JPS5925687A - 固定化酵素及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は固定化酵素及びその製造方法に関する。 酵素反応は医薬品、食品等のホリ造の過程で−・部］１
業的にも実施されているが、従来は酵素をノ、（譬の水
溶液に熔解させて、この水溶液中で反応を行なわ−Ｕて
いる。しかし、このような方法に、Ｊ、れば反応条件を
一定に維持しつつ、新町な酵素を補給したり、また、反
応後にｒ１ｖ素を失活さ−Ｕることなく、生成物と酵素
をう」１目゛ることが非當に困ｖｌＩであり、酵素が不
経済に消費される。そのうえ、反応が回分式であるから
生産性に劣る。 このような問題を解決するために、既乙こ水不溶性の担
体に酵素を固定化し、この固定化ｆ＋’ｌ素に）、（質
を反応さＵることが提案されている。このよ・うな固定
化酵素の−・つとし７て、＋＋を体に多層。性のソート
を用いたものが幾つが提案されている。例えば、特開昭
５３−４１４８７　可ニハ、紙、布等の多ｒＬ性シー１
−を酵素水溶液り含浸さ−Ｕてソート中に酵３１を物理
吸着さ・けた後、この表面に半透１？１模を製欽した固
定化酵素が提案されているが、この固定化ｆ１ゲ素にお
いては、酵素の負荷甲が小さく、上記′１−透性膜を製
膜Ｊる処理に際し゛ζ酵素が失活するおそれがあるのめ
ならず、特に紫外線重合により１１ｔｌＪｌｌ’Ａする
等の場合には酵素の失活凹曲が顕著であり、ＩＭｌｌも
３（１瑣である。また、特開昭５５−４５５３７°、４
には、所漫透１漠に酵素水溶液を正大通過し゛（、酵素
を１１ｇの緻密な所、ｔｌ？スキン層に（尿持さＵた固
定化酵素が１に案されている。この固定化酵素において
は、酵素の負＋’６ｊ　Ｆｉｔは大きいが、酵素が膜か
ら脱離しないように酵素を架橋しなりればならず、この
処理に際してやはり酵素が失活するおそれがある。また
、用いる！漢が＋ｌ’ｌ＋　１ｉｌｌｉな逆浸透映に限
定され、１１（ν晶１ｉ１ｉ格が１ｒｌｉ　くなる。 本発明は１−記した問題を解決するためになされノこも
のであ゛ノーζ、ｆ１ｙ素θ）　ｉ！１．　Ｉｎ１呈が
大きく、ｌ−１つ、酵素の固定化に際して酵素の失活が
ない・うえに、製造１や作の簡ｔ１χな固定化酵素及び
そのポリ漬方メツ：を１７Ｍ　（Ｊ（’４’るごとを目
的とする。 本発明による固定化ＦｉＶ素は、多孔ＩＪＩ膜表面に形
成された第１の凸分子重合体ゲル１−と、酵素を保持し
て」１記ゲル層の上に形成された第２の１１６分子−重
合体ゲル層とをイ１し、少なくとも第１のゲルｊ−が架
橋されていることを特徴とし、かかる固定化Ｆｉｌｉ素
は、本発明に従つ°１第１の水溶性品分予電合体の水溶
液に多孔性腺を強制ｊ１１過さ−Ｕて、ｌ１５表面に第
１の高分子重合体ゲル層を形成する上程、及び酵素と第
２の水溶１（１高分子１Ｆ合体とを含ず１゛」−る水溶
