JPS5938204A - 多糖類及びその製法並びにそれを有効成分とする降コレステロ−ル剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明伏コレステロール上昇抑制作用を有する！ｌ′ｒ
規多糖類及びその製法並びに本多相類を有効成分とする
呻コレステロール剤に関するものである。

従米有胞子細艷（バチルス　ポリミキサ）の生産する多
８！１類の製造、その成分については多くの発表がある
。例えば特公昭４２−７６００号公報、日本農芸化学会
誌４２＠４号　１７８〜１８４頁（１９６８年）　、１
ｔＩ１誌４２巻７号４３１〜４３４負（１９６８年）、
同＃；４３巻１１号７８０〜７８３負（１９６９年）、
　同誌４４巻６号２７０〜２７４　Ｎ　（１９７０年）
等、そして、これらの研究によシ得られた多糖類はグル
コース：マンノース：ガラクトース：グルクロン岐；８
ニア：３：５又は３：３：１：２の糖構成を有する高粘
稠性の多糖類でおる。そして、これらの多糖類は高粘稠
性のため食品、化粧品の雌加剤、製紙用、石油、井戸排
土用、鉱石の浮遊選鉱用、接着用等に利用する試みがな
されている。

しかるに、近時、前記多糖類のうち、特定の分子＠４を
４１するものが皿ｔ＃コレステロール（＋ｆｉ上引押引
抑制作用することが判った（特開昭５７−２９２９２号
公報等）。

本発明者等は降コレステロール作用を有する多糖類を広
く研究したところ、新菌株であるバチルス　ポリミキサ
Ｓ−４が生産する多糖類が公知の多糖類と、！１４なる
ｌ１ｌｌ栖成即ち、グルコース：マンノース：ガラクト
ース：グルクロンに：マンヌＯ／１’）？　＝　２．４
〜３．２　：　２．４〜３．０　：　１　：　１．５〜
２４　：　０．８〜２４　　よシ成る新規組成の多糖類
であることを見い出し、そしく、この多糖類が優れた呻
コレステロール作用を有することも見い出し本発明を光
取した０ 本発明は構成糖及び糖構成比がグルコース：マンノース
：ガラクトース：グルクロン酸：マンヌロン酸±２．４
〜３．２　：　２．４〜ａ、ｏ　：　ｔ　：　ｔ、ｓ〜
２．４　：　０．８〜１．４　　よ口０、分子輩２０〜
１６０万、　比旋光巣〔α）”　＝　＋　６４〜＋９０
　　（ｃ＝０．３％、ｌ？５副ＩＨ，Ｏ）、赤外線吸収
スペクトル：第１図の通り、溶解性が水、ホルムアルデ
ヒド、ギ酸、苛性ソーダ（ＩＯＭ）　ＫＪ６１１ｍ、ジ
メチルスルホキサイド、ベンセンに絵俗、エタノール、
アセトンに不治、呈色反応がモーリッシュ法で亦紫色、
アンスロン法で青緑色、フェノール硫酸法で黄橙色を有
する新規多糖類及びその塩。この多糖類又はその鳩をバ
チルス　ポリミキサ８−４を培来して得られる培養液か
ら採取することによって製造する方法。並びにこの多ｓ
類又はその塩を有効成分とする吋コレステロール剤であ
る。

本発明の多糖＃４を生産するバチルス　ボリミキサＳ−
４は新菌株で微］−研寄第１６４号（Ｆ’ＥＲＭ　ＢＰ
−１６４）として通商産業省工業技術院微生物工業技術
偵究所に寄肚しである。

