JPS5921399A - アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 - Google Patents
アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法Info
- Publication number
- JPS5921399A JPS5921399A JP12888382A JP12888382A JPS5921399A JP S5921399 A JPS5921399 A JP S5921399A JP 12888382 A JP12888382 A JP 12888382A JP 12888382 A JP12888382 A JP 12888382A JP S5921399 A JPS5921399 A JP S5921399A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ammonia
- reaction product
- bio
- specimen
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアンモニアを反応生成物とず、と、生体物質の
定１’＋を法に関するものである。更にｉｉｌ’細に１
よ、本発明１よアンモニアを含有゛Ｊ°る検体において
、アンモニアを反応生成物と−Ｊ−イ、生体物賃をその
ま−ま直接定、１１ｉする方法１ｔＣ関するものである
。
定１’＋を法に関するものである。更にｉｉｌ’細に１
よ、本発明１よアンモニアを含有゛Ｊ°る検体において
、アンモニアを反応生成物と−Ｊ−イ、生体物賃をその
ま−ま直接定、１１ｉする方法１ｔＣ関するものである
。
従来、アンモニアを含有する検体において、アンモニア
を反応生成物とする物Ｉｊ↓をアンモニアの生成１ｉｔ
で定量する際ＩＣ，検体中に存在するアンモニアも含め
た形で測定され１１−確ｌ定梵値を（Ｕることかできな
かった。
を反応生成物とする物Ｉｊ↓をアンモニアの生成１ｉｔ
で定量する際ＩＣ，検体中に存在するアンモニアも含め
た形で測定され１１−確ｌ定梵値を（Ｕることかできな
かった。
木兄’、Ｉ’ｊ ｔ；ｊ：このようなアンモ′ニアを反
応生成物とする物質の宝玉１における従来の欠点を改善
するためになされたものである。
応生成物とする物質の宝玉１における従来の欠点を改善
するためになされたものである。
即ち、本発明１ゴアンモニアを含有する検体ｔこグルタ
ミン酸脱水素酵素（以下Ｇ Ｉ Ｄ ＩＩという）、α
−ケトゲルタール酸（以下α−Ｋ （ｊという）、還元
型ニコチンアミじアデニンノヌクレオデドホスフエート
（以下Ｎ Ａ Ｌ）Ｉ）ＩＩ とい’：ｌ）、−ｔ−ｔ
、でニコチンアミドアラ″、ニー−７・ノヌクレ、）ｌ
−ｆ−ドホスノエ−１・（以下Ｎ Ａ Ｄ ）］という
）を還元する酵素及びＮ Ａ Ｉ） Ｉ）全ｌ）“＋１
フ【二”Ｉ゛るｒイＹ累の基！ｊＩＬを添加シ２、検体
中１こすでト（存在−ｊ゛るアンモニアを水とグルタミ
ン酸１こ変化せしめ、その際生成さｌＬ ｋ ＮＡＩ）
Ｐ ’、ｒ ＮＡＩ）Ｐ を１〜１℃元−１−（７
める酵素ケ用いて再度ＮＡＤＰ）Ｉ ）こ変換、１−′
１５めし〃・る後検体に過剰１（１の反応生成物と［−
２で）′ン七二ｆを生Ｉ戊するｒ）Ｙ素ど二：１−ｆ−
ンアミ１°アブ′ニン７ノメクレオチ１゛（以下ＮＡＤ
ＩＩｌといり）全添加し゛Ｃ−ル応ぜしめ、Ｎ Ａ、
ｌ） ＩＩの減少ｉｉ１を・３４０１目ｎの吸光度の減
少に上で）でアンモノーニアを反応生成物とする物＜ｔ
′（分定１−Ｔ１．する方法である。
ミン酸脱水素酵素（以下Ｇ Ｉ Ｄ ＩＩという）、α
−ケトゲルタール酸（以下α−Ｋ （ｊという）、還元
型ニコチンアミじアデニンノヌクレオデドホスフエート
（以下Ｎ Ａ Ｌ）Ｉ）ＩＩ とい’：ｌ）、−ｔ−ｔ
、でニコチンアミドアラ″、ニー−７・ノヌクレ、）ｌ
−ｆ−ドホスノエ−１・（以下Ｎ Ａ Ｄ ）］という
）を還元する酵素及びＮ Ａ Ｉ） Ｉ）全ｌ）“＋１
フ【二”Ｉ゛るｒイＹ累の基！ｊＩＬを添加シ２、検体
