JPS63185352A - 腫瘍の予防効果を有する食品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、構成糖の一部または全部がＤ−グルコサミン
もしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンであるオリゴ
糖を含有する食品に関する。さらに詳しくは、抗腫瘍性
を葡する構成糖の一部または全部がＤ−グルコサミンも
しくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンであるオリゴ糖
を有効成分として含有する食品に関する。

〔従来の技術〕

近年、健康に対する関心が高まっている中にあって種々
の食品が市販されており、その中には、抗腫瘍性を有す
る成分を含む天然物、例えば霊芝、シイタケ等を配合し
た健康食品も見受けられる。

抗腫瘍性を有する天然物としては、上記の担子菌類の他
、地衣類、酵母、カビあるいは、クマザサ、小麦ワラ、
バガスなどの植物体等が知られているが、その活性の本
体は多糖類であることが判明している。これらの抗腫瘍
活性の点で著効あるいは有力であると評価されている多
１１ｆ類は、はとんどβ−Ｄ−グルカンで、特にβ−（
１→６）分岐をもつβ−（１→３）　−Ｄ−グルカンを
主鎖とする分子量１万以上のものが主である。

一方、抗腫瘍性という点では、エビやカニ等の甲殻類に
存在する多糖類のキチンも活性を有することが知られて
おり（特公昭５９−２７８２６　）、その脱アセチル化
体であるキトサンにも抗腫瘍性が認められている。さら
に、キチンのオリゴ糖つまりＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミンを構成糖とするオリゴ糎も＠腫瘍性を有すること
が明らかにされているが、実験動物への経口投与による
扼腫瘍性に関しては未知であり、また、これらのオリゴ
糖を配合した食品は市販されていない。

〔発明が解決しようとする間顯点〕

最近、健康食品に関してその効果の面からの見直しが行
なわれている中で、抗腫瘍性という観点から予防的効果
のある物質を配合した食品も求められているものの一つ
であると考えられるが、前述の多糖類は、クレスチン等
数例を除き、マウスに対する腹腔内投与（１−ｐ−）も
しくは静脈内投与（ｉ、ｖ、）では著効あるいはを効と
認められるものの、経口投与（ｐ、０．）では有効と認
められないものがほとんどである。すなわち、キチン、
キトサンに関していえば、前者は水、エタノールおよび
有機酸等に不溶であり、かつ、人体の消化器官には分解
酵素であるキチナーゼが存在しないため、ｐ、０．では
吸収されに＜＜、一方、徒者も有機酸には可溶であるが
、キトサナーゼが存在しないので吸収されにくい。

また、マウスへの多糖類の投与時期に関しては、より予
防的考え方に近い腫瘍移植前投与による動物実験では抗
腫瘍性効果（腫瘍の予防的効果）の認められない多糖類
が多い。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らはこうした事情に鑑み、キチンやキトサンを
低分子化したオリゴ糖を用いることにより経口投与した
際の吸収型を上げることができると考え、予防という観
点から鋭意検討した結果、Ｄ−グルコサミンもしくはＮ
−アセチル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とするオリゴ糖
が、マウスを用いた腫瘍移植前投与かつＩ）、Ｏ，によ
る動物実験において腫瘍の予防的効果を有することを見
出し、発明を完成するに至った。

すなわち、　本発明は、構成糖の一部または全部がＤ−
グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
であるオリゴ糖を含をする食品である。

本発明で用いられるＤ−グルコサミンのオリゴ糖の製法
は、バチルスＮｏ、７−Ｍ（微工研菌寄第８１３９号）
の培養によって生産される酵素であるキトサナーゼによ
ってキトサンを分解する方法であり、Ｎ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンのオリゴ糎はそれをアセチル化したもの
、あるいはキチンを加水分解したものである。これらの
オリゴ糖は、水溶性であるため種々の食品に添加する際
に様々な応用が可能となる他、原料がエビやカニ等の甲
殻であるため、価格も安く大量供給できるという点で食
品としての利用に適している。

バチルスＮｏ、　７−　Ｍは、長崎県南高来郡／１１浜
町雲仙の原生沼の土壌よりキチンまたはキトサンを唯−
の炭素源とする培地に生育しうる細菌として分離された
バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐ、　Ｉ　Ｎｏ、　７
株を親株として、この親株をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
ソ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＣ）で処理して突然
変異を誘発させ、得られたストレプトマイシン耐性の変
異株の中から、高活性のキトサナーゼを生産しうるもの
として分離された変異株であって、微工研菌寄第８１３
９号（ＦＥＲＭ　Ｐ　−８］３９　）として通商産業省
微生物工業技術研究所に寄託されている。

