JPS59220196A - アクリル酸エステル生産菌 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野： 本発明はアクリル酸エステル生産菌、特に水酸基を有す
るアクリル酸エステルの生産菌およびその菌を用いたア
クリル酸エステルの製法に関する。

従来技術： エスｆｌｖ合成をエステラーゼの逆反応で行なう研究は
、古くから行なわれている。その一つに。

リパーゼを用いる反応において、酸成分とアルコール成
分を変えたときの研究報告がある（辻阪。

岩井、奥付ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏ
ｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ　。

５７５（１９７９）９１５６−１６５）。そこでは、酸
成分として酢酸、プロピオン酸、酪酸をはじめヌテアリ
ン酸、オレイン酸、リンゴ酸、コハク酸などが検討され
、アルコ−μ成分としては１級アルコール、１級ジオー
ル、フェノール類、２級アルコール、２級ジオール、８
級アルコール、糖フルコーμなどのあらゆるアルコール
類が検討されている。

そこに使用されているリパーゼ類は４種であシ。

それぞれの起源はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ
　、　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ｄｅｌｅｍｘ。

Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍ、　Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ　である。

そのうちの前二者が特に低分子量の酸に対してもエステ
μ合成能を有することが示されている。しかし、いづれ
にしろ、この研究には酸成分として。

アクリル酸が用いられていない。本発明者は上記報告に
開示されたリパーゼ（天野製薬■製および生化学工業■
製）を用い検討したが、アクリル酸はいかなるアルコー
ル類ともエヌテμ合成し得ないことを確認した。その他
の従来のエステル合成に関する報告においても酸成分に
アクリル酸を用いた反応は報告されていない。

アクリル酸とアルコールとのエステル合成によシ得られ
るアクリル酸エステルは、ビニル基を有するため１種々
の工業材料となシ得る重合体原料として極めて有用であ
る。例えば、このアクリル酸エステμを他の単量体と共
重合して得られる高分子は、粘着剤、接着剤、およびフ
ィルムなどとして用いられる。さらに、また、このアク
リル酸エステルが水酸基を有するので親水性を持ち官能
基としても作用し、それよシ得られる重合体は易架橋性
ポリマーとなシ、接着剤、塗料、その他の多くの用途を
有しかつ新規な用途開発も期待される。このようなアク
リル酸エステルの合成は、化学合成によシ可能ではある
。しかし、化学合成によると９反応条件が過酷であるた
め、そのための付帯設備とスペースと費用がかさむ。し
かも９作業環境が汚染されやすく環境公害の原因にもな
る。

このエステル合成を微生物を用いた生物学的反応によシ
行うと、低温・低圧という温和な条件下で反応できしか
も基質特異性を有するため、環境汚染のおそれがないう
えに設備費なども安くつく。

発明の目的： 本発明の目的は、アクリル酸と二価アルコールとによシ
水酸基を有するアクリル酸エステルを生産する新規な微
生物およびそれを用いた生物学的反応によるアクリル酸
エステμの製法を提供することにある。本発明の他の目
的は、生物学的反応により安全かつ安価にアクリル酸エ
ステルを製造する方法を提供することにある。本発明の
さらに他の目的は、工業材料となシ得る有用な重合体原
料としてのアクリル酸エステ〃を生産する菌およびそれ
を用いたアクリル酸エステルの製法を提供することにあ
る。

発明の要旨： 本発明のアクリル酸エステル生産菌は、アルカリ土類金
属に属しアクリ、Ｖ酸と一般式ＨＯＲＯＨ（ただし、Ｂ
−は炭素数２〜６の直鎖のアルキレン基で表わされる二
価アルコールとから水酸基を有するアクリル酸エステル
を生産する。そのことにより上記目的が達成される。ア
ルカリ土類金属菌はアルカリゲネス・フエーカリスＴＨ
８３６株およびアルカリゲネス・フエーカリスＴＫ４９
Ｂ５株のうちの少なくとも一方である。二価アルコール
としては両末端に水酸基を有する炭素数２〜６の直鎖状
アルコールであシ、それはエチレングリコール。

