JPS59173091A - ルゾペプチンｅ２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な環状デプシベプチド抗生物質ならびにそ
の製造と回収の方法に関する。本発明はまた上記の新規
な抗生物質を含む医薬組成物ならびに該抗生物質（およ
びそ５− の成分）を抗菌剤および抗腫瘍剤として使用する方法を
提供するものである。

英国特許出願第２，０５０，３８４Ａ号にはＢＢＭ−９
２８と命名される抗腫瘍抗菌複合体ならびに菌株Ｇ４５
５−１０１　（ＡＴＣＣ３１４９１）と命名されるアク
チノマイセテスの新菌株の発酵による該複合体の製造が
記載されている。この特許にはＢＢＭ−９２８複合体が
ＢＢＭ−９２８Ａ、　　Ｂ、　Ｃ，Ｄ、　　ＥおよびＦ
と命名される少なくとも６つの成分をもつことが記載さ
れている。成分Ａ、　　Ｂ、　ＣおよびＤは該特許にお
いて十分に特徴づけられたけれども、成分ＥおよびＦは
２種のシリカゲルＴＩ、Ｃ系におけるＪ値によって及び
ある種の好気性バクテリアに対する試験管内抗菌活性に
よって特徴づけられているにすぎない。

ＢＢＭ−９２８生産菌株Ｇ４５５−１０１は後になって
アクチノマジュラ属の新種であると決定され、アクチノ
マ６− ジュラルゾネンシスｎｏｖ、　ｓｐ、と命名された［Ｊ
。

Ａｎｔｉｂｉｎｔｉｃｓ３３（１０）：１０９８　１１
０２（１９８０）参照〕。

Ｊ、　Ａｒｎ、　Ｃｈｅｍ、　５ｏｃ−１０３：　１２
４１　（１９８１）には、ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　（１９８０）、Ｋ、オカダ（Ｅｄ、　）　：
Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉ
ｏｎ　（日本国大阪）ｌ）Ｔ）１１９−１２４（１９８
１）およびＪ。

Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３４（２）：１４８−１５９
（１９８１）と同様に、ＢＢＭ−９２８Ａ、ＢおよびＣ
の構造が記載されている。

ＢＢＭ−９２８の鎖成分の生産、単離、特徴付け、およ
び抗腫瘍活性はＪ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３３（
１０）　：１０８７−１０９７（１９８０）に記載され
ている。英国特許出願第２，０５０，３８４Ａ号に記載
されているように、成分ＥおよびＦは２種のシリカゲル
ＴＬＣ系におけるＲｆ値によって特徴づけられているに
すぎない。

ＢＢＭ−９２８Ａの抗１１１１ｍ活性の提案された機構
はＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９：５５３７（１９８
０）に記載されている。

ＢＢＭ−９２８抗生物質は生産種の後に現在ルゾペプチ
ン抗生物質と命名されている。それ故、ここに使用する
ルゾペプチンＡ、　　Ｂ、　　Ｃ等は上記刊行物に既に
使用されているＢＢＭ−９２８Ａ、Ｂ、Ｃ等と同じであ
る。

第１図はＫＢｒ中でベレット化したときのルゾベプチン
Ｅ２の赤外吸収スペクトルを示すものである。

第２図はＣＤＣｌ２に溶解させたルゾペプチンＥ２のプ
ロトン磁気共鳴スペクトルを示すものである。

第３図はＣＤＣノ３に溶解させたルゾベプチンＥ２のＣ
Ｉ３核磁気共鳴スペクトルを示すものである。

本発明はルゾペプチンＥ２と命名する新規な抗腫瘍抗生
物質ならびに共生産物質を実質的に含まない純粋状態で
の該新規抗生物質の製造および単離の方法に関するもの
である。この新規な抗生物質は、アクチノマジュラルゾ
ネンシスのルゾペプチンＥ２生産菌株、好ましくはアク
チノマジュラルゾネンシスＡＴＣＣ３１４９１もしくは
その突然変異体を、炭素および窒素の同化源を含む水性
栄養媒質中で浸漬好気性条件下に、実質量のルゾペプチ
ンＥ２が該培養媒質中で該微生物によって生産されるま
で培養し、そして該ルゾベプチンＥ２を共生産物質を実
質的に含まない純粋な形体で該培養媒質から回収するこ
とによってえられる。