中１こすでト（存在−ｊ゛るアンモニアを水とグルタミ
ン酸１こ変化せしめ、その際生成さｌＬ ｋ ＮＡＩ）
Ｐ ’、ｒ ＮＡＩ）Ｐ を１〜１℃元−１−（７
める酵素ケ用いて再度ＮＡＤＰ）Ｉ ）こ変換、１−′
１５めし〃・る後検体に過剰１（１の反応生成物と［−
２で）′ン七二ｆを生Ｉ戊するｒ）Ｙ素ど二：１−ｆ−
ンアミ１°アブ′ニン７ノメクレオチ１゛（以下ＮＡＤ
ＩＩｌといり）全添加し゛Ｃ−ル応ぜしめ、Ｎ Ａ、
ｌ） ＩＩの減少ｉｉ１を・３４０１目ｎの吸光度の減
少に上で）でアンモノーニアを反応生成物とする物＜ｔ
′（分定１−Ｔ１．する方法である。
本発明の７１１色どするところｒａｔ：検体中にすでに
存在するアンモニアを０７１） Ｉｆ 、α−１ＣＧ。
存在するアンモニアを０７１） Ｉｆ 、α−１ＣＧ。
ＮＡＩ）ｌ）Ｉｌｌ’こよってグルタミン酸ｆ′Ｃ変化
させ、（−２かど、後トこ）゛ン士ニアを反応生成物と
１２−Ｃ生Ｌ−１）−１−、める酵？；りの反応により
アンモニアを反応生成′１グ１とすイ・ｉｊすｌｔ′ｆ
から生ずるア、−２７七−こアを同じＧ Ｉ Ｄ Ｉｆ
とＮ Ａ Ｉ） １目Ｃよ−）′Ｃ反応ｔ！−’ ｌ−
、めグルタミンｊｉｅ：と水Ｉζ変化・ｌＬ（，７める
（１．ζＩＣ・らイ、。
させ、（−２かど、後トこ）゛ン士ニアを反応生成物と
１２−Ｃ生Ｌ−１）−１−、める酵？；りの反応により
アンモニアを反応生成′１グ１とすイ・ｉｊすｌｔ′ｆ
から生ずるア、−２７七−こアを同じＧ Ｉ Ｄ Ｉｆ
とＮ Ａ Ｉ） １目Ｃよ−）′Ｃ反応ｔ！−’ ｌ−
、めグルタミンｊｉｅ：と水Ｉζ変化・ｌＬ（，７める
（１．ζＩＣ・らイ、。
本発明のアンモ＝７５ｒ ）Ｖ’、 ｌｒ、、生成：＋
４ｙと＝４− 、Ｌｒ ・ｌ＋’、ｙ、７２（のシ九ニ
ー１辻θ５ ｔＣよれ（」：、恢イ・ト中ｔｃ Ｊ＝で
ｔ（二ｔＪ： ：ｒ：＋ミーノるアンモニアを前も″−
月Ｃ哨人へ１？−（ｔｙま・）ので、同−検体で−ｔ−
のｉ４添加（、た−ノーン化−−）゛を反応生成物どし
７て生［夕、せし２めるｒ’ｌＦ’ ｌ・； ）（１，
１、す、アンー←二γを反応生成′１りＪとする１１◇
）Ｊνｆからア、／モニニア金生成さ、柱、直接生成す
るアン−１ニー’７−全１！’！、”＋トアンモニア金
反応生成物と１２”（生じ−１しＶ） ６１’ｌ）’
；（’ｊ ＩｉＣ、Ｉ ’）−（Ｔ分）イされｆｃ −
１’ ７ 士＝ ’ｊ−ｃ’して（測定すＺ〉ことがで
きＺ）のでアンモニアを・反応生成物とする物ｊＪｔ貧
ｉ％１．ｉ″、ｊ正確に測定すＺ）ことができる。
４ｙと＝４− 、Ｌｒ ・ｌ＋’、ｙ、７２（のシ九ニ
ー１辻θ５ ｔＣよれ（」：、恢イ・ト中ｔｃ Ｊ＝で
ｔ（二ｔＪ： ：ｒ：＋ミーノるアンモニアを前も″−
月Ｃ哨人へ１？−（ｔｙま・）ので、同−検体で−ｔ−
のｉ４添加（、た−ノーン化−−）゛を反応生成物どし
７て生［夕、せし２めるｒ’ｌＦ’ ｌ・； ）（１，
１、す、アンー←二γを反応生成′１りＪとする１１◇
）Ｊνｆからア、／モニニア金生成さ、柱、直接生成す
るアン−１ニー’７−全１！’！、”＋トアンモニア金
反応生成物と１２”（生じ−１しＶ） ６１’ｌ）’
；（’ｊ ＩｉＣ、Ｉ ’）−（Ｔ分）イされｆｃ −
１’ ７ 士＝ ’ｊ−ｃ’して（測定すＺ〉ことがで
きＺ）のでアンモニアを・反応生成物とする物ｊＪｔ貧
ｉ％１．ｉ″、ｊ正確に測定すＺ）ことができる。
こ（−に示し／こ不発ＩＪｊのアン１４二−ラ°消′？
１（糸の反応の一例金式（１）で表わせば次の通（）で
あＺ、。
１（糸の反応の一例金式（１）で表わせば次の通（）で
あＺ、。
本発明のノ′ノ七ニアを反応化１戊物とする１１勿Ｔ（
の定量θ、は、′ｆン化二ｆ′ｉ′八へイＪするイ＞１
体［ｌＩ（レリえぼ血（１９・尿中）のｆンーヒュ′ノ
′を反応生成！吻とする物質の定Ｊｒ１． ｋこ用いら
！しる。こ７Ｌらの４９ミ体しこ１ユすでＦＣ多ｊ＋１
．のアンモニｆが絶えず仔ｒｂ ｔ、 ’Ｃい７ヒ）た
めｅこ１ｆ１接グルタミン酸生成反工山Ｃよっで測定す
るとγンーヒニアイト反応生成′吻とするｌ吻：Ｍ Ｊ
