JPS5941302A - 多糖の製造方法 - Google Patents
多糖の製造方法Info
- Publication number
- JPS5941302A JPS5941302A JP15227082A JP15227082A JPS5941302A JP S5941302 A JPS5941302 A JP S5941302A JP 15227082 A JP15227082 A JP 15227082A JP 15227082 A JP15227082 A JP 15227082A JP S5941302 A JPS5941302 A JP S5941302A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polysaccharide
- extracted
- crude enzyme
- enzyme solution
- mycelium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この弁明は制がんf1用および抗ウィルス作用等の(娶
れた生理活性を有する多糖のjI!1造方法に関づるも
のである。
れた生理活性を有する多糖のjI!1造方法に関づるも
のである。
担子菌類に属する4111W等の菌糸体がヒル臼−ス等
の腹水化物を分解するカルボヒドラ−14(Car1+
obyd+・ase )およびリグニン分解鼾索、更に
はでの他一般的に植物繊維と称される物質を分解する^
イ豫の生産に優れていることは良く知られているどころ
である。
の腹水化物を分解するカルボヒドラ−14(Car1+
obyd+・ase )およびリグニン分解鼾索、更に
はでの他一般的に植物繊維と称される物質を分解する^
イ豫の生産に優れていることは良く知られているどころ
である。
また、一方バガス(砂糖きびの搾り粕)、どうもろこし
、麦わら、米糠等の植物繊維質成分に富む物質中に多糖
が含まイ1、これら物質中に含有されている多糖が制が
ん作用おにび抗ウィルス作用を右することも多く報告さ
れている。
、麦わら、米糠等の植物繊維質成分に富む物質中に多糖
が含まイ1、これら物質中に含有されている多糖が制が
ん作用おにび抗ウィルス作用を右することも多く報告さ
れている。
然して、従来このJ:つな植物繊維から多糖を抽111
Jる抽出手段としては、熱水抽出によるのが一般的であ
るが、このようイT抽出手段によって得られた多糖には
殆ど/l 11!活性を示さないか、あるいは比較的低
いため、制がん作用J5よび抗ウィルス作用に劣るl〔
め、上2のJ:うイi抽出手段にJ、って得られた抽出
液を用いて制が7υ剤あるいは抗−フィルス剤どして工
業的に実施Jることは従来全く考えられていなかった。
Jる抽出手段としては、熱水抽出によるのが一般的であ
るが、このようイT抽出手段によって得られた多糖には
殆ど/l 11!活性を示さないか、あるいは比較的低
いため、制がん作用J5よび抗ウィルス作用に劣るl〔
め、上2のJ:うイi抽出手段にJ、って得られた抽出
液を用いて制が7υ剤あるいは抗−フィルス剤どして工
業的に実施Jることは従来全く考えられていなかった。
この発明はこのよう4I:点に46みイfされIこ・b
ので、多糖を含有している抽出液中に、」−記のごとき
菌糸体から抽出した粗酵素液を添加lしめ、この粗酵素
液の分解酵素により多糖を加水分解せしめ、これにより
優れた生理活性を有りる多糖を製造Jることを目的とJ
るものである。
ので、多糖を含有している抽出液中に、」−記のごとき
菌糸体から抽出した粗酵素液を添加lしめ、この粗酵素
液の分解酵素により多糖を加水分解せしめ、これにより
優れた生理活性を有りる多糖を製造Jることを目的とJ
るものである。
1ズ下この発明の詳細な説明する。
この発明において使用さ゛れる出発物質としては、バカ
ス、米糠、とうもろこし、麦わら等が用いられ、これら
は極めて植物繊維質成分に富むどともに、これらの物質
には多糖の含有され(いることIJ公知である。しかし
、これらの出ブを物質から多糖を抽出Jるには前処理と
して多糖を含んだ抽出液を3Flる必要がある。
ス、米糠、とうもろこし、麦わら等が用いられ、これら
は極めて植物繊維質成分に富むどともに、これらの物質
には多糖の含有され(いることIJ公知である。しかし
、これらの出ブを物質から多糖を抽出Jるには前処理と
