JPS5924256A - 免疫学的測定方法及び試薬 - Google Patents
免疫学的測定方法及び試薬Info
- Publication number
- JPS5924256A JPS5924256A JP13413182A JP13413182A JPS5924256A JP S5924256 A JPS5924256 A JP S5924256A JP 13413182 A JP13413182 A JP 13413182A JP 13413182 A JP13413182 A JP 13413182A JP S5924256 A JPS5924256 A JP S5924256A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- measured
- substances
- types
- test
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
つの被検液中に存在するそれぞれ異なる２種類以上の物
質を同時にかつ総合的に測定する方法及び試薬に関する
。
質を同時にかつ総合的に測定する方法及び試薬に関する
。
近年の臨床医学の進歩から、各種の疾患において、多数
の検査項目を測定し、その結果を総合的に判断し、必要
な措置がとられるようになった。ところが、現在の免疫
化学的測定法においては、１項目の検査に１〜４日を要
し、多数の項目を検査すると、たいへんな日数を要して
しまい、患者に対して必要々措置が迅速に行々えないた
め、必要々検査項目のうちのいくつかは省略されてし丑
う。このような情況では、患者に対する措置が適切に行
なえない場合が起こる可能性もある。
の検査項目を測定し、その結果を総合的に判断し、必要
な措置がとられるようになった。ところが、現在の免疫
化学的測定法においては、１項目の検査に１〜４日を要
し、多数の項目を検査すると、たいへんな日数を要して
しまい、患者に対して必要々措置が迅速に行々えないた
め、必要々検査項目のうちのいくつかは省略されてし丑
う。このような情況では、患者に対する措置が適切に行
なえない場合が起こる可能性もある。
例えば、近年の死亡原因の上位にある癌の早期診断、病
勢の把握、治療効果の判定、再発の有無の判定等に、各
種の腫瘍マーカーの測定が有用とされている。この場合
、多数の腫瘍マーカーの測定を行ない、その測定値から
総合的に判断する方がよシ効果的でまちがいのない方法
である。しかし、多数の腫瘍マーカーを測定するために
は、前記に説明したように、長い日数が必要となってく
る。更に、必要な検体（主に血清、血漿等）が多量とな
り、患者の苦痛も増大する。
勢の把握、治療効果の判定、再発の有無の判定等に、各
種の腫瘍マーカーの測定が有用とされている。この場合
、多数の腫瘍マーカーの測定を行ない、その測定値から
総合的に判断する方がよシ効果的でまちがいのない方法
である。しかし、多数の腫瘍マーカーを測定するために
は、前記に説明したように、長い日数が必要となってく
る。更に、必要な検体（主に血清、血漿等）が多量とな
り、患者の苦痛も増大する。
このような現状に鑑み、本発明者らは研究を重ねた結果
、腫瘍マーカーの測定による癌の早期診断には多数の腫
瘍マーカーについて、どのような種類の腫瘍マーカーが
どの位の量存在するかを個別に測定するのが最も好まし
いが、実質的には、後述する実施例２及び７から明らか
なように、腫瘍マーカーの総量によって診断することが
可能であることを見出した１、そしてこの結果に基づい
て、１つの被検液中に存在する２種類以上の測定物質を
１回の測定操作で同時に総和として測定する方法を見出
すべく研究を重ねた結果、免疫学的測定方法の原理を応
用し、同一の不溶性担体に２種類以上の測定抗原に対応
する２種類以上の抗体を結合させることにより、それぞ
れの測定抗原とその抗体との反応性に変化を生ずること
なしに、２種類以上の測定物質量の総和を１回の測定操
作によって測定することができることを見出し、本発明
を完成した。
、腫瘍マーカーの測定による癌の早期診断には多数の腫
瘍マーカーについて、どのような種類の腫瘍マーカーが
どの位の量存在するかを個別に測定するのが最も好まし
いが、実質的には、後述する実施例２及び７から明らか
なように、腫瘍マーカーの総量によって診断することが
可能であることを見出した１、そしてこの結果に基づい
て、１つの被検液中に存在する２種類以上の測定物質を
１回の測定操作で同時に総和として測定する方法を見出
すべく研究を重ねた結果、免疫学的測定方法の原理を応
用し、同一の不溶性担体に２種類以上の測定抗原に対応
する２種類以上の抗体を結合させることにより、それぞ
れの測定抗原とその抗体との反応性に変化を生ずること
なしに、２種類以上の測定物質量の総和を１回の測定操
作によって測定することができることを見出し、本発明
を完成した。
本発明の測定方法の基礎と々る免疫学的測定方法は、近
年、血清、尿などの生体試料中に含まれる微量の生理活
性物質、例えばペプチドホルモン類、ステロイド類、蛋
白質類などの濃度や、生体に投与した薬剤等の濃度の測
定手段として、広く用いられている。なかでも、赤血球
凝集反応法、ラテックス凝集反応法は、測定操作が簡便
で測定に要する時間が短かい々どの利点により、又、酵
素免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法は感度
が高く、定量性に優れているなどの利点により好んで用
いられる。
年、血清、尿などの生体試料中に含まれる微量の生理活
性物質、例えばペプチドホルモン類、ステロイド類、蛋
白質類などの濃度や、生体に投与した薬剤等の濃度の測
定手段として、広く用いられている。なかでも、赤血球
凝集反応法、ラテックス凝集反応法は、測定操作が簡便
で測定に要する時間が短かい々どの利点により、又、酵
素免疫測定法、放射免疫測定法、蛍光免疫測定法は感度
が高く、定量性に優れているなどの利点により好んで用
いられる。
これらの測定法の原理を簡単に説明すれば次のとおりで
ある。
ある。
（１）凝集反応法；赤血球や高分子ラテックスなどの微
粒子状の担体（以下、同相という）に結合させた抗体に
対して、未知量の測定抗原を反応させると、その存在量
に比例して抗原は同相に結合させた抗体に結合し、固相
が凝集する。その凝集の程度を測定し、濃度既知の物質
を同様の操作で測定した時の凝集の程度と比較して未知
量の抗原量を測定する。
粒子状の担体（以下、同相という）に結合させた抗体に
対して、未知量の測定抗原を反応させると、その存在量
に比例して抗原は同相に結合させた抗体に結合し、固相
が凝集する。その凝集の程度を測定し、濃度既知の物質
を同様の操作で測定した時の凝集の程度と比較して未知
量の抗原量を測定する。
（２）サンドインチ法；未知の量の非標識抗原（測定抗
原）と、固相に結合させた抗体とを反応させる（第１反
応）と、測定抗原と抗体は結合して抗原抗体複合体を形
成する。
原）と、固相に結合させた抗体とを反応させる（第１反
応）と、測定抗原と抗体は結合して抗原抗体複合体を形
成する。
これに、一定量の標識抗体を反応させる（第２反応）と
、標識抗体は前記複合体に結合するが、複合体の結合能
を越えた分の標識抗体は、結合せず遊離の状態で存在す
る。次に、固相き液相を分離し、同相又は液相の標識剤
の活性を測定し、同時に濃度既知の非標識抗原を用いて
同様に操作して作成した標準曲線によシ、未知の量の非
標識抗原量を測定する。
、標識抗体は前記複合体に結合するが、複合体の結合能
を越えた分の標識抗体は、結合せず遊離の状態で存在す
る。次に、固相き液相を分離し、同相又は液相の標識剤
の活性を測定し、同時に濃度既知の非標識抗原を用いて
同様に操作して作成した標準曲線によシ、未知の量の非
標識抗原量を測定する。
（３）競合反応法；未知の量の非標識抗原（測定抗原）
と、標識抗原の一定量とを固相に結合させた抗体に対し
て競合的に反応させると、非標識抗原と標識抗原とはそ
れぞれの存在量に比例して抗体に結合し、非標識抗原の
増減に反比例して抗体に結合する標識抗原の量が増減す
る。次に固相と液相を分離し、固相又は液相の標識剤の
活性を測定し、同時に濃度既知の非標識物質を用いて同
様に操作して作成した標準曲線によシ未知の量の抗原量
を測定する。
と、標識抗原の一定量とを固相に結合させた抗体に対し
て競合的に反応させると、非標識抗原と標識抗原とはそ
れぞれの存在量に比例して抗体に結合し、非標識抗原の
増減に反比例して抗体に結合する標識抗原の量が増減す
る。次に固相と液相を分離し、固相又は液相の標識剤の
活性を測定し、同時に濃度既知の非標識物質を用いて同
様に操作して作成した標準曲線によシ未知の量の抗原量
を測定する。
本発明は上記免疫学的測定方法の原理を利用して一つの
被検液中に存在する２種類以上の測定物質量の総和を一
度に測定する方法を提供するものである。
