JPS59199661A - 固定化されたオリゴペプチド類 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、オリゴペプチド釦が、直接にあるいは「スペ
ーサ−７−ム」（ｐａｃｅｒ ａｔｒｎ、）により、適
当な水不溶性担体に結合していることをケ徴とする新規
〃変性７トリツクスに関する。
ーサ−７−ム」（ｐａｃｅｒ ａｔｒｎ、）により、適
当な水不溶性担体に結合していることをケ徴とする新規
〃変性７トリツクスに関する。
新規か変性マトリックスによ、次式
式中、Ａは水不溶性担体ｆ：衣わし、Ｂｌｔま結合、ス
ペーサ−・アームまたはポリアミノ敵残基を表わし、Ｒ
はそれぞれ式 −Ｂ ＃ −（Ｃ＋ −ＣＩ２ ）アルキレンおよび’
（ＣＩ ’＋２）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（ＣＩ’＋２）フルキレン
置換アミノまたはオキシ基、好壕シくはそれぞれ式 〜ｌｌ〜−（”２−Ｃ６）アルキレジおよび’ （Ｃ
２−Ｃ６）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン
置換アミノまたはオキシ基を表わ（〜、あるいはＲ−Ｃ
ｏばＬ−＋）シニル残基、または結合または一〇Ｃ（’
ＣＨ２）ｎＣＯ−基を表わし、ここで？Ｚは１〜６の整
数、好ましくは２．３または４であり；Ｚはバーアラニ
ル、グリシニルおよびＤ−ロイシニルから選ばれるアミ
ノ酸残基を表わし；そしてＤ−ａｌａばＤ−アラニル基
を表わし７；ただしＲ−Ｃｏが結合であるとさ、ＢばＤ
−アラニンのアミノ官能基に結合するカルボキシ末端官
能基を有する基であるか、あるいはＲＣＯおよびＢの両
者が結合を表わす場合、Δ（ｒＪ Ｉ）−アラニンのア
ミノ官能基にペプチド結合を介し〜で結合するカルボキ
シ末端官能基を翁する水不溶性＋１１体である、 で衣わすことかできる。
ペーサ−・アームまたはポリアミノ敵残基を表わし、Ｒ
はそれぞれ式 −Ｂ ＃ −（Ｃ＋ −ＣＩ２ ）アルキレンおよび’
（ＣＩ ’＋２）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（ＣＩ’＋２）フルキレン
置換アミノまたはオキシ基、好壕シくはそれぞれ式 〜ｌｌ〜−（”２−Ｃ６）アルキレジおよび’ （Ｃ
２−Ｃ６）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン
置換アミノまたはオキシ基を表わ（〜、あるいはＲ−Ｃ
ｏばＬ−＋）シニル残基、または結合または一〇Ｃ（’
ＣＨ２）ｎＣＯ−基を表わし、ここで？Ｚは１〜６の整
数、好ましくは２．３または４であり；Ｚはバーアラニ
ル、グリシニルおよびＤ−ロイシニルから選ばれるアミ
ノ酸残基を表わし；そしてＤ−ａｌａばＤ−アラニル基
を表わし７；ただしＲ−Ｃｏが結合であるとさ、ＢばＤ
−アラニンのアミノ官能基に結合するカルボキシ末端官
能基を有する基であるか、あるいはＲＣＯおよびＢの両
者が結合を表わす場合、Δ（ｒＪ Ｉ）−アラニンのア
ミノ官能基にペプチド結合を介し〜で結合するカルボキ
シ末端官能基を翁する水不溶性＋１１体である、 で衣わすことかできる。
本発明の構成において、「−水不溶性４−１体」という
語は、−ＲＣ’０−１）−Ａ ｌ ａ−Ｚ−基、以後ｒ
配位子Ｊ （ｌｉｇａｎｄ ）または「■」とイウ
、に直接するいはスペーサー・アームを介して結合する
ことができる水不溶性の担体ま／？：けマｌ−リックス
を表わす。
語は、−ＲＣ’０−１）−Ａ ｌ ａ−Ｚ−基、以後ｒ
配位子Ｊ （ｌｉｇａｎｄ ）または「■」とイウ
、に直接するいはスペーサー・アームを介して結合する
ことができる水不溶性の担体ま／？：けマｌ−リックス
を表わす。
「変性マトリックス」というｕムは、一般に、本発明の
固定化された（ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ♂ｚｅｄ
）オリコ゛ペフ０チドを示すが、「マトリックス」と
いつ語それ自体ｉｌ″１′「水不溶性担体」と同義語と
１７で使用する。
固定化された（ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ♂ｚｅｄ
）オリコ゛ペフ０チドを示すが、「マトリックス」と
いつ語それ自体ｉｌ″１′「水不溶性担体」と同義語と
１７で使用する。
本発明の変性マトリックスにおける重Ｖ、々パラメータ
ーの１つは基質に対する配位子の特異性〔すガわち、固
定化されたペプチドに対する標的（ｔａｒｇｅｔ ）抗
生物質の選択性〕であるがマトリックス「それだけで」
は重俄な役割をもたない。
ーの１つは基質に対する配位子の特異性〔すガわち、固
定化されたペプチドに対する標的（ｔａｒｇｅｔ ）抗
生物質の選択性〕であるがマトリックス「それだけで」
は重俄な役割をもたない。
担体は使用する溶媒および緩衝液中に不溶性でなくては
ならず、機械的および化学的に安定でありかつすぐれた
流れ性質をもたなくてはならず、配位子にあるいは配位
子を結合できる「スペーサー・アーム」に容易に結合し
なくてはならず、そして吸着されるべき基質が接近でき
る大きい表面積をもつべきである。前記７トリツクスは
、単一組成のマトリックス、たとえば、アガロース、ガ
之ス、セルロースｈど、および二成分の組成のすなわち
化学的に変性されたマトリックス、たとえば、アガロー
ス被僚ポリアクリルアミド、ポリアクリル被覆鉄粒子、
ダリシドキシ被覆ガラスなどを包含する。
ならず、機械的および化学的に安定でありかつすぐれた
流れ性質をもたなくてはならず、配位子にあるいは配位
子を結合できる「スペーサー・アーム」に容易に結合し
なくてはならず、そして吸着されるべき基質が接近でき
る大きい表面積をもつべきである。前記７トリツクスは
、単一組成のマトリックス、たとえば、アガロース、ガ
之ス、セルロースｈど、および二成分の組成のすなわち
化学的に変性されたマトリックス、たとえば、アガロー
ス被僚ポリアクリルアミド、ポリアクリル被覆鉄粒子、
ダリシドキシ被覆ガラスなどを包含する。
水不溶性担体の例は、ヒドロキシ基、アミン基またはカ
ルボニル基まだはハロヶ゛ン原子を有するものである。
ルボニル基まだはハロヶ゛ン原子を有するものである。
ヒドロキシ基をイコする水不溶性担体の例ｕ、８糖類（
たとえば、セルロース、アガロース、架橋−ｒキストラ
ンなど）、ヒドロギシアルキルポリスチレン樹脂（たと
えば、ヒドロギシアルキル化スチレンーノビニルベンゼ
ンコポリマーなど）、ポリビニルアルコール庁どである
。アミン基を有する水不溶性担体の例は、アミノアルキ
ル多ｆＪ％ｔ ａ （ｉｔとえば、アミノアルキルセル
ロース、たとえば、アミノエチルセルロースまたはアミ
ノヘキシルセルロース、アミノアルキルアカロース、た
とえば、アミンへキシルアカロース々と）、 ｐ＝ニ
アミノペンツル糖類（プＣとえは、ｐ−アミノアルキル
セルロース、ｐ−７ミノベンソルアガロースなと）、キ
トサン、アミノアルキルポリスチレン１４脂（７’ｃと
えは、アミノアルギル化スチレン−ノビニルベンゼンコ
ポリマー） ％ 、＋４°リアクリルアミド、およびア
ミノアルキルポリアクリルアミド（たとえば、アミノエ
チルポリアクリルアミドなど）、およびアミノアルキル
多孔質ガラス（たとえば、アミノプロピル多孔質ガラス
々と）である。カルボキシル基を有する水不溶−性担体
の例は、カルボキシアルキル多糖類（たとえば、カルボ
キシルアガロース、たとえば、カルボキシルキルア ｆ
ｆ ｏ−スマタはカルボキシペンチルアガロース、カル
ボキシアルキルセルロース、りとえは、カルボキシメチ
ルセルロース、カルボキシ架橋デキストラン、たとえば
、カルゴヤ／メチル架橋デキストラン々ど）、カルボキ
シアルキルポリアクリルアミド（たとえば、カルボキシ
メチルポリアクリルアミドなと）、およびカルボン酸ｆ
ｌｔｔ脂（りとえば、アクリル酸−ヅビニルベンゼンコ
ポリアーなど）である。ロケ゛ン原子を有する水不溶性
担体の例は、ハロケノアルキルポリスチレン樹脂（たと
えば、クロロメチル化スチレンーソビニルベンゼンコポ
リマー）でアル。ハロケ゛ノアルキルポリスチレンを使
用するとき、それはその−ま捷使用することができある
いはより活性化された形に転化することができる。たと
えは、ハロケノアルキルポリスチレン樹脂は、この樹脂
をヅアルキルザルファイドと反応させることにより、ハ
ロゲノアルキルポリスチレン樹脂のそれよすい活有する
ソアルキルチオアルキルボリスチレン樹脂に転化するこ
とができる。
たとえば、セルロース、アガロース、架橋−ｒキストラ
ンなど）、ヒドロギシアルキルポリスチレン樹脂（たと
えば、ヒドロギシアルキル化スチレンーノビニルベンゼ
ンコポリマーなど）、ポリビニルアルコール庁どである
。アミン基を有する水不溶性担体の例は、アミノアルキ
ル多ｆＪ％ｔ ａ （ｉｔとえば、アミノアルキルセル
ロース、たとえば、アミノエチルセルロースまたはアミ
ノヘキシルセルロース、アミノアルキルアカロース、た
とえば、アミンへキシルアカロース々と）、 ｐ＝ニ
アミノペンツル糖類（プＣとえは、ｐ−アミノアルキル
セルロース、ｐ−７ミノベンソルアガロースなと）、キ
トサン、アミノアルキルポリスチレン１４脂（７’ｃと
えは、アミノアルギル化スチレン−ノビニルベンゼンコ
ポリマー） ％ 、＋４°リアクリルアミド、およびア
ミノアルキルポリアクリルアミド（たとえば、アミノエ
チルポリアクリルアミドなど）、およびアミノアルキル
多孔質ガラス（たとえば、アミノプロピル多孔質ガラス
々と）である。カルボキシル基を有する水不溶−性担体
の例は、カルボキシアルキル多糖類（たとえば、カルボ
キシルアガロース、たとえば、カルボキシルキルア ｆ
ｆ ｏ−スマタはカルボキシペンチルアガロース、カル
ボキシアルキルセルロース、りとえは、カルボキシメチ
ルセルロース、カルボキシ架橋デキストラン、たとえば
、カルゴヤ／メチル架橋デキストラン々ど）、カルボキ
シアルキルポリアクリルアミド（たとえば、カルボキシ
メチルポリアクリルアミドなと）、およびカルボン酸ｆ
ｌｔｔ脂（りとえば、アクリル酸−ヅビニルベンゼンコ
ポリアーなど）である。ロケ゛ン原子を有する水不溶性
担体の例は、ハロケノアルキルポリスチレン樹脂（たと
えば、クロロメチル化スチレンーソビニルベンゼンコポ
リマー）でアル。ハロケ゛ノアルキルポリスチレンを使
用するとき、それはその−ま捷使用することができある
いはより活性化された形に転化することができる。たと
えは、ハロケノアルキルポリスチレン樹脂は、この樹脂
をヅアルキルザルファイドと反応させることにより、ハ
ロゲノアルキルポリスチレン樹脂のそれよすい活有する
ソアルキルチオアルキルボリスチレン樹脂に転化するこ
とができる。
水不溶性担体が配位子へ直接結合できる何能基を有する
とき、配位子を７トリツクスへ１６接結合することがで
きる（すなわち、上記の式において、Ｂは結合を表わす
）が、ある場合においで、担体と配位子との間に介在す
るスペーサー・アームを経てマドｖツクスを配位子へ結
合〜て、その効果的結合を促進することが好ま−い。こ
のようなスー・アームの代表的々例ハ、式 式中、ηＬは１〜１２の整截、好ましく２〜６、最も好
