JPS59222458A - 新規ペプチド及びその塩 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は胃酸分泌促進作用及び膵外分泌促進作用を有す
る新規ペプチドの合成に関するものである。すなわち本
発明は次の一般式（１１Ｒ−八−Ｔｙｒ　　（ＳＯ３　
　Ｈ　）−Ｂ−Ｔｒｐ−Ｃ−八ｓｐ−Ｐｈｅ−Ｎｌ１２
　　　（１１〔式中Ｒはアセチル、プロピオニル、フタ
リル。

グルタリルまたはｐＧｌｕを示し、ＡはＡｌａまたはＧ
ｌｙを示し、ＢはＧｌｙ．Ｌ−Ａｌａ，Ｄ−八ｌａ，Ｌ
−Ｔｒｐまたは〕Ｄ−　Ｔｒｐを示し、ＣはＬｅｕ，　
ｎＬｅｕまたはＭｅｔを示す。〕で表されるペプチド及
びその塩。

本明細書に１９いて、アミノ酸、ペプチド、保護基、活
性基、その他に関し略号で表示する場合．■ＵＰＡに，
ＩＵＢの規定或いは当該分野における慣用記号に従・）
ものとし、その例を次に挙げる。

但しアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合は、
１７体を示すものとする。

Ａ　ｌ　ａ　−−−−−アラニン残基 ’［”　ｙ　ｒ　−−−チロシン残基 ＧＩ　Ｙ　　−−−グリシン残基 ’ｌ’　ｒ　ｐ　　−一トリプトファン残基ＭｏＬーメ
チオニン残基 しくシ（Ｉ−ｍ−ロイシン残基 ｎ　１．、　（！鬼１ーーノルロイシン残基ΔＳｐ　−
−アスパラギン酸残基 １’　ｂ　ｅ　−−−フェニルアラニン残基ｐ　（、”
ｙ　Ｉｌｌ〜−−ピログルタミン酸残基、一般式（１）
で表されるペプチドはペプチド合成に通富用いられる方
法、具体的には「ザ．ペプチド（Ｔｌ＋ｅ　Ｉ’ｃｐｔ
ｉｄｅｓ）　Ｊ第１巻（１９６６年＞　　（　Ｓｃｈｒ
ｏｄｅｒａｎｄ　　Ｌｎｈｋｅ著、　八ｃａｄｅｍｉｃ
　　Ｐｒｅｓｓ、　　Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、　　Ｕ、Ｓ
。

八、〕あるいは「ペプチド合成」　〔東屋ら著、丸善株
式会社（１９７５年）〕に記載される如き方法に従い、
例えばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混合酸無
水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（Ｐ〜ユニトロフェ
ニルエステル法Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル
法、シアノメチルエステル法等）、ウッドワード試薬Ｋ
を用いる方法、カルボジイミダゾール法、酸化還元法、
ＤＣＣ−アディティブ（ＨＯＮＢ、ＨＯＢ　ｔ、ＨＯ３
ｕ）法、固相法等により製造できる。

通常、一般式（１）のペプチドは上記した一般のポリペ
プチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸に順次１個
ずつアミノ酸を縮合させる所謂ステンプワイズ法によっ
て、又は数個のフラグメントに分けてカップリングさせ
る方法によって製造される。より詳細には上記ペプチド
は、その結合の任意の位置で２分される２種のフラグメ
ントの一方に相当する反応性カルボキシル基を有する原
料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミノ基を
有する原料をペプチド合成の常套手段で縮合させ、生成
する縮合物が保護基を有する場合、その保護基を常套手
段で脱離させることにより製造し得る。

尚、一般式（１）のペプチドを製造する反応工程でアス
パラギン酸を用いる場合、これは通常保護しておくのが
望３１１．い場合が多く、最終工程では通常ペプチドの
構成アミノ酸残基の少なくとも一つが保護された保護ペ
プチドからすべての保護基を脱離する。

又、士、記−Ｆ１５一式（１）のペプチドの合成反応工
程では、反Ｌ＋’、）、に関Ｌｊずべきでない官能基は
通常の保護基に保護され、反応終了後該保護基は脱離さ
れる。