被検液中に存在する２種類以上の測定物質量の総和を一
度に測定する方法を提供するものである。
本発明の測定方法は、従来の不溶性担体に抗体を結合さ
せて行なう免疫学的測定方法のすべて、例えば凝集反応
法、凝集阻止反応法、競合反応法、サンドイツチ法、イ
ムノメトリック法等に適用できる。以下、凝集反応法及
びサンドイツチ法を例として、本発明の方法を模式的に
説明する。
せて行なう免疫学的測定方法のすべて、例えば凝集反応
法、凝集阻止反応法、競合反応法、サンドイツチ法、イ
ムノメトリック法等に適用できる。以下、凝集反応法及
びサンドイツチ法を例として、本発明の方法を模式的に
説明する。
（１）凝集反応法：被検液中にＡ、 Ｂ、 Ｃ，Ｄの４
種類の物質の存在が予測される測定を行う場合、同一の
不溶性微粒子担体に抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｃ抗体及び
抗り抗体の４種類の抗体を結合させる。この４種類の抗
体を結合させた不溶性微粒子担体に被検液を反応させる
とＡ。
種類の物質の存在が予測される測定を行う場合、同一の
不溶性微粒子担体に抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｃ抗体及び
抗り抗体の４種類の抗体を結合させる。この４種類の抗
体を結合させた不溶性微粒子担体に被検液を反応させる
とＡ。
Ｂ、 Ｃ，Ｄの各測定物質は濃度に応じてそれぞれ対応
する抗体と結合し、微粒子担体の凝集を生ずる。この凝
集の程度を測定することによシ、１つの被検液中に含ま
れる２種類以上の測定物質量の総和を一度に測定するこ
とができる。
する抗体と結合し、微粒子担体の凝集を生ずる。この凝
集の程度を測定することによシ、１つの被検液中に含ま
れる２種類以上の測定物質量の総和を一度に測定するこ
とができる。
（２）サンドインチ法：被検液中にＡ、 Ｂ、 Ｃ，Ｄ
の４種類の物質の存在が予測される測定を行う場合、同
一の不溶性担体に抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｃ抗体及び抗
り抗体の４種類の抗体を結合させる。この４種類の抗体
を結合した不溶性担体に被検液を反応させると、Ａ、
Ｂ、 Ｃ。
の４種類の物質の存在が予測される測定を行う場合、同
一の不溶性担体に抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｃ抗体及び抗
り抗体の４種類の抗体を結合させる。この４種類の抗体
を結合した不溶性担体に被検液を反応させると、Ａ、
Ｂ、 Ｃ。
Ｄの各測定物質はそれぞれの対応する抗体と結合する。
必要であれば、固相を分離した後、抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体
、抗Ｃ抗体及び抗り抗体の各々に標識剤を結合させた標
識抗体を反応させると、各標識抗体はそれぞれの対応す
る測定物質と結合する。次いで、固相を分離した後、同
相に結合している標識剤の活性の合計を測定する。この
ようにして、・１つの被検液中に含まれる２種類以上の
測定物質量の総和を一度に測定することができる。
、抗Ｃ抗体及び抗り抗体の各々に標識剤を結合させた標
識抗体を反応させると、各標識抗体はそれぞれの対応す
る測定物質と結合する。次いで、固相を分離した後、同
相に結合している標識剤の活性の合計を測定する。この
ようにして、・１つの被検液中に含まれる２種類以上の
測定物質量の総和を一度に測定することができる。
本発明の凝集反応法において使用する不溶性微粒子担体
とし−Ｃは従来使用していたものと同様のものを使用す
ることができる。即ち、細菌や赤血球等の細胞等、ポリ
スチレンラテックス、カルボキシル基を導入したポリス
チレンラテックス、スチレン−ジビニルベンゼンコポリ
マーラテックス、水酸基又はカルボキシル基を導入シタ
スチレン−ジビニルベンゼンコポリマーラテックス、ポ
リビニルアルコールラテックス、ポリアクリル酸エステ
ルラテックス、酢酸ビニル−アクリルコポリマーラテッ
クス等の有機高分子ラテックス、シリカ、カーボンブラ
ック、アルミナ等の無機物質を使用することができる。
とし−Ｃは従来使用していたものと同様のものを使用す
ることができる。即ち、細菌や赤血球等の細胞等、ポリ
スチレンラテックス、カルボキシル基を導入したポリス
チレンラテックス、スチレン−ジビニルベンゼンコポリ
マーラテックス、水酸基又はカルボキシル基を導入シタ
スチレン−ジビニルベンゼンコポリマーラテックス、ポ
リビニルアルコールラテックス、ポリアクリル酸エステ
ルラテックス、酢酸ビニル−アクリルコポリマーラテッ
クス等の有機高分子ラテックス、シリカ、カーボンブラ
ック、アルミナ等の無機物質を使用することができる。
本発明のサンドイツチ法、競合反応法およびイムノメト
リック法の不溶性担体の材質としては、ポリスチレン、
ポリエチレン、ポリアクリル、テフロン、紙、ガラス、
アガロース等、従来の免疫学的測定において使用されて
いるものはすべて使用しうる。又、その形状は大鼓状、
球状、棒状、盤状あるいは容器状、例えば光学セル、試
験管等のものが使用しうるが、他の形状であってもよい
。
リック法の不溶性担体の材質としては、ポリスチレン、
ポリエチレン、ポリアクリル、テフロン、紙、ガラス、
アガロース等、従来の免疫学的測定において使用されて
いるものはすべて使用しうる。又、その形状は大鼓状、
球状、棒状、盤状あるいは容器状、例えば光学セル、試
験管等のものが使用しうるが、他の形状であってもよい
。
本発明の測定方法において使用する抗体は通常の多クロ
ーン性抗体でもよいが、単クローン性抗体の使用は更に
好ましい結果を与える。例えば、測定感度及び精度の向
上、反応時間の短縮、特異性の向上、測定操作の簡易化
、非特異反応の°除去、血清や尿などの生体成分による
反応阻害の除去などである。但し、凝集反応法に単クロ
ーン性抗体を使用する場合には凝集を生起させるために
１つの測定物質に対する２種類以上の単クローン性抗体
を混合して使用する必要がある。
ーン性抗体でもよいが、単クローン性抗体の使用は更に
好ましい結果を与える。例えば、測定感度及び精度の向
上、反応時間の短縮、特異性の向上、測定操作の簡易化
、非特異反応の°除去、血清や尿などの生体成分による
反応阻害の除去などである。但し、凝集反応法に単クロ
ーン性抗体を使用する場合には凝集を生起させるために
１つの測定物質に対する２種類以上の単クローン性抗体
を混合して使用する必要がある。
不溶性担体に抗体又は抗原を結合させる方法は、Ｃ１１
ｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、 ４８ ： １
５ （１９７３）；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ、 １１６ ： １５５４（１９７６） ；
５ｃｉｅｎｃｅ、 １５８ ： １５７０ （１９６７
）に・記述された方法と同様であるが、抗体の種類が１
種類ではないので、結合させようとする抗体を予め適当
な割合に混合した抗体溶液を用いる。例えば、抗ＡＦＰ
抗体を０．５■／−１抗ＨＣＧ抗体を０．１■／Ｍ、抗
ＣＥＡ抗体を０．２５ ｍｙ／ｍｌの濃度に０．０５Ｍ
リン酸緩衝生理食塩水ＰＨ６，４に溶解し、との抗体混
合溶液に不溶性担体を接触させて６７℃３時間反応させ
る。これを生理食塩水で洗浄して抗体結合担体を製造す
る。
ｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、 ４８ ： １
５ （１９７３）；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ、 １１６ ： １５５４（１９７６） ；
５ｃｉｅｎｃｅ、 １５８ ： １５７０ （１９６７
）に・記述された方法と同様であるが、抗体の種類が１
種類ではないので、結合させようとする抗体を予め適当
な割合に混合した抗体溶液を用いる。例えば、抗ＡＦＰ
抗体を０．５■／−１抗ＨＣＧ抗体を０．１■／Ｍ、抗
ＣＥＡ抗体を０．２５ ｍｙ／ｍｌの濃度に０．０５Ｍ
リン酸緩衝生理食塩水ＰＨ６，４に溶解し、との抗体混
合溶液に不溶性担体を接触させて６７℃３時間反応させ
る。これを生理食塩水で洗浄して抗体結合担体を製造す
る。
本発明の方法を競合反応に基づいて行なう場合、使用す
る標識抗原は測定物質と競合反応によって不溶化抗体に
結合させるものであるから、その抗原部分は原則的には
測定物質と同一物質を用いる。しかし、生理活性物質は
生体内に存在する場合は他の生体成分と結合したり、一
部代謝を受けたシして、生体外に存在する場合き異なる
場合があるので、免疫学的反応性の観点から実質的に同
一とみなし得る物質は測定物質と同一性を有する物質と
して同様に使用しうる。
る標識抗原は測定物質と競合反応によって不溶化抗体に