甘しくけ４を表わす、 の残基である。
とき、配位子を７トリツクスへ１６接結合することがで
きる（すなわち、上記の式において、Ｂは結合を表わす
）が、ある場合においで、担体と配位子との間に介在す
るスペーサー・アームを経てマドｖツクスを配位子へ結
合〜て、その効果的結合を促進することが好ま−い。こ
のようなスー・アームの代表的々例ハ、式 式中、ηＬは１〜１２の整截、好ましく２〜６、最も好
甘しくけ４を表わす、 の残基である。
「ポリアミノ酸残基」、これはＢについての可能々意味
の１つである、は被プチド結合（−ＣＯ−Ｎｌｉ−）を
経て互いに結合するアミノ酸基の配列を表わす。アミノ
酸は既知のアルファーアミノ酸の１種であることができ
、そしてアミノ酸単位／鎖の平均数は約２〜約１５以上
、好ましくは２〜６である。最も好ましくは、このポリ
アミド酸残基は（２〜１５）Ｄ−Δｌａ単位のポリ（Ｄ
−Ａｌａ）残基である。
の１つである、は被プチド結合（−ＣＯ−Ｎｌｉ−）を
経て互いに結合するアミノ酸基の配列を表わす。アミノ
酸は既知のアルファーアミノ酸の１種であることができ
、そしてアミノ酸単位／鎖の平均数は約２〜約１５以上
、好ましくは２〜６である。最も好ましくは、このポリ
アミド酸残基は（２〜１５）Ｄ−Δｌａ単位のポリ（Ｄ
−Ａｌａ）残基である。
直鎖状または分岐鎖状の（ＣＩ−ＣＩ２）アルキレン基
の例は、（’Ｃ，−Ｃ，□）メチレン基、またはｌもし
くはそれ以上のメチレン基の水素原子が低級アルキル基
たとえはメチル、エチル、ン０ロビル々どで置換づれて
いる（ＣＩ−ＣＩ２）メチレン基である。
の例は、（’Ｃ，−Ｃ，□）メチレン基、またはｌもし
くはそれ以上のメチレン基の水素原子が低級アルキル基
たとえはメチル、エチル、ン０ロビル々どで置換づれて
いる（ＣＩ−ＣＩ２）メチレン基である。
本発明の好ましい実施態様は、マトリックス（すなわち
、水不溶性担体）が架橋テキストラン、セルロースマタ
ハカルボキシメチルセルロース調整された孔のガラス捷
たは誘導化ガラス（／ことえば、シラン化これたあるい
はグリドキシｗ、′４整された孔のガラス、長鎖アルギ
ルアミンカラス、アミノプロピルガラス、カルボキシル
ガラスなと）、アガロース、または誘導体化アガロース
（たとえＩｄ、、 架橋アガロースのＮ−ヒドロキシス
クシンイミド活性エステル、カルボキシ末端アガロース
、アミン末端アガロ〜スなど）、、ｌｔＵポリアクリル
アミドケ゛ル、たとえば、遊離アミン基へ結合できる官
能基を有するアミンエチルポリアクリルアカルボキシ（
（、’００Ｒ’、ここでＲ１は水素、（Ｃ７−Ｃ３）ア
ルキル、クロロ、ブロモ甘たはアミノを表ワス）、ハロ
ケゞン（クロロまたはブロモ）および同様な基を有する
官能性誘導体〕である、本発明の変性マトリックスであ
る。スペーサー・アームは、存在するときｌｌ２Ｎ −
（Ｃ１ｉ２）ｍ Ｃ００Ｉｊ、ここでｍは上に定義した
とおりである、であり、そしてオリゴペプチド配位子は
官能化された担体のカルボニル末端の官能基とヅベプチ
ドの遊離アミン基との間のペプチド結合により担体へ結
合したＤ−アラニルーＤ−アラニンソベプチドであるか
、あるいは配位子は約２〜１５の平均の数の単位を含有
するポリ（Ｄ−アラニン）である。
、水不溶性担体）が架橋テキストラン、セルロースマタ
ハカルボキシメチルセルロース調整された孔のガラス捷
たは誘導化ガラス（／ことえば、シラン化これたあるい
はグリドキシｗ、′４整された孔のガラス、長鎖アルギ
ルアミンカラス、アミノプロピルガラス、カルボキシル
ガラスなと）、アガロース、または誘導体化アガロース
（たとえＩｄ、、 架橋アガロースのＮ−ヒドロキシス
クシンイミド活性エステル、カルボキシ末端アガロース
、アミン末端アガロ〜スなど）、、ｌｔＵポリアクリル
アミドケ゛ル、たとえば、遊離アミン基へ結合できる官
能基を有するアミンエチルポリアクリルアカルボキシ（
（、’００Ｒ’、ここでＲ１は水素、（Ｃ７−Ｃ３）ア
ルキル、クロロ、ブロモ甘たはアミノを表ワス）、ハロ
ケゞン（クロロまたはブロモ）および同様な基を有する
官能性誘導体〕である、本発明の変性マトリックスであ
る。スペーサー・アームは、存在するときｌｌ２Ｎ −
（Ｃ１ｉ２）ｍ Ｃ００Ｉｊ、ここでｍは上に定義した
とおりである、であり、そしてオリゴペプチド配位子は
官能化された担体のカルボニル末端の官能基とヅベプチ
ドの遊離アミン基との間のペプチド結合により担体へ結
合したＤ−アラニルーＤ−アラニンソベプチドであるか
、あるいは配位子は約２〜１５の平均の数の単位を含有
するポリ（Ｄ−アラニン）である。
本発明のさらに好ましい実施態様は、担体がカルボキシ
メチルセルロース、セルロース、 ｌＰｔガラス、調整
された多孔質ガラス、架橋デキストスであり、オリゴペ
プチド配位子がポリ（Ｄ−アラニン）であり、そして担
体と配位子との間の結合が臭化シアン、エビクロロヒド
リン、１．４−ビス（２，３−ソエボキシ）ズタンまた
は３−アミノプロピルトリエトキシシランである、変性
マトリックスである。
メチルセルロース、セルロース、 ｌＰｔガラス、調整
された多孔質ガラス、架橋デキストスであり、オリゴペ
プチド配位子がポリ（Ｄ−アラニン）であり、そして担
体と配位子との間の結合が臭化シアン、エビクロロヒド
リン、１．４−ビス（２，３−ソエボキシ）ズタンまた
は３−アミノプロピルトリエトキシシランである、変性
マトリックスである。
ある抗生物質は細菌の細胞壁の合成を妨害することによ
り作用することは知られている。さらに詳しくは、ペニ
シリン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ ） １４、セファロス
ポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ ） ％および他
のベーターラクタム類は、トランスペプチダーゼ類およ
びカルボキシペプチダーゼ類の阻害を経る架橋反応の阻
害によりペプチドグリカンの成熟を妨害する；バシトラ
ミンΔは、細胞膜を経る細胞質から外部へのムラミルペ
ンタペプチドの移送に参加する脂質担体から、２つの末
端ホスフェートの１つを遊離するホネホリラーゼを妨害
する；この妨害の結果、脂質担体はムラミルペンタペプ
チドの受容体と１〜でもはや機能することはでき々い（
Ｇ、 Ｌａ、ｎｃｉｎ？：、Ｉｐａｒｅｎｔｉ、Ｔｈｅ
ａｎｔｉｂｉ−ｏｔｉｃｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ、Ｎ、Ｙ、。
り作用することは知られている。さらに詳しくは、ペニ
シリン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ ） １４、セファロス
ポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ ） ％および他
のベーターラクタム類は、トランスペプチダーゼ類およ
びカルボキシペプチダーゼ類の阻害を経る架橋反応の阻
害によりペプチドグリカンの成熟を妨害する；バシトラ
ミンΔは、細胞膜を経る細胞質から外部へのムラミルペ
ンタペプチドの移送に参加する脂質担体から、２つの末
端ホスフェートの１つを遊離するホネホリラーゼを妨害
する；この妨害の結果、脂質担体はムラミルペンタペプ
チドの受容体と１〜でもはや機能することはでき々い（
Ｇ、 Ｌａ、ｎｃｉｎ？：、Ｉｐａｒｅｎｔｉ、Ｔｈｅ
ａｎｔｉｂｉ−ｏｔｉｃｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ、Ｎ、Ｙ、。
１９８２．７）ｐ、４２−４８参照）。バンコマイシン
（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）およびリストセチン（Ｒｉｓ
ｔｏ−ｃｅｔｉｎ）Ａは、細菌細胞の生合成の主構造成
分であるペプチドグリカンを妨害する。細胞の成長の阻
害に導ひき、結局、溶解により細胞の破壊に導びく、こ
の妨害は、これらの抗生物質とカルボニル末端にＤ−Ａ
ｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペンタペプチド前駆物質
との間の特異的結合のためである（Ｕ１）／）−＃−ア
セチルムラミルベンタベグチド）と教示されている。才
だ、ティコプラニン（Ｔｅｉｃｏｐｌａ、ｎｉｎ）（Ｉ
ＮＮ−ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＮＯ２０，−１ｒｏ
ｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅ）（以前はＴｅｉｃｏ−ｍ
ｙｃｉｎ、米国特許第４．２’３ ’９．７５１号）は
、細菌の成長する細胞壁へ結合することにより、同じ方
法で作用することが最近発見された。さらに詳しくハ、
ティコマイシンは、ンコマイシン＊−，１：グリストセ
チンΔおよび類似する抗生物質と同様に、Ｄ−Ａｌａ−
Ｄ−Ａｌａにおいて終るムコベゾチド類へ結合する。こ
のようにすることにより、それらは多分トランスペプチ
ダーゼの活性を阻害し、そして細胞壁の架橋を妨害する
であろう。
（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）およびリストセチン（Ｒｉｓ
ｔｏ−ｃｅｔｉｎ）Ａは、細菌細胞の生合成の主構造成
分であるペプチドグリカンを妨害する。細胞の成長の阻
害に導ひき、結局、溶解により細胞の破壊に導びく、こ
の妨害は、これらの抗生物質とカルボニル末端にＤ−Ａ
ｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペンタペプチド前駆物質
との間の特異的結合のためである（Ｕ１）／）−＃−ア
セチルムラミルベンタベグチド）と教示されている。才
だ、ティコプラニン（Ｔｅｉｃｏｐｌａ、ｎｉｎ）（Ｉ
ＮＮ−ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＮＯ２０，−１ｒｏ
ｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅ）（以前はＴｅｉｃｏ−ｍ
ｙｃｉｎ、米国特許第４．２’３ ’９．７５１号）は
、細菌の成長する細胞壁へ結合することにより、同じ方
法で作用することが最近発見された。さらに詳しくハ、
ティコマイシンは、ンコマイシン＊−，１：グリストセ
チンΔおよび類似する抗生物質と同様に、Ｄ−Ａｌａ−
Ｄ−Ａｌａにおいて終るムコベゾチド類へ結合する。こ
のようにすることにより、それらは多分トランスペプチ
ダーゼの活性を阻害し、そして細胞壁の架橋を妨害する
であろう。
このよう配位子の部分の合成類似体を不溶性担体へ置屋
よく結合することができ、そ−で標的抗生物質（すなわ
ち、配位子へ選択的に結合する抗生物質）を選択的に吸
着するために使用できることを、今回発見した。したが
って、本発明は抗生物質を選択的に吸着できる新規々不
溶化配位子および標的抗生物質を結合するためにそれを
使用する方法に関する。
よく結合することができ、そ−で標的抗生物質（すなわ
ち、配位子へ選択的に結合する抗生物質）を選択的に吸