その菌学的性質は次の通りである。

Ａ　形態 工）グラム染色性：パリアブル ２）細胞の形　　：形　円筒形 大きさ　０．６〜１．０　Ｘ　２．５〜６．０μｍ配列
　単−又は旬鎖 ３）胞１子形成　　：形　長円形 大きさ　１．０〜２．Ｕ　Ｘ　２．（１〜３．ｏ　μｍ
ｈｌ＋６　中央（平ヤｆ） 胞子檎　形成する ４）硬毛（連動性）：周鞭毛（＋） Ｂ　生理的性質 １）栄養寒天培地上のコロニー：粘液状２）　グルコー
ス寒天培地上のコロニー二粘赦状３）１−フｏ−ｇ大培
地（グルコース）上のコロ二−二粘液状 榎　生育条件：　４℃　　　− ２５℃十 ３７℃十 ５５℃　　　− ５％ＮａＣｔ− ７４ＮａＣ１− 嫌気性状態　十 ５）クエン酸塩の利用　　− ６）色素生成　　　　　　− Ｃ生化学的性質 １）　カタラーゼ生成　　　十 ２）オキシダーゼ生成　　− ３）　メチルレッド反応（グルコース）＋４）グルコー
スからのアセトイン生成　＋５）グルコースの０／Ｆテ
スト　　Ｆ ６）緻・ガスの生成 グルコース　　　　＋ キシロース　　　　士 ガラクトース　　　＋ フジクトース　　　＋ マンノース　　　　士 アラビノース　　　＋ ２クトース　　　　＋ シュクロース　　　＋ でんぷん　　　　　＋ マンニトール　　　＋ ７）硝口〈堪の還元　　　　　＋ ８）　メチレンブルーの還元　十 ９）　インドールの生成　　　− １０）　　帆化水素の生成　　　　− １１）　　ミルク　縦１！ｊ＋ ペプトン化　　＋ １２）カゼイ／分解　　　　　＋ １３）ゼラチンの欧化　　　　十 このｌｉ　ｅｌｉ株バチルス　ポリミキサＳ−４より本
発明のＶ「親炙糖類を得るには、通常の微生物が利用し
得る公知の栄養泥を含有する培地で公知の方法で培養す
る。例えば炭素源としてはグルコース、クリセリン、蔗
糖、殿粉、マルトース＋　ｌＩｌ’Ｊ植物油などが使用
でき、蓋素詠としては例えば大豆粉Ｉ肉−’−キス１１
１母エキス、ヘフ）ン、コーンステイープリカー、綿実
粕などの有機物並びに仏′酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、４１ｆ”４１Ｍアンモニウム、リン敵アンモニ
ウムなどの無様体窒素が使用できる。又必要に応じて食
塩、塩化カリウム、リンＭ塩、その他の虚金属塩などの
無磯塙知及びビタミン類全除加する。その他、発酵中の
発泡を抑制するため、シリコーン（信越化学ｒ、４１刺
ｍ俤）などの１６泡消を３ｈ　ｉｅ、ｓ加することもで
きる。

上記培地にバチルス　ポリミキサＳ−４ｆｆｉ接橿し、
湿）１ｔｌ　ｐＨ，ｊｍ気撹拌及０−％ｈｒ時１ｉＩの
ような発酵知性は最大殿の本発明の新月、多１１．ｌＩ
類が紡績するように選択する。例えば、発Ｍ条件として
は、２０〜４０℃、好１しくは２８〜３２℃、ｐＨ５〜
９、好ましくは６ｆＪ〜７．０において１〜６日、好ま
しくは３〜４日間行うのが肩利である。

以」二の如くして得られた培養液から本発明の多糖類を
１１４彫するには、通常の方法、例えは培養液をｔ濾過
し、菌体をＰ別した０５１Ｍより、エタノール又はメタ
ノールなどによる沈鑵、限外−過等の適胸の士民により
中５比１＃鞘製することによって得られる。

次に本開明の多糖類の製造例をボす。

製造例 結晶ブドウ砧３０２、ペプトン２ｆ、尿素０．５　Ｆ　
。

Ｍｇ５Ｏ４−７１１２０１≦芦　、　　ＫＨ２１ノｏ　
４　　ｉ　　≦Ｔ　　、　　ＭｎＳＯ４・７１１２０　
０．０６ｉ’　、　ＣａＣＯ３５ｆ　＆ひ水ＩＬよりｌ
る培地をｐＨ７，０に６１−１船佐、１２０’ＣＩ５分
間叙菌し、この培地１２　ｔに２８℃で、上記培地と同
一組成の培地にバチルスボリミキザ８−４を２４時１ｖ
＋培養した種母６００−を接種し、１２か分で無菌空気
を送υながら６日間培養する。

培養が完了した培養液を１０倍の水で稀釈し、珪藻土（
ダイカライド　オリエント社製パーライトＡ４１９ｉ？
Ａ品名）で１過し、更に０．４５μのメンプラン　フィ
ルター（東洋Ｐ紙製）濾過し、分子量５０、０００カツ
トの限外−過（バイオエンジニャリング社＋７）　ＵＦ
　−ＳＷＭ　８５Ｖ−１）を行い分子ｙ　ｓｏ、　ｏｏ
ｏ　　以上のものをｐ別し、固型分１．５−〇液８０ｔ
を得る。