ルゾベプチンＥ２は抗菌および抗腫瘍の両者の活性を示
す。

本発明によって提供されるルゾベプチンＥ２は英国％許
出願第２，０５０，３８４Ａ号に記載のルゾベプチン（
または９− ＢＢＭ−９２８）抗生物質複合体の少量成分であること
が発見された。該英国特許出願にはアクチノマジュラル
ゾネンシス　ｓｐ、ｎｏｖ、の発酵によりルゾペブチン
抗生物質複合体を製造すること、およびこのような複合
体を６種の生活性成分（今やルゾベプチンＡ、　　Ｂ、
　Ｃ，Ｄ、　　ＥおよびＦと呼ばれる）に分離すること
が記載されている。然しなから、アクチノマジュラルゾ
ネンシスの発酵において共生量されることが今や発見さ
れた抗生物質成分ルゾペプチンＥ２については該英国特
許出願には何も記載されていない。

本発明の新規な抗生物質はアクチノマジュラルゾネンシ
ス発酵液から実質的に純粋な形体で単離され乱つ以下に
更に詳しく述べるような物理的、化学的および生物学的
性質によって特徴づけられた。

ルゾベプチンＥ２の単離と特徴づけの後に本発明者の同
僚によって行表われた研究はルゾペブチンＥ（たとえば
英１０− 国特許出願第２，０５０，３８４Ａ号参照）が実際には
単一の抗生物質成分ではなくてルゾベプチンＥ２を包含
する諸成分の混合物であることを確立した２、 ルゾベプチンＥ２の性質 ルゾベプチンＥ２は発色団と１７でキノリン核を含む環
状デプシベプチド抗生物質である。スペクトルおよび化
学分析から、ルゾベプチンＥ２は次の構造式をもつもの
と決定された。

１１− ｔｉ３シＬ：ｔｉ３ Ｈ １２− ルゾペプチンＥ２は融点２０１〜２０３℃、分子量１３
１５．３７３２および分子式Ｃ６０Ｈ７１１Ｎ＋４０２
０をもつ白色固体である。元素分析は次の平均重量係を
示す。

Ｃ・・・５３．１９ Ｈ・・・　　５．４Ｏ Ｎ・・・１２．９２ ０（差から求める）・・・２８．４９ ＫＢｒ中でペレット化したときのルゾペプチンＥ２の赤
外吸収スペクトルは添付図面の第１図に示しである。特
徴ある赤外吸収帯はｆｆｉ’で表示して次の周波数で示
される。

３４７０．３３７０，２９８０，２９８３，２８５０，
１．７４．０゜１６４５．１５２０，１４１８，１３５
０，１２８５，１２３０゜１１９５．１１５０，１１２
８，１１０５，１０６５．　１０２５゜９０５．８８５
，７９５，７８５および７５０゜ルゾペプチンＥ２のプ
ロトン磁気共鳴スペクトルおよびＣ１３核磁気共鳴スペ
クトルはＢｒｕｋｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　ＷＭ−３６０スペ
クトルメータを用いそれぞれ３６０ＭＨ２および９０Ｍ
Ｈ２で操作して測定した。このＰＭＲおよびＣＭＲのス
ペクトルは添付図面の第２図および第３図に示しである
。

キシレン−メチルエチルケトン−メタノール（５：５：
１　ｖ／ｖ　）から成る溶媒系において、ルゾペプチン
Ｅ２はシリカゲル薄層クロマトグラフによって測定して
０３３のＲｆ値を示す。

知られているルゾペプチン諸成分から区別されるルゾペ
プチンＥ２の重要々構造上の特徴は、テトラヒドロピリ
ダジン基の代りにヘキサヒドロピリダジン部分が存在す
ることである。

ルゾペプチンＥ２は、アクチノマジュラルゾネンシスの
ルソペプチンＥ２生産菌株好ましくはＡＴＣＣ３１４９
１の同定特性をもつアクチノマジュラルゾネンシスの菌
株またはその突然変異体を浸漬好気性条件下に水性栄養
媒質中で培養することによって製造しうる。