結合させるものであるから、その抗原部分は原則的には
測定物質と同一物質を用いる。しかし、生理活性物質は
生体内に存在する場合は他の生体成分と結合したり、一
部代謝を受けたシして、生体外に存在する場合き異なる
場合があるので、免疫学的反応性の観点から実質的に同
一とみなし得る物質は測定物質と同一性を有する物質と
して同様に使用しうる。
標識剤としては、酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、β
−ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グル
コースオキシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、Ｉｌ
ｌ！ ｘ、 Ｉｌｎ ）、蛍光物質（例えば、フルオレ
ッセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミン
インチオシアネート）などが用いられる。
−ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グル
コースオキシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、Ｉｌ
ｌ！ ｘ、 Ｉｌｎ ）、蛍光物質（例えば、フルオレ
ッセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミン
インチオシアネート）などが用いられる。
凝集反応法では、前記のようにして得た２種類以上の抗
体を結合した担体を用いることによシ２種類以上の測定
物質量の総和を一度に測定できる。又、サンドイツチ法
、競合反応法では前記のようにして得た２種類以上の抗
体を結合した不溶化抗体と対応する２種類以上の標識抗
原又は標識抗体を用いて、２種類以上の測定物質量の総
和を一度に測定できる。また、サンドイツチ法及び競合
法においては１種類の標識抗原又は標識抗体を用いれば
、１種類の物質の単独の測定も可能である。例えば、適
当な濃度に希釈した被検液を抗体を結合させた試験管に
入れ、抗原抗体反応を行なわせる。反応終了後、蒸留水
で試験管を洗浄後、標識抗体を加え反応させる。次いで
蒸留水で洗浄後、標識剤の活性を適当々手段で測定する
。得られた測定値から濃度既知の標準物質を用いて同様
に操作して得た標準曲線により被検液中の測定物質の量
を算出する。この場合の標準物質は、１種類の抗原でも
複数の抗原の混合物でも良い。
体を結合した担体を用いることによシ２種類以上の測定
物質量の総和を一度に測定できる。又、サンドイツチ法
、競合反応法では前記のようにして得た２種類以上の抗
体を結合した不溶化抗体と対応する２種類以上の標識抗
原又は標識抗体を用いて、２種類以上の測定物質量の総
和を一度に測定できる。また、サンドイツチ法及び競合
法においては１種類の標識抗原又は標識抗体を用いれば
、１種類の物質の単独の測定も可能である。例えば、適
当な濃度に希釈した被検液を抗体を結合させた試験管に
入れ、抗原抗体反応を行なわせる。反応終了後、蒸留水
で試験管を洗浄後、標識抗体を加え反応させる。次いで
蒸留水で洗浄後、標識剤の活性を適当々手段で測定する
。得られた測定値から濃度既知の標準物質を用いて同様
に操作して得た標準曲線により被検液中の測定物質の量
を算出する。この場合の標準物質は、１種類の抗原でも
複数の抗原の混合物でも良い。
本発明の測定方法は従来の免疫学的測定方法によって測
定し得た物質はすべて測定可能である。特に重要な測定
物質としては腫瘍の早期診断、治療効果の判断等に重要
な意義を有する腫瘍マーカーを挙げることができる。
定し得た物質はすべて測定可能である。特に重要な測定
物質としては腫瘍の早期診断、治療効果の判断等に重要
な意義を有する腫瘍マーカーを挙げることができる。
例を挙げれば、癌胎児性抗原（以下ＣＥＡと略す）、α
−フェトプロティン（ＡＦＰ）、絨毛性性腺刺激ホルモ
ン（ＨＣＧ）、β２−ミクログロブリン（βｔｍ）、ペ
イシックフェトプロティン（ＲＦＰ）、アルカリフォス
ファターゼ（ＡＬＰ） 、γ−グルタミルトランスペプ
チダーゼ（γ−ＧＴＰ）、妊娠関連β、−グリコプロテ
ィン（ＳＰＩ）、妊娠関連α２−グリコプロティン（ｓ
ｐｓ）、免疫抑制酸性蛋白（ＩＡＰ） 、免疫抑制性α
２−マクログロブリン、胎児性フェリチン、フィブリノ
ーゲン、ハプトグロビン、カルシトニン、ステロイドホ
ルモン類、ポリアミン類、ＤＮＡ結合性蛋白、α、−ア
ンチトリプシン、膵癌胎児性抗原（ＰＯＡ）、ガラクト
シルトランスフェラーゼＩｆ（ＧＴ−ＩＩ）などであシ
、その他、現在研究の進められているものも多数ある。
−フェトプロティン（ＡＦＰ）、絨毛性性腺刺激ホルモ
ン（ＨＣＧ）、β２−ミクログロブリン（βｔｍ）、ペ
イシックフェトプロティン（ＲＦＰ）、アルカリフォス
ファターゼ（ＡＬＰ） 、γ−グルタミルトランスペプ
チダーゼ（γ−ＧＴＰ）、妊娠関連β、−グリコプロテ
ィン（ＳＰＩ）、妊娠関連α２−グリコプロティン（ｓ
ｐｓ）、免疫抑制酸性蛋白（ＩＡＰ） 、免疫抑制性α
２−マクログロブリン、胎児性フェリチン、フィブリノ
ーゲン、ハプトグロビン、カルシトニン、ステロイドホ
ルモン類、ポリアミン類、ＤＮＡ結合性蛋白、α、−ア
ンチトリプシン、膵癌胎児性抗原（ＰＯＡ）、ガラクト
シルトランスフェラーゼＩｆ（ＧＴ−ＩＩ）などであシ
、その他、現在研究の進められているものも多数ある。
又、輸血時の肝炎ウィルス感染によって起こる肝炎の診
断、予防に意義のある物質としてＢ型肝炎ウィルス抗原
（ＨＢｅ、 ＨＢｅ。
断、予防に意義のある物質としてＢ型肝炎ウィルス抗原
（ＨＢｅ、 ＨＢｅ。
ＨＢｅ ） 、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス抗原が挙げられ
る。
る。
異ガる２種類以上の測定成分の組み合わせの例としては
■ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣＧ■ｓｐ、、フィブリノー
ゲン■ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＨＣＧ、ＳＰｓ、フィブリノー
ゲン■フィブリノーゲン、ハプトグロビン、フェリチン
■ハブトゲ四ビン、β２ｍ１免疫抑制性。
■ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣＧ■ｓｐ、、フィブリノー
ゲン■ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＨＣＧ、ＳＰｓ、フィブリノー
ゲン■フィブリノーゲン、ハプトグロビン、フェリチン
■ハブトゲ四ビン、β２ｍ１免疫抑制性。
α２−マクログロブリン、α、−アンチトリフシン■Ａ
ＬＰ、γ−ＧＴＰ、 ＧＴ −ＩＩ■ポリアミン、ステ
ロイドホルモン■ＨＢ８、ＨＢｅ、 ＨＢｅなどを挙げ
ることができる。
ＬＰ、γ−ＧＴＰ、 ＧＴ −ＩＩ■ポリアミン、ステ
ロイドホルモン■ＨＢ８、ＨＢｅ、 ＨＢｅなどを挙げ
ることができる。
測定を実施するにあたって検体の量、結合させる抗体の
量及び比率、標識抗体又は標識抗原の量及び比率、反応
時間及び温度などの条件は、測定する物質の種類、使用
する抗体の力価、標識剤の種類などによって異なるので
各測定において最も適箔な条件を実験的に定める。
量及び比率、標識抗体又は標識抗原の量及び比率、反応
時間及び温度などの条件は、測定する物質の種類、使用
する抗体の力価、標識剤の種類などによって異なるので
各測定において最も適箔な条件を実験的に定める。
本発明の完成により、従来多数の抗原を測定する場合に
は１つ１つの抗原を個々に測定していたため測定に長時
間を要していたが著しく測定時間を短縮することが出来
た。又、必要とする被検液の量も少量で済むようになっ
た。
は１つ１つの抗原を個々に測定していたため測定に長時
間を要していたが著しく測定時間を短縮することが出来
た。又、必要とする被検液の量も少量で済むようになっ
た。
以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明する
。
。
実施例１ フィブリノーゲン、ハプトグロビン及びフェ
リチンの総和の測定 ａ）抗体結合ラテックス試薬の製造 抗フィブリノーゲン抗体（ＤＡＫＯ社）、抗ハプトグロ
ビン抗体（ＤＡＫＯ社）、抗フェリチン抗体（ＤＡＫＯ
社）をそれぞれ５１Ｒ９／ｍＡ！、１．８１ｎ９／１Ｆ
Ｌｌ、ｏ、 ７ ｍｙ／ｍｌの濃度となるように、０．
０５Ｍリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ６，４（以下ＰＢＳと
略す）で希釈し混合した。１０％ポリスチレンラテック
ス（ユニフォームラテックス粒子：ダウケミカル社）０
．５１１Ｌｌを前記混合抗体溶液２ＴｒＬｌ中に加え攪