バチルスＮｏ、　７−　Ｍの菌学的性質は以下に示され
る。

Ａ、細胞の形態 （１）細胞の形および大きさ：短桿菌、（肉汁および肉
汁寒天斜面培養、３７″Ｃ，２４〜７２時間の培養） （２）細胞の多形性の有無二煎し、 （３）運動性の有焦：有り、 （肉汁寒天半流動高層穿刺培養） （４）胞子の有無：有り、内生胞子および裸の胞子、球
状、 〔トーナー（Ｄｏｒｎｅｔ　）の染色法およびウィック
（Ｗｉｔｚ）変法〕 （５）ダラム染色性；陽性、 〔肉汁寒天斜面培養、３７６Ｃ，１８時間、ヒスツカ−
（Ｈｕｃｋｅｒ　）の変法にヨリ染色〕Ｂ、各培地にお
ける生育状態 （＋）肉汁寒天平板培養（３７８０１２４〜１６８時間
）：糸状の周縁を有する円形で、隆起した乳白色のコロ
ニーを形成する。コロニーの表面は凹凸でやや光沢があ
り、半透明である。時間の経過とともに盛上ってくる。

色素は生産しない。

（２）肉汁寒天斜面培養（３７６Ｃ１２４〜１６８時間
）：拡布駄に盛上っだ乳白色のコロニーを形成する。

コロニーは凸円形の隆起があり、光沢がある。生育は良
好で、時間とともに拡がってくる。色素は生産しない。

（３）肉汁液体培養（３７６０１２４〜１６８時間）：
表面に膜を形成しない。時間とともに全体的に濁ってく
る。底部に紫状（ｍ粒跋）の沈デンが形成され、徐々に
多くなってくる。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養（２５６Ｇ、２４〜１６８
時間）： 穿刺線に沿って生育し、液化する。表面および内部は漏
斗状に生育し、液化する。液化部分は白濁する。

（５）リドマスミルク（３７°０１２４〜１６８時間）
；２日後から上部が少しずつ液化し、４日目には色は完
全に変色し、酸性となった。凝固はしない。

時間の経過とともに、液化は進み、半透明になった。

Ｃ０生理学的性質 （］）硝酸塩の還元ニー （硝酸塩肉汁培地、３７°０１２４〜１２０時間）（２
）脱窒反応ニー （駒形らの方法、発酵管を使用、３７°Ｃ１２４〜１２
０時間） （３）ＭＲテスト：＋ （３７’Ｃ，２４〜１６８時間） （４）ＶＰテスト（アセチルメチルカルビノール生成試
験ニー１− （３７°０１２４〜１６８時間） （５）インドールの生成ニー （３７℃、２４〜１６８時間） （６）硫化水素の生成−一 （ＴＳＩ寒天法、３７°Ｃ，２４−１６８時間）（７）
デン粉の加水分解：＋ （３７６０１２４〜１６８時間） （８）クエン酸の利用 （コーザーの培地、３７℃、２４〜１６８時間）二　− （クリステンセンの培地、３７°Ｇ１２４〜１６８時間
）：十 （９）無機窒素源の利用（３７’Ｃ，２４〜１６８時間
） 硝酸塩：未定、 アンモニウム塩：未定、 （１０）色素の生成 （マンニット・酵母エキス寒天斜面培地）：〔キング（
Ｋａｎｇ）　　Ａ寒天斜面培地コニ−（１１）蛍光の有
無：無し く１２）ウレアーゼ二十 （クリステンセンーウレア寒天培地、３７°０１２４〜
１６８時間） （１３）オキシダーゼ：＋ （肉汁寒天培地、３７”Ｃ，２４〜４８時間）（１４）
カタラーゼ：＋ （肉汁寒天培地、３７℃、２４〜４８時間）（１５）生
育の範囲＝　（肉汁寒天培地）温度：未定、 ｐＨ：　５〜１０、 添加食塩濃度：未定、 （１６）酸素に対する明度：好気性 （１％グルコース肉汁高層寒天培地、３７°Ｃ１２４〜
７２時間） （１７）　　Ｏ−Ｆテスト〔ヒュー−ライフソン（Ｈｕ
ｇｈ　−Ｌｅｉｆｓｏｎ　）法、３７°Ｃ，Ｄ−グルコ
ース〕　：発酵的に酸を生成する。