して多糖を含んだ抽出液を3Flる必要がある。
その抽出液の抽出手段には種々<r手段が挙げられるか
、熱水、または酸、塩基を含む水系溶媒から抽出するこ
とが可能である。
、熱水、または酸、塩基を含む水系溶媒から抽出するこ
とが可能である。
また、上記のごとき抽出液には担子菌類に属Jる菌糸体
から抽出した粗酵素液を添加づるが、この発明はこの粗
酵素液を添加する点に最す大きな特徴がある。然して、
この粗酵素液を添加口しめる理由は、この粗酵県液が含
有しているカルボヒドラ−1により多糖を加水分解し、
これにより優れた生理活性を有する多糖を抽出Jるbの
である、。
から抽出した粗酵素液を添加づるが、この発明はこの粗
酵素液を添加する点に最す大きな特徴がある。然して、
この粗酵素液を添加口しめる理由は、この粗酵県液が含
有しているカルボヒドラ−1により多糖を加水分解し、
これにより優れた生理活性を有する多糖を抽出Jるbの
である、。
担子菌類に属Jる菌糸体の生産−りるカルボヒドラ−」
tの調整と性質は次の通りである。
tの調整と性質は次の通りである。
(1)調整方法
(a )深部培養ろ液から調整づる場合菌糸体をガーゼ
ろ過して除ぎ、ろ液を遠心分離して上清を100%硫安
飽和し遠心分離する。得られた沈澱を適当量の水に溶解
し透析して粗酵素液とJる。
ろ過して除ぎ、ろ液を遠心分離して上清を100%硫安
飽和し遠心分離する。得られた沈澱を適当量の水に溶解
し透析して粗酵素液とJる。
(b)固体培養基から調整覆る場合
バガス等を主材とする固体培#を基にて椎茸等の担子菌
類に属する菌糸体を培養した後、菌糸体のまん延した培
養基を砕ぎ、これに低濃度の緩衝液を加え−(低温で撹
拌し、ろ過して抽出液を得る。
類に属する菌糸体を培養した後、菌糸体のまん延した培
養基を砕ぎ、これに低濃度の緩衝液を加え−(低温で撹
拌し、ろ過して抽出液を得る。
その後この抽出液に40%程度の低濃度の硫宥で飽和し
、沈澱を除さ、清澄した後100%硫安飽和により沈澱
を得、適当量の水に溶解した後透析して粗酵素液と1−
る。
、沈澱を除さ、清澄した後100%硫安飽和により沈澱
を得、適当量の水に溶解した後透析して粗酵素液と1−
る。
(2)性質
担子菌類(BAS ID IOMYCETES>。
同担子菌亜綱(I」oo+obasidiae )’
、菌じん類(1−1y11− emomycetes
)のまった番ノ「l (A graricales)ニ
ツイテ、ひらたC−ノp 、 ostreatus
(F I’ ) 、 Lいた1Jl−、edodes
(3erk ) S ing 、ひだなしに番ノ目Ap
l+yllophoralesについて、こうlc番ツ
ノ5arcdon aspratus (1
3erk ) 、 や に lこ 1ノ
l 5hnoderlna resinosum
([r ) Karst、 5(担子菌亜m He
tcrobasidiae L ;うきくらげ目下r
em ella ruciformis Rerk
の5柚類の担子菌のイ1産りるカルボヒドラ−げの性質
を比較した。その結果(L下f’l+jの通りである。
、菌じん類(1−1y11− emomycetes
)のまった番ノ「l (A graricales)ニ
ツイテ、ひらたC−ノp 、 ostreatus
(F I’ ) 、 Lいた1Jl−、edodes
(3erk ) S ing 、ひだなしに番ノ目Ap
l+yllophoralesについて、こうlc番ツ
ノ5arcdon aspratus (1
3erk ) 、 や に lこ 1ノ
l 5hnoderlna resinosum
([r ) Karst、 5(担子菌亜m He
tcrobasidiae L ;うきくらげ目下r
em ella ruciformis Rerk
の5柚類の担子菌のイ1産りるカルボヒドラ−げの性質
を比較した。その結果(L下f’l+jの通りである。
nptpH0llt −r enll) 酵素の種類
?Pεr、Iフ3,4 5,3 35℃ム、Jも1り
3,5 5,5 35℃ α
−グLコLダーt゛こう1.rり 3.5 5.
7 32℃ α −ガラ2Fシク゛二t
“?に九け3.3 5,4 34℃ β−)
L−7りl−1−2°゛−乞°。
?Pεr、Iフ3,4 5,3 35℃ム、Jも1り
3,5 5,5 35℃ α
−グLコLダーt゛こう1.rり 3.5 5.