拌し３７℃２時間反応させた。
リチンの総和の測定 ａ）抗体結合ラテックス試薬の製造 抗フィブリノーゲン抗体（ＤＡＫＯ社）、抗ハプトグロ
ビン抗体（ＤＡＫＯ社）、抗フェリチン抗体（ＤＡＫＯ
社）をそれぞれ５１Ｒ９／ｍＡ！、１．８１ｎ９／１Ｆ
Ｌｌ、ｏ、 ７ ｍｙ／ｍｌの濃度となるように、０．
０５Ｍリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ６，４（以下ＰＢＳと
略す）で希釈し混合した。１０％ポリスチレンラテック
ス（ユニフォームラテックス粒子：ダウケミカル社）０
．５１１Ｌｌを前記混合抗体溶液２ＴｒＬｌ中に加え攪
拌し３７℃２時間反応させた。
反応終了後、水冷し、遠心してＰＢＳで洗浄を行ない、
洗浄後１％牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）を含
むＰＢＳに懸濁し、抗体結合ラテックス試薬を製造した
。
洗浄後１％牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）を含
むＰＢＳに懸濁し、抗体結合ラテックス試薬を製造した
。
ｂ）標準溶液の調製
フィブリノーゲン（シグマ社）、ハプトグロビン（シグ
マ社）、フェリチン（シグマ社）、を各々１チＢＳＡを
含むＰＢＳで各々１２０．６０゜３０、１５． Ｏｔｔ
９／ｍｌ； １２．６．３．１．５． Ｏｍ９／ｍｌ
；０．８．０．４．０．２．０．１．、０１１ｇ／ｍｌ
に調製した。
マ社）、フェリチン（シグマ社）、を各々１チＢＳＡを
含むＰＢＳで各々１２０．６０゜３０、１５． Ｏｔｔ
９／ｍｌ； １２．６．３．１．５． Ｏｍ９／ｍｌ
；０．８．０．４．０．２．０．１．、０１１ｇ／ｍｌ
に調製した。
Ｃ） フィブリノーゲン、ハプトグロビン、フェリチ
ンの測定 前記ｂ）で製造したフィブリノーゲン、ハプトグロビン
、フェリチンの各濃度の溶液を２０μβずつガラススラ
イド上に取シ、次いで１％ＢＳＡを含むＰＢＳを５０μ
！及び前記ａ）で製造した抗体結合ラテックス試薬を２
０ｉｔｌｊ加えた。
ンの測定 前記ｂ）で製造したフィブリノーゲン、ハプトグロビン
、フェリチンの各濃度の溶液を２０μβずつガラススラ
イド上に取シ、次いで１％ＢＳＡを含むＰＢＳを５０μ
！及び前記ａ）で製造した抗体結合ラテックス試薬を２
０ｉｔｌｊ加えた。
この混合液を３分間攪拌しながら反応させ、凝集の程度
を肉眼で判定した。凝集のみられないものを陰性；−１
凝集のみられたものを陽性とし、その程度によって＋、
−１−１−、＋ｌｌ−の合計４段階で判定した。フィ
ブリノーゲン、ハプトグロビン、フェリチン如対する感
度はそれぞれ１５ ｔｉｇ／ｒｎｌ、 １．５７ｎ９７
ｍｌ、 ０．１１１９７ｍ１ テあった。
を肉眼で判定した。凝集のみられないものを陰性；−１
凝集のみられたものを陽性とし、その程度によって＋、
−１−１−、＋ｌｌ−の合計４段階で判定した。フィ
ブリノーゲン、ハプトグロビン、フェリチン如対する感
度はそれぞれ１５ ｔｉｇ／ｒｎｌ、 １．５７ｎ９７
ｍｌ、 ０．１１１９７ｍ１ テあった。
実施例２． 患者血清の測定
肝癌患者１８例、胃癌患者２０例、大腸癌患者２０例、
肺癌患者８例、各種良性疾患患者２５例、健常人２０例
の各々の梅漬を用いて、本発明による測定を行った。操
作方法は実施例１ ｃ）と同様に行った。測定の結果を
第１表に示した。
肺癌患者８例、各種良性疾患患者２５例、健常人２０例
の各々の梅漬を用いて、本発明による測定を行った。操
作方法は実施例１ ｃ）と同様に行った。測定の結果を
第１表に示した。
第１表
肝 ＷＪ １８１２９６
胃 癌 ２０ ３ ４ ８
５大腸癌 ２０ ２ ３ ７ ８ 肺 癌 ８ ０２ ４ ２良性疾
患 ２５１９５１０ 実施例６． 精製ＡＦＰ及び抗ＡＦＰ抗体の製造ａ）精
製ＡＦＰの製造 肝癌患者腹水５ノから硫酸アンモニウムによる塩析法（
４５９！＋上清、７０％沈殿）により、ＡＦＰ粗抽出物
１６２ｇを得た。これを、兎抗ＡＦＰ抗体結合セファロ
ース４Ｂ（１□ｄセフアロース）５０づを用いたアフィ
ニティークロマトグラフィーによシ精製して、精製ＡＦ
Ｐ９２４Ｔｎ９を得た。
５大腸癌 ２０ ２ ３ ７ ８ 肺 癌 ８ ０２ ４ ２良性疾
患 ２５１９５１０ 実施例６． 精製ＡＦＰ及び抗ＡＦＰ抗体の製造ａ）精
製ＡＦＰの製造 肝癌患者腹水５ノから硫酸アンモニウムによる塩析法（
４５９！＋上清、７０％沈殿）により、ＡＦＰ粗抽出物
１６２ｇを得た。これを、兎抗ＡＦＰ抗体結合セファロ
ース４Ｂ（１□ｄセフアロース）５０づを用いたアフィ
ニティークロマトグラフィーによシ精製して、精製ＡＦ
Ｐ９２４Ｔｎ９を得た。
ｂ）単りローン性抗ＡＦＰ抗体の製造
前記ａ）で製造した精製ＡＦＰ５０μｇを完全フロイン
ドアシュパン） （ＦＣＡ）と共に雌性ＢＡＬＢ／ｅマ
ウスの皮下に投与した。１週毎に４回投与し、最終投与
後４日目に膵臓を摘出して牌細胞を採取した。１）ｕｌ
ｂｅｃｃｏ’ ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＭＥＭ培地（以下
Ｄ−ＭＥＭと略す）にて洗浄した後１×１０８個を計測
して、ｌＸ１Ｏ’個のマウスミエローマ細胞（Ｐ３−Ｎ
ＳＩ／１− Ａｇ４−１ ）と混ぜ、３７℃で４２，５
％ポリエチレングリコール１５４０および１５％ジメチ
ルスルフオキシドを含むＤ−ＭＥＭ １ ｍＪ中で１分
間融合、させた。この細胞にＨＡＴ培地（ヒボキサンチ
ン、アミノプテリン、チミジン、１０チ牛脂児血清を含
むＲＰＭＩ’−１６４０培地）を２ｏｍｇになるように
加えて、９６ウエル マイクルプレートに０．２ ｒｎ
ｌずつ分注して２週間培養した後、増殖したウェル中の
培養上清の抗体活性を測定した。
ドアシュパン） （ＦＣＡ）と共に雌性ＢＡＬＢ／ｅマ
ウスの皮下に投与した。１週毎に４回投与し、最終投与
後４日目に膵臓を摘出して牌細胞を採取した。１）ｕｌ
ｂｅｃｃｏ’ ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＭＥＭ培地（以下
Ｄ−ＭＥＭと略す）にて洗浄した後１×１０８個を計測
して、ｌＸ１Ｏ’個のマウスミエローマ細胞（Ｐ３−Ｎ
ＳＩ／１− Ａｇ４−１ ）と混ぜ、３７℃で４２，５
％ポリエチレングリコール１５４０および１５％ジメチ
ルスルフオキシドを含むＤ−ＭＥＭ １ ｍＪ中で１分
間融合、させた。この細胞にＨＡＴ培地（ヒボキサンチ
ン、アミノプテリン、チミジン、１０チ牛脂児血清を含
むＲＰＭＩ’−１６４０培地）を２ｏｍｇになるように
加えて、９６ウエル マイクルプレートに０．２ ｒｎ
ｌずつ分注して２週間培養した後、増殖したウェル中の
培養上清の抗体活性を測定した。
次に活性の認められたウェルの細胞をＢＡＬＢ／Ｃマウ
ス胸腺細胞を含む１０チ牛脂児血清加ＲＰＭＩ −１６
４０培地ＪｏｍＪ中に添加した。この細胞浮遊液を９６
ウエル マイクロプレート２枚に分注し、１週間培養し
−Ｃ９株の抗ＡＦＰ抗体産生性ハイプリドーマを得た。
ス胸腺細胞を含む１０チ牛脂児血清加ＲＰＭＩ −１６
４０培地ＪｏｍＪ中に添加した。この細胞浮遊液を９６
ウエル マイクロプレート２枚に分注し、１週間培養し
−Ｃ９株の抗ＡＦＰ抗体産生性ハイプリドーマを得た。
これらを大量に培養し、それぞれ得られた培養上清１１
を精製ＡＦＰを結合したセファロース４Ｂ （０５叩Ａ
ＦＰ／ｍｌセファロース）５０１ｎＩ！を用いたアフィ
ニティークロマトグラフィーにより精製を行い、それぞ
れ４．２〜１１．６■の単クローン性抗体を得た。各抗
体のＬｏｔＡを１〜９とした。
を精製ＡＦＰを結合したセファロース４Ｂ （０５叩Ａ
ＦＰ／ｍｌセファロース）５０１ｎＩ！を用いたアフィ
ニティークロマトグラフィーにより精製を行い、それぞ
れ４．２〜１１．６■の単クローン性抗体を得た。各抗
体のＬｏｔＡを１〜９とした。
Ｃ）抗原認識部位の同定
１）抗ＡＦＰ抗体結合試験管の製造
Ｌｏｔ Ａ １〜９の単りローン性抗ＡＦＰ抗体０５■
をそれぞれ含むＰＢ８１ｍ／！を予めＰＢＳで洗浄した
別々のポリスチレン製試験管に加え、６７℃３時間反応
を行った後ＰＢＳで洗浄して、それぞれの単クローン性
抗体を結合させた試験管を製造した。
をそれぞれ含むＰＢ８１ｍ／！を予めＰＢＳで洗浄した
別々のポリスチレン製試験管に加え、６７℃３時間反応
を行った後ＰＢＳで洗浄して、それぞれの単クローン性
抗体を結合させた試験管を製造した。
１１）酵素標識抗ＡＦＰ抗体の製造
西洋ワサビペルオキシダーゼ（ベーリンガー・マンハイ
ム社 グレード■；以後ＨＲＰＯと略す）５ｒｖを０．
３Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液１．０−に溶解し、これに
０．１ｍｌの１％１−フルオロ−２，４−ジニトロベン
ゼンエタノール溶液を加え、１時間反応させた。さらに
、ｉ、 ｏ ｍｌの００６Ｍ過ヨウ素酸す） ＩＪウム
溶液を加えて３０分間反応させ、次に、１．０ ｍｌの
