JPS62195373A - 抗生物質アエロカビン並びにアエロシアニジン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １１五Δ帆肛褒訪 本発明は、新規な抗生物質アエロモナスおよびアエロシ
アニジンならびに微生物アエロモナス・カビアエ（Ａｅ
ｒｏｍｏｎａｓ　ｃａｂｉａｅＸＡ　Ｔ　ＣＣＮｏ、５
３４３４）を培養することからなるそれらの製法に関す
る。

発明の構成と効果 アメリカン・タイプ・カルチュア・コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ）にＡＴＣＣＮｏ、５３４３４として寄託さ
れている微生物アエロモナス・カビアエ（Ａｅｒｏｍｏ
ｎａｓ　ｃａｂｉａｅ）ＳＣ＋４０３０の菌株を培養し
て抗生物質の混合物を産生ずる。該混合物の構成成分を
分別して、アエロカビンおよびアエロシアニジンと命名
する。

各成分はそれぞれダラム陽性菌に対する活性を持つ。

アエロモナスは、分析の結果、下記の化学構造＊ で示される［３Ｅ、６Ｆ、９Ｅ、ｌ　２α、１４β（Ｊ
ｔ　　）］−］１２−ヒドロキシ−１４−２−ヒドロキ
シウンデシル）−１０−メチル−２−オキソオキサンク
ロテトラゾカー３．６．９−トリエン−４−酢酸である
。上記の名称中の星印は、ヒドロキシウンデシル側鎖の
２位が、中心核中の１２位のヒドロキシ基と同じ偏光力
（ｃｈｉｒａｌｉｔｙ）を持つことを示す。他の２個の
不斉中心は、その中心に関して正確に相対的な立体配置
にある。化合物は約［αコ■＝＋２５．１°（Ｃ＝０．
９、メタノール）の旋光度によってそのエナンチオマー
と区別される。

アエロシアニジンは、下記の化学構造式：で示される［
２α（Ｒ）、３α］−に−ヒドロキシ−３−イソソ、ア
ノ−３−メチルオキシランウンデカン酸である。上記の
名称中の星印は、上記構造式中、ａおよびｂで印す炭素
原子の偏光力が同じであることを示す。アエロシアニジ
ンの完全な立体配置は不明であるが、その旋光度が約［
α］！１＝−２０°（Ｃ＝０．５、メタノール）である
ことによりエナンチオマ―と区別される。

アエロカビンとアエロシアニジンの生産に使用する微生
物はアエロモナス・カビアエＳＣＩ４０３０である。該
微生物の二次培養物は、メリーランド州ロックビルのア
メリカン・タイプ・カルチュア・コレクションの永久コ
レクションから入手することかできる。その受入番号は
ＡＴＣＣＮｏ。

５３４３４である。本明細書中で記載および特徴づける
特定の微生物以外に、該微生物の突然変異体（例えばＸ
線、紫外線または窒素マスタードなどの使用によって生
じる突然変異体）も、これを培養してアエロカビンおよ
びアエロシアニジンを生産しうろことを理解すべきであ
る。

アエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０は水性試料にュ
ージャージー州アラマツチ・マウンテン・ステート・パ
ーク（Ａｌｌａｍｕｃｈｙ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　５ｔａ
ｔｅ　Ｐａｒｋ）にて入手）から下記のようにして単離
することができる。

該試料を下記組成の寒天上に塗抹する。

トリプトン　　　　　　　　　　　　１０．０ｇグルコ
ース　　　　　　　　　　　　　５．０ｇパイル・ソル
ト（Ｂ　ｉｌｅ　５ａｌｔｓ）＃　３［ディフコ・ラボ
ラトリーズ（ＤＨｃ。

Ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）製］　　　　　　　　　
１．５ｇ寒天　　　　　　　　　　　　　　１５．０ｇ
蒸留水　　　　　　　　　　全ｆｆｉ１０００ｍＱ該培
地をｐＨ約６．７に調整し、滅菌濾過したシクロへキシ
ミド（１％水溶液）１０．０ｍｆｆを加え、オ−トクレ
ーブ中１２１’Ｃで３０分間殺菌する。