ルゾペプチンＥ２の生産微生物ならびにルゾペプチンＥ
２を得るだめの発酵条件は英国特許第２，０５０，３８
４Ａ号に記載されているとおりである。

好ましい生産微生物はアクチノマジュラルゾネンシス菌
株Ｇ４５５−１０１　（ＡＴＣＣ３１４９１）であるけ
れども、任意のルゾペプチンＥ２生産菌株あるいはこの
よう々微生物から通常の方法たとえばＸ線照射、紫外線
照射、窒素マスタード処理、フエージ露出などによって
作りうる好ましい微生物の突然変異体も本発明の範囲内
に含まれることが意図される。

生産微生物は同化性炭素源たとえばデンプン、グルコ−
１５− ス、テキストリン、マルトース、ラクトース、サクロー
ス、フラクトース、マンノース、糖蜜、グリセロールな
どを含む通常の栄養媒質中で生育させる。栄養媒質はま
た同化性窒素源たとえばタンパク、タンパク加水分解物
、ポリペプチド、アミノ酸、コーンステイープ液、カゼ
イン、尿素など；ならびに無機アニオンおよびカチオン
たとえばカリウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシ
ウム、サルフェート、カーボネート、ホスフェート、ク
ロライド、ナイトレート、などを与える栄養無機塩類；
を含むべきである。

ルゾペプチンＥ２の製造および回収にとって必須という
わけではないけれども、Ｄ、Ｌ−メチオニン、Ｓ−メチ
ル−システィン、Ｓ−エチル−Ｌ−システィン、　Ｄ、
Ｌ−エチオニン、Ｄ−メチオニン、Ｌ−メチオニン、ア
セチル−メチオニン、２−アミノエタンチオール、２−
ヒドロキシ−４−（メチルチオ）酪酸、Ｄ、Ｌ−０−メ
チルセリン、Ｌ−シ１６− スティンおよびＬ−メチオニルグリシンから成る群から
えらばれた硫黄含有化合物を栄養媒質に添加するのが好
ましい。好ましい硫黄含有化合物はり、Ｌ−メチオニン
およびＳ−メチル−システィンである。このような硫黄
含有化合物はたとえば発酵媒質の約０．０５％〜約０．
５係（ｗｔ／ｖｏｌ）の濃度で添加することができ、Ｄ
、Ｌ−メチオニンおよびＳ−メチル−システィンについ
ての最も好ましい濃度はそれぞれ０．１５％および０．
１％である。上記の硫黄含有化合物の添加はルゾペプチ
ンＥ２の生産を増大しそれによって分析および単離がよ
り容易になしうろことが見出された。

ルゾペプチンＥ２の製造において、生産微生物の満足な
生育に貢献する任意の温度を使用することができる。約
２０〜４５℃の範囲の温度が操作可能であり、２７〜３
５℃の温度範囲が最も好ましい。ルゾペブチンＥ２の最
大生産は一般に約７２〜９６時間後にえられる。

通常の方法がこの発酵法に使用される。たとえば、小量
生産は撮とうフラスコ中で又は表面培養によって好都合
に行なわれる。大量生産は好ましくは滅菌タンク中で浸
漬好気性条件下で行なわれる。タンク発酵を使用すると
きは、培養液に微生物からの胞子を接種することによっ
て栄養媒質中に生長力のある接種物をまず作って若い活
性のある種培養物を与え、次いでこれを無菌状態で発酵
タンク媒質に移す。タンクおよびボトル中の曝気は、機
械的な回転子によってタンク中に更なるかくはんを与え
々から発酵媒質の表面の中におよび表面上に滅菌空気を
強制送入することによって行なうことができる。必要に
応じて、発泡防止剤たとえばシリコーン油、大豆油およ
びラード油を添加してもよい。

発酵の過程はルゾペプチンＥ２に敏感な微生物たとえば
バシリウスサブテイリス　ＡＴＣＣ６６３３に対して時
々発酵液を試験することによって追跡することができる
。

ルゾペプチンＥ２はまた３　６０　ｎｍにおけるＵＶ観
察によって、あるいはシリカゲルＴＬＣ系のキシレン−
メチルエチルケトン−メタノール（９：　９　：　１　
ｖ／ｖ　）中のＲ１値によって、検出することもできる
。