０１６Ｍエチレングリコール溶液を加えて１時間反応さ
せた後、０．０１’Ｍ炭酸ナトリウム溶液ｐＨ９，５に
対して透析した。この溶液に、前記ｂ）において製造し
た９種の抗ＡＦＰ抗体５ｍ９をそれぞれ加え、室温で３
時間反応させた後に５ｍ９の水素化硼素ナトリウムを加
えて１晩反応させた。さらに、Ｏ，ｏ Ｉ ＭＰＢＳ
ｐＨ７，２に対して透析してＨＲＰＯ標識抗ＡＦＰ抗体
を得た。
ム社 グレード■；以後ＨＲＰＯと略す）５ｒｖを０．
３Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液１．０−に溶解し、これに
０．１ｍｌの１％１−フルオロ−２，４−ジニトロベン
ゼンエタノール溶液を加え、１時間反応させた。さらに
、ｉ、 ｏ ｍｌの００６Ｍ過ヨウ素酸す） ＩＪウム
溶液を加えて３０分間反応させ、次に、１．０ ｍｌの
０１６Ｍエチレングリコール溶液を加えて１時間反応さ
せた後、０．０１’Ｍ炭酸ナトリウム溶液ｐＨ９，５に
対して透析した。この溶液に、前記ｂ）において製造し
た９種の抗ＡＦＰ抗体５ｍ９をそれぞれ加え、室温で３
時間反応させた後に５ｍ９の水素化硼素ナトリウムを加
えて１晩反応させた。さらに、Ｏ，ｏ Ｉ ＭＰＢＳ
ｐＨ７，２に対して透析してＨＲＰＯ標識抗ＡＦＰ抗体
を得た。
ｌ１１）抗原認識部位の同定
前記１）で製造した各抗ＡＦＰ抗体結合試験管に、前記
ａ）で製造したＡＦＰを１００ ｎｇ／ｍｌとなるよう
ＰＢＳで希釈した標準液ｏ１ｒｎｌおよび前記１１）で
製造したＨＲＰＯ標識抗ＡＦＰ抗体１００倍希釈溶液０
．４ ｍｌを加え、６０分間反応を行った。反応終了後
、洗浄液で洗浄し、２０４個７のＯ−フェニレンジアミ
ンおよび６ｍＭ過酸化水素を含む酵素基質溶液ｏ、 ｓ
ｍｌを加え３０分間反応を行った。１規定塩酸２ ｍ
ｌを加えて酵素反応を停止した後、４９２ｎｍにおける
吸光度を測定し、反応の得られた組合せを＋、得られな
かった組合せを−として第２表に示した。
ａ）で製造したＡＦＰを１００ ｎｇ／ｍｌとなるよう
ＰＢＳで希釈した標準液ｏ１ｒｎｌおよび前記１１）で
製造したＨＲＰＯ標識抗ＡＦＰ抗体１００倍希釈溶液０
．４ ｍｌを加え、６０分間反応を行った。反応終了後
、洗浄液で洗浄し、２０４個７のＯ−フェニレンジアミ
ンおよび６ｍＭ過酸化水素を含む酵素基質溶液ｏ、 ｓ
ｍｌを加え３０分間反応を行った。１規定塩酸２ ｍ
ｌを加えて酵素反応を停止した後、４９２ｎｍにおける
吸光度を測定し、反応の得られた組合せを＋、得られな
かった組合せを−として第２表に示した。
第２表
抗原認識部位の差よシ前記ｂ）で得られた９株の単りロ
ーン性抗ＡＦＰ抗体は１ｏｔ７％１゜２、３．５．７の
５株とＬＯｔＡ６の１株と、ＬｏｔＡ４．８．９の３株
との３種類に分別することができ、それぞれ抗ＡＦＰ抗
体〔Ａ〕、〔Ｂ〕及び〔Ｃ〕とした。このなかで不溶化
抗体として［Ａ）、標識抗体として〔Ｃ〕を用いる。
ーン性抗ＡＦＰ抗体は１ｏｔ７％１゜２、３．５．７の
５株とＬＯｔＡ６の１株と、ＬｏｔＡ４．８．９の３株
との３種類に分別することができ、それぞれ抗ＡＦＰ抗
体〔Ａ〕、〔Ｂ〕及び〔Ｃ〕とした。このなかで不溶化
抗体として［Ａ）、標識抗体として〔Ｃ〕を用いる。
実施例４． 精製ＣＥＡ及び抗ＣＥＡ抗体の製造ａ）精
製ＣＥＡの製造 大腸癌組織４０．９を細切し、これに１００１ｎｌの蒸
留水を加えホモジナイザーを用いて破砕した。この液に
、同量の１．２Ｍ過塩素酸を加えて、攪拌下に３０分間
抽出を行った。遠心分離によシ上清を得、これを蒸留水
に対して透析してＣＥＡ粗抽出物を得た。
製ＣＥＡの製造 大腸癌組織４０．９を細切し、これに１００１ｎｌの蒸
留水を加えホモジナイザーを用いて破砕した。この液に
、同量の１．２Ｍ過塩素酸を加えて、攪拌下に３０分間
抽出を行った。遠心分離によシ上清を得、これを蒸留水
に対して透析してＣＥＡ粗抽出物を得た。
この粗抽出物を１０ｍＡ！に濃縮して、あらかじめ生理
食塩水にて平衡化しておいた ５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂを用いてゲル’ｉｐ過を行
い、第１分画を得た。これを同様に平衡化した５ｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ −２００にて再びゲルｆｌ過を行い、第
２分画を採取して２ ｍｌに濃縮して精製ＣＥＡ１３５
μｇを得た。
食塩水にて平衡化しておいた ５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂを用いてゲル’ｉｐ過を行
い、第１分画を得た。これを同様に平衡化した５ｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ −２００にて再びゲルｆｌ過を行い、第
２分画を採取して２ ｍｌに濃縮して精製ＣＥＡ１３５
μｇを得た。
ｂ）単クローン性抗ＣＥＡ抗体の製造
前記ａ）で製造した精製ＣＥＡを用いて実施例３−ｂ）
と同じ操作で抗ＣＥＡ産生性ハイブリドーマ８株を得た
。
と同じ操作で抗ＣＥＡ産生性ハイブリドーマ８株を得た
。
なお、マウスの免疫は各投与共に精製ＣＥＡ３０μｌを
用いた。あらかじめ、腹腔に０．５ ｍｌのプリスタン
（２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン；和
光紬薬）を投与した雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔に、
ｌＸ１０’個の各ハイプリドーマを接種して、２週間後
に腹水を採取した。各腹水をｏ、ｏＩＭｌｊン酸緩衝液
ｐＨ７，０で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースにようク
ロマトグラフィーを折力い、未吸着分画を単クローン性
抗ＣＥＡ抗体として得た。実施例３−Ｃ）に準じた抗原
認識部位の同定試験の結果、各抗体は３種類にわけられ
、各々５１ｏｔ、２Ｌｏｔ、 Ｉ Ｌｏｔ、であシ、そ
れぞれ抗ＣＥＡ抗体（Ａ）、〔Ｂ〕及び〔Ｃ〕とした。
用いた。あらかじめ、腹腔に０．５ ｍｌのプリスタン
（２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン；和
光紬薬）を投与した雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔に、
ｌＸ１０’個の各ハイプリドーマを接種して、２週間後
に腹水を採取した。各腹水をｏ、ｏＩＭｌｊン酸緩衝液
ｐＨ７，０で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースにようク
ロマトグラフィーを折力い、未吸着分画を単クローン性
抗ＣＥＡ抗体として得た。実施例３−Ｃ）に準じた抗原
認識部位の同定試験の結果、各抗体は３種類にわけられ
、各々５１ｏｔ、２Ｌｏｔ、 Ｉ Ｌｏｔ、であシ、そ
れぞれ抗ＣＥＡ抗体（Ａ）、〔Ｂ〕及び〔Ｃ〕とした。
このうちで、不溶化抗体として、〔Ａ〕、標識抗体とし
て〔Ｂ〕を用いる。
て〔Ｂ〕を用いる。
実施例５． ＨＣＧ−β及び抗ＨＣＧ−β抗体の作製
ａ）ＨＣＧ−βサブユニットの製造 ＨＣＧ（２００ロ工Ｕ／ｍ９）１ｇを２ｍＡ’ノ０．０
２５Ｍリン酸緩衝液ＰＨ５，６に溶解し、あらかじめ同
じ緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ −５ｅｐｈａｄｅＸ
Ａ−５０５ｇを用いてクロマトグラフィーを行った。
ａ）ＨＣＧ−βサブユニットの製造 ＨＣＧ（２００ロ工Ｕ／ｍ９）１ｇを２ｍＡ’ノ０．０
２５Ｍリン酸緩衝液ＰＨ５，６に溶解し、あらかじめ同
じ緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ −５ｅｐｈａｄｅＸ
Ａ−５０５ｇを用いてクロマトグラフィーを行った。
０．０５Ｍ！Ｊン酸緩衝液ｐＨ５，６溶出分画を採取し
蒸留水に対して透析して精製ＨＣＧ ３０８■を得、こ
れを凍結乾燥した。このうち、５００ｍ９を１０Ｍ尿素
（ｐＨ４，５） １０ｍｌに溶解し、４０℃、１時間反
応させた。あらかじめ００３ＭグリシンおよびｊＯＭ尿
素を含む溶液で平衡化したＤＥＡＥ −５ｅｐｈａｄｅ
ｘ Ａ −５０２ｇを用いてクロマトグラフィーを行い
、０．２Ｍグリシン、ＩＭＮａＣＡおよび８Ｍ尿素を含
む溶液で溶出して得た分画を生理食塩水に対して透析し
てＨＣＧ−βサブユニツト１４７■を得た。
蒸留水に対して透析して精製ＨＣＧ ３０８■を得、こ
れを凍結乾燥した。このうち、５００ｍ９を１０Ｍ尿素
（ｐＨ４，５） １０ｍｌに溶解し、４０℃、１時間反
応させた。あらかじめ００３ＭグリシンおよびｊＯＭ尿
素を含む溶液で平衡化したＤＥＡＥ −５ｅｐｈａｄｅ
ｘ Ａ −５０２ｇを用いてクロマトグラフィーを行い
、０．２Ｍグリシン、ＩＭＮａＣＡおよび８Ｍ尿素を含