（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ　） （１８）糖類からの酸およびガスの生成の有無（３７８
Ｃ１２４〜１６８時間）： 糖　類　　　　　酸　　　ガス Ｄ−グルコース　　＋　　　− Ｄ−マンノース　　−　　　　− Ｄ−ガラクトース　−− Ｄ−フラクトース　十　　　　− Ｌ−アラビノース　−　　　− Ｄ−キシロース　　−− Ｄ−ソルビット　　−− Ｄ−マンニット　　−　　　− イノシット　　　　−　　　− マルトース　　　　＋　　　　− サッカロース　　　＋　　　　− ラクトース　　　　−　　　　− デン粉　　　　　　十　　　　− セルロース　　　　−− グリセリン　　　−　　　− 以上の菌学的性質について、バージエイス・マニュアル
・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒＩ２ｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）の第８版（
１９７４年）を検索したところ、Ｎｏ、　７−　Ｍ株は
バチルス（Ｂａｒｉ　Ｉ　ｌｕｓ　）属に属するのが相
当であることがわかった。

バチルスｌＪｏ、　７−　Ｈにより生産されたキトサナ
ーゼの酵素化学的性質は以下に示すとおりであるう（１
）作用： キトサンに作用し、分子の内部銀から任意にβ−１，４
結合を分解して、主としてキトサンオリゴ１１１　（Ｇ
ｌｃＮ）　　（ｎ＝２−８＋　（２量体〜８量体）を生
成する。キトサンオリゴ糖は高速液体クロマトグラフィ
ーを用いてキトサン分解液から分離することができる。

この分解液におけるキトサンの分解度は約４５％である
。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ１にも作用し、
ある程度はこれを分解するが、キチンには全く作用しな
い。

（２）作用温度範囲および最適作用温度：可溶性キトサ
ンを基質とした場合、８０１′Ｃまで作用し、最適作用
温度は５０６Ｃである。

ｐＨ６，０において１０分間反応させた場合の温度と比
活性の関係を第１図に示す。

（３）作用ｐＨ範囲および最適ｐＨ： ｐＨ３〜９の範囲において作用し、最適ｐＨはｐＨ６で
ある。

１％可溶性キトサン１ｍｌに各ｐＨの緩ｇ液２ｎｉｌお
よび酵素液１　ｍＪを加えた反応液を３７°Ｃにおいて
１０分間反応させた場合のｐＨと酵素の比活性の関係を
第２図に示す。

（４）熱安定性： ５０６Ｃにおける１５分間の保温まで、はぼ安定で、６
０℃における１５分間の加熱により、酵素の約４０％が
失活し、７０℃における１５分間の加熱により、完全に
失活した。

温度と比活性の関係を第３図に示す。

（５）ｐＨ安定性： ０．１Ｍ緩衝液中で３０’Ｃにおいて２時間装置した後
、残存する酵素活性を測定したが、ｐＨ５〜１１の範囲
において安定であった。ｐＨ１０〜１１において安定で
あることは、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産され
たキトサナーゼの大きな特徴の一つである。ｐＨと比活
性の関係を第４図に示す。

（６）阻害剤： バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産されたキトサナ−
ＰｂＣ１、ＡｇＮ０　　、およびＰＣＭＢの存在により
はは１００％が阻害された。

（７）基質特異性： 種々の基質を使用し、基質の終濃度を０．２５％とした
時に、酵素反応液４　ｍｌ当り酵素蛋白質１榴によって
１時間後に遊離する全還元糖とへキソサミンのｆｉｌ（
ｍｇ／ｍ１ｌｊ５白質／時）を測定した。

その結果が第１表に示される。

（以下余白） 第１表　基質特異性 バチルスＮｏ、　７−　Ｈにより生産されたキトサナー
ゼは、コロイダルキトサン、可溶性キトサンおよびグラ
イコールキトサンをよく分解し、カルボキシメチルセル
ロース（ＣＭＣ）も若干分解したが、粉末キトサンには
作用しなかった。またコロイダルキチン、グライコール
キチン、粉末キチンおよびメチルセルロースは全く分解
しなかった。