液に」二記第１のゲル層を形成した膜を強制１ｆｆｌ過
さ−Ｕて、第１のゲル！縛の」二に酵素を（１二ｔＮし
／こ第２の１０ｊ分子ｉｎ合体ゲル屓を形成する上程と
をｆｊし、更に少なくとも第１の１０１分子ｍ合体ゲル
層を架橋さけ・る上程を有する方法によって製造され

【
）。 本発明において、多孔性腺としては後述」−る１１１１
分子重合体ゲル層を表面に形成することができれば、腺
構造や膜形状、膜素祠等に関係なく、種々の膜を用いる
ことができる。例えば、肱横】前曲には、等方性の所謂
精密ｊ１１過膜は紙庫で、１１１つ、伸度等の物理的性
質にもすぐれるので々ｒましく用いることができる。し
かし、異カ性の１限外１ｆｆｌ　ｊ？り　Ｅ♀】所准透
膜も勿論用いることができる。また、膜形状としては、
膜素月のｉｌ’ｌｉ分子重合体の消液を適宜の支持体」
二に流延塗布して製膜した通常のシート状の股のほか、
繊維状チップを和瓦に絡ま−Ｕてシー！・にした用」胃
デプスＩ史、ボ１」−ファイバーのような＆Ｊｕ￥４ｔ
’、状の膜も用いられる。また、膜単利も特に制限され
ず、例えば、アセデル１！ル１１−ス、プ１：＋ピオン
酸セル１：１−ス、酪酸セル１：１−ス、エチルレルロ
ース、二１・ＩＩセルｔｌ−ス等の１！ノ旧１−ス誘導
体、ポリアミド、ポリイミド、アクリＩに１リル系共電
合体、ポリエステル、ポリスルボン、ポリフッ化ビニリ
デン、ボリテトラフルオ＋１エチレン、ポリエチレン、
ボリプｌ：Ｉピレン、ポリビニルアルパー１−ル、ポリ
ＪＬＩ化ビニル等が用いられる。 本発明の固定化酵素においてし１、−１＝　ｎＬ！のよ
うな膜表面に第１の水溶性のｉｒｌ＋分子Ｙ口合体から
なるゲル層が形成されている。尚、膜表面には、豚の有
する微細な孔の壁表面をも含む。 −に記ゲル屓は水溶性１０ｊ分子重合体の水溶液に股を
強制１１１１過さ・ｌることにより形成される。本発明
の固定化１Ｉｉｙ素を酵Ａ；反応に使用Ｊ°るには、ｉ
ｌｌ常、拙質水溶液を膜に加）に透過さ−Ｕるが、ゲル
１−を水溶性重合体により形成４−ることにより、膜の
水ＩＩ。 相性を１■めて反応水溶液の換透過を容易ならしめるた
めである。一方、商分子出合体とじて−ｊ′セチルセル
ロースのような水不溶性重合体を用い、この有機溶液に
膜を強制通過さ−Ｕると、形成されるゲル層が緻密にす
ぎて、酵素反１．シを行なわ・Ｕる際に反応４１成物の
】透過が１木口’＋ｔとなるのＣ好ましくない。 ここに、水溶性ｍ合体としては、ポリビニルアルニ１−
ル、ポリエチレンイミン、ポリ　（メク）−ｒクリル酸
及びその川、ポリアクリル−ｊ′ミド、ポリビニルビＩ
Ｉす１′ン、ポリビニルピリジン、ポリーｊ゛ミド等の
合成１ｒｌｉ分子Ｖ口合体、アルブミン、カラギーーノ
゛ン、二１ラーゲン、アル−ギン酌ソーダ、ジアルデヒ
ドデンゾン等の天然１０１分子分子体を打ましく用いる
ことができるが、これらにｌＱＩ！＞ｉでされるもので