む溶液で溶出して得た分画を生理食塩水に対して透析し
てＨＣＧ−βサブユニツト１４７■を得た。
ｂ）抗ＨＣＧ−β抗体の製造
前記ａ）で製造したＨＣＧ−βサブユニットを用いて実
施例３−ｂ）と同じ操作で抗ＨＣＧ−β産生性ハイプリ
ドーマ１１株を得た。これらの株よシ得られた抗体につ
いて実施例３−ｃ）の方法に準じて抗原認識部位の同定
を行ない、それぞれ８ ｌｏｔ、及び５ Ｌｏｔ、を包
含する２種類に分別し、それぞれＨＣＧ−β抗体〔Ａ〕
及びＣＢ）とした。このなかで、不溶化抗体とじて［Ａ
）、標識抗体としてＣＢ’Ｊを用いる。上記の組み合わ
せで、黄体形成ホルモン（ＬＨ）との交叉反応を調べた
ところ、ＨＣＧを１００チとすると、ＬＨは１％以下と
なった。
施例３−ｂ）と同じ操作で抗ＨＣＧ−β産生性ハイプリ
ドーマ１１株を得た。これらの株よシ得られた抗体につ
いて実施例３−ｃ）の方法に準じて抗原認識部位の同定
を行ない、それぞれ８ ｌｏｔ、及び５ Ｌｏｔ、を包
含する２種類に分別し、それぞれＨＣＧ−β抗体〔Ａ〕
及びＣＢ）とした。このなかで、不溶化抗体とじて［Ａ
）、標識抗体としてＣＢ’Ｊを用いる。上記の組み合わ
せで、黄体形成ホルモン（ＬＨ）との交叉反応を調べた
ところ、ＨＣＧを１００チとすると、ＬＨは１％以下と
なった。
実施例６． ＡＦＰ、ＣＥＡ及びＨＣＧの総和の測定
ａ）試験管に抗体を結合させた試薬の製造ポリスチレン
製試験管に、実施例３，４及び５で製造した単りローン
性抗ＡＦＰ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥ抗体を各々０．
１．０．５． Ｏ，’２５ｍｙ／ｍｌの濃度となるよう
にＰＢＳで希釈し混合した溶液を１−加え、３７℃、３
時間反応させた。反応終了後、ＰＢＳで洗浄して試験管
に抗体を結合させた試薬を製造した。
ａ）試験管に抗体を結合させた試薬の製造ポリスチレン
製試験管に、実施例３，４及び５で製造した単りローン
性抗ＡＦＰ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥ抗体を各々０．
１．０．５． Ｏ，’２５ｍｙ／ｍｌの濃度となるよう
にＰＢＳで希釈し混合した溶液を１−加え、３７℃、３
時間反応させた。反応終了後、ＰＢＳで洗浄して試験管
に抗体を結合させた試薬を製造した。
ｂ）標準溶液の調製
実施例３−ａ）で製造したＡＦＰ、実施例４−ａ）で製
造したＣＥＡ及びＨＣＧ（ＨＣＧモチダニ持田持薬製薬
１％ＢＳＡを含むＰＢＳで各々８０゜４０、 ２０．
１０． ５． Ｏｎｆｉ／ｍｌ、 ８０． ４０．
２０゜１０、５． Ｏｎ９／ｍｌ、 ８０．４０．２
０．１０．５．０ｍ１ｕ／ｍ７！に調製した。
造したＣＥＡ及びＨＣＧ（ＨＣＧモチダニ持田持薬製薬
１％ＢＳＡを含むＰＢＳで各々８０゜４０、 ２０．
１０． ５． Ｏｎｆｉ／ｍｌ、 ８０． ４０．
２０゜１０、５． Ｏｎ９／ｍｌ、 ８０．４０．２
０．１０．５．０ｍ１ｕ／ｍ７！に調製した。
ｃ） ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣＧの測定前記ａ）で
製造した試験管に抗体を結合させた試薬に前記ｂ）で調
製した各濃度のＡＦＰ。
製造した試験管に抗体を結合させた試薬に前記ｂ）で調
製した各濃度のＡＦＰ。
ＣＥＡ、ＨＣＧ標準溶液の０．１ ｍを入れ、１％ＢＳ
Ａを含むＰＢＳ溶液を０．４−加え攪拌後、室温で２時
間反応させた。反応終了後、試験管を蒸留水で洗浄後、
実施例３，４及び５で製造した標識抗体を１％ＢＳＡを
含むＰＢＳで抗ＡＦＰ標識抗体２０００倍、抗ＣＥＡ標
識抗体８００倍、抗ＣＥ標識抗体８００倍に希釈混合し
、その０、５ ｍｌを加え室温で２時間反応させた。反
応終了後試験管を蒸留水で洗浄し、０．５ ｍｌの基質
溶液（６ｍＭ／７３の過酸化水素、２０ ｍＭ／ｌの０
−フェニレンジアミンを含有するＰＢＳ）を加え、室温
で遮光しながら３０分間反応させた。さらに１規定の塩
酸２ ｍｌを加え反応を停止し、４９２ｎｍの波長で吸
光度を測定した。比較のため、標識抗体を混合せずにそ
れぞれ１種類ずつ反応させた場合についても測定した。
Ａを含むＰＢＳ溶液を０．４−加え攪拌後、室温で２時
間反応させた。反応終了後、試験管を蒸留水で洗浄後、
実施例３，４及び５で製造した標識抗体を１％ＢＳＡを
含むＰＢＳで抗ＡＦＰ標識抗体２０００倍、抗ＣＥＡ標
識抗体８００倍、抗ＣＥ標識抗体８００倍に希釈混合し
、その０、５ ｍｌを加え室温で２時間反応させた。反
応終了後試験管を蒸留水で洗浄し、０．５ ｍｌの基質
溶液（６ｍＭ／７３の過酸化水素、２０ ｍＭ／ｌの０
−フェニレンジアミンを含有するＰＢＳ）を加え、室温
で遮光しながら３０分間反応させた。さらに１規定の塩
酸２ ｍｌを加え反応を停止し、４９２ｎｍの波長で吸
光度を測定した。比較のため、標識抗体を混合せずにそ
れぞれ１種類ずつ反応させた場合についても測定した。
結果を第１図〜第４図に示した。なお、各図において使
用した不溶化抗体と標識抗体の組合せは第３表の通りで
ある。
用した不溶化抗体と標識抗体の組合せは第３表の通りで
ある。
第３表
この結果から、ＡＦＰ、ＣＥＡ及びＨＣＧはその間に交
叉反応がないから、これらの物質が混在していても個別
の標識抗体を使用すればそれぞれ個別に測定することが
でき、又、標識抗体が混合物の場合であってもそれぞれ
対応する抗原と抗体のみが反応し、他の物質の存在によ
って反応性が影響されないことがわかる。
叉反応がないから、これらの物質が混在していても個別
の標識抗体を使用すればそれぞれ個別に測定することが
でき、又、標識抗体が混合物の場合であってもそれぞれ
対応する抗原と抗体のみが反応し、他の物質の存在によ
って反応性が影響されないことがわかる。
実施例Ｚ 患者血清の測定
肝癌患者１０例、胃癌患者１０例、大腸癌患者１０例、
各種良性疾患患者１０例及び健常人１０例の各血清につ
いてＡＦＰ、 ＣＥＡ及びＨＣＧの総量を測定した。測
定は標準溶液又は被検梅漬をｏ、 １ｍｌ使用し、実施
例６−Ｃ）と同様に行なった。測定値は４９２ｎｍの吸
光度をそのま＼及びその吸光度をＣＥＡの標準曲線にあ
てはめてＣＥＡ換算した値で表わした。なお比較のため
同一検体についてＡＦＰ、 ＣＥＡ及びＨＣＧをそれぞ
れ個別にも測定した。結果を第４表に示した。
各種良性疾患患者１０例及び健常人１０例の各血清につ
いてＡＦＰ、 ＣＥＡ及びＨＣＧの総量を測定した。測
定は標準溶液又は被検梅漬をｏ、 １ｍｌ使用し、実施
例６−Ｃ）と同様に行なった。測定値は４９２ｎｍの吸
光度をそのま＼及びその吸光度をＣＥＡの標準曲線にあ
てはめてＣＥＡ換算した値で表わした。なお比較のため
同一検体についてＡＦＰ、 ＣＥＡ及びＨＣＧをそれぞ
れ個別にも測定した。結果を第４表に示した。
第４表
第４表つづき
第４表つづき
癌の発生を疑うべき診断基準値をそれぞれＡＦＰ １０
ｎ９／ｍｌ、 ＣＥＡ ５ ｎ９／ｙｎｌ、ＨＣＧ
５ ｍｉｕ／ｍＪ以上と仮定した場合の単項目測定での
陽性率及び本発明の方法によってこれらの三種の物質を
総量として測定したときの４９２ｎｍの吸光度が０３５
０以上又はその吸光度をＣＥＡ換算した場合、８．５ｎ
ｆｉ／ｍ１以上を癌陽性としたときの、上記第４表の測
定における疾患別陽性率を第５表に示した。
ｎ９／ｍｌ、 ＣＥＡ ５ ｎ９／ｙｎｌ、ＨＣＧ
５ ｍｉｕ／ｍＪ以上と仮定した場合の単項目測定での
陽性率及び本発明の方法によってこれらの三種の物質を
総量として測定したときの４９２ｎｍの吸光度が０３５
０以上又はその吸光度をＣＥＡ換算した場合、８．５ｎ
ｆｉ／ｍ１以上を癌陽性としたときの、上記第４表の測
定における疾患別陽性率を第５表に示した。
第５表
３種類の腫瘍マーカーについて個別に測定した値の１種
類以上が基準値を越えた患者を癌陽性とすると、３種類
の腫瘍マーカーを総量として測定した場合の癌陽性率と
同じであった。このことは癌の診断にあたって、実質上
、腫瘍マーカーを個別に測定する必要はなく、総量とし
て測定した値から診断することが可能であることを示す
ものである。
類以上が基準値を越えた患者を癌陽性とすると、３種類
の腫瘍マーカーを総量として測定した場合の癌陽性率と
同じであった。このことは癌の診断にあたって、実質上
、腫瘍マーカーを個別に測定する必要はなく、総量とし
て測定した値から診断することが可能であることを示す
ものである。
実施例８ ＡＦＰ、ＣＥＡ及びＨＣＧの総和の測定ａ
）標準溶液の調製 実施例６−ａ）で製造したＡＦＰ、実施例４−ａ）で製
造したＣＥＡ及びＨＣＧ （ＨＣＧ モチダ、持出製薬
■）を１％ＢＳＡを含むＰＢＳで各々８０ｎ、９／ｍｌ
、 ８ ｏ ｎｊｉ／ｍｌ、 ８ ｏ ｍｉｕ／ｍＪに
調製し、その溶液を第６表に示す比率で混合し、５種類
の混合溶液を調製した。
）標準溶液の調製 実施例６−ａ）で製造したＡＦＰ、実施例４−ａ）で製
造したＣＥＡ及びＨＣＧ （ＨＣＧ モチダ、持出製薬