１・８ジヒドロキシプロパン、１・４ジヒドロキシブタ
ン、１・５ジヒドロキシペンタンおよびｌ・６ジヒドロ
キシヘキサンである。

また２本発明のアクリル酸エステ／Ｌ’製造法は。

上記微生物を用いてアクリル酸と一般弐〇〇ＲＯＨ（た
だし、Ｒは炭素数２〜６の直鎖のアルキレン基で表わさ
れる上記二価アルコールとから水酸基を有するアクリル
酸エステルを生産するもので。

そのことによシ上記目的が達成される。反応式で表わす
と。

の反応が行なわれる。

本発明の微生物は、化学工業原料を扱っている工場など
の土壌（茨木市、豊橋市）から分離・採集した新菌株で
ある。この新菌株は、後述する菌学的性状をもとに［Ｂ
ｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８ｔｈ　ｅｄ
ｉｔｏｒ　、　１９７４　Ｊ　（Ｄ細菌分類書を参考に
して同定され、アルカリ土類金属に属する細菌であると
ころから、それぞれ、アルカリゲネス・フエーカリス（
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　）　Ｔｉ
１３３６株（受託番号：微工研菌寄第７０８３号（ＦＥ
ＲＭＰ−７０８８））およびアルカリゲネス−７ｘ−カ
リス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌ　ｉｓ　）
　ＴＫ４９３５　（受託番号：微工研菌寄第７０８４号
（ＦＥＲＭ　　Ｐ−７０８４）ンと命名された。

菌学的性質 本発明のＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　
ＴＨ３ｊ３１３株とＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃ
ａｌｉｓ　ＴＫ４９３５株の菌学的性質を第１表に示す
。

以下余白 州　　　　　州　　　　　　州　　　　　　　褐　　　
　Ｏ 東 ｊ　　　　　　　　　想　胡　胡胡 文　　　　佃 瑞 （り＠（Ｅｌ＠　　　　　■　　　　■◎ＯＯ■［株］
■＠ ＠■ 十千 １１１１１１１１１１１１１＋＋ ＋＋ ＋＋ １１１１１１１１１１１１１＋＋ ＋＋ 他方１水閘株はいずれも、第８表に示すように。

Ａｌｃａｌ　ｉｇｅｎｅｓ属と多くの点で性質が共通す
る。

第　　　　８　　　　表 １、好気性 ２、ダラム陰性 ３、醗酵的でない ４、運動性有　鞭毛（１〜８本） ５、大きさ　０．５−１．２μｍ　ｂｙ　０．５−２．
６μｍ６、通常　単独で存在 ７、色素を作らない ８、オキシダーゼ　：　陽性 ９、寒天を分解しない １０、カゼイン・ゼラチンを分解しない１１、　　生育
の適温　２０〜８７℃ １２、　　ｐＨ７，Ｑですばやく生育する１８６　　ガ
ス状Ｎ２を固定しない 以上の結果から１本発明の菌株ＴＨ８Ｂ６株およびＴＫ
４９Ｂ５株はＡｌｃａｌｉｇｅｎｅａ　属Ｋ　Ｑ　ｆ　
ル１ｆ５１　ｆａ　テ１）　７）と同定される。次に本
発明の菌株の種を決定するためにこの属の既知の４種と
比較した結果を第本表に示す。

第　　　４　　　表 本発明の菌株は、いずれもＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆ
ａｅｃａｌｉｓとは、プロピオン酸と酪酸の資化性能を
欠く点が異なるにすぎず、他の特徴はすべてこれと一致
する。

よって１水閘株をＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａ
ｌｉｓにきわめて近緑の菌株であｌ）　Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓと同定した。

培養条件 培地としては格別である必要はなく、肉エキス。

酵母エキス、麦芽エキス、ペプトンなどの有機栄養源、
およびリン酸塩、マグネシウム、ナトリウム、カリウム
、マンガン、鉄などの無機栄養源等を適宜含有する通常
の検知でよい。