２５℃で４８〜７２時間培養後アエロモナス・カビアエ
ＳＣＩ４０３０のコロニーを単離する。

単離したコロニーをそれぞれ以下の組成の寒天培地に接
種する。

酵母抽出物　　　　　　　　　　　　５．０ｇグルコー
ス　　　　　　　　　　　　　５．０ｇＭｇ５Ｏ，・７
Ｈ，ＯＯ，１ｇ ＦｅＳＯ４・７ＨｔＯＯ，１ｇ 土壌抽出濾液＊　　　　　　　　２００．ｈ１２寒天　
　　　　　　　　　　　　　１７．５ｇ水道水　　　　
　　　　　　　　８００．０ｍ１２＊）該土壌抽出濾液
は下記のようにして調製する。水道水（１：　２　、ｖ
／ｖ）に土壌を懸濁し、沸騰せしめ、次いで約６０分間
煮沸をつづける。冷却後、抽出物をチーズクロス（ｃｈ
ｅｅｓｅ　ｃｌｏｔｈ）で濾過し、次いで遠心分離して
大部分の残留固体を除去し、最後にワットマンＮＯ３４
の濾紙で濾過する。得られる液体をオートクレーブ中１
２１’Ｃで２０分間殺菌する。

培地をオートクレーブ中１２１’Ｃで３０分間殺菌する
。アエロモナス・カビアエＳＣＩ４０３０は単毛性極鞭
毛によって運動するダラム陰性桿菌である。飼主の亜極
鞭毛が観察されることもある。

該微生物はチトクロームオキシダーゼ陽性であり、ガス
を発生せず発酵的にブドウ糖を分解する。バイブロスタ
ット（ｖｉｂｒｏｓｔａｔ）　２　、４−ジアミノ−６
゜７−ジイツプロピルプテリジンに対して耐性がありデ
オキシリボヌクレアーゼ陽性である。これらの特徴は該
微生物がアエロモナス属に属することを示す。

該微生物アエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０は上述
の重要な特性によって、アエロモナス・ヒドロフィリア
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉａ）およ
びアエロモナス・ツブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　５ｏ
ｂｒｉａ）とは区別され、アエロモナス・カビアエの特
性にマツチしている。すなわちこの属の２つの他の種で
あるアエロモナス・ヒドロフィリアおよびアエロモナス
・ツブリアは運動性があり、エスクリン加水分解および
ｌ−アラビノース利用性が陽性である。

アセトイン生成、ブドウ糖からのガス生成およびシステ
ィンからの硫化水素生成は総て陰性である。

従ってアエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０は、アエ
ロモナス・カビアエと同一であり、Ｍ、ボボフ（Ｍ、Ｐ
ｏｐｏｆ４）によるアエロモナス・カビアエの記載［バ
ージニーのマニュアル・オブ・システマティ”ｌり・バ
クテリオロジー（Ｂ　ｅｒｇｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａｌ
ｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）、上、Ｎ、Ｒ，クリーブ（Ｎ、Ｒ，Ｋｒｉｅｇ）お
よびＪ、Ｇ、ホルツ（Ｊ、Ｇ。

Ｈｏ１ｔ）編、ウィリアムズ・アンド・ウイルキンス（
Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ）、バルチ
モア、メリーランド、５４６〜５４７頁、１９８４年コ
に従って、アエロモナス・カビアエと同定される。

次に本発明に係る新規抗生物質の生産について説明する
。

抗生物質アエロモナスおよびアエロシアニジンは、アエ
ロモナス・カビアエＡＴＣＣＮｏ、５３４３４を同化し
うる炭素源および窒素源を含有する水性栄養培地にて通
気撹拌条件下室温もしくは室温付近の温度で培養して生
産することができる。

該培地に実質的な抗生活性が付与されるまで通常約１８
〜４８時間、好ましくは約２４時間発酵を行なう。

抗生物質単離の手順は、例えばスタフィロコッカス・ア
ウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅ
ｕｓ）Ｆ　ＤＡ２０９Ｐを用いて、通常手段であるペー
パーディスク−寒天拡散分析によりモニターすることが
できる。更に、アエロシアニジンはノーベルト・ヘルム
スドルフ（Ｓ　１ｅｖｅｒｔ　−Ｈｅｒｍｓｄｏｒｆ）
法［Ｐ、Ａ。