着するために使用できることを、今回発見した。したが
って、本発明は抗生物質を選択的に吸着できる新規々不
溶化配位子および標的抗生物質を結合するためにそれを
使用する方法に関する。
〜かして、本発明の１つの態様は、標的抗生物質を含有
する混合物からそれを精製するだめの前記不溶化配位子
の使用である。
する混合物からそれを精製するだめの前記不溶化配位子
の使用である。
抗生物質の、たどえは発酵肉汁からの、回収において解
決すべき主要な問題の１つは、実質的に純粋に形でかつ
高い収率でそれを回収することであるということは、事
実この分野においてよく知られている。
決すべき主要な問題の１つは、実質的に純粋に形でかつ
高い収率でそれを回収することであるということは、事
実この分野においてよく知られている。
時には、汚染物質は、精製すべき物質と同じ性質をもち
、すなわち、それに非常に類似する物理化学的性勿を有
し、それゆえ分離は非常に困難である。この精製はしは
１〜ば時間を消費する多数の工程を経て得られ、これら
の工程は多くの場合において全体の収率をかなり減少す
る。これと対照的に、本発明の変性マトリックスを使用
することにより、標的抗生物質（すなわち、変性マ）
ＩＪソックス選択的に結合する抗生物質の精製された溶
液ｆｄ、単一工程の手順において１．ば１．ばイ！Ｊら
れる。
、すなわち、それに非常に類似する物理化学的性勿を有
し、それゆえ分離は非常に困難である。この精製はしは
１〜ば時間を消費する多数の工程を経て得られ、これら
の工程は多くの場合において全体の収率をかなり減少す
る。これと対照的に、本発明の変性マトリックスを使用
することにより、標的抗生物質（すなわち、変性マ）
ＩＪソックス選択的に結合する抗生物質の精製された溶
液ｆｄ、単一工程の手順において１．ば１．ばイ！Ｊら
れる。
しかしながらある動台において、汚染物質の性質おまひ
量のため、得られる精製さえた溶液をそれ以上の精製工
程に伺し、同じ操作を反仮するかあるいは他の精製技術
たとえば欣−液クロ−トグラフイー、たとえばイオン交
換クロマトグラフィー、分離用ＨＰＬＣ、非溶媒なとに
よる沈殿の使用により得られる。
量のため、得られる精製さえた溶液をそれ以上の精製工
程に伺し、同じ操作を反仮するかあるいは他の精製技術
たとえば欣−液クロ−トグラフイー、たとえばイオン交
換クロマトグラフィー、分離用ＨＰＬＣ、非溶媒なとに
よる沈殿の使用により得られる。
したがって、本発明に従い、ここに記載する固定化され
た配位子を使用することにより、ある種の抗生物質を選
択的に吸着し、それを名有する混合物からそれを分離す
ることが用油である。
た配位子を使用することにより、ある種の抗生物質を選
択的に吸着し、それを名有する混合物からそれを分離す
ることが用油である。
本発明の他の態様は、配位子に選択的に結合できる抗生
物質をスクリーニングするための固定化された配位子の
使用である。事実、配位子に、細胞壁中に存在するヘン
チド鎖の合戎類似体でありかつこのようなペプチド釦へ
結合することかこれまで知られている抗生物質は少なく
ともグラム陽性細菌に対して抗微生物活性を有すること
が証明されだので、本発明の固定化配位子を使用してこ
の作用の機構を有する抗生物質をスクリーニングするこ
とができる。
物質をスクリーニングするための固定化された配位子の
使用である。事実、配位子に、細胞壁中に存在するヘン
チド鎖の合戎類似体でありかつこのようなペプチド釦へ
結合することかこれまで知られている抗生物質は少なく
ともグラム陽性細菌に対して抗微生物活性を有すること
が証明されだので、本発明の固定化配位子を使用してこ
の作用の機構を有する抗生物質をスクリーニングするこ
とができる。
その上、本発明の固定化配位子がある種の抗生物質を選
択的に吸着するという事実は、簡単な水溶液中ばかりで
なく、まだ生物学的流体中において、前記抗生物質を測
定する方法にとってもかなすな重要性をもつ。事実、生
物学的流体、たとえば尿または血液の多数のタンパク質
の汚染物質は、固定化配位子へ吸着でれず、標的抗牛物
質のみが吸着される。緩衝液ですすぎ洗いした後、抗生
物質を次いで、たとえば、異なるｐＨの他の緩衝液を用
いて溶離し、通常の技術に従って測定することができる
。
択的に吸着するという事実は、簡単な水溶液中ばかりで
なく、まだ生物学的流体中において、前記抗生物質を測
定する方法にとってもかなすな重要性をもつ。事実、生
物学的流体、たとえば尿または血液の多数のタンパク質
の汚染物質は、固定化配位子へ吸着でれず、標的抗牛物
質のみが吸着される。緩衝液ですすぎ洗いした後、抗生
物質を次いで、たとえば、異なるｐＨの他の緩衝液を用
いて溶離し、通常の技術に従って測定することができる
。
スぺーサー・アームの導入による水不溶性担体の配位子
への結合の一般的見解は、谷渚居．たとえは、Ｃ，Ｒ，
ＬｏｗｅおよびＰ、Ｇ、Ｄ．Ｄｅａｔ１Ａｆｆｉｎｉｔ
ｙ Ｃｈｒｏｔｎａｔｏｇｒａｐｈｙ”、ＪｏｈｎＷｉ
ｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、Ｎ、Ｙ、１９７４
およびＦ、Ｎ．Ｓｏｕｔｈａｎ、”Ａｆｊｉｎｉｔｙ
Ｃｔｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ” 、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、Ａ、Ｙ、１９８１に
記載されている。たとえは、ヒドロキン基を治する担体
（以後Ａ−ＯＨまたはとして示す）を使用するとき、担
体はたとえばハロクン化シアン（たとえば臭化シアン）
、モノエポキシド（たとえばエビクロロヒドリン）、ピ
オギシラン（たとえば１．４−ビス（２，３−エポキン
ゾロボキシ）ブタン）、ハロケノアセヂルハライド（こ
とえば塩化クロロアセチル）で活性化し、次いで得られ
る活性化きれた担体を、遊離アミノ基をもつ配位子また
は遊離アミン基をもつスベ〜リー・アームに結合した配
位子（以後両者の化合物を（■−ＮＪ２で表わす）と反
応させるが、あるいは上記の活性化された担体を、遊離
ヒドロキシ基をもつ配位子または遊離ヒドロキシ基をも
つスペーサー・アームへ結合した配位子（以後両者の化
合物をの−ＯＨで表わす）と反応させる。
への結合の一般的見解は、谷渚居．たとえは、Ｃ，Ｒ，
ＬｏｗｅおよびＰ、Ｇ、Ｄ．Ｄｅａｔ１Ａｆｆｉｎｉｔ
ｙ Ｃｈｒｏｔｎａｔｏｇｒａｐｈｙ”、ＪｏｈｎＷｉ
ｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、Ｎ、Ｙ、１９７４
およびＦ、Ｎ．Ｓｏｕｔｈａｎ、”Ａｆｊｉｎｉｔｙ
Ｃｔｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ” 、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、Ａ、Ｙ、１９８１に
記載されている。たとえは、ヒドロキン基を治する担体
（以後Ａ−ＯＨまたはとして示す）を使用するとき、担
体はたとえばハロクン化シアン（たとえば臭化シアン）
、モノエポキシド（たとえばエビクロロヒドリン）、ピ
オギシラン（たとえば１．４−ビス（２，３−エポキン
ゾロボキシ）ブタン）、ハロケノアセヂルハライド（こ
とえば塩化クロロアセチル）で活性化し、次いで得られ
る活性化きれた担体を、遊離アミノ基をもつ配位子また
は遊離アミン基をもつスベ〜リー・アームに結合した配
位子（以後両者の化合物を（■−ＮＪ２で表わす）と反
応させるが、あるいは上記の活性化された担体を、遊離
ヒドロキシ基をもつ配位子または遊離ヒドロキシ基をも
つスペーサー・アームへ結合した配位子（以後両者の化
合物をの−ＯＨで表わす）と反応させる。
これらの方法に従い、次の式をもつ吸着剤を得ることが
できる： Δ−０００−Ｎ）ｊ−の ；。
できる： Δ−０００−Ｎ）ｊ−の ；。
Δ−０−Ｃ−ＮノＩ−■ ；
Ａ ０−Ｃ）Ｊ２−（Ｊｌ（０１１）Ｃ１１２Ｎｌ−ノ
；Δ−０−ｃｊｌ、 ＣＪＩ （０１１） ＣＨ，、−
（Ｃ１１２）、ｎ、、−ＣＨ２ｃｉｌ（ＯＪｉ）ＣＪＩ
２１ＶＪｆ−ノ； Ａ−０−Ｃｉｉ２ＣＯ＃ｔ−の； Ａ−Ｑ−ＣＯＣ１ｊ２ＮＥ−の； 式中、Ａおまひのは上に定義したとおりであり、そして
ｍは１〜１６の整数である。
；Δ−０−ｃｊｌ、 ＣＪＩ （０１１） ＣＨ，、−
（Ｃ１１２）、ｎ、、−ＣＨ２ｃｉｌ（ＯＪｉ）ＣＪＩ
２１ＶＪｆ−ノ； Ａ−０−Ｃｉｉ２ＣＯ＃ｔ−の； Ａ−Ｑ−ＣＯＣ１ｊ２ＮＥ−の； 式中、Ａおまひのは上に定義したとおりであり、そして
ｍは１〜１６の整数である。
アミン基をもつ水不溶性担体（乃後Ａ−ＮＨ２として示
す）を使用するとき、 （１）担体を脂肪族ソアルテヒド（たとえば、グルタル
アルデヒド）で活性化し、活性化された担体を遊離アミ
ノ含有配位子（の−ＮＨ２）と反応させ、次いで得られ
るシッフ塩基を還元に剤（たとえは、水素化ホウ素ナト
リウム）で還元する； （２）担体を遊離カルボキシ含治配位子（の−Ｃ’００
１１）すなわち、Ｚ基のそれより多いカルボ・キフル官
能基を有する配位子または前記カルボキシル基が導入さ
れているスペーサー・アームをもつ配位子と反応させる
； （３）担体をハロクン化シアヌル酸（臭化シアヌル酸）
で活性化〜、次いで得られる活性化された担体を式の−
ＮＨ２の配位子と反応させる；（４）旦体をモノエポキ
シドまたはビスエポキシドで活性化し、次いで得られる
活性化された担体を式の−Ａｔ ｔｌ、、またはの−Ｏ
１ｌの配位子とへ応させる（ここでの−０１１およびの
−ＷＨ２は一ヒに定義し〜だとおりである）； （５）担体をソアゾ化し、次いで式の配位子と反応させ
る。
す）を使用するとき、 （１）担体を脂肪族ソアルテヒド（たとえば、グルタル
アルデヒド）で活性化し、活性化された担体を遊離アミ
ノ含有配位子（の−ＮＨ２）と反応させ、次いで得られ
るシッフ塩基を還元に剤（たとえは、水素化ホウ素ナト
リウム）で還元する； （２）担体を遊離カルボキシ含治配位子（の−Ｃ’００
１１）すなわち、Ｚ基のそれより多いカルボ・キフル官
能基を有する配位子または前記カルボキシル基が導入さ
れているスペーサー・アームをもつ配位子と反応させる
； （３）担体をハロクン化シアヌル酸（臭化シアヌル酸）
で活性化〜、次いで得られる活性化された担体を式の−
ＮＨ２の配位子と反応させる；（４）旦体をモノエポキ
シドまたはビスエポキシドで活性化し、次いで得られる
活性化された担体を式の−Ａｔ ｔｌ、、またはの−Ｏ
１ｌの配位子とへ応させる（ここでの−０１１およびの
−ＷＨ２は一ヒに定義し〜だとおりである）； （５）担体をソアゾ化し、次いで式の配位子と反応させ
る。
この方法によれば、次式の吸着剤を得ることができる：
Ａ−ＮＨＣＨ２（ＣＨ２）ＣＨ２−ＮＢ−のＡ−ＮＪＪ
−ＣＯ−の Ａ−Ｎｉｌ−ＣｊＪ２Ｃｌｌ（ＯＨ）ＣＨ２ＮのＡ−１
Ｈ１−ＣｔＣｌ（０１１）−〇−のＡ−ＮＢ−Ｃｌ、Ｃ
（ＯＪｉ）Ｃ２（Ｃ２）−Ｃ２ＣＭ（０）ｊ）Ｃ２Ｎｊ
ｉの 式中、■、Δおよびｍは上に定仝しだとおりである。
−ＣＯ−の Ａ−Ｎｉｌ−ＣｊＪ２Ｃｌｌ（ＯＨ）ＣＨ２ＮのＡ−１
Ｈ１−ＣｔＣｌ（０１１）−〇−のＡ−ＮＢ−Ｃｌ、Ｃ