はない。 水溶１！ｌ　＋＋１＋分子重合体のゲル層を形成Ｊ−る
にあたみ）、その′ｌＲ度は特に制限されるものではな
いが、ｊ１η′占′；、　＋１．　（１Ｆｌ　１〜３０
市９９石、☆了ましくは０．０５〜５巾１ｉ、　９ｇの
範囲である。余りに高い濃度の水溶１１ｋを用いると、
ゲルＩ−が厚くなって基質や反応生成物の透ｊｆ：’）
　（ｉ力■）くなるので々ｒましくない。ｉｌに／海風
が４りに小さいときは、均一なゲル層を形成り、　ｅｊ
ｆｉいと共に、ゲル層の形成に不必要に即時間をｔ）！
ｊ　ｉるこ２：となるので打まＬ　＜ない。 本発明によ？いては、第１のゲル層は、酵素反応のｊｊ
なわ４？、る水系にＪ、？い”（熔出−υず、安定に股
−１−に存在してｆ＆ｉΔＩ゛る酵素を１ｖ持したゲル
１ビを支持４る）、：めにヒ（ＨＩ３．ｆ４されている
ごとをｒｉする。水溶１１１ｖＩＸ合体の架橋方法は既
によく知られており、例えば、ポリビニルアルニ１−ル
の場合、ポウｈ（？）電ｒ線に、１、り架橋さｌるごと
ができ、また、ｒ’ｉｋ　！’１ｌｌ−７’ミノ基をｆ
Ｉする；Ｉζリエヂレンーイミンやアルブミン等の場合
は、ジアルデヒドにより架橋させることができる。また
、−アルギン酸ソーダの場合は、ＡＩ゛酸カルシウＪ２
のよ・うなカルシラフ。、用により架橋さ−１ることが
できる。 尚、水溶（！ｌ−１１１＋分子Ｈ＋７合体０）　分子用
１．ｔ、　ｉＪｎ　：％’；、Ｅ’ｖ　＋乃至数百万程
度であり、股表面上に水溶性１０１分子市予電イーのゲ
ル層を形成するためには、股は用いる重合体の分子用よ
りも小さい分画分子用をｆｌ−することが４・要である
。しかし、膜が用いる水ｔ８　ｆ’ｌ：　ｉｌｊ合体の
分子量よりも大きい分画分子用を口する場合でも、例え
ば、予め水溶１ｊ１市合体の水ｌ’ｒ：　／ｐｉ、に架
１喬剤苓添加しておき、これに股をＵ！ｌ！　ｉｔ；’
Ｉ　Ｊｍ過さす

【１と共に架橋さ−ｌることに２１、す
、成子に有すノなゲル層を形成することができ、或いは
膜表面に水々１１１１重合体を少♀イて１着さ・Ｕ、架
橋処理した後に水溶１！１１ｎ合体の水溶液を強１１ｉ
１１　ｊｔ’１１渦さ−Ｕることに青、っても、膜表面
にイｒリノにゲルｊ祠を形１戊することができる。 架橋処理は好ましくは、架１呂剤の水溶液にｎζＬを強
制ｉｍ過さ−１ることにより行なわれｈが、ｊＪＡ合に
よってはゲル層を１１１に架橋剤水溶ｌＣｋに＾を布Ｊ
ニジ＜は含浸さ−ｌることによっても行な・）ことがで
きも。 このようにして架１喬されたゲル層は分画分子Ｒが１ｆ
ｆｌ常］　００００以下であるので、このゲルｊ−の１
−に酵素と第２の水溶ｔ’ｌ　ｉｎｒ分子重合体とを含
ｒｉ４−る水溶液を強制ｊ１１過さ・Ｕると、酵素がゲ
ル層をｉｆｆ過−Ｕず、イ８すＪに酵素を含有する第２
のゲルｊ皆が形成される。従って、本発明によれば、用
いる膜の構１ｉ１１やそのｈ”、を孔孔経に関係なく、
ｒ１ゲ素を膜に保持さ・けることができる。勿論、酵素