■）を１％ＢＳＡを含むＰＢＳで各々８０ｎ、９／ｍｌ
、 ８ ｏ ｎｊｉ／ｍｌ、 ８ ｏ ｍｉｕ／ｍＪに
調製し、その溶液を第６表に示す比率で混合し、５種類
の混合溶液を調製した。
第６表
上記１〜５の混合溶液を１％ＢＳＡを含むＰＢＳで各々
２倍、４倍及び８倍に希釈して標準溶液を調製した。
２倍、４倍及び８倍に希釈して標準溶液を調製した。
ｂ） ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣＧの測定前記ａ）で
製造した標準溶液のｏｌｍｌと３種類の混合標識抗体を
用い、実施例６−Ｃ）と同様に操作を行なった。各々の
標準曲線を第５図に示した。ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣ
Ｇを混合した標準溶液を用いた場合でも、第１図と同様
な標準曲線を示した。このことは、ＡＦＰ、ＣＥＡ及び
ＨＣＧが混在している場合であっても、本発明の方法に
よってそれぞれが個別に測定され、その総和としての測
定値が得られることを示すものである。
製造した標準溶液のｏｌｍｌと３種類の混合標識抗体を
用い、実施例６−Ｃ）と同様に操作を行なった。各々の
標準曲線を第５図に示した。ＡＦＰ、 ＣＥＡ、 ＨＣ
Ｇを混合した標準溶液を用いた場合でも、第１図と同様
な標準曲線を示した。このことは、ＡＦＰ、ＣＥＡ及び
ＨＣＧが混在している場合であっても、本発明の方法に
よってそれぞれが個別に測定され、その総和としての測
定値が得られることを示すものである。
第１図ないし第・４図は実施例６における標準曲線を表
わすグラフである。 第５図は実施例８における希釈曲線を表わすグラフであ
る。 白η ２１ 図 ０５１０２０ ４０ ８０！
４ １’Ｊ １）（ｎ９／ｍｌ 又Ｌ−ｔ ”ｉ
ｕ／ｍ（）才２図 ０５１０２０ ４０ ８０標準１’
／ｊ 貿（ｎ９／ｍｌ 又り、ｒ ”ｉｕ／ｍｌ）才３
図 標準Ｔ’Ｊ １１ （ｎ９／ｍ１ＲＬ：ｔ””／ｒｒ）
ｌ ）才４凶 ０５１０２０ ４０ ８０ｊａ 準
７’ｌｌ ｉｉ （”Ｊ／ｍｌ 又ＬＩ ”’ｕ／ｍ
１）２５図 ；６１「 軟イｆ牟
わすグラフである。 第５図は実施例８における希釈曲線を表わすグラフであ
る。 白η ２１ 図 ０５１０２０ ４０ ８０！
４ １’Ｊ １）（ｎ９／ｍｌ 又Ｌ−ｔ ”ｉ
ｕ／ｍ（）才２図 ０５１０２０ ４０ ８０標準１’
／ｊ 貿（ｎ９／ｍｌ 又り、ｒ ”ｉｕ／ｍｌ）才３
図 標準Ｔ’Ｊ １１ （ｎ９／ｍ１ＲＬ：ｔ””／ｒｒ）
ｌ ）才４凶 ０５１０２０ ４０ ８０ｊａ 準
７’ｌｌ ｉｉ （”Ｊ／ｍｌ 又ＬＩ ”’ｕ／ｍ
１）２５図 ；６１「 軟イｆ牟
Claims (9)
- （１）測定物質に対する抗体又は抗原を結合させた不溶
性担体に、測定物質を含む被検液を反応させることによ
って生体中に存在する物質を測定する免疫学的測定方法
において、不溶性担体に、それぞれ異なる２種類以上の
測定物質に対する抗体又は抗原を結合させたことを特徴
とするそれぞれ異なる２種類以上の測定物質量の総和を
一度に測定する免疫学的測定方法。 - （２）免疫学的測定方法が凝集反応又は凝集阻止反応で
ある特許請求の範囲第１項記載の測定方法。 - （３）抗原又は抗体を結合させる不溶性担体が赤血球、
高分子ラテックス又はカーボンブラックである特許請求
の範囲第２項記載の測定方法。 - （４）同一の不溶性担体に２種類以上の測定物質に対応
する２種類以上の抗体を結合せしめたものと、測定物質
を含む被検液とを反応させて凝集反応を生起せしめ、こ
の凝集の程度を測定することによって２種類以上の測定
物質量の総和を一度に測定する特許請求の範囲第２項記
載の測定方法。 - （５）免疫学的測定方法が酵素免疫測定方法、放射免疫
測定方法又は蛍光免疫測定方法である特許請求の範囲第
１項記載の測定方法。 - （６） ａ） 同一の不溶性担体に２種類以上の測定
物質に対応する２種類以上の抗体を結合せしめた不溶化
抗体と、測定物質を含む被検液とを反応させ、反応生成
物を分離するか又は分離せずに、 これＫ。 ｂ）前記測定物質に対応する抗体に標識剤を結合させた
標識抗体の２種類以上を反応させた後、固相と液相を分
離し、 Ｃ）次いで固相又は液相中の標識剤の活性を測定するこ
とからなる、 ２種類以上の測定物質量の総和を一度に測定する特許請
求の範囲第５項記載の測定方法。 - （７） ａ） 同一の不溶性担体に２種類以上の測定
物質に対応する２種類以上の抗体を結合せしめた不溶化
抗体と、測定物質と同−又は免疫学的に同一性を有する
物質に標識剤を結合させた標識抗原の２種類以上と、測
定物質を含む被検液との三者を反応させた後、固相と液
相を分離し、 ｂ）次いで固相又は液相中の標識剤の活性を測定するこ
とからなる２種類以上の測定物質量の総和を一度に測定
する特許請求の範囲第５項記載の測定方法。 - （８） （ａ） 測定物質を含む被検液と２種類以上
の測定物質に対応する２種類以上の抗体に標識剤を結合
させた標識抗体を反応させ、 これに、 （ｂ） 同一の不溶性担体に２種類以上の測定物質と
同−又は免疫学的に同一性を有する物質を結合せしめた
不溶化抗原を反応させた後、固相と液相を分離し、 （Ｃ）次いで固相又は液相中の標識剤の活性を測定する
ことからなる２種類以上の測定物質量の総和を一度に測
定する特許請求の範囲第５項記載の方法。 - （９）抗体が腫瘍マーカーに対する抗体である特許請求
の範囲第１項ないし第８項のいずれか１項記載の測定方
法。 Ｃ１Ｏ抗体が単クローン性抗体である特許請求の範囲第
１項ないし第９項のいずれか１項記載゛の測定方法。 ０１）不溶性担体にそれぞれ異なる２種類以上の測定物
質に対する抗体又は抗原を結合させたことを特徴とする
免疫学的測定試薬。 ０リ 凝集反応又は凝集阻止反応を利用した特許請求の
範囲第１１項記載の測定試薬。 ０１ 不溶性担体が赤血球、高分子ラテックス又はカ
ーボンブラックである特許請求の範囲第１２項記載の測
定試薬。 ０４ 酵素免疫測定法、放射免疫測定法又は蛍光免疫
測定法を利用した特許請求の範囲第１１項記載の測定試
薬。 α９ 抗体が腫瘍マーカーに対する抗体である特許請求
の範囲第１１項力いし第１４項のいずれか一項に記載の
測定試薬。 ０・ 抗体が単クローン性抗体である特許請求の範囲第
１１項ないし第１５項のいずれか一項に記載の測定試薬
。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13413182A JPS5924256A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 免疫学的測定方法及び試薬 |
| GB08319459A GB2125547B (en) | 1982-07-31 | 1983-07-19 | Simultaneous immunoassay of two or more substances |
| SE8304190A SE8304190L (sv) | 1982-07-31 | 1983-07-28 | Forfarande och reagens for immunologiska metningar |
| CH416183A CH664018A5 (de) | 1982-07-31 | 1983-07-29 | Immunologisches bestimmungsverfahren und reagens fuer immunologische bestimmungen. |
| CA000433585A CA1235062A (en) | 1982-07-31 | 1983-07-29 | Immunological measuring method and reagent |
| AT276883A AT385601B (de) | 1982-07-31 | 1983-07-29 | Immunologisches bestimmungsverfahren und reagens zur durchfuehrung desselben |
| NL8302708A NL8302708A (nl) | 1982-07-31 | 1983-07-29 | Immunologische meetmethode en reagens. |
| DE19833327496 DE3327496A1 (de) | 1982-07-31 | 1983-07-29 | Immunologisches bestimmungsverfahren und mess reagenz hierzu |
| FR8312645A FR2531223B1 (fr) | 1982-07-31 | 1983-08-01 | Procede et reactif de dosage immunologique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13413182A JPS5924256A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 免疫学的測定方法及び試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5924256A true JPS5924256A (ja) | 1984-02-07 |