（ＯＪｉ）Ｃ２（Ｃ２）−Ｃ２ＣＭ（０）ｊ）Ｃ２Ｎｊ
ｉの 式中、■、Δおよびｍは上に定仝しだとおりである。
カルボキシ基を有する水不溶性４μ体（以後ＡＣＯＯＪ
）を使用するとき、との担体を式の配位子と反応させて
酸アミドを形成する。
）を使用するとき、との担体を式の配位子と反応させて
酸アミドを形成する。
この方法によれば、次式の吸〃剤が得られる：Ａ−ＣＯ
ＮＢ−の 式中、４およびのは上に定義したとおりである。
ＮＢ−の 式中、４およびのは上に定義したとおりである。
ハロケン原子をもつ担体（塚後Ａ−ｈａｌｏ）を使用す
るとき、この担体を式の一７ＶＪＪ２、■−０１１また
ば■−ＣＯＯの配位子と反応させることができる。
るとき、この担体を式の一７ＶＪＪ２、■−０１１また
ば■−ＣＯＯの配位子と反応させることができる。
この方法によれは、次式の吸着剤を得ることができる：
式中、Ａおよびのは上に定義したとおりである。
上の式は成分間の化学量論的釣合いを定義することを意
図しない。なぜなら、成分（すなわち、担体、配位子、
スペーサー・アーム）の比は変動し、それらの成分を結
合する方法および結合操作の実際の順序は、本発明にお
いて定める性質を本質的に有し、それゆえ本発明の範囲
内に包含されるポリマーおよび架橋変性マトリックスを
得ることができ、そして前記ポリマーまたはマトリック
スは化学量論的な面または構造的な面において上の概略
的な式と究極的には異なることがあるからである。
図しない。なぜなら、成分（すなわち、担体、配位子、
スペーサー・アーム）の比は変動し、それらの成分を結
合する方法および結合操作の実際の順序は、本発明にお
いて定める性質を本質的に有し、それゆえ本発明の範囲
内に包含されるポリマーおよび架橋変性マトリックスを
得ることができ、そして前記ポリマーまたはマトリック
スは化学量論的な面または構造的な面において上の概略
的な式と究極的には異なることがあるからである。
本発明の水不溶性担体は、また、ここに記載すいる場合
において、本発明の変性マトリックスを製造するために
便利に使用できるある数の商業的に入手できる官能化さ
れたマドツクスを包貧する。
において、本発明の変性マトリックスを製造するために
便利に使用できるある数の商業的に入手できる官能化さ
れたマドツクスを包貧する。
前記マトリックスの例は、次のとおりである：Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｊｉｎｅ Ｃｈｅｒ
ｎ、Ｃｃａｌｓ。
ａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｊｉｎｅ Ｃｈｅｒ
ｎ、Ｃｃａｌｓ。
Ｕｐｐｓａｌａ スウェーデン）、Δｆｆ１−Ｇｅｌの
２０２、Ａｆｊｉ−ＧｅｌおよびＪｉｏ−Ｒａ、ａ Ｉ
ｎｃ、。
２０２、Ａｆｊｉ−ＧｅｌおよびＪｉｏ−Ｒａ、ａ Ｉ
ｎｃ、。
米国）、Ｅｕｐｅｒｇｉｔ （Ｒｈｒｎ Ｐａｒｍａ、
ＩＶｅｉｔｅｒ−ｓｔｄｔ、西ドイツ）など。
ＩＶｅｉｔｅｒ−ｓｔｄｔ、西ドイツ）など。
これらの官能性誘導体は、スペーサーを介在させないで
−ＲＣ−Ｄ−Ａｌａ−ＺＸｉＭヘ直接結合することがで
きる。
−ＲＣ−Ｄ−Ａｌａ−ＺＸｉＭヘ直接結合することがで
きる。
本発明の吸着剤において、配位子は好ましくは約２〜３
００マイクロモル（湿った形態の吸着剤）の量で結合さ
れる。「湿った形態」は、水性懸濁液の濾過後に得られ
た吸着剤の湿った重量である。
００マイクロモル（湿った形態の吸着剤）の量で結合さ
れる。「湿った形態」は、水性懸濁液の濾過後に得られ
た吸着剤の湿った重量である。
吸着剤と接触させるべき抗生物質含有溶液は、約７〜８
５のｐＪＪを有する。しかしながら、よ低いｐｌをする
抗生物質の溶液を少なくともある場合において使用する
こともできる。基質含有溶液を吸着剤と接触させるとき
、たとえばカラムを用いる、連続法あるいは吸着剤を「
塊状で」用いる、パッチ法を用いることができる。
５のｐＪＪを有する。しかしながら、よ低いｐｌをする
抗生物質の溶液を少なくともある場合において使用する
こともできる。基質含有溶液を吸着剤と接触させるとき
、たとえばカラムを用いる、連続法あるいは吸着剤を「
塊状で」用いる、パッチ法を用いることができる。
たとえば、カラムを使用するとき、吸着剤をカラムへ詰
め、温溶液、水および緩衝溶液で洗浄し、次いで基質含
有溶液をカラムに通過させて標的抗生物質をカラム上へ
選択的に吸着させ、この系を次いで上の緩衝溶液ですす
ぎ洗いし、最後に吸着された抗生物質を溶離によ、たと
えば異なるｐＢの緩衝液で溶離することにより、吸着剤
から解放する。このようにして得られる抗生物質は、も
との汚染物質の多くを実質的に含まない、製された形で
ある。
め、温溶液、水および緩衝溶液で洗浄し、次いで基質含
有溶液をカラムに通過させて標的抗生物質をカラム上へ
選択的に吸着させ、この系を次いで上の緩衝溶液ですす
ぎ洗いし、最後に吸着された抗生物質を溶離によ、たと
えば異なるｐＢの緩衝液で溶離することにより、吸着剤
から解放する。このようにして得られる抗生物質は、も
との汚染物質の多くを実質的に含まない、製された形で
ある。
好まくけ、第１緩衝液は約７〜８５のｐＪを有し、一方
第２緩衝液（溶離の緩衝液）ば１０より高い、最も好ま
しくは約１０〜約１１５のｐａｌを有する。
第２緩衝液（溶離の緩衝液）ば１０より高い、最も好ま
しくは約１０〜約１１５のｐａｌを有する。
他方において、バッチ法を実施するとき、基質含有溶液
を吸着剤の懸濁液へ加え、生ずる混合物を２５〜８５の
ｐＨ好ましくは７〜８５のｐＢ値に緩衝化し、かきまぜ
て吸着剤上へ標的抗生物質を吸着させ、次いで標的抗生
物質を有する吸着剤を回収し、すすき洗いし、標的抗生
物質を１０より高いｐＨ１好ましくは１０〜１１．５の
ｐｊの緩衝液により吸着剤から解放することにより梢裂
略れた形で回収される。抗生物質含有溶液と接力すべき
吸着剤との間の比は、種々のパラメーター、たとえは溶
液中の標的抗生物質の合計釦使用する特定の吸着剤、選
択された作業条件とくに着的抗生物質の状変、および汚
染物質の捗類および於に依存する。
を吸着剤の懸濁液へ加え、生ずる混合物を２５〜８５の
ｐＨ好ましくは７〜８５のｐＢ値に緩衝化し、かきまぜ
て吸着剤上へ標的抗生物質を吸着させ、次いで標的抗生
物質を有する吸着剤を回収し、すすき洗いし、標的抗生
物質を１０より高いｐＨ１好ましくは１０〜１１．５の
ｐｊの緩衝液により吸着剤から解放することにより梢裂
略れた形で回収される。抗生物質含有溶液と接力すべき
吸着剤との間の比は、種々のパラメーター、たとえは溶
液中の標的抗生物質の合計釦使用する特定の吸着剤、選
択された作業条件とくに着的抗生物質の状変、および汚
染物質の捗類および於に依存する。
しかながら、これらの範囲内の実際の条件にこの明細−
中に開示されこものを基準にしてできるであろう。
中に開示されこものを基準にしてできるであろう。
次の実施例により、本発明実施できる方法を実廁例１
位子の活性化ヘリツクスへの軸台
活性化されたＣＨ、−Ｓｅｒｏｓｃｌ Ｐｌａｒｎａｃ
ｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｎｃａｔｓ）を１ミリルの冷た
い水塩酸中で１５分間膨潤させ、カノスノイルクー士で
同じ溶液で洗浄づる。
ｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｎｃａｔｓ）を１ミリルの冷た
い水塩酸中で１５分間膨潤させ、カノスノイルクー士で
同じ溶液で洗浄づる。
得られたグル（約３ｍｌ）をｐＨ８０、５ルの塩化ノル
りムおよび０．１−ルの手が酸シトリウムの緩液中のＤ
〜アジニル−ノンニン（３０ｎｌＵ）のＦＪａと昆合す
る。
りムおよび０．１−ルの手が酸シトリウムの緩液中のＤ
〜アジニル−ノンニン（３０ｎｌＵ）のＦＪａと昆合す
る。
この混合物を空温において助回さしよ
く混合する。
結合反応が完結したとさ、配位子の過剰間を緩衝液で洗
浄除去する。デキズノンの担体の結合しない活性化基を
、Ｈ９１モノの１タノールアミン塩酸塩て１時間処理す
ることによりブロックする。
浄除去する。デキズノンの担体の結合しない活性化基を
、Ｈ９１モノの１タノールアミン塩酸塩て１時間処理す
ることによりブロックする。
次いて３ｅｐｈａｄｅｙ−ε−アミノカフロイルＤ−ア
ラニルＤ−アラニン変イク−マ〜リックスをび５過によ
り回収し、交りに０．５モルの塩化−リウムよひ０．１
モルの酢りナトリウムＨ４で、次いで０．５モルの塩化
訃ウムおよび。
ラニルＤ−アラニン変イク−マ〜リックスをび５過によ
り回収し、交りに０．５モルの塩化−リウムよひ０．１
モルの酢りナトリウムＨ４で、次いで０．５モルの塩化
訃ウムおよび。
モルのトノス（ヒ〜キシメチル）アミノメタンＭ雨液Ｈ
８−ｃ、交互によく洗浄する（１１回）本質的に上記の
ようにであるが、Ｌ−アラニル−１−アラニンを１．−
ノラニルーＤ−アラニンの代わりに用いて実ると、ｅｌ
ＮｌａｄｅＸ−５−７ミノカイル−Ｌ−アラニル−Ｌ〜
アラニンが得られる。
８−ｃ、交互によく洗浄する（１１回）本質的に上記の
ようにであるが、Ｌ−アラニル−１−アラニンを１．−
ノラニルーＤ−アラニンの代わりに用いて実ると、ｅｌ
ＮｌａｄｅＸ−５−７ミノカイル−Ｌ−アラニル−Ｌ〜
アラニンが得られる。
Ｃセルロース−ポリ（Ｄ−アラニン）の、ＪｔＭセルロ
ース（ＷＩ＋ａｔｎ＋ａｎ ＣＦ１１．ＩａｔｎａｎＩ
ｎｃ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）を、１Ｎの水酸化ナトリウム（４
００１）およびエビクロロヒドリン（４００ｍｌ）と混
合する。この混合物をかきまぜながら約１２時間反応さ
ゼる。次いで懸濁液を濾過し、回収された固体を１Ｎ塩
化ノトリウム多数回洗浄して過剰間のエビタロロヒドリ
ンを除し、次いて蒸留水で洗浄する。次いでこの誘導体
化さたセルロースを過により回収するど、約９０９（湿
った形）か得られる。
ース（ＷＩ＋ａｔｎ＋ａｎ ＣＦ１１．ＩａｔｎａｎＩ
ｎｃ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）を、１Ｎの水酸化ナトリウム（４
００１）およびエビクロロヒドリン（４００ｍｌ）と混
合する。この混合物をかきまぜながら約１２時間反応さ
ゼる。次いで懸濁液を濾過し、回収された固体を１Ｎ塩
化ノトリウム多数回洗浄して過剰間のエビタロロヒドリ
ンを除し、次いて蒸留水で洗浄する。次いでこの誘導体
化さたセルロースを過により回収するど、約９０９（湿
った形）か得られる。
上記の誘導体化されたセルロース（９０ｇ）を蒸留水（
３００ｍｌ）中に慰濁さえ、ｐＨを約１１５に調整し、
２７ｇのε−アミノカブトン酸を加える。
３００ｍｌ）中に慰濁さえ、ｐＨを約１１５に調整し、
２７ｇのε−アミノカブトン酸を加える。
この混合物を約７２時間かきまけ、ｐＨを約１１．５に
保持する。次いてろ過後、回収された回体を水でよく洗
浄すると、約９７ｇ（湿ったクル）か得られる。
保持する。次いてろ過後、回収された回体を水でよく洗
浄すると、約９７ｇ（湿ったクル）か得られる。
蒸留水中に懸濁さぜ得られた樹脂（９７ｇ）にＮ−エチ