、ｉｔ ｌ・Ｃ相当ｌｉｔのアン−〔ニブ−Ｉ′Ｉｒ金
付加しでυ１１１定き）し−（シ′まうので庄、（１偵
な定」１［１直がイυ ら）し な い 。
の定量θ、は、′ｆン化二ｆ′ｉ′八へイＪするイ＞１
体［ｌＩ（レリえぼ血（１９・尿中）のｆンーヒュ′ノ
′を反応生成！吻とする物質の定Ｊｒ１． ｋこ用いら
！しる。こ７Ｌらの４９ミ体しこ１ユすでＦＣ多ｊ＋１
．のアンモニｆが絶えず仔ｒｂ ｔ、 ’Ｃい７ヒ）た
めｅこ１ｆ１接グルタミン酸生成反工山Ｃよっで測定す
るとγンーヒニアイト反応生成′吻とするｌ吻：Ｍ Ｊ
、ｉｔ ｌ・Ｃ相当ｌｉｔのアン−〔ニブ−Ｉ′Ｉｒ金
付加しでυ１１１定き）し−（シ′まうので庄、（１偵
な定」１［１直がイυ ら）し な い 。
本発明でトユあらかじめ検体中１こ存在するノ′ン七−
二ｆ金ＮＡＩ）ＰＩＩ）Ｃより消費させてしま：）だ後
、”アンモ；二Ｊを反応生成物とし−Ｃ生じせ１〜める
ｔｑｙ 、＋・：全恢体中の−ｆンーヒニーノ” Ａ：
）、ｉ応生成物とする物質に作用させるので、−ｔこ
に生成するＮ Ａ Ｉ）の１．ｉＪユ１１ミ確？こアン
モニ′ｆを反応生成物とず、’５）！ｌｅａ １ｔｌｉ
の１１【とし゛Ｃ測定ンＸれるものである。
二ｆ金ＮＡＩ）ＰＩＩ）Ｃより消費させてしま：）だ後
、”アンモ；二Ｊを反応生成物とし−Ｃ生じせ１〜める
ｔｑｙ 、＋・：全恢体中の−ｆンーヒニーノ” Ａ：
）、ｉ応生成物とする物質に作用させるので、−ｔこ
に生成するＮ Ａ Ｉ）の１．ｉＪユ１１ミ確？こアン
モニ′ｆを反応生成物とず、’５）！ｌｅａ １ｔｌｉ
の１１【とし゛Ｃ測定ンＸれるものである。
本発明の一アンモニアを反応生成物とする物質の定ｆｉ
１：法は、単ｔこエンド、ｊ５・インド法によつ−Ｃも
アンモニアをｎ１ｊず之〕（・；ミ体中（１）−ノ゛１
、′Ｉ：−ア２’Ｃ反Ｉら生成物とする物ｊ’ｔ ”：
ａ・＞ｉＬ Ｉ＋ｉできな）（７、ま７Ｃ尾’ｄ ｊｅ
ｔ １１）′ン七ニアを反応化１ノい１θと１−Ｃ１生
じぜしめる１３’；：′！−リｊ辻・；ｉ）月侭°ノど
、こＪ二によ−〕で、レ ・イ １・ ア セ ・イ
（ｒａｔｅ ａ ｇｓａｙ ｌ ＆ｉアＣ
’ｊ−ン −Ｅ 、−二 “７−全反応生成物とずＺ
）物質を定：、）でり２．。
１：法は、単ｔこエンド、ｊ５・インド法によつ−Ｃも
アンモニアをｎ１ｊず之〕（・；ミ体中（１）−ノ゛１
、′Ｉ：−ア２’Ｃ反Ｉら生成物とする物ｊ’ｔ ”：
ａ・＞ｉＬ Ｉ＋ｉできな）（７、ま７Ｃ尾’ｄ ｊｅ
ｔ １１）′ン七ニアを反応化１ノい１θと１−Ｃ１生
じぜしめる１３’；：′！−リｊ辻・；ｉ）月侭°ノど
、こＪ二によ−〕で、レ ・イ １・ ア セ ・イ
（ｒａｔｅ ａ ｇｓａｙ ｌ ＆ｉアＣ
’ｊ−ン −Ｅ 、−二 “７−全反応生成物とずＺ
）物質を定：、）でり２．。
本発明しこｊ＋’いて、イ）らかしめ（Ｊ（Ｕ−′〕゛
る７−：ｉ−シ二Ｉをｔ肖ノ甚’； ｅ ７）＆こは第
一１こアンモご、−ノーとα−［（Ｇより水とグルタミ
ン１′１夕全生成す、＝、 に ｌＩ） ＩＩ（ＥＣ１
，４，１，３）が心安となる。この反Ｊｃｄこｒ、’ｉ
、ｔｔＪｒ ｆ’ｉ１％ ＝％ トＬ テＮ Ａ Ｄ
ｐ １１ ノ（Ｆ ｒｌ：が必安であるがＮＡＤＰＩ
Ｉの添加ＩＪ（音生なくするたぺ゛）しく反応で生成す
るＮＡＤＰ を嶽元するグツＬ−：、ｆｆ−ス６リン
敵脱水素酵素Ｇ−６−１） ｌ） ＩＩ （１４Ｃ１，
１゜１．４９）などのＮ Ａ ｉ） Ｐ“１を還元す７
＋ｌ“杼７）ｉノ＋、ｕ １・１ｊのグルコース６リン
［７，７（Ｇ −６−Ｐ ）などのＮＡＩ）Ｐ”を還ノ
Ｃする〔１７素反応基・ｔ（（と−籟に１４に加［７て
おいて６ポスホグル４７７酸（６−１） Ｇ ）を生成
させると同時にアンモニアをｃｌ −Ｋ Ｇによって完
全１こ水とグルタミン酸に変化させてし′まりのである
。
る７−：ｉ−シ二Ｉをｔ肖ノ甚’； ｅ ７）＆こは第
一１こアンモご、−ノーとα−［（Ｇより水とグルタミ
ン１′１夕全生成す、＝、 に ｌＩ） ＩＩ（ＥＣ１
，４，１，３）が心安となる。この反Ｊｃｄこｒ、’ｉ
、ｔｔＪｒ ｆ’ｉ１％ ＝％ トＬ テＮ Ａ Ｄ