Ｓ、スミス（Ｐ、Ａ、Ｓ、Ｓｍ１ｔｈ）著″Ｔｈｅ　Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆ　０ｐｅｎ−Ｃｈａｉｎ　Ｏｒｇ
ａｎｉｃ　Ｎｉｔｒｏｇｅｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”、
ベンジャミン、ニューヨーク、１９６５年、上、２２５
頁コ（イソシアン化物で青色を呈する）によって比色分
析してモニターすることもできる。

試験サンプル０．１−をメタノール：酢酸＝　９　：　
ｌ　（ｖ／Ｖ）中の３．３’　、５．５’−テトラメチ
ルベンジジンｌｊ＋９／ｌｌ１ｅ溶液と酢酸銅ｌ水和物
（３ｒｎ９／ｍＱ）水溶液の等容量混合して調製した試
薬０　、９　ｍｆ！に加える。メタノールと該試薬から
調製したブランクに相関する３７０ｎｉにおける吸光度
の増加は、アエロシアニジンの存在量に比例する。

アエロカピンは、既存の技術を用いて発酵培地から分離
、精製することができる。例えば、培養液を遠心して産
生微生物の細胞を除去する。上澄液を酸（例えば塩酸）
でｐＨ５に調整し、酢酸エチルで抽出し、次いで抽出液
を減圧下に濃縮してシロップ状にする。

該シロップを、例えばヘキサン−クロロホルム、クロロ
ホルム、最後にクロロホルム−メタノールを溶媒として
用いてケイ酸カラムクロマトグラフィーに付す。スタフ
ィロコッカス・アウレウスもしくはスタフィロコッカス
・エビデルミゾイス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　
ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対して通常使用される手段
であるペーパーディスク−寒天拡散分析によって生物学
的活性が検出された両分を合せ、減圧下に濃縮し、次い
で残渣をセファデックスＬＨ−２０（アルキル化架橋デ
キストランゲルビーズ、ファルマシア・ファイン・ケミ
カルズ・ＡＢ。

ウプサラ、スウェーデン国）上のクロマトグラフィーに
付し、クロロホルム：メタノール：ヘプタン＝１　：　
３　：　６　（ｖ／ｖ／ｖ）の混合溶媒で溶離する。活
性画分をプールし、減圧下に濃縮し、次いでセルロース
上、ヘプタンおよびヘプタン−エーテルでクロマトグラ
フィーに付して更に精製する。プールした活性画分をセ
ルロース上で再クロマトグラフィーし、その活性溶出液
を濃縮結晶化させて高純度のアエロカビンが得られる。

発酵培地からアエロカピンを分離し、アエロカビンとア
エロシアニジンを収集する他の方法は、発酵培養液のｐ
Ｈを６に調整し、細胞や他の粒子状物を遠心分離するこ
とから成るものである。透明な上澄液を酢酸エチルで抽
出し、得られる有機層（抗生物質活性を有する）を減圧
下に濃縮し、次いで残渣をヘキサン：トルエン；メタノ
ール：水＝３：３：４：２に分配する。減圧下に濃縮し
て下相からメタノールを除去し、抗生物質活性を含有す
る水溶液を得る。抗生物質の混合物を酢酸エチルにて抽
出し、次いでヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水＝
ｌ＋ｌ：１：１で向流クロマトグラフィーに付して精製
する。本操作中にアエロカピンからアエロシアニジンが
分離される。各抗生物質を含有する両分をプールする。

アエロシアニジンを含有する画分はアセトニトリル−水
の直線勾配を利用した粗孔性スチレン−ジビニルベンゼ
ンポリマーでの逆相クロマトグラフィーに付すことによ
りさらに精製する。活性画分を合せて酢酸エチルで抽出
し、次いで減圧下に濃縮して、アエロシアニジンを無色
結晶固体で得る。アエロカビンを含有する画分ち上記と
同様にして精製できる。