ル−Ｎ”−（３−シメヂルアミノプロビル）カーホライ
ミド塩酸（８，５ｐ）を加え、ρＨを１Ｎ塩酸で約４．
７に調整する。適当にがきまぜた憐、Ｄ−アラニン（３
，８ｇ）をこの混合物に目え、かきにぜを約２４時間続
け、その間ｐＨを約４．７に保持する。次いて濾過によ
り回収されたセルロ二ス誘導体を蒸留水、Ｎ／１０塩酸
あよひ再ひ蒸留水でよく洗浄する。
ル−Ｎ”−（３−シメヂルアミノプロビル）カーホライ
ミド塩酸（８，５ｐ）を加え、ρＨを１Ｎ塩酸で約４．
７に調整する。適当にがきまぜた憐、Ｄ−アラニン（３
，８ｇ）をこの混合物に目え、かきにぜを約２４時間続
け、その間ｐＨを約４．７に保持する。次いて濾過によ
り回収されたセルロ二ス誘導体を蒸留水、Ｎ／１０塩酸
あよひ再ひ蒸留水でよく洗浄する。
反応しないオキシラン基の過剰量を、このセルロース誘
導体を１ニルのエタノールアミン中で室帰により２４時
間かぎまぜることによりブロツクする。
導体を１ニルのエタノールアミン中で室帰により２４時
間かぎまぜることによりブロツクする。
次いて回収された樹脂を、０．０５モルのクエン酸プリ
ウムおよひ０．１モルの塩化ヘリウム衝液、ｐＨ８で洗
がする。セルロース−ポリ（Ｄ−アラニンン樹脂はこう
してすぐに使用できる状態にある。
ウムおよひ０．１モルの塩化ヘリウム衝液、ｐＨ８で洗
がする。セルロース−ポリ（Ｄ−アラニンン樹脂はこう
してすぐに使用できる状態にある。
Ｄ）ガラス−ポリ（Ｄ−Ａｌａ）の調製、３−アミノプ
ロピルリエトキシシラン（１０ｍｌ）を、メタノール／
蒸留水に１：１（１００ｍｌ）中の多孔質ガラス（ＧＰ
Ｃ−１０：ＥＩｅｃｔｒｏ−Ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ Ｉ
ｎＣ，）（１２ｇ）へ加える。この混合物を２４時間お
だやかにかぎまぜる。次いて、それを吸収濾過し、この
カーノスをメジ−ル７Ａ留水で洗浄し、次いで蒸留水単
独、１モルの塩化ナトリウムおよび最後に蒸留水で洗浄
りる。
ロピルリエトキシシラン（１０ｍｌ）を、メタノール／
蒸留水に１：１（１００ｍｌ）中の多孔質ガラス（ＧＰ
Ｃ−１０：ＥＩｅｃｔｒｏ−Ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ Ｉ
ｎＣ，）（１２ｇ）へ加える。この混合物を２４時間お
だやかにかぎまぜる。次いて、それを吸収濾過し、この
カーノスをメジ−ル７Ａ留水で洗浄し、次いで蒸留水単
独、１モルの塩化ナトリウムおよび最後に蒸留水で洗浄
りる。
この活性化マトリレクスを蒸留水（１００ｍｌ）中に懸
濁し、無水コハク酸（２０ｇ）を和え、ｐＨを約６に調
整する。この混合物を全溝でかきまげ、その間ｐＨを約
６に約２時間維持し、次いでそれを濾過し、回収された
不溶性マヘリックスを蒸留水で洗浄する。
濁し、無水コハク酸（２０ｇ）を和え、ｐＨを約６に調
整する。この混合物を全溝でかきまげ、その間ｐＨを約
６に約２時間維持し、次いでそれを濾過し、回収された
不溶性マヘリックスを蒸留水で洗浄する。
次いでこのマトリツクスを５０ｍｌの蒸留水中に再懸濁
さけ、Ｎ−エチル−Ｎ”−（３−シタチルアミノプロピ
ル）カーボシイミ〜塩醒塩（４ｇ）と反応させ、その間
１Ｎ塩酸によりｐＨを１．７に調整する。約５分後、Ｄ
−アラニン（３ｇ）を加え、ｐＨを約４．７に保ら、か
きましを３時間続ける。次いで混合物を濾過し、回収さ
れた樹脂を蒸留水でよく洗浄し、次いて、順次に、１Ｎ
福酸；蒸留水；あよひ０．０５モルのクエン酸あよひ０
．１モルの塩化ナトリウム、ｐＨ８．３、で洗浄する。
さけ、Ｎ−エチル−Ｎ”−（３−シタチルアミノプロピ
ル）カーボシイミ〜塩醒塩（４ｇ）と反応させ、その間
１Ｎ塩酸によりｐＨを１．７に調整する。約５分後、Ｄ
−アラニン（３ｇ）を加え、ｐＨを約４．７に保ら、か
きましを３時間続ける。次いで混合物を濾過し、回収さ
れた樹脂を蒸留水でよく洗浄し、次いて、順次に、１Ｎ
福酸；蒸留水；あよひ０．０５モルのクエン酸あよひ０
．１モルの塩化ナトリウム、ｐＨ８．３、で洗浄する。
Ｒ）Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ−ポリ（Ｄ−アラニン）の調
製反応性オキシフン基を有する活性化アクリルアミド（
Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ；Ｒｏｌｍ ｐｌａｒｍａ、Ｗｅ
ｉｔｅｒ−ｔｓｔａｄｔ、西ドイツ）（５ｉ）を１モル
のリン酸カリウム緩衝液，ｐＨ７，４中に懸濁させ、ε
−アミノカプロン酸を加え、その間ｐＨを約７．４に保
持する。次いでこの懸濁液を約７２時間かきまぜ、吸引
濾過し、回収されたマヘリックスを水でよく洗浄し、丙
ひ濾過する。
製反応性オキシフン基を有する活性化アクリルアミド（
Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ；Ｒｏｌｍ ｐｌａｒｍａ、Ｗｅ
ｉｔｅｒ−ｔｓｔａｄｔ、西ドイツ）（５ｉ）を１モル
のリン酸カリウム緩衝液，ｐＨ７，４中に懸濁させ、ε
−アミノカプロン酸を加え、その間ｐＨを約７．４に保
持する。次いでこの懸濁液を約７２時間かきまぜ、吸引
濾過し、回収されたマヘリックスを水でよく洗浄し、丙
ひ濾過する。
このようにして得られた湿つだ樹脂を蒸留水（７０ｍｌ
）中に再懸濁させ、Ｎ−エチル−Ｎｌ−（３−シタチル
アミノプロピル）カーポジイミド塩酸塩＜７．６５ｇ）
を加え、その間１Ｎ塩酸によりｐＨを４，７に調整する
。
）中に再懸濁させ、Ｎ−エチル−Ｎｌ−（３−シタチル
アミノプロピル）カーポジイミド塩酸塩＜７．６５ｇ）
を加え、その間１Ｎ塩酸によりｐＨを４，７に調整する
。
この懸濁液を約５分間かぎまぜ、次いでＤ−アラニンを
加え、その間ｐＨを約４．７に保持し、かきませを２４
時間続ける。次いで変性された樹脂を吸引濾過により回
収し、順次に蒸留水、Ｈ／１塩酸および再ひ蒸留水て洗
浄づる。
加え、その間ｐＨを約４．７に保持し、かきませを２４
時間続ける。次いで変性された樹脂を吸引濾過により回
収し、順次に蒸留水、Ｈ／１塩酸および再ひ蒸留水て洗
浄づる。
未反応の過剰のオキシラン基を、０．０１モルのリン酸
塩緩衝液、ｐＨ８，９（１５０ｍｌ）中の１０％のエタ
ノールアミンで得られた伺旨て、おたやかにかきまぜな
がら７２助間、処理づることにより不活性化する。次い
で標題の樹脂を吸引ろ過により回収し、次いで順次に蒸
留水、１Ｎ塩酸、蒸留水、あよひ０．０５モルのクエン
罰ナトリウムおよび０．１モルの塩化ナトリウム緩慟髪
、ｐＨ８，３で洗浄する。
塩緩衝液、ｐＨ８，９（１５０ｍｌ）中の１０％のエタ
ノールアミンで得られた伺旨て、おたやかにかきまぜな
がら７２助間、処理づることにより不活性化する。次い
で標題の樹脂を吸引ろ過により回収し、次いで順次に蒸
留水、１Ｎ塩酸、蒸留水、あよひ０．０５モルのクエン
罰ナトリウムおよび０．１モルの塩化ナトリウム緩慟髪
、ｐＨ８，３で洗浄する。
実施例２
前記変性されたマトリツクスの容量ついての特性づり
バッチ式で、スカラー最の変性樹脂を使用りることによ
り、既知の含量のティコラフニン（Ｆｅｉｃｏｐｌａｎ
ｉｎ）（約４００ｆｇ／ｍｌ）の標準試料を検定するこ
とにより、次の価か得られる：表 １ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．０２５
４６％ ０．０５０
８８％ ０．１００
９７％ ０．２００ ９８％ ０
．４００ ９８．５％ａ）１ｍｌの
ティコプラニン試料へ加えたに帰つこ樹脂のｍｌ。
り、既知の含量のティコラフニン（Ｆｅｉｃｏｐｌａｎ
ｉｎ）（約４００ｆｇ／ｍｌ）の標準試料を検定するこ
とにより、次の価か得られる：表 １ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．０２５
４６％ ０．０５０
８８％ ０．１００
９７％ ０．２００ ９８％ ０
．４００ ９８．５％ａ）１ｍｌの
ティコプラニン試料へ加えたに帰つこ樹脂のｍｌ。
ｂ）ろ過後の試料溶液の含量からの差こより計算した。
Ｂ）セルロース−ポリ（Ｄ−アラニン）の容量の測定
上のように実施づることにより、次のデータが得られる
： 表 ２ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０、２
２５％ ０、４
６４％ ０、６
８２％ ０．８ ９１％
１．０ ９５％ａ）１ｍｌのテ
ィコプラニン試料へ加えた湿った伺旨のｍｌ。
： 表 ２ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０、２
２５％ ０、４
６４％ ０、６
８２％ ０．８ ９１％
１．０ ９５％ａ）１ｍｌのテ
ィコプラニン試料へ加えた湿った伺旨のｍｌ。
ｂ）濾過後の試料溶液の含量からの差こより計算した。
ｃ）カラス−ポリ（Ｄ−Ａｌａ）の容量の測定上記のよ
うに操作することにより、次のラータか判られた（ティ
コブラニン約５００μｇ／ｍｌ）：表 ３ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．００５
６７％ ０．０１０
７６％ ０．０２５ ９１％
０．０５０ ９４％ ０．１０
０ ９８％ａ）１ｍｌのデイコブラニ
ン試料へ加えた湿った樹脂のｍｌ。
うに操作することにより、次のラータか判られた（ティ
コブラニン約５００μｇ／ｍｌ）：表 ３ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．００５
６７％ ０．０１０
７６％ ０．０２５ ９１％
０．０５０ ９４％ ０．１０
０ ９８％ａ）１ｍｌのデイコブラニ
ン試料へ加えた湿った樹脂のｍｌ。
ｂ）濾過後の試料溶液の含量からの差により計算した。
Ｄ）Ｅｕｅｒｇｉｔ Ｃ−ポリ（Ｄ−アラニン）の容量
の測定 上記のように操作することにより、次のデータが得られ
る（デイコマイシン含量約５００μｇ／ｍｌ）： 表４ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．１
６２％ ０、２
８５％ ０．３
９０％ ０．４ ９２％
０、５ ９５％ ０、６
９９％ａ）１ｍｌのティコプラニ
ン試料へ加えた湿った樹脂のｍｌ。
の測定 上記のように操作することにより、次のデータが得られ
る（デイコマイシン含量約５００μｇ／ｍｌ）： 表４ 樹脂により結合された樹脂の
添加量ａ） テイコプラニンの％ｂ） ０．１
６２％ ０、２
８５％ ０．３
９０％ ０．４ ９２％
０、５ ９５％ ０、６
９９％ａ）１ｍｌのティコプラニ
ン試料へ加えた湿った樹脂のｍｌ。
ｂ）濾過後の試料溶液の含量からの差により泪紳した。
実施例３
基質の変性されたマトリックスへの選択的結合実施例１
Ａに従って得られた前もつて決定した量の変性マトリッ
クス（ＳｅｐＨａｄｅｘ−ε−アミノカプロイル−Ｄ−
アラニル−Ｄ−アフニン）は、０．１５モルの塩化ナト
リウムおよび０．０５モルのリン酸塩の緩衝液、ｐＨ７
，４中の増大する濃度の試験抗生物質へ加える。ふたを
した試験恒を１時間全品において回転してよく混合し、
４０００ｐｐｍで５分回遠心分離する。
Ａに従って得られた前もつて決定した量の変性マトリッ