ｐ １１ ノ（Ｆ ｒｌ：が必安であるがＮＡＤＰＩ
Ｉの添加ＩＪ（音生なくするたぺ゛）しく反応で生成す
るＮＡＤＰ を嶽元するグツＬ−：、ｆｆ−ス６リン
敵脱水素酵素Ｇ−６−１） ｌ） ＩＩ （１４Ｃ１，
１゜１．４９）などのＮ Ａ ｉ） Ｐ“１を還元す７
＋ｌ“杼７）ｉノ＋、ｕ １・１ｊのグルコース６リン
［７，７（Ｇ −６−Ｐ ）などのＮＡＩ）Ｐ”を還ノ
Ｃする〔１７素反応基・ｔ（（と−籟に１４に加［７て
おいて６ポスホグル４７７酸（６−１） Ｇ ）を生成
させると同時にアンモニアをｃｌ −Ｋ Ｇによって完
全１こ水とグルタミン酸に変化させてし′まりのである
。
式（１）の反応においてα−１（Ｇ→グルタミン酸の変
化によってＮ Ａ、 Ｄ Ｐ ＩがＮＡＤＰ ）ζな
ると３４０ｎｍによる吸光度が一旦Ｖｉ減少するがＧ
−６−Ｐ Ｉ） ＩＩ Ｋよって再びＮＡＤＰＩ［（１
：変化するために３４０ ｎｍによる吸光度は上昇し、
吸光度の変化がなくなったらアンモニアが全部消費され
たことになる。
化によってＮ Ａ、 Ｄ Ｐ ＩがＮＡＤＰ ）ζな
ると３４０ｎｍによる吸光度が一旦Ｖｉ減少するがＧ
−６−Ｐ Ｉ） ＩＩ Ｋよって再びＮＡＤＰＩ［（１
：変化するために３４０ ｎｍによる吸光度は上昇し、
吸光度の変化がなくなったらアンモニアが全部消費され
たことになる。
本発明のアンモニア消費１坪のうちＧ Ｉ Ｄ ＩＩは
必須であるが助酵素のＮ Ａ Ｉ） Ｐ Ｆを還元する
酵素ｔｄＧ−６−ＰＤＨに限らすＮＡＤＰ を助曲調
として還元する酵素であれば任意に選択することができ
る。
必須であるが助酵素のＮ Ａ Ｉ） Ｐ Ｆを還元する
酵素ｔｄＧ−６−ＰＤＨに限らすＮＡＤＰ を助曲調
として還元する酵素であれば任意に選択することができ
る。
例えばＧ −６−Ｐ Ｄ Ｈ（Ｆ Ｃ１，１，１，４９
）（グルコース−６−リン酸脱水素酵累）６− Ｐ −
Ｇ Ｄ １１ （Ｅ Ｃ１，１，１，４４）（６ホスホ
グルコン酸脱水丼；酵素） １ ｃ −Ｄ ＩＩ （Ｅ Ｃ１，１，１，４２）（イ
ンクエン酸脱水素酵素） などがあり、これらを用いる場合はそれぞれ過剰の基質
としてＧ−６−Ｐ、 ６−ＰＣ，□ｆツクエン酸全そ
ノＬそれ選択して′＆１５加すれば良い。
）（グルコース−６−リン酸脱水素酵累）６− Ｐ −
Ｇ Ｄ １１ （Ｅ Ｃ１，１，１，４４）（６ホスホ
グルコン酸脱水丼；酵素） １ ｃ −Ｄ ＩＩ （Ｅ Ｃ１，１，１，４２）（イ
ンクエン酸脱水素酵素） などがあり、これらを用いる場合はそれぞれ過剰の基質
としてＧ−６−Ｐ、 ６−ＰＣ，□ｆツクエン酸全そ
ノＬそれ選択して′＆１５加すれば良い。
このようＩＣ検体中のすでに存在しでいたアンモニアは
ｌｔ）費されアンモニア肴反応生成物として生じせしめ
る酵素の作用によって生成するアンモニアＶＪ１α接測
定できる状態となったわけである。
ｌｔ）費されアンモニア肴反応生成物として生じせしめ
る酵素の作用によって生成するアンモニアＶＪ１α接測
定できる状態となったわけである。
次に本発明ンこおけるアンモニアを反応生成 物と
する物質例えば尿素を定量する場合の反応系を式（２）
で表わぜは次の通りである。
する物質例えば尿素を定量する場合の反応系を式（２）
で表わぜは次の通りである。
なお太線はアンモニア消費系の反応に関する系で、＋Ｎ
ＩＩ腺はウレアーゼの反応に関する糸である。即し、検
体に定量する尿素に応じた基質、酵素及び過剰のＮ Ａ
Ｉ） ＩＩを添加して反応せしめることによつ゛Ｃ尿
素ｉ Ｎ Ａ Ｄ ＩＩの減少−１，とじて３４０１目
ｎ Ｖこよるυ１１１定で定（１１することができる。
ＩＩ腺はウレアーゼの反応に関する糸である。即し、検
体に定量する尿素に応じた基質、酵素及び過剰のＮ Ａ
Ｉ） ＩＩを添加して反応せしめることによつ゛Ｃ尿
素ｉ Ｎ Ａ Ｄ ＩＩの減少−１，とじて３４０１目
ｎ Ｖこよるυ１１１定で定（１１することができる。
ここで添加に必須のものとしてはα−Ｋ Ｇ並びにＧ
Ｉ Ｄ ＩＩであるが、最初のアンモニア消費反応系に
添加されていたものを眺用°ノーることもできる。最初
