の相対量の独特の組
   合せの存在に関してモニタされる特許請求の範囲第２項
   記載の方法。 ４ 付加物質が抗原−抗体化学反応の少なくとも抗原ま
   たは抗体成分に添加される特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 ５ 付加物質がケイ光物質であり、モニタ工程が化学反
   応の開始の信号を発生するためにケイ光物質により放射
   される光を検出する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６ ケイ光物質がオキサジン−１−過塩素酸塩である特
   許請求の範囲第５項記載の方法。 ７ 反応の特性を測定する工程が第一のスペクトル帯域
   における反応の光学特性を測定し、ケイ光付加物質が前
   記第一のスペクトル帯域から分離した第三のスペクトル
   帯域における光を放射するように選択され、モニタ工程
   が第三の帯域における光を検出することを含む特許請求
   の範囲第５項記載の方法。 ８ ケイ光付加物質がさらに第一および第三のスペクト
   ル帯域から分離した第二のスペクトル帯域における光を
   吸収するように選択される特許請求の範囲第７項記載の
   方法。 ９ ケイ光付加物質が抗原−抗体化学反応の一成分に添
   加され、前記光学特性が反応中形成される沈殿物によつ
   て散乱される光である特許請求の範囲第８項記載の方法
   。