（８）分子量： ５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法により分子量を
測定した結果を第５図に示す。第５図において（○）は
バチルスＮｏ、　７−　Ｈにより生産されたキトサナー
ゼの分子量であって、約４１　、０００である。

セファデックスＧ　−１００を用いたゲル濾過法により
分子量を測定した結果を第６図に示す。第６図において
（○）はバチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産されたキ
トサナーゼの分子量であって、約３０．０００である。

（９）酵素力価の測定法： １ｇの粉末キトサン（２８メツシユ）を５ｏｍ、、ｇの
０．１Ｍ酢酸水溶液に溶解し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム
水溶液でｐＨ６，０に調整した後、０．１Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ：　６．０３を加えて、全容を１００ｍ７にして
、基質の１％可溶性キトサン溶液を調製する。

３７℃において５分間ブレインキュベートした基質の１
％可溶性キトサン溶液１　ｍｌ：に、同様にブレインキ
ュベートした酵素液１　ｍｌｌを加え、３７”（：にお
いて正確に１０分間酵素反応を行なわせる。その後反応
液を３分間煮沸して酵素反応を停止させ、反応液中に生
成した還元糖を定量する。

ど この条件において１＃モルのグルコサミンに相当する還
元糖を遊離させる酵素量を、１単位（＋＋ｙ＋ｉｔ）の
キトサナーゼ活性とする。

参考例１ （種培養の調製） ２５０乳で容三角フラスコに、酵母エキス０．８％、ペ
プトン０．４％、肉エキス０．２％、コロイダルキトサ
ン０・５％を含む液体培地（ｐＨ：　７．２）　　５０
７ｎ７！を入れ、常法により殺菌した後、これに予め液
体培養したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐ、　）　
Ｎｏ、７−Ｍ　（ＦＥＲＭ　Ｐ　−８１３９）を接種し
、３０℃において、１日間振どう培養した。

（酵素生産用培養液の調製） ５１容三角フラスコ２本に、上記と同一の組成の液体培
地をそれぞれｌｌずつ入れ、常法により殺菌した後、こ
れに上記で得られた種培養液４０ｍ１４を接種し、３０
６Ｃにおいて、４日間振どう培養した。培養液を６．０
０Ｏｒ、ｐ−ｍにおいて遠心分離して、菌体を除去し、
得られた上澄液のキトサナーゼの活性を前記の酵素力価
の測定法によって測定した。上澄液１ｍ７！当り０．９
９ｊ１位であった。

（酵素液のＭ製） 上記で得られた上澄液を混合し、得られた混合液１．８
１　Ｊに固体硫安１，０１５１１（硫安８０％飽和に相
当する）を加え、濾過し、得られた沈デン物を蒸留水に
溶解し、１７７ｍＪとした。この酵素液を蒸留水、引き
続いて、０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ：　６．０）に
対して透析した径、得られた酵素液を、予め０．０２　
Ｍリン酸Ｎ衝液で平衝化したＣＭ−セファデックスＣ−
５０を充填したカラム〔２，６ｃｍ（径）×４５ｃｍ（
長さ）〕に流してキトサナーゼを吸着させた。はとんど
の不純蛋白質は素通り区分に集まっていた。このカラム
を０．０２Ｍリン酸靜衝液３５０７Ｍで洗浄した後、０
〜０，５Ｍの塩化ナトリウムで直線的濃度勾配により酵
素蛋白質を溶出した。

次にキトサナーゼ活性を示した第２１８〜２４０のフラ
クションを合し、これをダイアフローメンブレンフィル
ターＰＭ−１０（アミコン社製品）を用いた限外濾過装
置で１７倍に濃縮し、この濃縮液に、セファデックスＧ
−１００を用いるゲル濾過を行なった。

このゲル濾過のキトサナーゼ活性を示した第５０〜６３
のフラクションを合し、再びＣＭ−セファデックスＣ−
５０によるカラムクロマトグラフィーを行なった。前回
と同じ条件で酵素を吸着し、０〜０．５Ｍの塩化ナトリ
ウムで直線的濃度勾配により酵素蛋白質を溶出した。

以下に、Ｄ−グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−
グルコサミンを構成糖とするオリづ糖の製造法の例を示
す。