の添加層が少ないとき１こはここで追加し゛〔添加する
こともできる。またウレフ′−ゼの添加も必須である。
Ｉ Ｄ ＩＩであるが、最初のアンモニア消費反応系に
添加されていたものを眺用°ノーることもできる。最初
の添加層が少ないとき１こはここで追加し゛〔添加する
こともできる。またウレフ′−ゼの添加も必須である。
またＮ Ａ Ｄ ＩＩのぢ≦加は必須であつＣＮＡＩ）
ＨのＮＡＤ への変化によって生じる３ ４０ ｎｍの
減少１′Ｃよつ′ＣＣ尿素上１ｔ測定できることになる
。
ＨのＮＡＤ への変化によって生じる３ ４０ ｎｍの
減少１′Ｃよつ′ＣＣ尿素上１ｔ測定できることになる
。
反応ｋま１＋ＩＩ ７．５の緩＠故中で２５℃で行なわ
れる。式（２）の反応において尿素がウレアーゼによっ
て分解づれアンモニアからα−Ｉ（ＧとともＶＣＧ Ｊ
Ｄ ＩＩ ＆てよってグルタミン酸ｅこなるときにＮ
Ａ Ｄ ＨがＮＡＤ になって蓄積する。
れる。式（２）の反応において尿素がウレアーゼによっ
て分解づれアンモニアからα−Ｉ（ＧとともＶＣＧ Ｊ
Ｄ ＩＩ ＆てよってグルタミン酸ｅこなるときにＮ
Ａ Ｄ ＨがＮＡＤ になって蓄積する。
この時検体中のアンモニアを消費するだめに添加されて
いたＮ Ａ Ｄ Ｐ ＩＩがＮ Ａ Ｄ Ｈと同様ｒこ
酸化されて、さらにＧ −６−Ｐ Ｄ ＨによってＮ
Ａ Ｄ １１にもどると危惧される。しかし、ＮＡＤＰ
ＩＩ ｔ、ｉ： Ｎ Ａ Ｄ ｌ（Ｋ比較シテごく微量
、例えば１０分の１以下しか存在しないため、Ｇ −６
−Ｐ Ｄ Ｈザイクルが回る小はｌｔ＋：視できるもの
である。
いたＮ Ａ Ｄ Ｐ ＩＩがＮ Ａ Ｄ Ｈと同様ｒこ
酸化されて、さらにＧ −６−Ｐ Ｄ ＨによってＮ
Ａ Ｄ １１にもどると危惧される。しかし、ＮＡＤＰ
ＩＩ ｔ、ｉ： Ｎ Ａ Ｄ ｌ（Ｋ比較シテごく微量
、例えば１０分の１以下しか存在しないため、Ｇ −６
−Ｐ Ｄ Ｈザイクルが回る小はｌｔ＋：視できるもの
である。
また検体中のアンモニアを消費するために含有されてい
るＧ −６−Ｐ Ｄ ＨがＮＡＤ を還元すると危惧
されるがここで含有される酸素は助曲調ｅこ高い特異性
を持つものが選ばれているため、その心配は必要としな
い。
るＧ −６−Ｐ Ｄ ＨがＮＡＤ を還元すると危惧
されるがここで含有される酸素は助曲調ｅこ高い特異性
を持つものが選ばれているため、その心配は必要としな
い。
生成したＮＡＤはそのまま３４０ｎｍの吸光度の減少に
よって尿素金層を測定することができる。
よって尿素金層を測定することができる。
まだ尿素以外にもアンモニアを反応生成物とする物質の
定量も同様に行なうことができる。例えばクレアチニン
、Ｌ−アスノ９ラギン、Ｌ−グルタミン、モノ力ルポギ
シリック酸、Ｎ−カルバミルβアラニン、Ｌ−ウレ−（
１−コハクｔＬＮ−ホルムイミノーＬ−アスノぐラギン
酸、ソ［・シン、アデニン、グーアニン、−１５″ノノ
ノ、ンナゾン、ＡＤＰ、４アミン・ｆミダゾール、−ξ
トリノ、デオキシ−ＣＭ））、ニトリル、尿素（１）の
物Ｃ１１の定Ｆｉ−１： ｋｃ −’ｆ、−ｈらの一ア
ンモニーア４７反応生成物とする物質に作用し、アンモ
ニアを生成せしめる酵素例えばクレアナニンデイミナー
ゼ、アス／ｅラギナーゼ、グルタミナーゼ、アミダーゼ
、β−ウレ・ｆトプロピオナーゼ、ウレ−１１−ザクシ
ナーゼ、ホ／ｌ、ムイミノアスパラギン酵−フ”−（ミ
ナーゼ、ントシノプ″アミナーゼ、アデニンデアミナー
ゼ、グｆ ニ ン ）′ア ミ リ′ −−ビ、 ソ
”ブ′ノ シ ンブｊ −ｆ ミ ノー −ゼ、ゾチ
ノンデ゛ノ゛ミナーゼ、ＡＩ）Ｐｆアミナーゼ、アミノ
イミダゾラーゼ、ベトリンデアミノ”−・ビ、デオキシ
ＣＭ Ｉ）う″フ゛ミナーゼ、ニトリラーゼ、ウレアー
ゼとともに用いることによりアンモニア全反応生成物と
する物）？Ｌを定ｉｉＬすることができる。
定量も同様に行なうことができる。例えばクレアチニン
、Ｌ−アスノ９ラギン、Ｌ−グルタミン、モノ力ルポギ
シリック酸、Ｎ−カルバミルβアラニン、Ｌ−ウレ−（
１−コハクｔＬＮ−ホルムイミノーＬ−アスノぐラギン
酸、ソ［・シン、アデニン、グーアニン、−１５″ノノ