7 32℃ α −ガラ2Fシク゛二t
“?に九け3.3 5,4 34℃ β−)
L−7りl−1−2°゛−乞°。
L3沢ら+7”3.!i 5,6 308Co p
[p b :最適P t−1 optHen+ρ:R適濤痘 五4買に水溶性澱粉を用いて検討した結果、何れの一担
子菌にもほぼ同じ最適温度、最適)〕Hを右Jるカルボ
ヒドラーゼが存在し、カラムク【コマ[・により分画し
て検討した結果、PI−13,5近くに最適P Hを有
する酵素はα−ガラクトシダーゼ(Galactosi
dase)活111を示し、PH5,5近くに最適P1
−1を有りる酵素4Jα−グルコシダー1?(Gluc
osidase) d3cJ、びβ−h−フク1〜シダ
ー17(FllctO5idase)の活性を示した。
[p b :最適P t−1 optHen+ρ:R適濤痘 五4買に水溶性澱粉を用いて検討した結果、何れの一担
子菌にもほぼ同じ最適温度、最適)〕Hを右Jるカルボ
ヒドラーゼが存在し、カラムク【コマ[・により分画し
て検討した結果、PI−13,5近くに最適P Hを有
する酵素はα−ガラクトシダーゼ(Galactosi
dase)活111を示し、PH5,5近くに最適P1
−1を有りる酵素4Jα−グルコシダー1?(Gluc
osidase) d3cJ、びβ−h−フク1〜シダ
ー17(FllctO5idase)の活性を示した。
こねは深部培養ろ液、固体培養基何れから得たものも1
司じてあった。
司じてあった。
図面に示−4−6のは培養ろ液から抽出した椎U1菌糸
体の粗酵素液をセフ10−ス−6Bにより分画したグラ
フであり、このグラフによっても明らかな如く、本相酵
素欣にα−グル」シダーげ、α−ガラク1−シダ=げお
J、びα−11フク1〜シダーゼの含有されていること
が明らかである。
体の粗酵素液をセフ10−ス−6Bにより分画したグラ
フであり、このグラフによっても明らかな如く、本相酵
素欣にα−グル」シダーげ、α−ガラク1−シダ=げお
J、びα−11フク1〜シダーゼの含有されていること
が明らかである。
本発明方法にJ:す1!7られた多糖は極め−で!1理
活性に田み、特に制がん作用および抗ウィルス作用にお
いて優れた効果のあることが判明した。
活性に田み、特に制がん作用および抗ウィルス作用にお
いて優れた効果のあることが判明した。
以下本発明の実施例を詳、IIIに説明する。
粉砕したバガス300 gに加水し、煮沸してろ過袋を
介し、残渣を分離して多糖を含んだ抽出液1.000c
cを1ηる。
介し、残渣を分離して多糖を含んだ抽出液1.000c
cを1ηる。
然して、ぞの抽出液を冷7JI後、Fll醗緩絢液等で
1)11を5−6に調整し、上記固体培養基から調整さ
れた111. ’l−1菌糸体の相酔素液100ccを
加え、30″C〜40°Cにて1〜5時間緩かにインギ
コベートする。イfaり、この1)l15〜6で反応す
る酵素はα−グル」シダーぜJ5よびフクトシダ−6−
cあることが1!l!解C′きるであろう。次いでPI
−1を2.5〜4に調整し、同じく1〜5時間緩かに撹
拌しつつインキュベ−1〜′1Jる。なおこの1)11
で反応Jる酵素はカラクトシダーゼあることが理解でき
るであろう。
1)11を5−6に調整し、上記固体培養基から調整さ
れた111. ’l−1菌糸体の相酔素液100ccを
加え、30″C〜40°Cにて1〜5時間緩かにインギ
コベートする。イfaり、この1)l15〜6で反応す
る酵素はα−グル」シダーぜJ5よびフクトシダ−6−
cあることが1!l!解C′きるであろう。次いでPI
−1を2.5〜4に調整し、同じく1〜5時間緩かに撹
拌しつつインキュベ−1〜′1Jる。なおこの1)11
で反応Jる酵素はカラクトシダーゼあることが理解でき
るであろう。
−I−Ill!の如< kA適P Hおよび最適)品1
真下においてカルボにドラ−Uの各M水液が最も効率良
く反応し、これにより抽出液中の多糖を加水分解し、嶋
れた生理活性を有する多糖を得ることができるのである
。
真下においてカルボにドラ−Uの各M水液が最も効率良