これを４０℃で２０時１１４１　Ａ空煉結乾燥を行った
後、粉砕して粉末状の本発明の多糖類１２０ｔが得られ
る。

なお、本発明の多ｉＡ！１＝はグルクロン酸、マンヌロ
ン酸を含有しているから、これらの酸のナトリウム、カ
リウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム
等のアルカリ土類金属塩等の塩類とすることもできる。

以上の方法によって製造された本発明の多ｇｓ類は分子
量が１００万以上のものが多く製造される。

従って、その利用面において１００万以下の低分子の多
糖類を王として１＃造するには、１１１述の方法により
得られた培養液を塩叡寺の酸によシ処理すると２０〜１
００刀の任怠の分子量の　本発明の多糖類がイ与られる
。

かくして得られた多糖知社分子警２０〜１６０万、」七
旋′Ｘ１建〔α〕芸芸子＋６４〜＋９０ｃ＝０．隷、カ
５ｍ。

）１２０）、元糸分析イー、Ｃ：　４３．５％、　Ｈ：
　６．２５％、ラメ外脚吸収スペクトルは第１図に示す
通シの物質である。

この物質を２Ｎ硫酸で１００℃、６時間かけて加水分ｈ
ｔＬ、これをＰ紙クロマトグラフィーによシ分離定性す
ると、グルコース、マンノース、ガラクトース及びウロ
ンばより成ることが判った。そこで、この各単糖をアセ
チル９４体としてガスクロマトグラフィーにより定電す
ると、グルコース：マンノース：ガラクトースの＋ｈｌ
ｈ比が大体３：３：１であることが判り、更にウロン酸
の＄１　！ＩＡについて見るため、この物質を還元して
ウロン酸のカルボキシル基をアルコールとした後、単糖
類の定椿と同様に加水分解した汝アセチル化してガスク
ロマトグラフィーにかけて定鎗し、グルコースとマンノ
ースの増量からグルクロン酸、マンヌロン１便であるこ
とが判り、前に測定したグルコースとマンノースの鈑を
走引いてグルクロン＋！髭、マンヌロン酸の＋ｉ４　Ｊ
戎比を３１足した。その結果、本発明の多糖は、グルコ
ース：マンノース：ガラクトース：グルクロン醸：マン
ヌロン酸が２．４〜３．２　：　　２．４〜３．０　：
　１　：　１．５〜２．４　：　ＯＢ〜１．４　　よシ
成ッテいることが判った。

本発明の多ａ知の化学的性質は溶解性：水、ボルムアル
デヒド、ギ敵、苛性ソーダ（ＩＯＭ）に８浴、エタノー
ル、アセトンに子苗、ジメチルスルホキサイド、ペンセ
ンに離俗でめった。呈色反応はモーリッシュ法で亦紫已
、アンスロン法で宵緑色、フェノール硫酸法で黄橙色を
示す。

本発明の多糖類は上述の如く、文献未知の新規物質であ
る。そしてこの物質ｒｉ囲者に降コレステロール作用を
廟するものでるる。

次に本発明の降コレステロール作用を有することを示す
試験を示す。

降コレステロール作用ｖＸ、験 ｌ　試験法 生後３週令のンロネズミを多数曲ｒｌＴ販の固型飼料（
例えばメリエンタル酵母←）製ラット・マウス・ハムス
ター飼育用１ｖｌ　Ｆ）で５日間１１ｎＩ召シ、これ舎
Ａ、Ｂ２＃＋に別け、Ａ徂°をカゼイン２２％、ラード
０．１％、塩類混合３．５％、ビタミン混合１．０％、
塊化コリン０．１１％、　シュークロース６３．３９％
の粉末飼料（無コレステロール食と略称）で４日間飼ｌ
する。

Ｂ　Ｊｒ＋−をカゼイン２２％、ラード１０％、塩類混
合３．５％、ビタミン尻合１．０％　、　ｔ４化コリン
０．１１％、　コレステＣ’−ル０．５％、コール敞ナ
トリウム０．２５％、　シュークロース６２．６４％の
粉末飼料（コレステロール食と略称）で４日間飼育する
。４日後Ａ群及び８群より各６匹を採シ、晴頭層殺し、
頚部より採血した後、肝臓を揃出して重音測定を行った
。血液は恵心分耐して血７ｕを採取した。肝臓及び血清
は分析時まで凍結保イＹした。血清コレステロールはそ
の１＼、肝カ゛表コレステロールはけん化俊、不けん化
物区分をとり、それぞれデタミナーＴＣ（Ｑ第１１醗＃
−仙）製）を用いて定量した。