ノ、ンナゾン、ＡＤＰ、４アミン・ｆミダゾール、−ξ
トリノ、デオキシ−ＣＭ））、ニトリル、尿素（１）の
物Ｃ１１の定Ｆｉ−１： ｋｃ −’ｆ、−ｈらの一ア
ンモニーア４７反応生成物とする物質に作用し、アンモ
ニアを生成せしめる酵素例えばクレアナニンデイミナー
ゼ、アス／ｅラギナーゼ、グルタミナーゼ、アミダーゼ
、β−ウレ・ｆトプロピオナーゼ、ウレ−１１−ザクシ
ナーゼ、ホ／ｌ、ムイミノアスパラギン酵−フ”−（ミ
ナーゼ、ントシノプ″アミナーゼ、アデニンデアミナー
ゼ、グｆ ニ ン ）′ア ミ リ′ −−ビ、 ソ
”ブ′ノ シ ンブｊ −ｆ ミ ノー −ゼ、ゾチ
ノンデ゛ノ゛ミナーゼ、ＡＩ）Ｐｆアミナーゼ、アミノ
イミダゾラーゼ、ベトリンデアミノ”−・ビ、デオキシ
ＣＭ Ｉ）う″フ゛ミナーゼ、ニトリラーゼ、ウレアー
ゼとともに用いることによりアンモニア全反応生成物と
する物）？Ｌを定ｉｉＬすることができる。
−また上記しＵ以外の一アンモニアを反応生成物とする
物質金も本発明の範囲に合むものである。
物質金も本発明の範囲に合むものである。
このよＩ）Ｐｃ本不発刃ｔよアンしニアを反応生成物と
する物Ｊｔ４Ｊの定に、１： ）こおいで前もって倹ｆ
１・中のアンモニアを消費ぜし７めだ／Ｃめ（・Ｃ引〃
・１．き同−険体で面接アンモニアを反応４１．代物と
゛）−イ、物’ｔｔの定ｌｉｔを１り能としたものでア
ンモニア４：反（６生成物とする物ｔｔ＜の自動分析ト
こきわ！ｊ）’（’適した方法である。
する物Ｊｔ４Ｊの定に、１： ）こおいで前もって倹ｆ
１・中のアンモニアを消費ぜし７めだ／Ｃめ（・Ｃ引〃
・１．き同−険体で面接アンモニアを反応４１．代物と
゛）−イ、物’ｔｔの定ｌｉｔを１り能としたものでア
ンモニア４：反（６生成物とする物ｔｔ＜の自動分析ト
こきわ！ｊ）’（’適した方法である。
次に本発明の実施例を示す。
実施例（尿素の定１１１）
α−ＫＧ ４．２ｍＭ
ＮＡＩ）Ｐｌｌｏ、０１コ３ｍＭ Ｇ−６−Ｐ ３．２ｍＭ（Ｊ−６−Ｐ
Ｉ）ＩＩ （Ｙｅａｓｔ） ３．２ ｕ／ｍｅＧ
ｌＤＩＥ （Ｂｅｅｒ １ｉｖｅｒ） ３８ ｕ
／＋ｌ＋／：以上を含有する０１Δｆ ｔ・’Ｊス」１
；１λ酸緩１・１１Ｊ液（＋）ＩＩ ＝ ７．５ ）
３ ｍｌ Ｉｃ ２ ｍＭアン七ニア全含む様々ｆｒ、
濃１庄ＶＣ８周荒し／こ尿素含有検体（Ａ：０．１ｍ９
／１ｌｌｅ Ｂ ： Ｑ、２ｍｙ／ｍｅ Ｃ： Ｑ
、４＃ＩＬｙＶ＊＋６Ｄ ： ０．８〃１ｙ／ｍｅ ）
１０μｌを添加した。
ＮＡＩ）Ｐｌｌｏ、０１コ３ｍＭ Ｇ−６−Ｐ ３．２ｍＭ（Ｊ−６−Ｐ
Ｉ）ＩＩ （Ｙｅａｓｔ） ３．２ ｕ／ｍｅＧ
ｌＤＩＥ （Ｂｅｅｒ １ｉｖｅｒ） ３８ ｕ
／＋ｌ＋／：以上を含有する０１Δｆ ｔ・’Ｊス」１
；１λ酸緩１・１１Ｊ液（＋）ＩＩ ＝ ７．５ ）
３ ｍｌ Ｉｃ ２ ｍＭアン七ニア全含む様々ｆｒ、
濃１庄ＶＣ８周荒し／こ尿素含有検体（Ａ：０．１ｍ９
／１ｌｌｅ Ｂ ： Ｑ、２ｍｙ／ｍｅ Ｃ： Ｑ
、４＃ＩＬｙＶ＊＋６Ｄ ： ０．８〃１ｙ／ｍｅ ）
１０μｌを添加した。
それぞれ２５℃で５分間保温した後３４０ｒａｎの吸光
度を測定し吸光度の変化が停止し／こところで５ｍＭＮ
ＡＤＨ７２μｌを添加し３４０ ｎｍの吸光度の増加を
約２分間追跡したｆｕ １００ ｕ ７ｍｌウレアーゼ
５０ｔｔｌを添加（７，３４０ｎｍの吸光度の減少を測
定した。
度を測定し吸光度の変化が停止し／こところで５ｍＭＮ
ＡＤＨ７２μｌを添加し３４０ ｎｍの吸光度の増加を
約２分間追跡したｆｕ １００ ｕ ７ｍｌウレアーゼ
５０ｔｔｌを添加（７，３４０ｎｍの吸光度の減少を測
定した。
ΔＥ：Ａ ： ００６６ Ｂ ：０１３２ Ｃ：０．２
６４ Ｄ：０．５２７（ｌ ｉ′Ｎ、金次弐Ｖこよって
計算した結果、検体中にすで（ｒ（存在していたアンモ
ニア２ｍＭは完全に消費ｉΣれ、引続き測定される尿素
の定ηしに影響なく検体中の尿素含捕が定縫された。
６４ Ｄ：０．５２７（ｌ ｉ′Ｎ、金次弐Ｖこよって
計算した結果、検体中にすで（ｒ（存在していたアンモ
ニア２ｍＭは完全に消費ｉΣれ、引続き測定される尿素