ルゾペプチンＥ２は発酵液から通常の方法たとえば実施
例１において更に詳しく述べる溶媒抽出法およびクロマ
トグラフ法によって単離することができる。このような
方法はルゾペプチンＥ２を共生産物質を実質的に含まな
い純粋な形体で回収することを可能にする。

ルゾペプチンＥ２の試験管内最小阻止濃度を連続カンテ
ン希釈法によって測定した。ミュラー・ヒントンカンテ
ンをダラム陽性菌およびダラム陰性菌について一般に使
用し１９− た。ただし酸耐性菌についてはＮ［Ｌ１００１媒質〔３
％グリセロール、０．３％ナトリウム−Ｌ−グルタメー
ト、０．２％ペプトン、０．３１％Ｎａ２ＨＰＯ４，０
，１％Ｋ　Ｈｚ　Ｐ　０４．０．００５％アンモニウム
シトレート、０．００１％ＭｇＳＯ４および１．５％カ
ンテン〕を使用した。これらの結果をルゾペプチンＡの
活性との比較において第１表に示した。

２０− 第１表 スタフィロコッカス　アウレウス２０９Ｐ　　　　　Ｏ
，４０４スタフイロコツカス　アウレウス　スミス　　
　　　０．４　　　　０．８スタフイロコツカス　ビオ
ジェネス　５−２３　　　　＜０．０５　　　０．２サ
ルシナ　ルティア　ＰＣＩ　　１００１　　　　　　０
．１　　　　０．２マイクロコツカス　フレバス　ＤＩ
２　　　　　　　０．２　　　　０．２コリネバクテリ
ウム　キセロシス　５３に−Ｉ　　　　　　Ｏ，８０，
８バシリウス　サブティリス　ＰＣＩ　　２１９　　　
　　０．２　　　　０．８バシリウス　メガテリウム　
Ｄ−２０，２０，２バシリウス　アンスラシス　Ａ９５
４０　　　　　　　０．１　　　　０．２エスチエリチ
イア　コリ　ＮＩＨＪ　　　　　　　＞１００　　　＞
１００クレブシラ　ニューモニアエ　Ｄ−１１＞１００
　　　＞１００プロテウス　バルガリス　Ａ９４３６　
　　　　＞１００　　　＞１００シユードモナス　アエ
ルジノサ　Ａ９９３０　　　　＞１００　　　＞１００
マイコバクテリウム　スメグマテイス６０７　　　　０
．８　　　　０．４マイコバクテリウム　フレイ　Ｄ８
８　　　　　　　１．６　　　　０．４白血病Ｐ３８８
に対するルゾベプチンＥ２の抗腫瘍活性を既に報告した
方法（ｃａｎ、　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｐ、　５０　：　４
７９．１９６６およびＣａｎ、　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｐ、
　３　：　１．１９７２）ＫよってＢＤＦ、マウスにお
いて検査した。この試験結果をルゾベプチンＡの結果と
共に下記の第２表に示す。

第２表 ルゾペプチンＥ２　　　　６４　　　　　　　　　毒性
あり３２　　　　　　　　１４４ １６　　　　　　　　１６７ ８　　　　　　　１２２ ４　　　　　　　１２２ ２　　　　　　　１００ １　　　　　　　１００ 化合物　投与量（ｗ′Ｋｇ／８）　　腫瘍阻止ＭＳ　Ｔ
　（％　Ｔ／ｅ　）ルゾベプチンｐ、　　　　　　６４
　　　　　　　　　　１５６３２　　　　　　　　　　
１６１ １６　　　　　　　　　　１４４ ８　　　　　　　　　１４４ ４　　　　　　　　　　１２８ ２　　　　　　　　　　１１１ 治療：　９回の注射について毎日−回 宿主：ＢＤＦ１　　♀マウス 評価：ＭＳＴ＝中央生存期間 ％　Ｔ／Ｃ＝治療したＭＳＴ／対照標準ＭＳＴＸ１００
％判断基準：Ｔ／Ｃ≧１２５は顕著な抗腫瘍効果ありと
考えられる。