七の佐Ｂ　４＋１を更に４ｓ　（ａ　＋　ｂ　＋　ｃ　
＋　ｄ＞に分け、ａｆｉＦにはＭｔ＋　記無コレステロ
ール食、ｂ群には無コレステロール食に４％の本発明の
多糖類を加えた飼料、ｃｌＮ−には前記コレステロール
食、ｄ相・にはコレステロール食に４％の本発明の多糖
類を加えた駒材を夫々与えて祠有した。

このＡ　Ｌ’Ｐ、Ｂ　（ａ）　ｍ＋、Ｂ　（ｂ）群、Ｂ
　（ｃ）群、Ｂ　（ｄ）群を分離して飼付始めてよシ２
日依各群より６匹全徊出し、尾部より採血して、その血
清のコレステロールの蛸を０１１記と同様に測定した。

更に２日佐、Ａ　ｆｉｌ’よシロ匹、Ｂ　（ａ）、Ｂ　
（ｂ）、Ｂ　（ｃｌ、Ｂ　（ｄＪ群よシ夫々５匹を断頭
層殺蚊開腹し、血清、肝臓のコレステロールを前記とＦ
ｉｌ様に測定した。更に４日佐同妹にＡ群から６匹、Ｂ
　（ａ）、Ｂ　（ｂ）、Ｂ　（ｃ）、Ｂ　（ｄ）各群か
ら５匹丁つ１ｒ囲ノイ籾後、開腹し、血清、肝臓のコレ
ステロールを測定した。史に４日後Ａ　１ｒＰがら６匹
、１１　（ｂノイｊ（、Ｂ　（ｄ）肝から５匹ずっ断頭
Ｉｎ殺して皿？＃　％　ｎｒ　＋＋＝コレステロールを
上記と１０１様に測定した０ この賊躾法全第２図で示した。図中、○は測距時期を示
す。

区験結呆 上記試験によシ測定した結果は血清ｄｔ当シのコレステ
ロールの量りを各時期のＡｈ（無コレステロール食）　
実Ｗ　、Ｂ　（ａ）　＆”＋　（コレステロール食の佐
無コレステロール＊−ラＢ　（ｂ）右■　（コレステロ
−ル食の佐無コレステロール十本究明多糖類距加食）二
重実線、Ｂ（ｃ）群（コレステロール食の後コレステロ
ール食）　点ｍ、Ｂ（ｄ１群（コレステロール図は上記
試験によシ肝ｊ賊中のコレステロール五ｉを第３図と同
じ群、同じ時期の供試シロネズミよυ揃出測足した結果
を図示したものである。

以上の結果よシ明らかな如く、コレステロール食で駒角
佼に無コレステロールに本発明の多糖類を加えた場付は
、始めから無コレステロール食の場合と殆んど同等にな
シ、またコレステロール食でＭ　ＮＱ後コレステロール
賞に本発明の多糖ｇＪ＋を加えた場合は、対照であるコ
レステロール食で祠有した場合よシ明瞭に血清、肝臓の
コレステロールが低下する。

従って、本発明の多糖類は降コレステロール剤として七
オリに用いることができる。

マウスに対する急性毎性￥Ａ、験では５．８１８　ｆ／
にりの経口投与でも何ら問題が起きず、安全な物質であ
る０ 本発明の多糖知又龜その堪を有効成分とする呻コレステ
ロール？ｔｌ＋としては、本発明の多糖類又は薬学的に
Ｉｒ［容される塩のいずれかを、當用の医薬用（１１体
と配合して製剤することができる。

本発明の多糖類の投与形態は、柱口、注射などの形態で
ある。

経口用固形製剤をｈ岬製する場合は有効成分に賦形ハリ
、結合創、崩壊剤、所沢ハ’Ｉ　Ｍ矯味剤等を加えた彼
、常法によシ錠剤、顆粒剤、カプセル剤等を作ることが
できる〇 また、注射ハリをル・４製する場合は、本発明の多糖類
又は薬学的に許容される塊の分子業２０〜５０刀のもの
にｐｎ　ｍ　ｉ剤、績１−■ハリ、女矩剤等張剤等を麟
力ｌして留去により皮下、静脈内注射ハリを作ることが
できる。