く反応し、これにより抽出液中の多糖を加水分解し、嶋
れた生理活性を有する多糖を得ることができるのである
。
一1記のごどき手段により多糖を加水分解した1!2、
遠心分離してト清を晴縮し、2〜3倍溶のアルコール、
アレトン等の有機溶媒を加える。その後沈澱を分離し、
乾燥υしめて多糖の粉末体約6gを得る。なお、有機溶
媒沈澱操作は前後しても良く、例えば抽出液と残渣を分
離した後、イJ′機溶媒を加えて沈澱させ、沈澱を適当
量の緩衝液に溶解した後、酵素反応を行ない史に+=i
機溶媒で沈澱さμτも良い。
遠心分離してト清を晴縮し、2〜3倍溶のアルコール、
アレトン等の有機溶媒を加える。その後沈澱を分離し、
乾燥υしめて多糖の粉末体約6gを得る。なお、有機溶
媒沈澱操作は前後しても良く、例えば抽出液と残渣を分
離した後、イJ′機溶媒を加えて沈澱させ、沈澱を適当
量の緩衝液に溶解した後、酵素反応を行ない史に+=i
機溶媒で沈澱さμτも良い。
また、多糖を含^7だ1111出液を得るに際しτ上記
実施例では残渣を予め分離したが、この段階においては
特に分離J−ることなく、反応終了後、残渣と分離して
も良い。
実施例では残渣を予め分離したが、この段階においては
特に分離J−ることなく、反応終了後、残渣と分離して
も良い。
次に上記の如くして得られた多糖を用いて、次のにうな
実験を行なブた。
実験を行なブた。
(1)本発明により15ノられIこ多軸(酵素反応後)
の糖組成および生理活性の例をバがス、米IJiについ
て天然物(酵素反応ri:+ )と比較Jるど次の如く
であっIc。
の糖組成および生理活性の例をバがス、米IJiについ
て天然物(酵素反応ri:+ )と比較Jるど次の如く
であっIc。
リドつ1ビバガスおよび米糠の糖組成
(Wei(7tH%)
す゛ 1・ ウ キ じ ハ ノJ ス
米 糠灰応前 反応後 反応前
反応1(ΔI゛a 11,0 19.1
24,6 37.4X yl 4.1241.
7 1(1,836,81yl all 3,
4 12,4 3,4 5.3Gal
18,0 11,8 9.6 6,9G
Ic 63,5 13.!j 53,
8 13.6分析はJOnQS等の/J払に従いガ
スクn7トグラフイーで同定、定量を行なった。
米 糠灰応前 反応後 反応前
反応1(ΔI゛a 11,0 19.1
24,6 37.4X yl 4.1241.
7 1(1,836,81yl all 3,
4 12,4 3,4 5.3Gal
18,0 11,8 9.6 6,9G
Ic 63,5 13.!j 53,
8 13.6分析はJOnQS等の/J払に従いガ
スクn7トグラフイーで同定、定量を行なった。
△ra:〕Iラビノ〜ス xy+:4ニジ[]−スt
vjan:マンンース Gal:ガラク1〜−スQl
cニゲル丁1−ズ 上記のごとき実験結果から明らかな如く、反応前と反応
後においてはその生理活性に顕著イに差異が認められた
。
vjan:マンンース Gal:ガラク1〜−スQl
cニゲル丁1−ズ 上記のごとき実験結果から明らかな如く、反応前と反応
後においてはその生理活性に顕著イに差異が認められた
。
(2)制がん効果
△5cites hepatoma 41 II
l) onryt+系卸ウッ1〜 投つ方法:各物¥1を0.9%段塩水に溶解し、Al1
414移植前日から1日おき4回、腹こう内投与し腹水
中のA)+414の11″i殖抑制率で効果を判定。
l) onryt+系卸ウッ1〜 投つ方法:各物¥1を0.9%段塩水に溶解し、Al1
414移植前日から1日おき4回、腹こう内投与し腹水
中のA)+414の11″i殖抑制率で効果を判定。
G roup cells / n+Ix 1
0− ’ 3 r%非投与群 1.62
二iI 0808 100反応前八ガへ多@’i 5
0111(11,61j 0.34 1001001
11(11,23:t: 0.15 76反応後バガ
ス多糖50 m g 0.87 :!: 0 、22
!i 4100mg O,34二i:
(1,0!l 21反応前米ぬか多糖!