炭素源としては、炭素源資化性試験において基質となっ
た各種アミノ酸、ＴＣＡサイクルメンバーの有機酸など
が用いられる。窒素源としては。

硝酸塩、亜硝酸塩およびアンモニウム塩などの無機窒素
やアミノ基の有機窒素などが用いられる。

培養温度は２０°Ｃ〜８５°Ｃ好ましくは２５°Ｃ〜８
０°Ｃである。培養ＰＨは５〜８好ましくは６．５〜７
．６であシ、１日〜８日間好気的に攪拌又は振とうしな
がら培養を行なう。

反応組成 本発明のエステル反応は、このような培養条件のもとて
本発明菌株を培養し、その休止菌体、菌体抽出液（粗酵
素液）、精製酵素、固定化菌体および固定化酵素状態の
うちの少なくとも一つを適当に選んで用いる。本発明の
水酸基を有するアクｖｉｖ酸エスデμの合成に必要な反
応系の基本組成は第５表に示される。なお、この合成に
当って媒体を用いる場合には水媒体とするのが一般的で
ある。

第　　　５　　　表 リン酸バッファー（ｐＨ８，０）　　　　　　０．２Ｍ
アクリル酸　　　　　　　　　　　　　１％（ｙ／ｖ）
ジヒドロキシアルコ−ｔｖ　　　　　　　　１０％（’
Ｐｖ）水 菌体もしくは菌体抽出液 菌体および抽出液の添加量は、菌体懸濁液として最終濃
度がｅ６ｏｎｍの吸光度（００６６０）でｏ、　ｉ以上
０通常は１．０〜２０の範囲にある。菌体抽出液は。

菌体を超音波破砕機やフレンチプレスで処理して得られ
、　２８Ｏｒ１ｍの吸光度（Ａ２８０）が０．１以上・
通常は０．５〜２０．０の範囲で用いられる。

反応ＰＨは５〜９の範囲にあればよい。好ましくは６．
５〜７．５である。

アクリル酸量の使用可能な濃度は、０．１％０’ｖ）〜
５％（”’ｖ）でアシ、好ましくは０．５％（！ｖ）〜
２％（Ｙ’ｖ）の範囲に選ばれる。アクリル酸の使用に
よシ反応系組成のｐＨが低下しアクリル酸の消費と共に
ｐｉが上昇する。このようなｐＨ変動を極小にし反応系
のｐＨが常時７前後になるようにするために本基本組成
ではバッファーとして０．２Ｍのリン酸バッファーが用
いられる。リン酸バッファーに代えて重伏酸−次酸Ｎａ
バッファー、トリス塩酸バッファーなどを用いることも
できる。バッファー濃度も０．２Ｍに限定されることは
なく、使用されるアクリル酸量や反応速度などに応じて
適宜選択される。

前記二価アルコールは、酵素の安定化に悪影響を与える
ことがないため量的な制限は特にない。

しかし、アクリル酸１七ｐ当シ、少なくとも０．５七ｐ
の二価アルコールが用いられる。上記アルコールの使用
量の上限は前記のようにいくら多くてもよいが９通常０
．５％（Ｙ’ｖ）　〜１０％（Ｙ’ｖ）で用いられる。

モル比ではアクリル酸１モル当り通常０．５〜５ｏモｌ
、好ｔしくけ１〜２０モルの二価アルコールが用いられ
る。ジヒドロキシアルコールの添加量に応じて生成する
水酸基を有するアクリｙ酸エステルの量も多くなる。反
応温度は２０゛Ｃ〜４０°Ｃの範囲内であれば良い。好
ましくば２５゛Ｃ〜３５°Ｃである。反応時間は基質添
加量によシ幾分異なるが約１０分以上であれば検出可能
である。

生成物の検出 反応終了後の系から菌体を遠心分離によシ除く。

その上澄液を直接ガスクロマトグラフあるいは液体クロ
マトグラフにかけ生成物質の検出定量を行なうか、もし
くはその上澄液を必要に応じてさらに熱処理（例えば１
００°Ｃにて１分間）し夾雑する蛋白を除去してからガ
スクロマトグラフもしくは液体クロマトグラフにかけ生
成物質の検出定量を行なう。検出は次のような条件で行
なわれる。