製造例１ ５０〇−容のビーカーに、キトサン１５ｇ　（脱アセチ
ル化度＝９９％）を取り、これに脱イオン水１５０−お
よびＩＮ乳酸８２．５−を加え、充分撹拌した愛、脱イ
オン水を加えて全体を３００ｍ１とした。

このキトサン乳酸溶液のｐＨは５．９０であった。

このキトサン乳酸溶液１０艷を試験管に取り、３７°Ｃ
の恒温槽において１０分間ブレインキュベートした。

これとは別に、参考例１のバチルスＮｏ、　７−　Ｈの
培養によって生産されたキトサナーゼ溶液を水で希釈し
、１０．５　ｕｒ＋４ｔ　、／艷とし、その１−を試験
管に取り、３７℃の恒温槽において１０分間ブレインキ
ュベートし、これを前記のキトサン乳酸溶液に加え、３
７８Ｃの恒温槽において反応させた。８時間経過後に、
試験管を沸騰浴に浸漬し、反応液を加熱して反応を停止
させ、反応液を遠心分離し凍結乾燥させた。これにより
、Ｄ−グルコサミンの重合度が主として３〜４のキトサ
ンオリゴ糖が得られた。

製造例２ ２５０ｍ１容の三角フラスコにキトサン５ｇ　（脱アセ
チル化＝９９％）を取り、脱イオン水５０艷およびＩＮ
酢酸２７．５−を加え、充分に撹拌した後、脱イオン水
を加えて全体を１００−とじた。このキトサン酢酸溶液
のｐＨは５．７４であった。このキトサン酢酸溶液を３
７″Ｃの恒温槽において１５分間ブレインキュベートし
た。

これとは別に参考例１のバチルスＮｏ、　７−　Ｈの培
養によって生産されたキトサナーゼ溶液を水で希釈しＩ
ｏ、５　ｕｎ１ｔ／−とし、その１０艷を試験管に取り
３７℃でブレインキュベートし、これを前記のキトサン
酢酸溶液に加え、３７℃の恒温槽において反応させた。

１時間４０分鍾に三角フラスコを沸騰浴に６分間入れ、
反応液を加熱して反応を停止させた。反応液を遠心分離
ｔノ、凍結乾燥してＤ−グルコサミンの重合度が主とし
て５〜６のキトサンオリゴ糖が得られた。

製造例３ ５０〇−容の三角フラスコに製造例１で得られたキトサ
ンオリゴＭ５１１を取り、水１００−とメタノールＩＯ
ｄを加え溶解した後、イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ　Ｔ−
Ｘ８　　（炭酸塩型）を１２０艷加え、溶液を０〜５°
Ｃに冷却した。これに無水酢酸ｌＯ−を加え、９０分間
撹拌した後イオン交換樹脂を濾過し水で洗浄した。得ら
れた濾液および洗液を合わせ、５５６Ｃ以下の温度で減
圧下溶媒を留去して、Ｎ−アセチル化度５０％のＤ−グ
ルコサミンのオリゴ垢が得られた。

製造例４ ５１容の三角フラスコに製造例２で得られたキトサンオ
リゴＭ５ｇを取り、１０％酢酸水溶液を加え溶解した。

この溶液に、撹拌しながらメタノール４００ｍ１を加え
、さらに無水酢酸１０−を加えた。室温で一晩撹拌し、
メタノール３１を加えてさらに一晩撹拌した。減圧濃縮
後、適量の水を加えて凍結乾燥して、Ｎ−アセチル化度
２０％のＤ−グルコサミンのオリゴ糖が得られた。

〔廃明の効果〕

本発明で用いられるＤ−グルコサミンもしくはＮ−アセ
チル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とするオリゴ糖の抗腫
瘍性に関しては、従来実験動物に対する腹腔内投与（１
−ｐ−）あるいは静脈内投与（ｔ、ｖ、）での効果は認
められているものの、経口投与（ｐ−ｏ、）での効果は
未知であり、他の抗腫瘍性効果類でも同様のことが多い
。また、実験動物に対する腫瘍移植前投与という形で効
果のある多糖類は少ないが、Ｄ−グルコサミンもしくは
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とするオリゴ
糖について経口投与（ｐ、ｏ、）かつ腫瘍移植前投与と
いう方法での動物試験において抗腫瘍効果が今回初めて
確認され、本物質は腫瘍の予防的効果という点で擾れて
いることが判明した。本発明では、それを食品に配合し
、食べることによって予防的効果を発揮しようとするも
のである。