Family
ID=15121185
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13413182A Pending JPS5924256A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 免疫学的測定方法及び試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5924256A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61292556A (ja) * | 1985-06-20 | 1986-12-23 | Green Cross Corp:The | 酵素免疫測定方法およびキツト |
| JPH032565A (ja) * | 1989-05-30 | 1991-01-08 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的分析方法 |
| JP2008080439A (ja) * | 2006-09-27 | 2008-04-10 | Ishizuka Glass Co Ltd | 多面体の加工保持装置及び加工方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5215815A (en) * | 1975-07-23 | 1977-02-05 | Coulter Electronics | Measurement of presence of antigen or antibody within sample |
| JPS5585252A (en) * | 1978-10-30 | 1980-06-27 | Ames Yissum Ltd | Compound even system peculiar bondage analysis and test means and test kit for same |
| JPS5696248A (en) * | 1979-09-28 | 1981-08-04 | Ventrex Lab Inc | Diagnostic testing method |
| JPS5712363A (en) * | 1980-06-24 | 1982-01-22 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | Immunoassay for various simultaneous measurement |
-
1982
- 1982-07-31 JP JP13413182A patent/JPS5924256A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5215815A (en) * | 1975-07-23 | 1977-02-05 | Coulter Electronics | Measurement of presence of antigen or antibody within sample |
| JPS5585252A (en) * | 1978-10-30 | 1980-06-27 | Ames Yissum Ltd | Compound even system peculiar bondage analysis and test means and test kit for same |
| JPS5696248A (en) * | 1979-09-28 | 1981-08-04 | Ventrex Lab Inc | Diagnostic testing method |
| JPS5712363A (en) * | 1980-06-24 | 1982-01-22 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | Immunoassay for various simultaneous measurement |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61292556A (ja) * | 1985-06-20 | 1986-12-23 | Green Cross Corp:The | 酵素免疫測定方法およびキツト |
| JPH032565A (ja) * | 1989-05-30 | 1991-01-08 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的分析方法 |
| JP2008080439A (ja) * | 2006-09-27 | 2008-04-10 | Ishizuka Glass Co Ltd | 多面体の加工保持装置及び加工方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2322562B1 (en) | Monoclonal antibody, and immunoassay using same | |
| US4894347A (en) | Erythrocyte agglutination assay | |
| JPH06102037B2 (ja) | 抗体、製法と用途 | |
| JP2009085753A (ja) | サンドイッチイムノアッセイ法 | |
| JPH04503600A (ja) | 抗インターロイキン―１α及び―１βのモノクローナル抗体、その製法、ならびに前記抗体類の、インターロイキン―１α及び―１βの検出と治療への応用 | |
| WO2004011607A2 (en) | Reagent and method for determination of a substance using an immunoaggregator | |
| CN100593721C (zh) | 用于病人的样本中生物化学标记物的早期和同步检测的免疫测定法和试剂盒 | |
| JP4334065B2 (ja) | 抗体のフレームワーク領域から誘導される物質によるイムノアッセイの干渉の減少 | |
| JP2598893B2 (ja) | 特異性ｃｅａファミリー抗原に対し特異性の抗体を使用するイム／アッセイ | |
| JPH08311100A (ja) | ヒト肺腺癌に関するモノクローナル抗体および抗原、及びそれを用いた免疫測定方法 | |
| JPH08100000A (ja) | ヒトｉｖ型コラーゲンに対する抗体及びその利用 | |
| JPS5924256A (ja) | 免疫学的測定方法及び試薬 | |
| CA1235062A (en) | Immunological measuring method and reagent | |
| EP0114818B1 (en) | Immunoassay for carbohydrate antigenic determinant | |
| CA2281262C (en) | Anti-human medullasin monoclonal antibody, process for producing the same and immunoassay using the same | |
| WO2022023461A1 (en) | Improved epitope for detecting and/or quantifying autoantibodies against alpha-fetoprotein | |
| JP2915530B2 (ja) | ラミニン フラグメント | |
| JPS5940166A (ja) | 免疫学的測定方法及び試薬 | |
| JP4422291B2 (ja) | ヒトメダラシンの免疫学的測定方法 | |
| JP2878317B2 (ja) | ラミニン測定試薬 | |
| JPS5954966A (ja) | 免疫学的測定試薬 | |
| JPS62185169A (ja) | 多目的免疫化学的測定法および試薬 | |
| JP4363767B2 (ja) | 多発性硬化症の検査方法 | |
| JP4037586B2 (ja) | ヒトメダラシンの免疫学的測定方法 | |
| AU2002346529B2 (en) | Immunoassay and kit for an early and simulataneous detection of biochemical markers in a patient's sample |