i0nrg 1.63 :!、: 0.20 10
0100mg 1.32−1: 0.14 82
反応後米ぬか多糖5011jl 1.08±0.33
67100mg O,71:LO,1944S
r :非投与群の細胞数を100どしIc時の伯投与量
:体重1kg当り 上記の如き実験結果から明らかな如く、本発明方法によ
り得られた多糖の投りiffはH2応前のJρ与群に比
しA I−1414の増殖に対して1&!れた抑fhl
j効果のあることが判明した。
0− ’ 3 r%非投与群 1.62
二iI 0808 100反応前八ガへ多@’i 5
0111(11,61j 0.34 1001001
11(11,23:t: 0.15 76反応後バガ
ス多糖50 m g 0.87 :!: 0 、22
!i 4100mg O,34二i:
(1,0!l 21反応前米ぬか多糖!
i0nrg 1.63 :!、: 0.20 10
0100mg 1.32−1: 0.14 82
反応後米ぬか多糖5011jl 1.08±0.33
67100mg O,71:LO,1944S
r :非投与群の細胞数を100どしIc時の伯投与量
:体重1kg当り 上記の如き実験結果から明らかな如く、本発明方法によ
り得られた多糖の投りiffはH2応前のJρ与群に比
しA I−1414の増殖に対して1&!れた抑fhl
j効果のあることが判明した。
(3)抗ウィルス効果
ウィルス:シバ−1モ1fイクウイルス(TMV)検定
植物: N 1cotiana G 1utinos
e試験方1ム:各物質の水溶液とTMVを11〜合し、
力−ボフンタムを用いてN 、 (]ILItillO
3eに接種し。
植物: N 1cotiana G 1utinos
e試験方1ム:各物質の水溶液とTMVを11〜合し、
力−ボフンタムを用いてN 、 (]ILItillO
3eに接種し。
対照榮に対Jる局部病斑(l ocal l−esi
on )の成形附1に率で抗ウィルス作用を判定。
on )の成形附1に率で抗ウィルス作用を判定。
G roup LocaI Les、o
s仮(9#q4)mlrti止傘(% )対照
296− 反応前バガス多糖200ppnl 219 2
6100ppm 266 10 1シ応後バガス多糖200ppm 0 10(
1100ppm 41 8G 反応前米ぬか多糖200pp+n 252 1
!+1100pp 275 7 反応後米ぬか多糖200旧1111 .0 01
0100ppII171 76 −1記の如き実験結束から明らか<’L如く、本発明り
法により得られた投与群は反応前の投与群に比し、渋れ
た荊成阻止率を得るこ、どがでさた。
s仮(9#q4)mlrti止傘(% )対照
296− 反応前バガス多糖200ppnl 219 2
6100ppm 266 10 1シ応後バガス多糖200ppm 0 10(
1100ppm 41 8G 反応前米ぬか多糖200pp+n 252 1
!+1100pp 275 7 反応後米ぬか多糖200旧1111 .0 01
0100ppII171 76 −1記の如き実験結束から明らか<’L如く、本発明り
法により得られた投与群は反応前の投与群に比し、渋れ
た荊成阻止率を得るこ、どがでさた。
図面は培養ろ液から抽出した椎茸菌糸体の粗酵素液をセ
ノアロース6Bににり分画したグラフである。 特許出願人 野FT1食菌二U業株式会ネl “1′11”、Yi“
ノアロース6Bににり分画したグラフである。 特許出願人 野FT1食菌二U業株式会ネl “1′11”、Yi“
Claims (1)
- (1)多糖を含イ1ηる植物繊維から多糖成分を仙1[
IJる]二線ど、十記工稈により得られた抽出液に](
!了菌力′1に属Jる菌糸体から抽出した粗酵素液を添
加J−る上程と、ト記■稈により得られた粗酵素液を多
糖成分を含有覆る十記仙出液に添加uしめて、最適1)
l−1、最適?品度の下に反応せしめるI程とJ、り
なる多糖の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15227082A JPS5941302A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | 多糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15227082A JPS5941302A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | 多糖の製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5941302A true JPS5941302A (ja) | 1984-03-07 |
Family
ID=15536820
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15227082A Pending JPS5941302A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | 多糖の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5941302A (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US7883708B2 (en) | 1999-12-15 | 2011-02-08 | Amino Up Chemical Co., Ltd. | Substance derived from basidiomycetes culture, method for producing it and its use |
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-
1982
- 1982-09-01 JP JP15227082A patent/JPS5941302A/ja active Pending
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