本発明の多糖類の投与振は症状により異なるが、成人で
は４５０〜９００キを１日に３〜４回に別けて投与する
。

次に本発明の眸コレステロール剤の鯉刑例を示す。

例 本発明の多糖類１０部、乳糖２０部、コーンスターチ２
０部、ステアリン醒マグネシウム２部　を混合し錠剤機
により１錠５００〜の錠剤とする。

【図面の簡単な説明】

８Ｉ４１図は本発明の多糖類のＫＢｒ法による赤外線吸
収スペクトルである。 第２図は本発明の多糖類の血清及び肝臓におけるコレス
テロールの低１試験の作業順の概略を図示した図である
。 第３図は同試験の結呆、血清中のコレステロールが低下
した状態を示したグラフである。 第４図は同肝臓中のコレステロールが低下した状態を示
したグラフでめる。 図中、点線はコレステロール食のみで１Ｍ￥したシロネ
ズミのコレステロール）ｇ’ｒ、−−−−−ｔｒｉコレ
ステネズミのコレスプロールｊｌｌ−，４ｂ　訳ハコレ
ステロ−Δ ル角の懐コレステＣＩ−ル貢に４％の本晃；町の多格゛
知ｋＨΣ加した℃１１１料で一一〇したシロネズミのプ
レスチロール敏、ニル実がシはコレスプロール食の侯無
コレステロール共に４優の本う６明の多糖褪を添加し７
たｒ！呵科で飼育したシロネズミのコレステロールｈ２
、実線は無コレステロール共のみで納付したシロネズミ
のコレステロール逍ヲ示す１．１１４岨出願人　　　昭
第１１産菜株式公社代　　理　　人　　　　　小　　　
掘　　　　　　荻（ｒｋか２名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　下記理化学的性質を有する多糖類及びその塩１）
   分子量　　２０〜１６０万 ２）比旋光度　〔α）Ｄ　＝＋　６４〜＋９０　（ｃ＝
   ０．３％。 １、−５ｃｍ　＋　Ｈ２Ｏ） ３）赤外線吸収スペクトル　ホ１図の通り４）　　Ｉ’
   ｒ７ｊＷ性　　水、ホルムアルデヒド、ギ酸。 苛性ソーダ（ＩＵＭ）に易溶、ジ メチルスルホキサイド、ベンゼ ンに離俗、エタノール、アセト ンに不溶。 ５）呈色反応　モーリッシュ法：赤紫色、アンスロ／法
   ：宵林色、フェノール 硫酵法：負橙色 ａ＞糖組成ｙルコース、：マンノース：カラクトース：
   グルク日ン酸：マン ヌロン酸＝２．４〜３．２　：　２．４〜３ｊ）：１：
   １．５〜２．４：０．８〜１．４２、　バデルス　ポリ
   ミキサＳ−４を培養して得られる培養液から下記理化学
   的性質を有する多糖類及びその塩を製造する方法。 υ　分子′Ｍ、２０〜１６０万 ２）比旋光度　〔α〕υ＝＋６４〜＋９０　（ｃ＝Ｑ、
   ３％。 か５ｏｎ　、　Ｈ２Ｏ） ３）赤外線吸収スペクトル　記１図の通υ４）俗解性　
   　水、ホルムアＡ・デヒド、ギ酸。 苛性ソーダ（ＩＯＭ）に易溶、ジ メチルスルホキザイド、ベンゼ ンＫ　ｋｋ　鹸、エタノール、アセト ンに不溶０ ５）呈色反応　モーリッシュ法：赤紫色、アンス口”法
   ’青緑色、フェノール 硫酸法：黄橙色 ６）　　ｍ組成　　　グルコース：マンノー；１．ニガ
   ラクトース：グルクロン醒：マン ヌロン叡＝２．４〜３．２　：　２．４〜３．０：１：
   １．５〜２．４：Ｏ，ＢＮ２．４３、　下記理化学的性
   餉を南する多１．１１類又はその塩を手動成分とする降
   コレスプロール剤。 １）分子−２０〜１６０万 ２）　比旋光度　〔α〕■＝＋６４〜＋９０　（ｃ＝０
   ．３％　。 ｔ＝＝５ｃｒｎ＋　Ｈ２Ｏ） ３）赤外線吸収スペクトル　即、１図の通り４）溶解性
   　　水、ホルムアルデヒド、ギ酸。 苛性ソーダ（ｔｏＭ、）に易鯵、ジ メチルスルホキザイド、ベンゼ ンに離俗、エタノール、アセト ンに不治０ ５）呈し反応　モーリッシエ沃二非紫色、アンスロン沃
   ：首緑色、フェノール 硫酸法＝１（橙色 ６）Ｎ組成りルコース：マンノース：ガラクトース：グ
   ルクロン酸：マン ヌロン醒＝２．４〜３．２　：　２．４〜３．０：　１
   　：　１．５〜２．４　：　０．８〜１．４