の定ηしに影響なく検体中の尿素含捕が定縫された。
ΔＥ＝＝ＮＡＤＨの減少による吸光度の減少６．２＝Ｎ
ＡＤＨの１ｍＭの吸光度 ３１３２−余液１１［ ００１一検体（辻 ６０．０６−尿素の分子ｆ−二
ＡＤＨの１ｍＭの吸光度 ３１３２−余液１１［ ００１一検体（辻 ６０．０６−尿素の分子ｆ−二
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 検体にグルタミン酸脱水素１１％ ｌ＜ 、２−オキソ
ゲルタール酸、還元型ニコチンアミドアデニンノヌクレ
オチドホスフエートそしてニコチンアミドアデニンジヌ
クレオナドホスフエートを還元するＮ％素と基質を添加
混合し、混合液［；身Ｃすでに存在するアンモニアを消
費せしめ、その際生成されたニコチンアミドアｒニンノ
ヌクレオチドホス７エートヲニコチ／アミドアラ１ニン
ジヌクレオチドホスフエートを還元せしめる酵素を用い
−〔１１■度還元型ニコチンアミドアブ１ニンジヌクレ
オテドホスフエートに変換せしめ、しかる後還元型ニコ
ｆ−７１ミドアブ″ニンノヌクレオチド及び反応生成物
とし−Ｃアンモニアを生成せしめる酵素を添加して反応
せしめることを’ｔ！ｊ ｍとするアンモニアを反応生
成物とする生体物質の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12888382A JPS5921399A (ja) | 1982-07-26 | 1982-07-26 | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12888382A JPS5921399A (ja) | 1982-07-26 | 1982-07-26 | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5921399A true JPS5921399A (ja) | 1984-02-03 |
| JPH0218074B2 JPH0218074B2 (ja) | 1990-04-24 |
Family
ID=14995706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12888382A Granted JPS5921399A (ja) | 1982-07-26 | 1982-07-26 | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5921399A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60152090U (ja) * | 1984-03-22 | 1985-10-09 | カルソニックカンセイ株式会社 | 電動フアン |
-
1982
- 1982-07-26 JP JP12888382A patent/JPS5921399A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60152090U (ja) * | 1984-03-22 | 1985-10-09 | カルソニックカンセイ株式会社 | 電動フアン |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0218074B2 (ja) | 1990-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bergmeyer et al. | L-aspartate and L-asparagine | |
| JPS584915B2 (ja) | アデノシンジホスフェ−トを測定する方法 | |
| US5302513A (en) | Method for determination of components | |
| Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