反応においては、酵素反応のｊ＋；質又は４Ｌ成物の分
子用が、例えば、グルコース、尿酸、尿素１．、’レス
テ１１−ル、ペニシリンアシシーＩｉ等の場合で数十乃
至数十稈度であるの°ご、これら力くゲル層をｉ３過す
るのは（可らつ方げられない。 本発明によれば、−に記第１のゲル層の」二に酵素を保
持した第２のゲル層が形成されている。この酵素層は、
酵素と第２の水溶性１１１ｉ分子ＹＩｔ合体とを含有す
る水溶液に、」二記した第１のゲル１−を形成した１漢
を強制通過さ・ｌることにより、Ｓｉｔ合体と共に、酵
素ｔ）ゲル層を透過することなく、ゲルＩｄ上に１市Ｊ
ｌｉｉされ、力・くして、酵素を１呆を聞しノこ第２の
重合体ゲル層が形成される。このゲル層においても、よ
る。この酵素を含有する第２のゲル層も第１のゲル層と
間しく架橋されζい°ζもよい。この場合、第１のゲル
Ｌ−を形成した後、これをビシ１１１ｔさ王、Ｌ′）り
に第２のゲル層を形成して、このゲル層を架橋さ・Ｕ、
かくし゛Ｃ個別的にゲル層を架１合さ−１ても、１、い
が、また、第１と第２のゲル層を形成した後、架橋剤水
溶液を腺に・ｊ４：制１Ｊｌｌ過し゛Ｃ１同時に架橋し
てもよい。 本発明に、、ｉ９いて用いる酵素（，１特に制限される
ものではないが、例えば、グルー１−スイソメラ−１２
′、グルコースオキシダービ、ウレアーゼ、ウリカーセ
゛、二ＨＬ／　ステＩ：＋　−／ｌ／　：ｔ　４”ｙ　
グー　ｂ′、Ｉ−−’７’　ミ／　ｎ’Ｊ酸化酵素、ベ
ニシリナーヒ′、カタラーゼ等を用いることができる。 また、本発明の固定化酵素は１多述するように、１０１
分子基質を低分子化する酵素反応に々ｒｊ所Ｃご用い１
！するが、かかる酵素として、例えば、」−記のほかに
パパイン、ペプシン、１リプノン等のブ１−１テアービ
やリパーゼ等の加水分解酵素を挙げることができる。酵
素は目的とする反１．い、二応じて１種又は２種以上の
混合物が用いられ、また、酵素を含有する第２のゲルＩ
ＮはＩ　ｆＨのみならず、多層に形成されてもよい。更
に、・ソ・要に応して、酵素のみを含有する水溶液を第
１のゲル１ｄと￥Ｐ、２のゲル層との間に形成しても、
１、い。尚、酵素を含ｒｉ４−る水溶７ｔＤを膜に強制
１ｆｆｌ過さ・Ｕる際、これらの酵素の水ｍ？ｔｌはア
ルブミン、グリセリン等の）背室の安）ｉテ刑を含イｌ
していてもよい。 本発明においては、重合体水溶液及び架橋剤水溶ｉ’ｌ
’＜に）１９を・１４１制通過さ・Ｕるにあたって、加
圧、減圧い」”れの手段を用いＣもよいが、加圧して水
溶液を膜通過さ・Ｕる場合、その圧力は例えば０．１〜
１０　ｋｇ／　ｃ、Ｊが適当である。圧力が０．１に＋
ｒ／ｃｆｆｌよりも小さいときは、水溶液の透過Ｍが少
ないので、ゲル層の形成や架橋処理に長時間を要して実
用的でなく、−力、ｌ　Ｏｋｇ　／　Ｃ１ｌ＋を越える
ときｔ；Ｉ：　、多孔性Ｉ９の破打１が起こるおそれが