■　ガスクロマトグラフ 機種　　　　　　　　日立１６８型ガスクロマトグラフ
検出方法　　　　ＦＩＤ カラムＴｅｎａｘ　　ＧＣ（ｌ　ｍ　）カラム温度　　
　　２３０°Ｃ キャリアガス　　窒　素 流量　　　　　　３９　ｍ　ｌ　／　ｍ　ｉ　ｎ■　液
体クロマトグラフ 機種　　　　　　Ｖａｒｉａｎ　　モデ／ｌ’　５００
０カラム　　　　　ＭＣＨ１０ 溶離液　　　　　水：アセトントリμ＝　５０　　：　
　５０流量　　　　　　１．Ｑｍｌ／ｍｉｎ。

波長　　　　　　２００ｎｍ 例えば、アクリル酸と１・４ブタンジオールとの反応で
生成するヒドロキシブチルアクリＶ−Ｆについてはガス
クロマトグラフでは約５分後、液体クロマトグラフでは
約４分後にピークが現われる。

二価アルコ−μがエチレングリコ−ｐであればヒドロキ
シブチルアクリレートが生成され、液体クロマトグラフ
では８．２分にピークが見られる。

生成物質の確認は次のようにして行なった。

１、　アクリル酸、二価アルコールおよび酵素の８者が
同時に存在したときだけ、生成物のピークが見られ（液
体クロマトグラフにて）、そのピークが時間とともに増
加する。

２、　ガスクロマトグラフおよび／もしくは液体クロマ
トグラフによシ既知物質と同じリテンションタイムを示
した。（既知物質は化学合成にて入手した） ３、　　ＧＣ−Ｍａｓｓ（日立製）によるＣＩ法によシ
生成物質が既知物質と同じ分子量であることを確認した
。

生成されたアクリル酸エステルを採取するには常法の蒸
留もしくは溶剤抽出が用いられる。

Ａｌｃａｌ　ｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　ＴＨ８
３５株のエステル化能を有する酵素の安定性について、
超音波破砕時（海゛上電気■のＴＡ４２８０振動子４２
８０Ｓ　、２〜４Ａにて使用）の酵素の安定性を第１図
に示す。図はソニック処理時間とヒドロキシブチルアク
リレートの生成反応活性との関係を示している。活性は
、１分間にヒドロキシブチルアクリレート１μｍｏｌ　
生成したとき１ユニツトとした。第１図から本閑株ＴＨ
８８６株のエステル化醇素は比較的安定であることがわ
かる。

反応系組成とそこに用いる各種バッファーを下記のよう
に調整し９水閘株ＴＨ８８６株を用いたヒドロキシブチ
ルアクリレートの生成に及ばずｐＨの影響を調べた。そ
の結果を第２図に示す。図から酵素活性はｐ　Ｈ５〜１
０付近までであることがわが各種バッファー　　　　　
　　　　１ｍ１１０％アクリル酸　　　　　　　Ｑ、５
ｍ１１０％１・４ブタンジオ−ＩＶ　　　Ｑ、５ｍｌ酵
素　Ａ２８０　　＝　　１４０　　　　８，９ｍ１５３
．５ リン酸カリウム　　　　６４．１ （Ｉｔｖｌ）　　　　　　７　　　　　　　　５．４９
７．１ 重炭酸一度酸Ｎａ　　　１０　　　　　　　８．１（Ｉ
Ｍ）　　　　　　１１　　　　　　　９．８実施例： 以下に本発明を実施例にょシ具体的に説明する。

実施例１ （菌体懸濁液の調製） 肉エキス１０ｇ、ポリヘプ）　７１０ｇ、　ＮａＣ１５
ｇ　。

蒸留水ＩＩＩ、そしてＩ）Ｈ？、０の組成の肉汁液体培
地１００ｍ１を調製した。これを５００ｍ１容坂ロフラ
スコに入れ殺菌して後、これにＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
　ｆａｅｃａｌｉｓＴＨ８Ｂ６株を植菌した。これを８
０”Ｃにて２４時間振とり培養した。この培養液を遠心
分Ｍ（ＩＱ　ｏｏ。