〔実験例〕

次にＤ−グルコサミンもしくはＮ−アセチルグルコサミ
ンを構成糖とするオリゴ糖の腫瘍移植前投与による抗腫
瘍性効果（腫瘍の予防的効果）を示すｌ物実験の結果に
ついて以下に記述する。

１　実験材料および方法 （１）被験物質 被験物質は、製造例１．２．３および４で得られたＤ−
グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
のオリゴ糖を構成糖とするオリゴ糖を用いた。

（２）使用動物 動物は（株）チャールズリバーより４週令のＩＣＲ／　
ＪＣＬおよびＣ５７ＢＬ　／　６のＳＰＦマウス雄を購
入し、１週間の予備飼育後、億康な動物を選び実験に供
した。

（３）飼育条件 飼育は温度２３±２°Ｃ１温度５５±５％の他の区域と
隔絶されたバリアーシステムの飼育室で行なった。換気
回数は新鮮空気１時間３２回転、照明は人工照明により
７時から１９時までの１２時間行なった。実験期間中、
動物はプラスチック製透明ケージ（２＋５　Ｘ　３２０
　Ｘ　１３０朋、クリーンＳ　−ＴＰＸ　。

日本夕レア株式会社）に１ケージあたり５匹を収容し、
飲料水は紫外線殺菌灯・フィルター付きの自動給水装置
で、飼料は市販固型飼料（ＮＭＦ　−３Ｍｒａｄ照射、
オリエンタル酵母株式会社）を自由に摂取させた。また
、天敷は滅菌したものを使用し、１週間に２回の割合で
ケージごと交換した。

（４）実験群の構成および投与量の設定実験群の構成は
表１に示す、 （表１）実験群の構成 り−グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサ
ミンを構成糖とするオリゴ糖の急伸毒性試験において、
ＬＤ　　値は１５０００ｍｇ／に９以上テアす、事実上
無毒性であることが確認されている。

また、今回の実験では１０日間連続投与を行なうため検
討を行なった結果、最低用量投与群を３００■／ＫＩＪ
とし、中用量投与群を９００■／Ｋｇ、最高用量投与群
を２７００■／に９とした（公比３）。

（５）方法 実験はまず、腫瘍移植前１０日目上り腫瘍移植前日まで
の１０日間、１日１回製造例１．２．３および４のＤ−
グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
を構成糖とするオリゴ糖を蒸留水で希釈し、上記の用量
をそれぞれ胃ゾンデを用い、強制経口投与にて投与した
。腫瘍の移植はザルコマ（Ｓａｒｃｏｍａ　）　　１８
０に対しては６週令ＩＣＲ／　ＪＣＬ雄マウマウスイス
（Ｌｅｗｉｓ）肺癌３ＬＬタイプに対しては６週令Ｃ５
７ＢＬ　／　６雄マウスを１群１０匹として用いた。ザ
ルコマ（Ｓａｒｃｏｍａ　）１８０では腹腔内に１０　
個、ルイス（Ｌｅｗｉｓ　）肺癌３ＬＬタイプでは皮下
に１０　個を滅菌生理食塩水で希釈して投与した。また
、対照群は、ザルコマ（Ｓａｒｃｏｍａ　）　　１８０
またはルイス（Ｌｅｗｉｓ）肺癌３ＬＬタイプの腫瘍を
移植したのみで、各製造例で得られたオリゴ糖は全く投
与していない群を示す。

ザルコマ（Ｓａｒｃｏｍａ　）　　１８０を移植したマ
ウスについては、移植後３０日間観察を行ない、平均体
重および平均腫瘍重量を測定し、腫瘍の阻止率について
検討した。ルイス（Ｌｅｗｉｓ　）肺癌３ＬＬタイプを
移植したマウスについては、移植後６０日間観察を行な
い、生存率について検討した。

２　結果 製造例１．２．３および４で得られたＤ−グルコサミン
もしくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とす
るオリゴ環のザルコマ（Ｓａｒｃｏｍａ　）１８０に対
する抗腫瘍性については表２に、ルイス（Ｌｅｖｉｓ）
肺癌３ＬＬタイプに対する拒腫瘍性については第７図、
第８図、第９図および第１０図に示した。表２における
腫瘍の阻止率（％）は対照群の腫瘍の平均重量 とし、オリゴ環により腫瘍の増殖が阻止された比率を示
す。