あるほか、ゲル層や酵素層の圧密化が起こり、反応水溶
液の透過性が悪くなるので好ましくない。 面、ゲル層を形成する場合、更には架橋剤水溶液にＨ’
Ａを強制ｉｌ１遇させる場合、ｉｍ雷、各水溶液は循環
して膜をｊｍ過さ−Ｕる。例えば、当初には膜を透過し
た重合体もゲル層が形成されるにっれζ、膜を透過しな
くなり、ｎ効にゲル層の形成に関り、するからである。 本発明の固定化／１１／素の使用にあたっては、ＩＩ’
２に基質水溶／Ｉｋを強制ｊｉ７１　Ｊさ−１る。この
際の圧力も前記と同し理由から１〜５　ｋｇ／　ｃｎｔ
稈度がよい。 本発明による固定化酵素は、以」二のよ・うに、多孔性
膜表面に、水溶性ＩＩ′ＩＩ分子重合体からなり、１１
ワ、架橋された第１のゲル層が形成され、この十に酵素
を含有保持した水溶性ｉｎｊ分子ｉｎ合体からなる第２
のゲル層が順次形成されており、Ｐｉｖ素を穀内に保持
さ−Ｕるのではないので、酵素の負（１：ｉ量を大きく
することができ、その製造にあたっては、膜物！生や族
４４質を限定されず、しかも、製造１Ｍ作が非審にｆｌ
？ｉ　、ｆｌχであり、且つ、酵素は重合体のゲル内に
保持されているので、酵素反応系において溶出すること
がなく、１番１υ１にわたって１０１い酵素１１ｒｉ　
ｆｌ″を維り寺することができる。更に、酵素自体を架
橋処理する心・要がないので、酵素の架１８に仕う酵素
の失活もない。 特に、本発明の固定化酵素においては、酵素を含有する
第２のゲル層表面が基質水溶液に露出し°Ｃいるので、
高分子）に質を低分子化する酵素反応に用いるに崩する
。即ら、１Ｔｌｉ分子ノ、（譬は第２のゲル層表面にて
酵素反応を受け、内ｆ１１；に１）；、１ルシて更に低
分子化されて、所要の酵素反応を行ない得るからである
。 以下に本発明の実施例を挙げるが、本発明はこれら実施
例により？＝Ｊら限定されるものではない。 実施例１ 多孔性膜として分画分子量約５　（１（１（ｌ　Ｏのポ
１コーファイバー状精密濾過膜（８東ｒ１１気」業（閉
製ＮＴＩＪ−１１０５ＯＡ−ＯＥｉ、股月質ポリアミド
、りＩ−１１％　１．　（ｌ嘗鍾、内径［１，（ｉ　ｍ
＋＋、有効膜面積］、　８６　ｎｆ）を用い、水溶性高
分子重合体としてポリエチレンイミン（１−１本触媒化
学工業ａυ製ポリエチレンイミン水溶液１１−１０００
　）を、まノこ、酵素にはプ１，１テアーゼ（長瀬生化
学工’５　ｆｌｌｌｌｌｌ製ビオブラー１５）を用いた
。 （１，４５ｊｌｉ−１ｅｔ％のポリエチレンイミン水溶
液ｌＯｅを１．記ボローファ・イハー状＄／ｉ　ｌ−ｆ
？通過股のり１側から疏９５ｐ／う）、圧力０．３シｇ
　／　Ｃｌイにて室温下に４時間循環して流ｊＴｌさ−
Ｕ“ζ、第１のゲル層を形成した（多、架橋剤であるグ
ルタルアルア１−．ド水溶液の２５９石水溶液を−１−
記ボリｊ−チレンイミン水溶液に添加し、流♀１０７！
／分、圧力１　ｋｇ／　ｃｎｌ、室温にて更に３時間楯