更に反応に関りする官能基は通常活性化される。

これら各反応方法は公知であり、それに用いられる試薬
等も公知のものから適宜選択し得る。

アミノ基の保護基としては、例えばカルボヘンジキシ、
　１．ｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（以下ｒｒｌｏ
ｃ−ｌとｌ１ｉＪ　ｔ　）、　ｔｅｒｔ−アミルオキシ
カルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、Ｐ−メト
キシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジル
オキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ト
リフルオロアセチル、フクリル、ホルミル、０−ニトロ
フェニルスルフェニルジフェニルポスフィノチオイルな
どが挙げられる。カルボキシル基の保護基としては、例
えばアルキルエステルく例：メヂル、エチル、プロピル
、ブチル、ｔｅｒ　ｔ−ブチルなどのエステル基）、ヘ
ンシルエステル、Ｐ−ニトロヘンシルエステル、１〕−
クロルベンジルエステル、ヘンズヒドリルエステル、カ
ルボヘンジキシヒドラジド、　ｔｅｒ　ｔ−プチルオギ
シ力ルボニルヒドラジド、ｌ・リチルヒドラジド等が挙
げられる。

カルボニル基の活性化されたものとしては、例えば対応
する酸クロライド、酸無水物又は混合酸無水物、アンド
、活性エステル（ペンタクロロフェノール、Ｐ−ニトロ
フェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒド
ロキシヘンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノル
ボルネン−２，３−ジカルボキシイミド等とのエステル
）等が挙げられる。尚、ペプチド結合形成反応は縮合剤
、例えばジシクロ・・・キシルカルボジイミド、カルボ
ジイミダゾール等のカルボジイミド試薬やテトラエチル
ピ１」ボスフィト等の存在下に実施し得る場合もある。

上記一般式（１）のペプチドの好ましい製造例を示せば
以下のｊＪｎりである。

一般式（１）の化合物は一般式（２） トへ−Ｔｙｒ４＋−１’ｒｐ　　ｃ−八５ｐ−Ｐｈｅ−
ＮＩＩ２　　　　　（２１〔式中Ｒ１Δ、Ｂ、Ｃは前記
に同じ〕 で表されるペプチドにピリジン−無水硫酸複合体を反応
−ｕｊノＣ硫酸エステル化し、更に脱塩、＄ｉ製するこ
とにより製造される。

本発明のごとき一般式（１）で示されるように、アシル
基（“ｉ′、ｌ＝千ル基、プロピオニル基、フクリル基
、グルタリル基）又はｐＧｌｕがＮ末端に位置しα−ア
ミノｊ、Ｉ；がｌスフされている化合物においては、硫
酸エステル化反応は最終段階で行うのが好ましい。ずな
わｌノ一般式（２）のペプチドに直接硫酸エステル化反
応を行いその後脱保護、更にアシル化又はベプ＋ドに鎖
延長する既知の方法に比べ、硫酸エステル結合の分解を
最少に押え、副産物を少なくする利点があり、より高い
収率とよい純度の製品が得られる。

一般式（２）のペプチドは公知のペプチド合成法に従っ
て製造されうる。例えば、保護ベンクペプチドＢｏｃ−
Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−八５ｐ−Ｐｈｅ−Ｎｌ１２　
　　（Ｍ、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙａｎｄ　Ｓ、Ｎａｔａｒ
ａｊａｎ、　、１．Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、＋　４０巻＋　
　２４９５ベージ（１９７５）　）をトリフルオロ酢酸
等の酸で脱保護し、Ｒ−＾１ａ−Ｔｙｒ−ＮＩＩＮＩ１
２　　（Ｒは前記に同し〕をアシＦ法により縮合するこ
とにより製造される。又、保護へブタペプチド　Ｂｏｃ
−＾１ａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−＾５ｐ−
Ｐｂｅ−Ｎｔ１２を通常の方法により脱保護し、無水酢
酸、無水プロピオン酸、無水フタル酸、無水グルタル酸
もしくはピログルタミン酸の活性エステルを反応させる
ことにより製造される。

硫酸エステル化の反応は既に公知であり、例えば−メ投
式（２）のペプチドをジメチルホルム了ミドーピリジン
等の不活性溶媒中に溶解し〜これに約１０倍量のピリジ
ン無水硫酸複合体を添加し反応させる方法によって行わ
れる。反応は最初低温で行し）その後室温にて１５〜２
０時間行うの力（々子ましし）。