（以下余白） （表２）Ｄ−グルコサミンもしくはＮ−アセチル−Ｄ−
グルコサミンを構成糖とするオリゴ環ザルコマ（Ｓａｒ
ｃｏｍａ　）　　＋８０に対する抗腫瘍性効果（腫瘍の
予防的効果）については、製造例！では３００．９００
および２７００ｍｇＺＫｇ群の駆出系はそれぞれ７０．
３．７５．１および７８．６％であり、投与量に相関し
て阻止率が高くなる傾向を示した。製造例２．３および
４においても、製造例１と同様に、投与量に相関して阻
止率が高くなる傾向を示した。

また、ルイス（Ｌｅｗｉｓ　）肺癌３ＬＬタイプに対す
る抗腫瘍性効果（腫瘍の予防的効果）については、製造
例１では対照群は腫瘍移植後１７日目上１０匹とも死亡
したのに対し、移８６０日後の生存率は、３００■／に
９投与群では２０％、９００■／に９投与群では４０％
、２７００■／に９投与群では６０％で、投与量に相関
して生存率は高くなる傾向を示した。

製造例２．３および４においても若干のばらつきはある
ものの、製造例１と同様に投与量に相関して生存率が高
くなる傾向を示した。

製造例１および２で得られたオリゴ環は脱アセチル化度
が９９％のキトサンを分解したものであるから、構成糖
の少なくとも９９％がＤ−グルコサミンのキトサンオリ
ゴ糖である。また製造例３および４で得られたオリゴ環
はＮ−アセチル化度が５０％および２０％のものである
から、Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グル
コサミンを構成糖とするオリゴ環である。

マウスにこのオリゴ環を胃ゾンデを用い強制経口投与し
た後に腫瘍細胞を移植し、腫瘍細胞の増殖が６０日間の
長期にわたって阻止されたことは、このオリゴ環の抗腫
瘍性効果が腫瘍の予防的効果を有しているということを
示唆している。

また、このオリゴ環の投与量の増加とともに抗腫瘍性が
強くなる傾向が認められ、その効果はオリゴ環によるこ
とを示すが、オリゴ環による腫瘍の予防的効果はオリゴ
環におけるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの含量とは
関係のないことが示唆された。

以上のように、本発明に配合されるＤ−グルコサミンも
しくはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とする
オリゴ環は、腫瘍移植前の経口投与によって移植腫瘍に
対する抗腫瘍性効果を示すことは明らかである。なお、
オリゴ環の重合度は２〜８のものが抗腫瘍性の点で望ま
しく、さらに好ましくは重合度５〜７のものである。Ｎ
−アセチル−Ｄ−グルコサミンのオリゴ環を含む場合、
抗腫瘍性の観点からは、Ｎ−アセチル化度が１００％で
もよいが、好ましくはＮ−アセチル化度が１０〜９０％
であり、さらに好ましくは２０〜５０％のものがよい。

また、本オリゴ糖はＩＣＲ系ｆｉ（ＳＰＦ）マウスを用
いた急性溶性試験において、ＬＤ　　値は１５．０００
■／に９以上であり事実上無毒であることが判明してお
り、広範囲の量で食品に安全に配合することができる。

〔実施例〕

本発明に配合されるＤ−グルコサミンもしくはＮ−アセ
チル−Ｄ−グルコサミンを構成糖とするオリゴ環は水溶
性であるので、ドリンク剤等の飲料に利用できるほか、
常法に従って通常のこの種の食品の形態、例えば錠剤、
乳剤、カプセル剤、顆粒剤などにすることができる。他
の配合成分は特に限定するものではなく、通常の賦形剤
、結合剤、保存剤、香料等を用いることができ、また、
各種ビタミンや野菜等の乾燥粉末も配合することができ
る。さらに、日常の食品または食品原料に適宜混入させ
た形のものであってもよい。

以上の種々の食品としての利用にあたって、摂取量は１
日あたりオリゴ環として６〜２０．９が抗腫瘍性を発揮
する適当量であるが、それ以上過剰に摂取しても与えら
れる障害はない。

次に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明する。本
発明はこれによって限定されるものではない。