クス（ＳｅｐＨａｄｅｘ−ε−アミノカプロイル−Ｄ−
アラニル−Ｄ−アフニン）は、０．１５モルの塩化ナト
リウムおよび０．０５モルのリン酸塩の緩衝液、ｐＨ７
，４中の増大する濃度の試験抗生物質へ加える。ふたを
した試験恒を１時間全品において回転してよく混合し、
４０００ｐｐｍで５分回遠心分離する。
上澄み液中の遊離の抗生物質の濃度を、既知の分析手順
により測定する。（２８０ｎｍにおけるＵＶの測定、Ｅ
＝５１、６を参照する）。
により測定する。（２８０ｎｍにおけるＵＶの測定、Ｅ
＝５１、６を参照する）。
ティコプラニン、バンコマイシン、リストセチンＡはマ
トリツクスへ選択的に結合されたが、バシトラシン（Ｂ
ａｃｉｔｒａｃｉｎ）、アクタガルジン（Ａｃｔａｇａ
ｒｄｉｎ）（米国特許第４０２２８８４号）および抗生
物質Ａ／１６６８６（米国特許第４３０３６４６号）は
マトリックスへ結合せず、上澄み液中に全部か存在する
。結合データはＧ。
トリツクスへ選択的に結合されたが、バシトラシン（Ｂ
ａｃｉｔｒａｃｉｎ）、アクタガルジン（Ａｃｔａｇａ
ｒｄｉｎ）（米国特許第４０２２８８４号）および抗生
物質Ａ／１６６８６（米国特許第４３０３６４６号）は
マトリックスへ結合せず、上澄み液中に全部か存在する
。結合データはＧ。
Ｓｃａｔｃｈａｒｄ（Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、５１．６６０−６７２（１９４９））に従って得る
。前述の実験に従って計算した親和性定数を、下表に記
載する： 表 ５ 抗生物質 Ｒａ（１×モル−１）ティコプ
ラニン ８，０８×１０−３±０，１３バンコマイ
シン １．５３×１０−３±０．３６リストセチン
Ａ ４．６８×１０−３±０．７０５Ｓｅｐｂａｄ
ｅｘ−ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニルーＤ−アラ
ニンの代わりにＳｅｐｈａｄｅｘ−ε−アミノカプロイ
ル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンを使用した上の実験に
より、変性マトリックスと試験抗生物質のいずれかとの
間の結合は存在しない。とくに、ティコプラニン、バン
コマイシンおよひリストセチンＡの全量は上澄み液中に
存在づることが示される。
ｉ、５１．６６０−６７２（１９４９））に従って得る
。前述の実験に従って計算した親和性定数を、下表に記
載する： 表 ５ 抗生物質 Ｒａ（１×モル−１）ティコプ
ラニン ８，０８×１０−３±０，１３バンコマイ
シン １．５３×１０−３±０．３６リストセチン
Ａ ４．６８×１０−３±０．７０５Ｓｅｐｂａｄ
ｅｘ−ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニルーＤ−アラ
ニンの代わりにＳｅｐｈａｄｅｘ−ε−アミノカプロイ
ル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンを使用した上の実験に
より、変性マトリックスと試験抗生物質のいずれかとの
間の結合は存在しない。とくに、ティコプラニン、バン
コマイシンおよひリストセチンＡの全量は上澄み液中に
存在づることが示される。
実施例４
標的抗生物質の選択的結合Ｊ３よひその結合実施例１Ａ
に従っ”Ｃ得られた変性７１−リックスを用いて８周製
されたクロマトグラフィーのカラム（０，８Ｘ１．５ｃ
ｍンへ、異なる抗生物買含吊。
に従っ”Ｃ得られた変性７１−リックスを用いて８周製
されたクロマトグラフィーのカラム（０，８Ｘ１．５ｃ
ｍンへ、異なる抗生物買含吊。
〈純度的７０％）のティコプラニンをｊ０用する。
このカラムを０．１５モルの塩化ナトリウムおよび０．
０５モルのリン酸す１〜リウムの緩衝液、ｐＨ７，ｌて
室温において予備平衡化りる。
０５モルのリン酸す１〜リウムの緩衝液、ｐＨ７，ｌて
室温において予備平衡化りる。
次いてこのカラムを同じ緩衝液で洗浄し、ティコプラニ
ンについて検定すると、収集された分画は微小含聞の抗
生物質を示すが、０．１５モルの塩化ナトリウムあよひ
リン酸ナトリウムの緩衝液、ｐＨ１１，５（流速−６ｍ
ｌ／時）で溶離した後、溶離された分画は初期量の約９
０〜９７％のティコプラニンを含有する。
ンについて検定すると、収集された分画は微小含聞の抗
生物質を示すが、０．１５モルの塩化ナトリウムあよひ
リン酸ナトリウムの緩衝液、ｐＨ１１，５（流速−６ｍ
ｌ／時）で溶離した後、溶離された分画は初期量の約９
０〜９７％のティコプラニンを含有する。
次の表に実験フーータを要約する。
表６
実験番号 テイコプラニン含量ａ）（ｍｇ）
回収率％ Ｓ．Ａ．ｂ） Ｒ．Ｓ．
ｃ） Ｅｄ） １ ２８．０
０，４２ ２７．１６ ９７％ ２
２８．０ ０，４２ ２４．４ ８７
％ ３ ２８．０ − ２
４．９ ８９％ ４ ２８．０
− ２８，７６ １０２％ａ）ティコプ
ラニンは実施例５Ａ中に記載するＨＰＬＣ法により検出
する。
回収率％ Ｓ．Ａ．ｂ） Ｒ．Ｓ．
ｃ） Ｅｄ） １ ２８．０
０，４２ ２７．１６ ９７％ ２
２８．０ ０，４２ ２４．４ ８７
％ ３ ２８．０ − ２
４．９ ８９％ ４ ２８．０
− ２８，７６ １０２％ａ）ティコプ
ラニンは実施例５Ａ中に記載するＨＰＬＣ法により検出
する。
ｂ）試料をカラムへ適用づる。
ｃ）すずぎ洗い溶液（０，１５モルの塩化ナトリウム＋
０．０５モルのリン酸ナトリウムの緩衝液、ｐＨ７，４
）。
０．０５モルのリン酸ナトリウムの緩衝液、ｐＨ７，４
）。
ｄ）溶離液（０，１５モルの塩化ナトリンムＡ＋リン酸
ナトリウムの緩衝液、ｐＨ−１１、５）。
ナトリウムの緩衝液、ｐＨ−１１、５）。
実施例５
本発明の変性マトリックスへ選択的に結合することによ
る抗生物質の構製 アクチノプラネス・テイコマイヒチクス（Ａｃｔｉｎｏ
ｐｌａｎｅｓ ｔｅＩｃｈｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）ＡＴ
ＣＣ；３１１２１を米国特許第４２３９７５１号に記載
されでいるように培養づることにより得られた光酵肉汁
（ティコプラニン純度：乾燥物質の＜５％：ｐＨ８，３
）を、選択的吸着剤か実施例１Ｄのガラス−ポリ（Ｄ−
アラニン）であるクロマ〜グラフイーのカラム（２，８
ｃｍ×１１ｃｍ）へ杏用づる。
る抗生物質の構製 アクチノプラネス・テイコマイヒチクス（Ａｃｔｉｎｏ
ｐｌａｎｅｓ ｔｅＩｃｈｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）ＡＴ
ＣＣ；３１１２１を米国特許第４２３９７５１号に記載
されでいるように培養づることにより得られた光酵肉汁
（ティコプラニン純度：乾燥物質の＜５％：ｐＨ８，３
）を、選択的吸着剤か実施例１Ｄのガラス−ポリ（Ｄ−
アラニン）であるクロマ〜グラフイーのカラム（２，８
ｃｍ×１１ｃｍ）へ杏用づる。
このカラムを０．０５モルのクエン酸、０．１Ｎの塩化
ナトリウムの緩衝液、ｐＨ８，３で調製する。基質をマ
〜リックスへ選択的に吸着させた後、カラムを水で４倍
に希釈した上の緩衝液ですｆぎ洗いする。次いで選択的
に吸着された基質を３％のアンモニア（ｐＨ約１１．５
：流速約１６Ｑｎｌ／時）で溶離する。溶離された分画
を連続的に監視し、ティコプラニンの存在について検定
すル（２８０ｎｍにおいてＵｖｉｏｒｄ ＳＶＫＢ分光
光度削を用いる）。それを含有する分画を直ちに中和し
、プールし、抗生物質の含量を測定する。
ナトリウムの緩衝液、ｐＨ８，３で調製する。基質をマ
〜リックスへ選択的に吸着させた後、カラムを水で４倍
に希釈した上の緩衝液ですｆぎ洗いする。次いで選択的
に吸着された基質を３％のアンモニア（ｐＨ約１１．５
：流速約１６Ｑｎｌ／時）で溶離する。溶離された分画
を連続的に監視し、ティコプラニンの存在について検定
すル（２８０ｎｍにおいてＵｖｉｏｒｄ ＳＶＫＢ分光
光度削を用いる）。それを含有する分画を直ちに中和し
、プールし、抗生物質の含量を測定する。
表７に報告する分析結果は、ＨＰＬＣ手順、ＬＣＤ（Ｃ
，Ｃ、Ｍ．Ｓｙｓｔｅｍ）を次の分析条件のもとに用い
ることにより得られる： カラム：ＲＰ１８．Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｓｐｈｅｒｉ５
（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｌａｂ、Ｃｏ、Ｓａｎｔａ Ｃｌ
ａｒａ、米国）：１０ｃｍ、予備カラム カラム温度：３０℃ ＵＶ検出：２１４ｎｍ 溶離混合物：溶媒Ａ＋溶媒Ｂ、ここで溶媒Ａ：９０％の
０．０２５モルのＮａＨ２ＰＯ４＋１０％のＣＨ３ＣＮ
：ｐＨ６；溶媒Ｂ：３０％の０．０２５モルのＮａＨ２
ＰＯ４＋７０％のＣＨ３ＣＮ：ｐＨ６ 勾配：Ｔ＝０分、３％の溶媒Ｂ Ｔ＝３分、３％の溶媒Ｂ Ｔ＝３０分、３７％の溶媒Ｂ 流速：１、８５ｍｌ／分。
，Ｃ、Ｍ．Ｓｙｓｔｅｍ）を次の分析条件のもとに用い
ることにより得られる： カラム：ＲＰ１８．Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｓｐｈｅｒｉ５
（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｌａｂ、Ｃｏ、Ｓａｎｔａ Ｃｌ
ａｒａ、米国）：１０ｃｍ、予備カラム カラム温度：３０℃ ＵＶ検出：２１４ｎｍ 溶離混合物：溶媒Ａ＋溶媒Ｂ、ここで溶媒Ａ：９０％の
０．０２５モルのＮａＨ２ＰＯ４＋１０％のＣＨ３ＣＮ
：ｐＨ６；溶媒Ｂ：３０％の０．０２５モルのＮａＨ２
ＰＯ４＋７０％のＣＨ３ＣＮ：ｐＨ６ 勾配：Ｔ＝０分、３％の溶媒Ｂ Ｔ＝３分、３％の溶媒Ｂ Ｔ＝３０分、３７％の溶媒Ｂ 流速：１、８５ｍｌ／分。
表７
実験番号 テイコプラニン含量ａ）（ｍｇ）
Ｓ．Ａ．ｂ） Ｒ．Ｓ．ｃ） Ｅｄ
） １ １７１ ３，３％
９４％ ２ ３６３ ２１、５％
８１％ ３ ３６３ ３５．８
％ ６９％ ４ １６７６ １２
．７％ ８７％ａ）試料中のティコプラニンの合計
吊＜ｍｇ＞。
Ｓ．Ａ．ｂ） Ｒ．Ｓ．ｃ） Ｅｄ
） １ １７１ ３，３％
９４％ ２ ３６３ ２１、５％
８１％ ３ ３６３ ３５．８
％ ６９％ ４ １６７６ １２
．７％ ８７％ａ）試料中のティコプラニンの合計
吊＜ｍｇ＞。
ｂ）すすき洗い溶液中のティコプラニンの％。
ｃ）溶液中の検出されたティコプラニンの％。
これらの試料の純度は、試料をいったん乾燥しかつ添加
した無機塩を除去すると、約９０％（「純粋」の標準を
参照）である。
した無機塩を除去すると、約９０％（「純粋」の標準を
参照）である。
実質的に実施例５Ａにおけるように実施することにより
、ティコプラニン含有発酵肉汁を、実施例１Ｃに従い得
られたセルロース−ポリ（Ｄ−アラニン）の使用により
、１工程操作で精製される。
、ティコプラニン含有発酵肉汁を、実施例１Ｃに従い得
られたセルロース−ポリ（Ｄ−アラニン）の使用により
、１工程操作で精製される。
（カラムの人きさ：５ｃｍ×１２ａｍ：溶離液の流速：
約２００ｎｉ／時）。
約２００ｎｉ／時）。
表 ８
実験 テイコプラニン含量（ｍｇ）番号 Ｓ．Ａ
．ａ） Ｒ．Ｓ．ｂ） Ｅｃ） １ ４６２