又、特Ｈ’ｌ’　Ｉｌｌ　Ｉ？Ｊ］公開昭５６−４９５
３号で示され、る方法、すなわぢ硫酸：ｆニスチル化反
応液を濃縮しその残査ニメタノール、ブタノール、エフ
ノール、ジメチルポルムアミド、水等の溶媒、及ヒカル
シウム、亜鉛等の−（曲金属水溶性塩の水／８７夜を加
えてペフ。

チドアミドスルフエートエステルを二（西金属塩として
安定化し、同時に未反応ピ１ノジンフ爪７に硫酸複合体
より仕−Ｊ゛る硫酸を不溶性の硫酸二（西金属塩として
沈殿除去した後精製する方法もに子通である。

斯くしてｉ！ｌられた一般式（１）の化合物しよ必要Ｇ
こより医薬的にＢ１１容され得る塩、例えｃｆナト１ノ
・シム、カリウ１２等のアルカリ金属塩、カルシウム等
のアルカリ土類金）爪塩、トリエチルアミン、アンモニ
ウム等の゛）゛ミン塩等とすることができる。

尚一般式（］１の化合物の生理活性作用、即ち胃酸分泌
促進作用及び膵外分泌促進作用のＩＩＩ定法Ｇこついて
次に説明する。

１）胃酸分泌ｆ足進作用 ｉ入駒４’、Ｉ：！ｉｌ＋＋ｉｙ　　Ｒａｔ　　（１１
，５ｈａｙ　　ｅｔ　　ａｌ＋Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒ
ｏ−］ｏｇｙ　　５巻、４３頁（１９４５’））を作製
し行った。即ちウィスター系雄性ラット　（２７０〜３
１０ｇ）を２４時時間音したものを用い、エーテル麻酔
下、幽門結紮を行った。本発明によって製造されたペプ
チド、及びその対照物質としてのテトラガストリンは幽
門結紮直後、静脈投与を行った。投与後２時間に胃液を
採取し液量と総酸分泌艮を測定し、テトラガストリンと
の比活性を求めた。

２）膵外分泌促進作用 試験はｄ　ｏ　ｃ、ｋ　ｒ　ａ　ｙの方法（Ｊ、　Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ　　２２５巻、６７９〜６９２頁（１９７２
）　）に準拠してウィスター系カイＬ性うソｌ　（２８
０ｇ前後）を２４時間絶食し、麻酔下で行゛　っ　ノこ
。

幽門部、総肝管の一二指腸開ロ部の結紮をし、肝臓側の
総肝管に逆向きにカニュレーションし、胃液の排出を行
いながら膵液を採取した。本発明によって製造されたペ
プチド、及びテトラガストリンを１時間毎に静脈投与し
た。投与後３０分間の膵液をＯＤ　２８０ｎｍにより測
定し、アルブミン検量線から総蛋白量を求め、テトラガ
ストリンとの生理活性を比較した。

以−１；に本発明ペプチドの製造例を挙げる。

製造例１ １１００ｃ　　（ＣＩ＋２　　）３　Ｇｏ−八１ａ−Ｔ
ｙｒ　　（５０３Ｈ）−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Δ！
ｉ　ｌｉ円ｕ＋−ＮＩＩ２の製造法■）　ロＯＣ−へＩ
ａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Δ５ｐ−Ｐｈｅ
−Ｎｌ１２　　（ｍｐ１９７へ・２０（ビ５元素分析、
Ｃ４８Ｈ６１Ｎ９０ｊ２Ｓ１、計神植：　（’；　、５
１１３５％、Ｈ，６，２２％ｉ　Ｎ　、　１２．７５％
ン貝り定イ直　：　　（”、　、５１１．３５％　ｉ　
　Ｈ、６，４３％　；　　Ｎ　、１２．６１％）１．０
０＋ｙをエタンジチオール０．２ｍ（！存在下１−リフ
ルオロ酢酸５ｍｅに溶解し、室温で３０分間処理する。