ｒｐｍ、　ｌＱｍｉｎ、　）　Ｌ、沈澱した菌体をｐＨ
７，０のリン酸バッファー０．０５Ｍにて１回洗浄した
。この菌体を同じバッファーにて０Ｄ６６０＝１０．０
になるように希釈し、これを菌体懸濁液とした。

（粗酵素液の調製） 得られた菌体懸濁液を海上電気製超音波破砕機にて氷冷
水で冷却しつつ２０分間破砕した。これを遠心分離（１
５，００Ｏｒｐｍ　、　８０分間）シ、その上澄液を粗
酵素液とした。

（反応組成） 次の反応組成にて３０″Ｃで反応し、得られた生成物を
ガスクロマトグラフを用いて分析した。

組成　　　　　　　　添加量 リン酸バッファー　　　ＩＭ（ｐＨ８，０）　　　　９
．２ｍｌアクリル酸　　　　　　１０％水溶液（％）　
　　０．１　ｍｔＩ・４　ブタンジオ−μ　各種濃度　
　　　　　　Ｑ、１ｍｌ粗酵素液　　　　　　　Ａ２８
０　＝　１４．０　　　０．６　ｍ１１・４ブタンジオ
−〃の濃度は最終濃度でｉｏ、ｏ％（／ｖ）　、　５．
０％（／ｖ）、　８．０％（ｖ／ｖ）、　１．０％（／
ｖ）　、　０．５％（／ｖ）とした。

（結果） ｌ・４　ブタンジオール濃度のエステμ生成におよぼす
影響を調べた。その結果を第３図に示す。

エステル生成量は対アクリル酸収率（モル％）で表示さ
れる。１・４ブタンジオ−Ｉｖ量が多くなるにつれ生成
するヒドロキシグチルアクリレートの量も多くなること
がわかる。まだ、アクリル酸１０％（最終濃度）と１・
４グタンジオ一ρ１ｏ％　（最終濃度）との（ｌ：１の
）反応でもジアクリレートの生成は生成アクリル酸エス
テルの１％以下であった。しかし、アクリル酸と二価ア
ルコールとの比が１＝２以上になるとジアクリレートは
まったく生成しなかった。化学合成においてはアクリル
酸と二価アルコールとを１＝１で反応させると。

生成したアクリル酸エステルに対し５〜１５％のジアク
リレートが生成する。ジアクリレートは重合時の反応系
をゲル化させるため、それが生成しないようにすること
が必要である。化学合成ではそれは極めてむつかしい。

それゆえ１重合時の仕　　　゛込み濃度を低くおさえね
ばならないという欠点があった。本発明のエステル反応
においてはジアクリレートの生成は微量もしくは皆無で
あるため。

このような問題はない。

実施例２ 実施例１で示した培地にて同様にＡｌｃａｌ　ｉｇｅｎ
ｅｓｆａｅｃａｌ　ｉａ　　Ｔ　Ｈ８９５株とＡｌｃａ
ｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　ＴＫ４９８５株を
それぞれ培養した。得た各菌体を０Ｄ６６０　ｍ１０．
０になるように０．０５Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７
，０）にて、菌体懸濁液を調製した。この菌体懸濁液を
実施例１と同様に処理して粗酵素液を調製した。この菌
体懸濁液もしくは市販の酵素液を用いて次の反応組成に
て３０°Ｃで２時間反応を行った。市販のリパーゼとし
ては、　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓに属する糸状菌から生
産されたリパーゼ（リパーゼＡＰ：天野製薬■ンおよび
Ｍｕｃｏｒ　　に属する糸状菌から生産されたリパーゼ
（リパーゼＭ−ＡＰ；天野製楽■）を出いた。