ＩＱＩ、て流ｉｍさ−Ｕ、−１−記ゲル屓を架橋さ・ｌ
た。この、１、うにして、第１の架橋ゲル層を膜表面上
に形成した後、水を流量Ｏｆｆ／分、圧力０、５　ｋｇ
／　ｃａｌ、室温にてｐｌ＋が約７となるまで循環流ｉ
ｍさＵて腺をａ滌した。 次ニ、（１，４５Ｆ１２Ｆａ％のンｊξリ−”ＩＩチレ
ンイミン水ｔｄ液５ｆｆ（ポウ醇／炭酸す１−リウム緩
園液でｐＨ１１，０に〆周整）に５ｇのピオブラーゼ／
ＩＬ−１５をｔ容色１″し、これを流量５７！／分、圧
力１．０　ｋｇ／　ｃ１１！、室温にて２時間循環流ｊ
ｍさ・Ｕ、酵素を含有する２／Ｓ２のゲル層を形成した
６尚、この処理において、ｌ’Ａ　ｉ！；過液からクン
バク質は検出されなかった。 この後、０．１　Ｍ炭酸ナトリウＪ、水溶液でｐＨ１１
，０に調整した０、０１重♀％グルクルーｊ′ルデヒじ
水ｌｈ液５　ｉｌを流９５１７分、圧力０．．５　ｋｇ
　／　ｃれ室温に”ζ２時間循環流通さ−Ｕて、ゲル層
を架１＆さ−Ｕた。 次に、ポウ酸／炭酸すｌ−リウＪ、暖南液をＩＩＱに循
１９流ｉｍさ・Ｕて、膜を充分に洗滌し、かくして、プ
１】ター゛ｊ′−ゼ固定化脱をｌＯた。 この固定化酵素を用いて、のりん中に八よれるタンパク
質の分１＋５′を行なった。ｌ！ＩＩ　”３、膜にシリ
んを流９２４７分、圧力１．Ｏｂ／ｃれ冷°温６．二て
３時１！ｆｌ　ｉＡ’ｉ環流ｊ１ｎさ−Ｕ、脱透脱液過
液いてクンバク窒λ１及び−１ミノ窒素を定Ｑしたとこ
ろ、元のめりんはそれぞれ４５％及び４３％であったが
、膜ｊ刀ｊ尚ンｔ？ｉ。 にすいてはそれぞれ６．７％及び８１．０９ｏであ−っ
た。 また、のりんと同じ体積のエタノールを添加しＣ（ｉ　
６０　ｎ　ｍにおりる測度を測定したところ、元のめり
んは２．１０、ＩＩＱｉ力過ン皮は０．１０°であった
。 実施例２ 実施例１と同じ膜に同１．ｌｆにし”ζ架橋ポリエチレ
ンイミンからなる第１のゲル層を形成した後、ウレアー
ゼ５　ＩＵとアルギンｌ’ｌ（ｔソーダ２０ｇの混合物
をＩ　０７！のｐＨ７、［ｌ、ｏ、ＩＭＦｉｌ°酸すｌ
リウム左刈ｉ多Ｉン１ｋに１８解したものを−Ｊ二記Ｉ
１ｇに流１’；１．２．５Ｎ／分、圧力１、５　ｋｇ　
／　ｃｌにて室温で循環流ｊｍさ−Ｕ、次イテ、１１１
１７．０、ｏ、　］　Ｍｌｌｌｉｌ＋酸り一トリウムｌ
’Ｈ！ｉン１ｋに０．　＋１５　Ｍ西Ｙ酸カルシウＪ８
を加えたちのｌρを透過さ−Ｕて、ｊ”ル”１１ン酸ソ
ーダを架橋さ・Ｕ、第２のゲル層を形成し、ウレアーゼ
固定化ｌｆＡを１坪だ。 この膜に流…、１．１１７２／分、圧力２．０　ｋｇ／
　ｃｔ　、温度２５°Ｃの条（１１′乙３９石の尿素を
含有する０、ＩＭｌ・’）　ス−Ｊ話ｒ（Ｊ　ｋＡ　ｌ
１ｉＪ　／ｉｋ　’　（ｐ　Ｉｔ　６，７　）を透過さ
、ｕた。結果を第１図に示すよ・）に、長時間にわたっ
て発ノＩ゛アンモニア慴はほぼ１０ｇ／時間で一定であ
った。 実施例３ 実施例Ｉと同しＢｌｋローフアイバー膜に同様にして１