無水エーテル１．００ｍｅを加え固化し、濾取乾燥する
。

このへ・ブタペプチドをトリエチルアミン０．１４ｍｅ
を含むジメチルポルムアミド（２０ｍｅ　）に溶解し、
水冷下無水グルタル酸０．４０ｇを添加する。４°Ｃで
１７時間攪１’Ｐｆ＆溶媒を減圧留去し、ＩＮクエン酸
で固化、水洗する。メタノール２０ｍｅより再結晶し、
Ｇｌｔ−八ｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−八
５ｐ−Ｐｂｅ−ＮＩＩ２　０．７７ｇを得る。

■）上記Ｉ）で得られたアシル化ペプチド３０１ｍｇを
ジメチルホルムアミドＬＯｍｅ及びピリジン１　ｍｅに
溶解し、水冷下ピリジン無水硫酸複合体４７７ｍｇを添
加し、０℃で３０分間、更に室温で２０時間攪拌する。

反応液を減圧濃縮し、残渣に０．０５Ｍ炭酸アンモニウ
ム水溶液３０ｍＲを加え、アンモニア水によりｐｌ＋　
８．５に調製する。その溶液をＤＥＡＥ−セルロースカ
ラム（４印ＸＬ２ｃｍ）クロマトグラフィーにより精製
する。０．０５Ｍ炭酸アンモニウム−重炭酸アンモニウ
ム緩衝液（ｐｌ！　８．５）　　５００ｍＥで吸着、洗
浄し０．２Ｍ同緩衝液（ｐＨ８，５）　　７００ｍＪ！
で溶出する。

活性画分を集め、溶媒を濃縮し凍結乾燥することにより
、ｌ１００Ｃ（ＣＨ２）３　Ｃｏ−八１ａ−Ｔｙｒ　（
ＳＯ３Ｈ）−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ
−ＮＯ３を１６３ｍｇ　（収率５０．２％）を得る。本
ペプチドは以下の諸性質を示す。

（１）元素分析値　Ｃ４８Ｈ５９Ｎ９０，１３３２Ｎｌ
１３・４１１２０計算（ａ　：　Ｃ，４９，２２％、Ｈ
，６，０２％ｉ　Ｎ　、１１．９６％測定値：　Ｃ，４
９，２２％、　Ｈ、５，７９％、　Ｎ　、１２．１２％
（２）酸分解によるアミノ酸分析値 へｓｐ　　１．０５（１）、　　Ｇｌｙ　　Ｏ，９６（
１１、Ａｌａ　　１．０２（１１Ｍｅｔ　Ｏ，９４＋１
１．　Ｔｙｒ　１．００（１）、　Ｐｈｅ　Ｏ，９８（
１１（３ン赤外吸収スペクトルより１０５０ｃｍ−１に
硫酸エステルに特異的な強いピークが見られる。

（４）Ｗ酸分８１に促ｊＩＬ作用 テトラガスｉ・リンを１とした場合の６．１倍の比活性
を力くず。

（５）胚性分泌促；ＩＬ作用 テ（・ラガス］−リンを１とした場合の２５８．８倍の
胚性分泌促進活性を示す。

製造例２ ｐＧＩｕ−八Ｉ＋＋−１’ｙｒ　　（Ｓ０３　　Ｈ）−
Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｎ１１２の
製造法 １）Ｂ（＋（、−ｉｉｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−八５ｐ−
Ｐｂｅ−ＮＨ２１，５１ｇをエタンジチメー・ル０．２
ｍｅ存在下トリフルオロ酢酸５　ｍｅに溶解し、室温で
３０分間処理する。無水エーテル１００ｍｅを加え固化
し、濾取乾燥する。このペンタペプチドをトリエチルア
ミン０．２８ｔｎｌを含むジメチルホルＪ・アミＦ　（
２０ｍｅ　）溶液に、　ｐＧＩｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｎ
ｌｌＮＩ１２　　（ｍｐ　２ｆｉ！］−２７０”　、元
素分析、計算値：Ｃ＋５７．７０％、　Ｉｔ　、　５．
８５％、　Ｎ　、１４．０２％　測定値二Ｃ，５７，６
０％、　ＩＩ　、　６．１５％ｉ　Ｎ　、１４．１５％
）　０．７６ｇを亜硝酸イソアミルによりアジド体とし
て反応する所謂アジド法により縮合する。溶媒を減圧留
去し、残渣にＩＮクエン酸を加え固化し水洗する。ジメ
ヂルホルムアミドーメタノールより再結晶してｐＧＩｕ
−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−八５ｐ−
Ｐｂｅ−’ＮｌＩ２　　を１．６８ｇ得る。収率８４．
１％ Ｈ）上記Ｔ）で得られたオクタペプチド１．００ｇをジ
メチルホルムアミドＬＯｍｅ及びピリジン１　ｍｆ！に
熔解し、水冷下ピリジン無水硫酸複合Ｉ＊、１．６０ｇ
を添加し、０℃で３０分間、更に室温で１７時間攪拌す
る。