| GB1417538A (en) | Process and reagent for the determination of blood ammonia | |
| JPS5921399A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 | |
| US4742001A (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction in an analytical system | |
| DE3415436C2 (de) | Assay-Verfahren unter Verwendung von NAD-Synthetase | |
| Davis | A spectrophotometric method for the assay of threonine dehydratase | |
| Wakisaka et al. | A rapid assay method for ammonia using glutamine synthetase from glutamate-producing bacteria | |
| Sicsic et al. | Activity of NMN+, nicotinamide ribose and analogs in alcohol oxidation promoted by horse‐liver alcohol dehydrogenase: Improvement of this activity and structural requirements of the pyridine nucleotide part of the NAD+ coenzyme | |
| EP0207493B1 (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction | |
| Shiio | BACTERIAL FORMATION OF GLUTAMIC ACID FROM ACETIC ACID I. GLUTAMATE FORMATION AND ITS RELATED ENZYMES IN BREVIBACTERIUM FLAVUM, No. 2247 | |
| JPH0675515B2 (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量方法 | |
| JPS5931700A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量方法 | |
| US5258286A (en) | Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction | |
| El Kasmi et al. | Hydroxybenzoyl-CoA reductase: coupling kinetics and electrochemistry to derive enzyme mechanisms | |
| West et al. | Improved colorimetric procedure for quantitating N-carbamoyl-β-alanine with minimum dihydrouracil interference | |
| JPS6047698A (ja) | Νｈ↓３またはａｔｐの測定法 | |
| Näslund et al. | Spectrophotometric assay of GTPase and ATPase activities related to protein synthesis | |
| JPH0218078B2 (ja) | ||
| JPS6236199A (ja) | カルシウムイオンの定量法 | |
| JPS626700A (ja) | アンモニアを反応生成物とする生体物質の定量法 | |
| JPH0412119B2 (ja) | ||
| JPS5931697A (ja) | 検体の前処理法 |