実施例１　（キトサンオリゴ新入りこんにゃく）１１の
水にこんにゃく精粉３５ｇ、製造例１で得られたキトサ
ンオリゴ糖３Ｉを加えて充分に撹拌した後ゼリー状にな
るまで放置した。このゼリ一体を適当の石灰水とともに
練り合わせてボイルすることにより、こんにゃく製品を
得た。

実施例２　（キトサンオリゴ新入りチューインガム）ガ
ムベース２５ｇ、マルチトール６５．２　Ｆ　、還元水
飴５ｇ、製造例２で得られたキトサンオリゴ糖４１１香
料０．８ｇを通常の方法に従いガムを作成し、１個当り
ｌ０Ｊ７の板状に成型した。

実施例３　（キトサンオリゴ新入りカプセル）食用ゼラ
チン５０ｇにグリセリン２ＩＩ、水６０ｍ１を加えてゼ
ラチンを膨潤させ、展延板上で加熱ゲル化させてゼラチ
ンシートを得た。このシートを下金型板上に置き、その
上に、製造例３で得られたキトサンオリゴ糖適量を食用
油に分散させたものを流し込み、その上にさらにゼラチ
ンシートを置き、ヒ部に上金型板を置いた。この金型を
加圧することによって軟カプセルを得た。

実施例４　（キトサンオリゴ新入りふりかけ）ａａ例４
で得られたキトサンオリゴ糖５ｇ、粉末醤油４．Ｇ＋、
カツオ節粉末５１１ブドウ糖４ｇを混合し、これを粉砕
し、ふるい機にかけて粒子をそろえた上で８０°０２時
間乾燥した。場合によってはゴマ、青のりなども加えて
防瀞包装した。

実施例５　（キトサンオリゴ新入りヨーグルト）牛乳、
豆乳などにスターターを添加して発酵させて得られた通
常のヨーグルト４０Ｊ７に蜂蜜２１１　。

砂！１５ｊ７１製造例１で得たキトサンオリゴ糖３ｇを
加え、充分撹拌して、上記ヨーグルトを得た。

実施例６　（キトサンオリゴ新入り飲料）クエン酸０．
５１１　、乳９１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、カラメル５ｇに
、製造例３で得たキトサンオリゴ糖３０ｇを加えて混合
した。これを１回２０ｇ取り水１８０ｍ１に溶かして上
記飲料を得た。

実施例７　（キトサンオリゴ糖含有茶）製造例４で得ら
れたキトサンオリゴ糖を適量抹茶に混合し、通常のティ
ーバッグと同じように封入し、防浬包装した。キトサン
オリゴ糖量は１日飲用量として５〜１０．９が適当であ
る。使用時には、水または温水出キトサンオリゴ糖を茶
成分とともに溶かし出し飲用する。

【図面の簡単な説明】

＠１図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産された
キトサナーゼにおける温度と比活性の関係を示す図表、
第２図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産された
キトサナーゼにおけるｐＨと比活性の関係を示す図表、
第３図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｈにより生産された
キトサナーゼにおける温度と比活性の関係を示す図表、
第４図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産された
キトサナーゼにおけるｐＨと比活性の関係を示す図表、
第５図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産された
キトサナーゼの電気泳動法による分子量を示す図表、そ
して第６図は、バチルスＮｏ、　７−　Ｍにより生産さ
れたキトサナーゼのゲル濾過法による分子量を示す図表
であり、第７図は、製造例１のオリゴ糖の試験の結果を
示す図表であり、第８図は、製造例２のオリゴ糖の試験
の結果を示す図表であり、第９図は、製造例３のオリゴ
糖の試験の結果を示す図表であり、第１０図は、製造例
４のオリゴ糖の試験の結果を示す図表である。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）構成糖の一部または全部がＤ−グルコサミンもし
   くはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンであるオリゴ糖を
   含有する食品。
2. （２）構成糖の一部または全部がＤ−グルコサミンもし
   くはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンであるオリゴ糖が
   キトサンオリゴ糖である特許請求の範囲第１項記載の食
   品。
3. （３）構成糖の一部または全部がＤ−グルコサミンであ
   るオリゴ糖が、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ．
   ）に属する微生物により生産される酵素であってｐＨ５
   〜１１の領域において安定なキトサナーゼによって分解
   製造される特許請求の範囲第１項および第２項記載の食
   品。
4. （４）バチルス属に属する微生物がバチルスＮｏ．７−
   Ｍ（微工研菌寄第８１３９号）である特許請求の範囲第
   ３項記載の食品。