重晴９６”ｒルブミン水溶液を循環流ｉＪＤさ・ｌて、
第１のゲル層を形成した。次に、５ｇのグルコアミラー
ビをｐ１１４．０のＯ，ＩＭＩ’ｉ＋−酸ＵＪ　（ｉｉ
液（酉酸カルシウム０．０　（１１Ｍを含む。）に熔解
したものを（記ゲル層からｌｌ’２を強制１ｆｆｌｉ渇
させて、第１の酵素からなる酵素ＩＮを形成さ−Ｕた。 次いで、Ｃχ−アミラーゼ５１’及びポリエチし・ンイ
ミン１　’Ｏｇを」１記と同様の団ｉ！ｉ液に熔解さ−
Ｕた水溶液５１を」−１記酵素屓側から模を’：！１！
　：Ｉｉ’ｌ　Ｊ過させ、α−アミラーゼを含有する第
２のゲル１≠を形成さ・Ｕた。この後、ｐ１１６の」１
記と同様の暖南？＋１に肱を・１４１制通過さ−Ｕて洗
滌し、かくして、α−アミラーゼ及びグルニ１アミラー
ゼ固定化膜をｉｙ？だ。 ｐＨ５，０のＯ，１Ｍｌｌｌｉｌ’酸暖市液（酢酸カル
シウム０゜００　Ｊ　Ｍを含む。）に熔ｆ’７４　シた
１９６可溶１牛デンフ。 ン消液を流ｌ；ｌＩＪ　ＯＩＵ７分、圧ジノ０．２　ｋ
ｇ、温度５（）°Ｃで股をｉｊｌ制ｊｌｆ］　ｉ問１ｍ
・ｌだとごろ、膜透過液及び膜不透ｊＭ）湾（１盾環液
）Ｌこおりる全Ｗ１中の１１元れ１１の割合の経時変化
４；ｔ：　！７Ｓ２し１に示ずとおりであった。

【図面の簡単な説明】

ｔ（〜ｌ　１３／Ｉ　ＩＩ本発明のつし・アービ固定化
膜により尿幸を反応さ−１たときの゛ｒンモニアの発生
鼾の経時変化をン１＜１グラフ、第２図は本発明のα−
アミラター及びグルＩ−ｊ”−ラーゼ固定化成により１
肘彊１１゜デンプンを反応さ−Ｕたときの還元糖の生成
の経時変化を示すグラフである。 ４

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）多孔性腺表面に形成された第１の高分子重合体ゲ
   ル層と、酵素を保持して」１記ゲル層の」−に形成され
   た第２のｉｒｌ＋　３）半重合体ゲル１目とを白し、少
   なくとも第１のゲル層が架橋されていることを特徴とす
   る固定化酵素。
2. （２）第１の水溶性ｊ１１１分子ｉｌＸ合体の水溶液に
   多孔性膜を強制ｉｍ過さ−Ｕて、膜表面に第１のｉｌ’
   ｌｉ分子重合体ケル層を形成する」１稈、及び酵素と第
   ２の水溶ｆ！ｌ′１ｒｌｉ分子−市合体とを含有する水
   溶液に上記第１のゲル層を形成した膜を強制）ｍ過さゼ
   て、第１のゲル層の」二に酵素を１イ：持した第２の高
   分子重合体ゲル層を形成する」二稈とをイｊし、更に少
   なくとも第１の＋１１ｉ　’ｙ”ｒ予電合体ゲル層を、
   ！４！Ｉ橋さ−Ｕる二ｃ程を有することを特１１文とす
   る固定化ｆｉ’ｌ　ｍ’ｓ　（Ｄ　！Ｉ−１造方法。
3. （３）架橋剤水溶液にゲル層を強制１ｉＴＩ　ｉ＃Ｉさ
   ・Ｉて、ゲル層を架橋さ・Ｕる、１吉を特徴とするり、
   冒′１ｉｌＩ′１求の範囲第２項記載の固定化酵素の製
   造方法。