以下余白 リン酸パｙフｙ−ＩＭ（ｐｉ−１８，０）　　　　　　
　０．２ｍｌアクリル酸　　　　　　ｉｏ％水溶液（”
ｌ’ｖ）　　　　　　０．１ｍｌエチレングリコ−）Ｖ
またはｌ・４ブタンジオールまたは１・６ヘキサンジオ
一／’１００％　　　　　Ｑ、１ｍｌ閑体懸濁液または
粗酵素溶液　　　　　　　　　　９．６ｍｌ市販リパー
ゼの酵素溶液濃度は３　ｍ　ｇ　７ｍ　１であった。１
・６　ヘキサンジオールの使用景は０．１ｇであった。

この場合には反応系の固形濃度を調整する意味で水Ｑ、
１ｍｌを糸にさらに添加した。生成物質を液体クロマト
グラフもしくはガスクロマトグラフで確脈した。いずれ
の反応系においてもジアクリレート生成は検出されなか
った。結果を第６表に示す。

以下余白 第　　　　６　　　　表 実施例８ 実施例１と同様にして得たｒｔｔ６３６株および’ｒＫ
４９Ｂ５株ノ培ｆｆｆ＋７ｉ体ヲｉ４心＋［ｍ、　０．
０５Ｍ　　（ｐ１１７．０）のリン酸バッファーにて０
０６６０が１０．０の菌体懸濁液を調製した。この菌体
懸濁液に８倍斌のアセトン（−２０’Ｃ）を加え、１０
分間攪拌した後遠心分瀧（１α０００ｒｐｍ、　１０分
）した。沈澱した菌体をさらにアセトンにて２回洗浄し
た。これを吸引式デシケータ中にて完全に乾燥し、アセ
トンドライ菌体を得た。この菌体を用いて反応を行なっ
た。

反応組成　　　　　　　　　　添加量 リン酸バッフｙ−ＩＭ（ｐＨ８，０）　　　　　　　０
．２ｍｌアクリル酸　　　　１０％水溶液（ｙ／ｖ）　
　　　　　０．１　ｍ　１１・４ブタンジオ−／Ｌ’１
００％　　　　　　　　　Ｑ、　ｌ　ｍ　１水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｑ、５ｍｌ
アセトンドライ菌体　　　　　　　　　　　　　　２０
ｍｇ反応は８０°Ｃにて２時間行なった。その結果。

対アクリル酸収率（モｐ％）はＴＨ８Ｂ６株では４．２
％、そしてＴＫ４９Ｂ５株では４，５％であった。

実施例４ 実施例１と同様にして得たＴＨ８８６株の粗酵素液を第
７表に示したように常法に従って精製し。

比活性が４０倍になった訃ケ精製酵素を得た。

以下余白 この活性は、アクリル酸と１・４ブタンジオールとの反
応におけるヒドロキシブチルアクリレートの生成によっ
て評価された。

次にこの伸勿精製酵素をセファロース４ＢにＣＮＢｒ活
性化法（ＲｏＡｘｅｎ、Ｎａｔｕｒｅ、　２１４．　１
８０２（１９６７））で固定化した。得られた固定化酵
素を内径１２ｆｌ長さ８０ｃＩＭのカラムに詰め、上部
から下記の組成の反応液をｌＯａ＊／１時間の流速で流
した。

その結果、対アクリル酸当シ１七ρ％の収率でヒドロキ
シブチルアクリレートが生成された。

反応液組成　　　　　　　　　　　　　　添加量リン酸
バツｙｙ−ＬＭ（ＰＨ８，０）　　　　１００ｍ１アク
リル酸　　　　　　１０％水溶液（／ｖ）　　　　５０
　ｍ　１１・４グタンジオ一／Ｌ／１００％　　　　　
　　　５０ｍ１水　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　８００ｍ１実施例５ 実施例１と同様にして得たＴＨ８８６株およびＴＫ４９
Ｂ５株の菌体懸濁液および粗酵素液をそれぞれ用い１次
の反応系のもとてジアクリレートの加水分解能を調べた
。