反応液を減圧濃縮し、残渣に０．０５Ｍ炭酸アンモニウ
ム水溶液５０ｍｅを加え、アンモニア水を添加してｐｌ
＋を８．５に調製する。その溶液を製造ｆ？ｌＪ　１と
同様に、ＤＥＡＥ−セルロースカラム（４ｃｍ　Ｘ　１
２ｃｍ）イオン交換クロマトグラフィーにより精製する
。

活性画分を集め溶媒を濃縮し、凍結乾燥することにより
ｐＧＩｕ−八Ｉａ−Ｔｙｒ　（Ｓ０３　Ｈ）−Ｇｌｙ−
Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−八５ｐ−Ｐｈｅ−Ｎｌ１２　５６３■
を得る。本ペプチドは以下の諸性質を示す。

０．１元素分析値　Ｃ４８Ｈ５ＢＮ１００Ｉ５５２　Ｎ
Ｉ＋３・４Ｈ２０ｎｉ算稙：　Ｃ，４９，３５％　；　
Ｈ、５，９５％　；　Ｎ　、１３．１９％測定（１１’
ｆ　：　Ｃ，４９，５１％ｉ　Ｈ、５，９５％；　Ｎ　
、　１３．’０２％（２）酸’ｉ）（柄ｉによるアミノ
酸分析値＾ｓｐ　１．（１５（ＩＬ　Ｇｌｕ　Ｏ，９６
ｆｔ）、　Ｇｌｙ　１．０４（１１ΔＩａ　０．９（１
（１，１，Ｍｅｔ　１．００（１１、Ｔｙｒ　１．０３
（１１１’ｌ＋を二１．り４（１１ （：３）赤り１吸１＋Ｍスペク１〜ルより１０５０ｃｍ
−１に硫酸エステルにＩＩＩ異的な強いピークがみられ
る。

（４）胃酸分泌Ｄｔ准作用 テｉ・ラガストリンを１とした場合の２．０倍の比活性
を示Ｊ−０ ＋５）　７１そりＬ　）Ｉ＞　％、Ｉ４　（ｔｌ進作用
テ（ラガス１リンを１とした場合の５０倍の胚性分泌ｔ
ｂ：　ｊｌ、ｆｊ　ｌＩｌへ＋７１．を示ず。

【図面の簡単な説明】

第１し１はｊｐ、＋）造例１によって製造された本発明
のペプチドのｊ外相１−］’　Ｐ　Ｌ　Ｃのパターンを
示すものであり、第Ｓシ図は製造例２によって製造され
た本発明のベブチ１−″の逆相ＨＰＬＣのパターンを示
すものである。 尚、カラムはＦｉｎｅｐａｋ　　ＳＩＬ　ＣＡＢ　（４
，６ｍｍＸ　２５０ｍｍ）を用い、流速を１が７分とし
、２７８ｎｍで検出した。 特許出願人　天野製薬株式会社 第　−１ｌｉ’：Ｉ Ｇ−７’、） １４％Ｃ１ｋ＋［Ｎ　− ０、（ｌ　ｌ　ＭＣＩＩり（’、　ｉｌ　ｉｌ　Ｎ　Ｉ
Ｉ　ｓ第２図 ８．６６ １８％Ｃ１ｌうＣＮ− ０，０ＩＮＩＣＩＩｉＣＯＯＮＨａ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式（１） ％式％（１１ 〔式中Ｒはアセチル、プロピオニル、フタリル。 グルタリル Ｇｌｙを示し、ＢはＧｔｙ，　Ｌ−八ｌａ，　Ｄ−Ａｌ
   ａ，　Ｌ−ＴｒｐまたはＤ−Ｔｒｐを示し、ＣはＬｅｕ
   ＋　ｎＬｅｕまたはＭｅｔを示す。〕で表されるペプチ
   ド及びその塩。