アエロカビンおよびアエロシアニジンは酸性物質であり
、種々の有機および無機塩基と塩を形成する。薬理学的
に許容し得る塩が好ましいが、他の塩でも、例えば、抗
生物質の単離に利用できる。

抗生物質の塩も本発明の範囲に含まれ、既存の技術を用
いて容易に調製される。これらの塩としては、例えば、
アンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナトリウムおよびカ
リウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウムおよ
びマグネシウム塩など）お上びノシクロヘキシルアミン
、ベンザチン、ヒドラバミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカ
ミンのような有機塩基との塩などが挙げられる。

以下に実施例を挙げて、アエロカビンおよびアエロシア
ニジンの製造法をより具体的に説明する。

実施例１ アエロカピンの産生 酵母エキス、グルコース、土壌抽出物、塩類を含む斜面
寒天培地にアエロモナス・カビアエ、ＡＴＣＣＮｏ、５
３４３４を植付け、２５℃で一夜培養し、これを、５０
０ｍ１２のエルリンマイヤーフラスコ中１００ｍ２部の
水性培地に接種する。発芽培地に組成は以下の通りであ
る。

酵母エキス　　　　　　　　　　４．０ｇ麦芽エキス　
　　　　　　　　ｔ　０．０ｇブドウ糖　　　　　　　
　　　　　４．０ｇ蒸留水　　　　　　　　全量１００
０ｍ１２ｐＨ７，３に調整した培地を使用前に１２１℃
、蒸気圧１５１ｂｓで１５分間殺菌する。接種した発芽
フラスコを、２インチストローク、３００　ｒｐｌｎで
回転する回転振盪機にて２５℃で約２４時間培養する。

この発芽フラスコから、その１％（Ｖ／Ｖ）を５００ｍ
Ｑエルレンマイギンマイヤーフラスコ中成分を含有する
培地１００ｍ１２部に移す。

酵母エキス　　　　　　　　　ｔｏ、０ｇ麦芽エキス　
　　　　　　　　Ｉ　０．０ｇペプトン　　　　　　　
　　　　１．０ｇデキストロース　　　　　　　　２０
．０ｇ蒸留水　　　　　　　　全量１０００ｍ１２ｐＨ
７に調整した培地を使用前に１２１ｔ’、蒸気圧２５１
ｂｓで１５分間殺菌する。接種した発芽フラスコを、２
インチストローク３００　ｒｐｍで回転する回転振盪機
にて２５℃で約２４時間培養する。

フラスコの内容物をプールし、プールした培養液を遠心
分離して、ｐＨ６、６の上澄液的１６０Ｑを得る。その
上澄液を６Ｎ塩酸でｐＨｓ、ｓに調整し、酢酸エチル８
０１２で２回抽出する。抽出液をプールし、次いで４０
℃以下の温度で減圧濃縮し゛て１４．６ｇのシロップを
得る。

該シロップ１４．６ｇをヘキサン：クロロホルム＝　Ｉ
　：　Ｉ　（ｖ／ｖ）にてケイ酸カラム（２，５ｃｍｘ
５４ｃ謂）に通ず。ヘキサン：クロロホルム＝　ｌ　：
　ｌ　（ｖ／ｖ）５００ｍ１２で溶出を開始し、次いで
ヘキサン：クロロホルム−１：２（ｖ／ｖ）５００ｍ９
、クロロホルム３ｉ２、最後にクロロホルム：メタノー
ル＝９９：１（ｖ／ｖ）　５００　ｍ（ｌにて溶出する
。活性画分を集め、プールして減圧濃縮し、残渣４ｇを
得る。この残渣をメタノール；クロロホルム：へブタン
＝　１　：３　：６（ｖ／ｖ／ｖ）からなる溶媒２０Ｉ
Ｉ１ｇに溶解し、次いで同じ溶媒でセファデックスＬＨ
−２０カラム（２゜５　Ｃｆｆ１Ｘ　５０　ｃｍ）にて
クロマトグラフィーに付す。