反応組成　　　　　　　　　　　添加量リン酸パ”／　
７７−　　　　　　ＩＭ（ｐＩ（８，Ｑ　）　　　　Ｑ
、２ｍ　ｌジヒドロキシアクリレート　０．２％　　　
　　　　Ｑ、２ｍｌ菌体懸澗液　　　　　　　　０Ｄ６
６０＝　１０．０　　０．６ｍ　ｌもしくは粗酵素液　
　　　　ＯＤ２８０＝１１Ｍ）　　　（０，６ｍ１）上
記反応系を３０°Ｃにインキュベートするとジヒドロシ
キアクリレートは５〜１０時間のうちに消失し、それに
対応するアクリル酸エステルとアクリル酸とが生成した
。

発明の効果： 本発明の新菌株Ａｌｃａｊｉｇｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉ
ｓ　’ｒＨ８３Ｇ　オヨびＴＫ４９８５はアクリル酸と
二価アルコールとから水酸基を有するアクリル酸エヌテ
ｐを生産する能力を有する。この菌株を用いることによ
シアクリμ酸と二価アルコールとを含有する反応系から
水酸基を有するアクリル酸エヌテ〜を製造することがで
きる。エステル化に必要な酵素は、培地の種類に無関係
に、菌体増殖に比例して生産される。

このエステル生成物は工業材料となシうる重合体原料と
して有用である。この生成物を他の既知単量体と共重合
して得られる高分子は粘着剤、接着剤、フイリムなどと
して用いられうる。しかも。

この生成物は水酸基を有するため、親水性をもちしかも
官能基としても作用するので、他の多くの用途に利用さ
れうる。

さらに２水閘株を用いたエステル反応においてジアクリ
レートがほとんど生成されない。ジアクリレートが系内
に生成されなければ１重合反応中にゲル化が起こらず、
したがってエステル反応出発物質の高濃度仕込みが可能
となる。その結果。

新規な特徴をもつ高分子を得ることも可能である。

微量ながらジアクリレートが系内に生成されても。

本菌株はいずれもこれに対応するアクＩ））し酸エステ
ルとアクリル酸とに加水分解する能力を有するという利
点がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の菌株Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅ
ｃａｌｉｓ　ＴＨ８８６のエステル化酵素の安定性を示
す図２第２図は同じ＜ＴＨ８３６株のエステル化酵素の
ｐＨによる影響を示す図、第３図は同じ（ＴＨ８３６株
のエステル生成能の１・　４グタンジオ一ル濃度による
影響を示す図である。 以　　上 代理人　弁理士　山　本　秀　策 第１図 に Φ Ｊ　　　第２図 健 Ｈ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、７μカリゲネス属に属し、アクリル酸と一般式ＨＯ
   ＲＯＨ（ただし、Ｒは次素数２〜６の直鎖のアルキレン
   基）で表わされる二価アルコールとからアクリμ酸エス
   テμを生産する菌。 ２、　前記アルカリゲネス属菌が７μカリゲネス・フエ
   ーカリスである特許請求の範囲第１項に記載の菌。 ８、　前記アルカリゲネス争フェーカリスカ７〃カリゲ
   ネス・フエーカリスＴＨ８Ｂ６株およびアルカリゲネス
   ・フエーカリ７．ＴＫ４９８５株のうちの少なくとも一
   方である前記特許請求の範囲第２項に記載の菌。 ４、　アルカリ土類金属に属する菌にょシ、アクリ〜酸
   と一般式ＨＯＲＯＨ（ただし、Ｒは次素数２〜６の直鎖
   のアルキレン基）で表わされる二価アルコールとからア
   クリル酸エステルを生産する。 微生物によるアクリル酸エステルの製法。 ５、前記アルカリゲネス属菌がアルカリゲネス・フエー
   カリスである特許請求の範囲第４項に記載の製法。 ６、　前記アルカリゲネス・フエーカリスがアルカリゲ
   ネス・フエーカリスＴＨ８８６株およびアルカリゲネス
   ・フェカリスＴＫ４９Ｂ５株のうちの少なくとも一方で
   ある前記特許請求の範囲第５項に記載の製法。