毒性あシ：＜４／６生存体、日数５ 第２の試、験において、ＢＤＦ、マウスの白抑病Ｐ３８
８に２３一 対するルゾベプチンＥ２の抗腫瘍活性をＪ、　Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ３３：１０８７−１０９７（１９８０）
に報告した方法によって検査した。ルゾペプトンＡを基
準化合物として比較のために試験した。第３表に示すよ
うに、ルゾベプチンＡおよびＥ２ははソ等しい抗腫瘍活
性を示した。ルゾベプチンＡおよびＥ２の多数回投与（
ｑｄｌ→９）の後に測定した腹膜内の毒性は第３表の最
終行に示しである。ルゾペプチンＥ２の毒性はルゾペブ
チンＡの毒性のはソ％である。

２４− 第３表 ０１　　　　　　　　−　　　　− 〇、０３　　　　　　　　８９　　　　１４３０．０１
　　　　　　　　１７４　　　　１８１０．００３　　
　　　　　１６８　　　　１４９０．００１　　　　　
　　１４１　　　　１２９０．０００３　　　　　　１
２１　　　　１１７畑Ｄ”（ｍｙ／Ｋｐ／ｄａｙ）　　
　　ｏ、ｏｏｔ　　　　　ｏ、ｏｏｔＬＤｓｏ　”　（
ｑ／Ｋｐ／ｄａｙ　）　　　　０．０１９　　　　０．
Ｏ：３４釆　投薬量スケジュール：ｑｄｌ→９ 上記の抗菌性データおよびマウスＩｌｌ瘍データに示す
ように、ルゾペプチンＥ２は抗生物質としておよびＰ３
８８白血病のような呻乳動物の悪性腫瘍の閉止のだめの
抗腫瘍剤−２５＝ としでも有用である。本発明はその範囲内に有効な抗菌
またけ腫瘍閉止の址のルゾベプチンを不活性々医薬的に
許容しうる担体もしくは希釈剤と組合せて医薬組成物を
包含する。このような組成物はまた他の活性な抗菌剤ま
たは抗腫瘍剤を含むことができ、そして所望の投与ルー
トに適切な任意の形体に作ることができる。このような
組成物の実例として、経口投与用の固体組成物たとえば
錠剤、カプセル、丸薬、粉末、および顆粒；軽口投与用
の液体組成物だとえ　　　′ば溶液、懸濁液、シロップ
またはエリキシル剤；ならびに非経口投与用の処方物た
とえば滅菌した溶液、懸濁液まだは乳化液；があけられ
る。これらはまた、滅菌固体組成物の形体で製造し、使
用直前に滅菌水、生理的食塩水またはその他の滅閑注射
用媒質にとかすこともできる。

本発明の別の面によれば、有効な抗菌またはｌ＋！ＩＪ
ｊｉ！Ｉｓ目止の調剤量のルゾペプチンＥ２−！たけそ
の医薬組成物を哺乳動２６− 物に投与することから成る、細菌感染を受けた又は悪性
腫瘍（たとえばＰ３８８白血病）にかかった哺乳動物を
治療する方法が提供される。

次の実施例は本発明を具体的に説明するだめのものであ
って、本発明をこの特定の具体例に限定するものと解釈
すべきではない。ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａは綿実ミール
についてのＢｕｃｋｅｙｅ　０ｊｌｓｅｅｄ　Ｐｒｏｄ
ｕｃｔｓ　Ｃｏ、　　（米国テキサス州フォートウオー
ス）の商標である。Ｎｕｔｒｉｓｏｙは粉末に砕いた大
豆ミールについてのＡｒｃｈｅｒ　ＤａｎｉｅｌｓＭｉ
ｄｌａｎｄ　Ｃｏ、　　（米国イリノイ州デカター）の
商標である。Ｆｅｒｍｏ　３０はイースト粉末について
のＹｅａｓｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｉｎｃ、　（米国ニ
ューシャーシー州りリフトン）の商標である。５ｋｅｌ
　１ｙｓｏｌｖｅ　Ｂは異性体ヘキサン類から成、Ｃ６
０〜６８℃の沸点をもつ石油溶剤についての５ｋｅｌｌ
ｙＯｉｌ　　Ｃｏ、　　（米国ミズリー州カンサス市）
の商標である。

２７− Ｎｙｌｏｎ　Ｃｏｐｏｌ　８はガラスの代りにカラムと
して使用するナイロンの管状片である。このナイロンは
ある種の溶媒に耐性があシ、クロマトグラフ完了後に、
このカラムはカットして諸留分を得ることができる。