ｍｇ ２５，８％ ７６．８％ ２ ４１２
ｍｇ １５．７％ ７５％ ３ ４６５ｍｇ
１１．１％ ７８％ａ）試料中のテイカブラニ
ンの合訓量（ｎｇ）ｂ）すすき洗い溶液中のティコマイ
シンの％。
．ａ） Ｒ．Ｓ．ｂ） Ｅｃ） １ ４６２
ｍｇ ２５，８％ ７６．８％ ２ ４１２
ｍｇ １５．７％ ７５％ ３ ４６５ｍｇ
１１．１％ ７８％ａ）試料中のテイカブラニ
ンの合訓量（ｎｇ）ｂ）すすき洗い溶液中のティコマイ
シンの％。
ｃ〉溶離液中の検出されたティコプラニンの％。
Ｃ）Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ−ポリ（Ｄ−アラニン）を用
するティコプラニンの精製 実質的に前の実施例におけるように実施することにより
、ティコプラニン含有発酵肉汁よ、実施例１Ｅに従って
得られたＥｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ−ポリ（Ｄ−アラニン）
樹脂の使用により精製される（ツラムの大ぎさ２．８×
４ｃｎ）。
するティコプラニンの精製 実質的に前の実施例におけるように実施することにより
、ティコプラニン含有発酵肉汁よ、実施例１Ｅに従って
得られたＥｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ−ポリ（Ｄ−アラニン）
樹脂の使用により精製される（ツラムの大ぎさ２．８×
４ｃｎ）。
下表に報告する分析結果は、前記実施例と同じ条件下で
実施することにより得られる。
実施することにより得られる。
表 ９
実験番号 ティコプラニン含開
Ｓ、Ａ、ｃ） Ｒ，Ｓ、ｂ） Ｅｃ） １
１００ｍｇ ３２％ ９０％ａ）試
料中のティコプラニンの合計量（ｍｇ）。
Ｓ、Ａ、ｃ） Ｒ，Ｓ、ｂ） Ｅｃ） １
１００ｍｇ ３２％ ９０％ａ）試
料中のティコプラニンの合計量（ｍｇ）。
ｂ）ずずぎ洗い溶液中のティコマイシンの％。
ｃ）溶離液中の検出されたティコマイシンの％。
実施例６
住物学的流体中の標的抗生物質（溶解した）の選択的結
合 尿中のティコプラニンの定量 各尿試料を１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウムにより
ｐＨ７，４に調整する。乳白光または沈殿の形の場合に
おいて、それを遠心後の濾過により除去りる。はぼ１０
０μｇのティコプラニンを含有づる尿試料を、０．０５
モルのリン酸ナトリウム、０．１５モルの塩化ナトリウ
ム、ｐＨ７．４で１０ｍｌに希釈する。使用した試験箆
は、トルエン中の５％のジクロロシメチルシシンで処理
し、メタノールおよひ無水エチルエーテルで完全に洗浄
したカノス憔である。はぼ１０μｇ／ｍｌより少ないテ
ィコプラニンを含有する試料は未希釈に保持する。同じ
手順に従い、１０μｇ／ｍｌのティコプラニンを含有す
る１０ｍｌの試料を調製づる（標準溶液）。上と同じ緩
ｍ液（０，５ｍｌ）中の、実施例１Ａにおけるようにし
で調製したＣＨ−Ｓｅｐｌａｒｏｓｅ４Ｂ （Ｐｌａｒ
ｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｃｍｉｃａｌｓ）の均質懸
濁液（１：１）を各試料に＋える。この混合物を約１時
間おたやかにかさませる、次いで試料を遠心し（５分×
４０００ｒｐｍ）、上澄み液を廃棄した後、１０ｍｌの
緩衝液中に再憇濁する。
合 尿中のティコプラニンの定量 各尿試料を１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウムにより
ｐＨ７，４に調整する。乳白光または沈殿の形の場合に
おいて、それを遠心後の濾過により除去りる。はぼ１０
０μｇのティコプラニンを含有づる尿試料を、０．０５
モルのリン酸ナトリウム、０．１５モルの塩化ナトリウ
ム、ｐＨ７．４で１０ｍｌに希釈する。使用した試験箆
は、トルエン中の５％のジクロロシメチルシシンで処理
し、メタノールおよひ無水エチルエーテルで完全に洗浄
したカノス憔である。はぼ１０μｇ／ｍｌより少ないテ
ィコプラニンを含有する試料は未希釈に保持する。同じ
手順に従い、１０μｇ／ｍｌのティコプラニンを含有す
る１０ｍｌの試料を調製づる（標準溶液）。上と同じ緩
ｍ液（０，５ｍｌ）中の、実施例１Ａにおけるようにし
で調製したＣＨ−Ｓｅｐｌａｒｏｓｅ４Ｂ （Ｐｌａｒ
ｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｃｍｉｃａｌｓ）の均質懸
濁液（１：１）を各試料に＋える。この混合物を約１時
間おたやかにかさませる、次いで試料を遠心し（５分×
４０００ｒｐｍ）、上澄み液を廃棄した後、１０ｍｌの
緩衝液中に再憇濁する。
各試料を再び上のように遠心し、上澄み欣を出び廃棄り
ると、約０．５ｍｌの打夕中に樹脂か残る。
ると、約０．５ｍｌの打夕中に樹脂か残る。
樹脂へ選択的に吸着された抗生物質を、内部傅準として
５００μｇ／ｍｌのオルシノール（ｃｍｉｃａｌｓ）を
用いて、０．０５モルのリン酸プヘリウム緩衝液、ｐ−
１１．６で処理ることにより、浴部りる。この混合物を
おたヤかに約３０分間かさまぜ、次いで樹脂を遠心によ
り＋除し、上澄み液を１ＮａＨＣｌ（５０ｍｉ）で中和
する。
５００μｇ／ｍｌのオルシノール（ｃｍｉｃａｌｓ）を
用いて、０．０５モルのリン酸プヘリウム緩衝液、ｐ−
１１．６で処理ることにより、浴部りる。この混合物を
おたヤかに約３０分間かさまぜ、次いで樹脂を遠心によ
り＋除し、上澄み液を１ＮａＨＣｌ（５０ｍｉ）で中和
する。
分析は、すてに述へたＨＰＬＣ法に従い、！準溶液とじ
て同じ含量のティコプラニンの浴液を用いてブランク（
づなわら、他の試料と平行して検定するが、樹脂へ加え
ない試料）の役目をさせることにより、実施する。
て同じ含量のティコプラニンの浴液を用いてブランク（
づなわら、他の試料と平行して検定するが、樹脂へ加え
ない試料）の役目をさせることにより、実施する。
実験のデータを下表に要約する：
表 １０
実験番号 犀からのティコプラニンの回収率％ １
７３、８ ２ ７２、５ ３ ７４ ４ ７８ 平均の回収率＝７４．５％ 表 １１ 標準溶液からのティコプランの実験番
号 回収率％ １ ７６、５ ２ ７１．６ ３ ７２、８ ４ ８８、１ ５ ７５、４ ６ ８１、４ 平均の回収率−７７．６％ 第１頁の続き ｅ発 明 者 アドルフォ・ソツフィエンティーニ イタリニ国セスｌーサンジョバン ニ（エムアイ）ビアフラテルリ テイデイ第１６８ ＠発明者 フランチェスコ・パレンティイタリー国ミ
ラノ・ビアエミリ オデマルキ８
７３、８ ２ ７２、５ ３ ７４ ４ ７８ 平均の回収率＝７４．５％ 表 １１ 標準溶液からのティコプランの実験番
号 回収率％ １ ７６、５ ２ ７１．６ ３ ７２、８ ４ ８８、１ ５ ７５、４ ６ ８１、４ 平均の回収率−７７．６％ 第１頁の続き ｅ発 明 者 アドルフォ・ソツフィエンティーニ イタリニ国セスｌーサンジョバン ニ（エムアイ）ビアフラテルリ テイデイ第１６８ ＠発明者 フランチェスコ・パレンティイタリー国ミ
ラノ・ビアエミリ オデマルキ８
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 Ａ−Ｂ−Ｒ−ＣＯ−Ｄ−Ａｌａ−Ｚ 式中、Ａは水不溶性担体を表わし、Ｂは結合、スペーサ
ー・アームまだはポリアミノ酸残基を表わし、Ｒはそれ
ぞれ式 −ＨＮ−（Ｃ１−Ｃ１２）アルキレンまたは−Ｏ−（Ｃ
１−Ｃ１２）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（Ｃ１−Ｃ１２）アルキレ
ン置換アミノまたはオキシ基を表わし、あるいはＲ−Ｃ
ＯはＬ−リシニル残基、または結合または−ＯＣ（ＣＨ
２）ＮＣＯ−基を表わし、ここでｎは１〜６の整数、好
ましくは２．３または４であり、ＺばＤ−アラニル、グ
リシニルおよびＤ−ロイシニルから選ばれるアミノ酸残
基を表わし；そしてＤ−ａｌａはＤ−アラニル基を表わ
し；たたしＤ−ＣＯが結合であるとき、ＢはＤ−アラニ
ンのアミン官能基に結合するカルボキシ末端官能基を有
する基であるか、あるいはＢも結合である場合、ＡばＤ
−アラニンのアミン官能基にペプチド結合を介して結合
するカルボキシ末端官能基を有する水不溶性担体である
、 の新規々変性マトリックス。 ２ Ｒがそれぞれ式 −ＨＮ−（Ｃ２−Ｃ６）アルキレンまたば−Ｏ−（Ｃ２
−Ｃ６）アルキレン の直鎖状もしくは分岐鎖状の（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン
置換アミノまたはオキシ基である特許請求の範囲第１項
記載の変性マトリックス。 ３、水不溶性担体が、ヒドロキシ基、アミン基またはカ
ルボニル基またけハロケン（クロロ、ブロモ）原子を有
するものから選ばれる特許請求の範囲第１項記載の変性
マトリツクス。 ４、水不溶性抗体が、多糖類、ヒドロキシアルキルポリ
スチレン類．ポリビニルアルコール類、アミノフルキル
多糖類、ｐ−アミノベンツル多糖類、ギトザン、アミノ
アルキルポリスチレン炙、ポリアクリルアミド類、アミ
ノアクリルアミド類、アミノアルキル多孔質ガラス質、
カルボキシアルギル多糖類、カルボキシアルキルアクリ
ルアミド類、およびハロケノアルキルボリスチレン類が
ら選ばれる特許請求の範囲第１項記載の変性マトリック
ス ５ 水不溶性担体が、セルロース、アガロース、架橋デ
ギストラン、ヒドロキシアルキル化スチレン−ヅビニル
ベンゼンコホリマー、アミノアルキルセルロース、アミ
ノアルキルアガロース、ｐ−アミノアルキルセルロース
、ｐ−アミノベンツルアガロース、アミノアルギル化ス
チレン−ヅビニルベンゼンコボリマー、アミノエチルポ
リアクリルアミド、アミノプロピル多孔質ガラス、カル
ボギシアルキルアガロース、カルボキシアルキルセルロ
ース、カルボキシアルキル架橋デキストラン、カルボキ
ンメチルポリアクリルアミド、アクリル敵−ヅビニルベ
ンゼンコポリマー、クロロメチル化スチレン−ヅビニル
ベンゼンコホリマーから選ばれる特許請求の範囲第１項
記載の変性マトリツクス。 ６．水不溶性担体が、セルロース、カルボキシメチルセ
ルロース、ガラス、調整された孔のガラス、架橋テキス
トラン類、アカロース、およびカルボキシメチルアガロ
ースから選ばれる特許請求の範囲第１項記載の変性マト
リックス。 ７．記号Ｂが結合を表わす特許請求の範囲第１項記載の
変性マトリックス。 ８．Ｂが式 −ＨＮ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ− −ＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯ− −ＨＮ（ＣＨ２）ｍＣＯ−または −ＨＮ（ＣＨ２）ｍＯ− 式中、ｍは１〜１２の整数を表わす、 の残基から選ばれる特許請求の範囲第１項記載の変性マ
トリックス。 ９、 Ｈが−ＪｉＮ （ＣＪｆ２）ｍ−ＣＯ−を表わ
し、ここでｍは２〜６の整数である特許請求の範囲第１
項記載の変性マトリックス。 １０、 Ｒ−（、’０−１）−Δｌａ、−Ｚが約２〜
１５の残基のボ＋）（１）−アラニン）鎖を表わす特許
請求の範囲第１項記載の変性マトリックス。 １１、 Ｚがυ−アラニンである特許請求の範囲第１項