実施例Ｉ Ａ０発酵 アクチノマジュラルゾネンシス菌株Ｇ４５５−１０１の
よく生育して生長力ある処方物を２０％の最終濃度にお
いてサクロース中で凍結状態（−１２℃）に保持した。

この凍結した生長力ある処方物を、３％セレローズ、１
％Ｐｈａｒｔｎａｍｅｄｉａ　　（綿実ミール）、１％
Ｎｕｔｒｉｓｏｙ（大豆ミール粉）および０．３％Ｃａ
Ｃ０＋を含む生長媒質に接種した。この種培養液を回転
しんとう器（２１Ｏｒｐｍ）上で３５℃において４８時
間培養し、７−の生育物を３％セレ２８− ローズ、２％Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ、　１％Ｆｅｒｍ
ｏ　３０　　（イースト粉末）、０．５　％　ＣａｃＯ
３および０．１５％ＤＬ−メチオニンから成υ、滅菌前
にｐＨを７．０に調整した発酵媒質１００　ｒｎｌヲ含
ｔｒ　５００　ｍｌエルレンマイヤーフラスコに移した
。ルゾペブチンＥ２の生産は３５℃の培養温度において
７２〜９６時間で最大に達した。

Ｂ、検出 ルゾペプチンＥ２は発酵液全体を等容量のｐＨ８，０，
５Ｍ）ＩＪスーＨＣ１緩衝液で希釈し、次いで発酵液の
２倍容量のメチレンクロライドで抽出することによって
発酵混合物から単離することができる。乳化状態を破壊
するために短期間の遠心分離を行なった後、溶媒相をＡ
ｎａｌｔｅｃｈシリカゲルプレート上にスポットさせて
キシレン−メチルエチルケトン−メタノール（９：９：
１）系中で展開させた。

ルゾベプチンＥ２はＢＢＭ−９２８Ａ（Ｒｆ　　Ｏ，５
７）とＢＢＭ−９２８Ｂ（Ｊ　Ｏ，２７）との間のＪｏ
、３７にあられれる。３種の化合物のすべては３５　Ｑ
　ｎｍでのＵＶ観察によって又はｐＨ８，０に調整して
バシルスサプテイリスＡＴＣＣ６６３３を接種したカン
テンを使用するバイオオートグラフによって検出するこ
とができる。

Ｃ６単離 ＤＬ−メチオニン（１，！Ｍ’μ）の存在下で生育した
アクチノマジュラルゾネンシス菌株Ｇ４５５−１０１の
発酵からの全体の液（１０ｔ　）を炭酸す）　ＩＪウム
でｐＨ８に調整し、濾過助剤としてのケイソウ土の存在
下で４１のｎ−ブクノールと２時間かくはんした。生成
混合物をＰ４し、有機相を分離して減圧下で濃縮し、油
状残渣をえた。この油状残渣を５ｋｅｌｌｙｓｏｌｖｅ
　Ｂ　（異性体ヘキサン類から成り６０〜６８℃の沸点
をもつ石油溶剤についての５ｋｅｌｌｙＯ口Ｃｏ、の商
標）と共にすりつぶし、ジエチルエーテルを加え、濾過
および乾燥後に４１の富化ルゾペプチン複合体をえた。

この富化ルゾペプチン複合体をＬｏｅｖおよびＧｏｏｄ
ｒｎａｎ　（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　　ｊｎ　　５ｅｐａｒ
ａｔｉｏｎ　　ａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　ｖ
ｏｌ、　３．　ｐ　７３．　１９７０　）に従って調製
した乾燥シリカゲルカラム上でクロマトグラフ処理した
。乾燥カラムシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ　：２８Ｏｒ）を
４０ｍ１の蒸留水の添加によって失活させ、３時間激し
くしんとうした後に更に３時間、キシレン−メチルエチ
ルケトン（１：１容量比）混合物１８＋＋＋／により平
衡化させた。次いでこのシリカゲルを１６０ゲージのＮ
ｙｌｏｎ　Ｃｏｐｏｌ　８（４Ｘ１００ｃｍ）カラムを
使用するカラムにガラスクールの助力により充てんした
。

このルゾペプチン複合体（４り）をキシレン−メチルエ
チルケトン（１：１容量比）の３０ｍ１にとかして濾過
し、減圧下での溶媒除去によってシリカゲル上に被覆し
、乾燥３１− カラムに適用した。このカラムを、流出液がカラムの床
より上を走行するまで、メチルエチルケトン−キシレン
−メタノール（５：５：１容量比）で展開した。３５　
Ｑ　ｎｍでのポータプルＵＶランプでカラムを観察して
、黄色螢光帯域をカットし、えられたシリカゲルをクロ
ロホルム−メタノール（１：１容量比）で溶出し、そし
て５ｉ０２（メチルエチルケトン−キシレン−メタノー
ル：５：５：１容量比）上での薄層クロマトグラフ（Ｔ
ＬＣ）分析の後に、ルゾペプチンＥ２を含む固体を集め
た（４９４■）。富化ルゾベブチンＥ２留分（４９４■
）をメチレンクロライドにとかし、シリカゲル上に被覆
し、そしてトルエン−メタノール勾配（０〜１０％）を
もつトルエン中で充てんした２×８０ｃｒｎのシリカゲ
ルカラムスラリー上でクロマトグラフ処理した。諸留分
を集めてシリカゲル（メチルエチルケトン−キシレン−
メタノール：５：５：１容量比）上でＴＬＣ３２− によって分析した。７％メタノールでの溶出でルゾベプ
チンＡと不純物をえた。次いでルゾベプチンＡとルゾペ
プチンＥ２（留分７１〜７５）の溶出を行ない純ルゾベ
プチンｇ２（１分７６〜８０）をえた。メチレンクロラ
イド−トルエンからの純ルゾベプチンＥ２の結晶化によ
り２２■の結晶ルゾベプチンＥ２をえた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＫＢｒ中でペレット化したときのルゾベプチン
Ｅ２の赤外吸収スペクトルを示し、横軸の上部は波長（
ミクロン）を、横軸の下部は波数（ｃｍ−’）を、そし
て縦軸は透過率１条）をそれぞれ表わす。 第２図はＣＤＣ／；３に溶解させたルゾベブチンＥ２の
プロトン磁気共鳴スプクトルを示す。 第３図はＣＤＣｉｓに溶解させたルゾベブチンＥ２のＣ
１３核磁気共鳴スペクトルを示す。 ３３− 第１頁の続き ０発　明　者　テレンス・ダブリュー・ドイルアメリカ
合衆国ニューヨーク州 ファイエツトビル・レッドフィ ールド・アベニュー２２４ （ｌ　　明　者　マリアンヌ・エフ・カマーアメリカ合
衆国ニューヨーク州 イースト・シラキューズ・ミル フォード・ドライブ１５５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　共生産物質を実質的に含まない、次式をもつ抗腫瘍
   抗生物質ルゾペプチンＥ２゜ １− ５２１− ２、アクチノマジュラルゾネンシスＡＴＣＣ３１４９１
   またはそのルゾペプチンＥ２生産突然変異体を炭素およ
   び窒素の同化曽を含む水性栄養培質中で浸漬好気性条件
   下に実質量のルゾベプチンＥ２が該培養媒質中で該微生
   物によって生産されるまで培養し、そして該ルゾベプチ
   ンＥ２　を該培養媒質から共生産物を実質的に含まない
   状態で単離することから成ることを特徴とする、次式を
   もつ抗腫瘍抗生物質ルゾペプチンＥ２の製造法。 ３− ３、　　Ｄ、Ｌ−メチオニン、Ｓ−メチル−システィン
   、Ｓ−エチル−Ｌ−システィン、Ｄ、Ｌ−エチオニン、
   Ｄ−メチオニン、Ｌ−メチオニン、アセチル−メチオニ
   ン、２−アミノエタンチオール、２−ヒドロキシ−４−
   （メチルチオ）酪酸、Ｄ、Ｌ−０−メチル−セリン、Ｌ
   −システィンおよびＬ−メチオニルグリシンから成る群
   からえらばれた硫黄含有化合物を発酵工程中の該栄養媒
   質に添加する特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、　　Ｄ、Ｌ−メチオニンまたはＳ−メチル−システ
   ィンを発酵工程中の該栄養媒質に添加する特許請求の範
   囲第２項記載の方法。