記載の変性マトリックス。 １２ ｌ＜−Ｃｏが結合を表わし、セしてｂかＤ−ア
ラニンのアミン官能基にベゾ′チド結合を介して結合す
るカルボキシ末端官能基を有する基である傷−許請求の
範囲第１項記載の変１牛７トリツクス。 １３、 Ｒ，−Ｃ’ＯおよびＢの両者が結合を衣わし
２、そ（〜てＡがＤ′−アラニンの７ミノ官能）、（と
ペプチド結合を介し２て結合するカルボギン末端官能基
を崩する水不溶性担体である峙許Ｍ工求の範囲第１項れ
る物質を精、製するときに使用するための特許請求の範
囲第１項記載の変性マトリックス。 １５、 −ｃｏｏ）ｌ末端に１）−Ａｌａ−１）−Ａｌ
ａ基を有するムコペプチド類に選択的に結合する、ティ
コプラニン、バンコマーイ７ン、リストセチンΔ方どの
抗生物質を精製するための特許請求の範囲第１項記載の
変性マトリックス。 】６ 前記変性マトリックスにより選択的に・吸辛１さ
れる物Ｉｌを精製するだめの特許請求の範囲第１項記載
の７トリツクスの使用。 １７ ａ）標的抗生物質を特許請求の範囲第１項記載の
変性マｌ−リツクス上に吸着させ、ｂ ）６％的抗生物
質を前記マ）・ソックスから溶離しない第１緩衝液です
すぎ洗いし、そしてＣ）標的抗生物質を第２緩衝液で溶
離する、 ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の変性マト
リックスに選択的に結合するティコプラニン、バンコマ
イシン、リストセチンΔｉ＆ｉｊそれらの誘導体を精製
する方法。 １ Ｂ、 第１緩衝液が８５より低いｐ〃値を有する
溶液である％訂請求の範囲第１７項記載の方法。 １９ 第１緩衝液が７）８５の７３Ｂ値を有する緩衝液
である特許請求の範囲第１７項記載の方法。 する特許請求の範囲第１７項−己載の方法。 ２ゝ１ 第２緩衝液がｌＯ〜］、１．５のｐＪｉｊ面を
イ１する特許請求の範囲第１７項、伯叔の方法。 ２２ α）抗生物質をり浦しつる混イよ物（溶液、発、
酵肉汁など）を特許請求の範囲第１項記載の変性マトリ
ックスと接触させ、 ｂ）前記基質（在任する場合）を前記マトリックスに選
択的に吸涜させ、 Ｃ）選択的に吸着された前記基質（吸肩されている場合
）を有意に溶離（−ないすすき洗い＃液ですずき洗いし
、そし７て ｄ）選択的に吸着された前記基質（吸着されている場合
）を浴離し、そしてそれをそれ自体既知の方法に従い回
収する、 ことを特徴とする、卸ｊ菌の細胞壁、とくに１）−Ａｌ
ａ−Ｄ−Ａｌａにおいて終るそのムコベノ°チド構成成
分に結合する抗生物質をスクリーニングする方法。 ２３ ずすき゛洗い溶液が８５より低いｐＨ値を冶する
緩衝液である請求の範囲第２２項記載の方法。 ２４ すすき洗い溶液が７〜８５のｐＨ値を廂する緩衝
液である特−請求の範囲第２２項記載の方法。 ２５ 溶踊液が１０よシ１９いｐ値を有する特請求の範
囲第、２２項記載の方法。 ２６ 溶離液が１０〜１１．５のｐ １１値を有する緩
衝液である特許請求の範囲第２２項記載の方法。 ２７ 水不溶性担体Ａが、カルボキシ・メチルセルロー
ス、セルロース、多孔質ガラス、架ｍ７キストラン類、
アガロース、カルボキンメチルアガロースから選ばれ、
配位子ＲＣ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄが２〜１５個の残基のポリ
（Ｄ−Ａｌａ）残基であり、ここでＺｌ−４１）−Ａｌ
ａであり、そして配位子と担体との＋Ｖ＋の結合は臭化
・／アン、′１ニビ′クロロヒドリン、１．４−ビヌー
（２，３−ソエ列辷゛キーンン０ロポキシ）ブタンオだ
は３−アミノゾロピルトリエトキソシランにより得られ
る特に匝囲第１項記載の変性マトリックス。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB838311136A GB8311136D0 (en) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | Immobilised oligopeptides |
| GB8311136 | 1983-04-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59199661A true JPS59199661A (ja) | 1984-11-12 |
Family
ID=10541626
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58241072A Withdrawn JPS59199661A (ja) | 1983-04-25 | 1983-12-22 | 固定化されたオリゴペプチド類 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0122969B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59199661A (ja) |
| AT (1) | ATE43609T1 (ja) |
| AU (1) | AU566327B2 (ja) |
| CA (1) | CA1229848A (ja) |
| DE (1) | DE3379952D1 (ja) |
| GB (1) | GB8311136D0 (ja) |
| ZA (1) | ZA839380B (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4778846A (en) * | 1983-07-13 | 1988-10-18 | Smithkline Beckman Corporation | Affinity chromatography sorbent |
| US4667024A (en) * | 1983-07-13 | 1987-05-19 | Smithkline Beckman Corporation | Process for the preparation of purified vancomycin class antibiotics |
| GB8427436D0 (en) * | 1984-10-30 | 1984-12-05 | Lepetit Spa | Receptor assay |
| US4569794A (en) * | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| GB8500209D0 (en) * | 1985-01-04 | 1985-02-13 | Ceskoslovenska Akademie Ved | Synthetic polymeric drugs |
| EP0190606B1 (de) * | 1985-02-04 | 1990-05-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Adsorbens für die Reinigung von Proteinen |
| GB8522388D0 (en) * | 1985-09-10 | 1985-10-16 | Lepetit Spa | Receptor-antibody sandwich assay |
| AU6512586A (en) * | 1985-11-21 | 1987-05-28 | Devoe Holbein International N.V. | Insoluble composition for removing silver from a liquid medium |
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| US4778751A (en) * | 1986-05-12 | 1988-10-18 | Diagnostic Products Corporation | Method for measuring antigens or antibodies in biological fluids using ligand labeled antigens or ligand labeled antibodies |
| ZA877192B (en) * | 1986-10-01 | 1988-10-26 | Smithkline Beckman Corp | Affinity purification process for glycopeptide antibiotics |
| DE19518771C2 (de) * | 1995-05-22 | 1997-12-04 | Deutsches Krebsforsch | Mittel enthaltend einen Komplex aus einem polymeren Mediator und einem Peptid, sowie eine Trägeroberflächen zur adsorptiven Bindung des Komplexes |
| CA2250578C (en) | 1996-04-23 | 2003-06-24 | Versicor Inc. | Improved chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic a 40926 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3947352A (en) * | 1974-05-31 | 1976-03-30 | Pedro Cuatrecasas | Polysaccharide matrices for use as adsorbents in affinity chromatography techniques |
-
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- 1983-04-25 GB GB838311136A patent/GB8311136D0/en active Pending
- 1983-11-30 AU AU21856/83A patent/AU566327B2/en not_active Expired
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- 1983-12-14 DE DE8383112555T patent/DE3379952D1/de not_active Expired
- 1983-12-14 EP EP83112555A patent/EP0122969B1/en not_active Expired
- 1983-12-19 ZA ZA839380A patent/ZA839380B/xx unknown
- 1983-12-22 CA CA000443997A patent/CA1229848A/en not_active Expired
- 1983-12-22 JP JP58241072A patent/JPS59199661A/ja not_active Withdrawn
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