この同じ溶媒を用いて生物学的活性物質を溶出し、集め
て減圧濃縮して残渣１．１ｇを得る。この残渣をヘプタ
ン２０ＩＩＩＩ２に溶解し、ヘプタンにてセルロースカ
ラム（ワットマンＣＦ　１１．　２．５　Ｘ　２８ｃｍ
）に通す。５００ｍＱずつのへブタンおよびヘプタン：
エーテル＝　ｌ　：　１　（ｖ／ｖ）をカラムに通して
溶出する。プールした溶液を濃縮し、活性画分を石油エ
ーテル（３５〜３６℃）にてセルロースカラム（ワット
マンＣＦ　ＩＬ　２．５　Ｘ　２５ｃｍ）で再クロマト
グラフィーに付す。５００−ずつの石油エーテル、石油
エーテル：へブタン＝　１：　１　（ｖ／ｖ）、ヘプタ
ン、ヘプタン：エーテル＝　１　：　１　（ｖ／ｖ）、
最後にエーテルで溶出して、活性成分を回収する。プー
ルされた活性画分を減圧濃縮し、得られた残渣０．２ｇ
を少量のへブタン：酢酸エチル＝　９　：　１　（ｖ／
ｖ）に溶解し、それからアエロカピンの結晶（１００Ｉ
ＩＦ）を得る。

アエロカビンは無色酸性物質であり、以下の物理化学的
性質を有する。

実験式Ｃ５ｔＨａ−Ｏｓ、分子１４６４（高分解能ＦＡ
Ｂマススペクトロメトリー）、融点１２７℃１、［α］
２２Ｄ＝＋２５．１’　（Ｃ＝０．９、メタノール）、
’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ２＊）δ＝０．８７（３ｆ−１，
ｔ、Ｊ＝６゜８Ｈｚ）、　　１．２６（ｃａ、１３Ｈ）
、　　１．４５（ｃａ、３Ｈ。

ｍ）、１．４９（３Ｈ，Ｓ）、１．６０（ＩＨ，ｄｄｄ
、Ｊ＝２゜６．８．６，１４．６Ｈｚ）、１．８８（２
Ｈ，ｍ）、２．０２（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１１．７，１１
．７Ｈｚ）、２．２２（ＩＩ−１，ｄｄ、Ｊ＝３．４，
１２．０Ｈｚ）、２．２５（ｌ　Ｈ，ｄ。

Ｊ＝１１．３Ｈｚ）、２．５０（２１−１，ｍ）、２．
５８（１Ｈ，ｄｄｄ、Ｊ＝４．４．ｌ　３．２．ｃａ、
１８．４Ｈｚ）、３゜１３（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１５．２Ｈ
２）、３．２０（Ｉ　Ｈ，ｄ。

去＝１５．２Ｉ−１ｚ）、３．６６（ＩＨ，ｍ）、３．
８８（ＩＨ，ｍ）、４．０１（Ｉ　Ｈ，ｄｄ、止＝８．
５，１３．２Ｈｚ）、５．１１（Ｉ　Ｈ，ｍ）、５．２
６（Ｉ　Ｈ，ｍ）、５．２６（ＩＨ，ｄｄｄ、Ｊ＝４．
７，８．０，１７．０Ｈｚ）、５．３７（ＩＨ，ｄｄｄ
、Ｊ＝５．２，８．７，１４．０Ｈｚ）、５．７６（Ｉ
Ｈ，ｓ）、６．０２ｐｐｍ（２〜３Ｈ，ブロードｓ）；
”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩ２ｓ）δ＝１４．０．１６．４，
２２．６゜２５．４，２９．２，２９．５（３Ｇ）、３
０．９，３１゜８．３４．６，３７．１，３８．４，３
９．５，４４．８゜４９．４，６５．６，６９．１，７
０．９，１２０．６，１２４．９．Ｉ　２５．６，１２
９．２，１３３．７，１５２゜１、　ｌ　６５．２，１
７４．０ｐｐｍ；Ｉ　Ｒ（ＫＢｒ）３４５０゜３０２５
．２９５５，２９２７，２８５６，１７２１゜１６９９
．１６４９，１３７７．１２３５．１＋８７゜１１５６
．１　＋１９．１０６２．９６５ｃｍ−’。

本抗生物質はメタノール、アセトン、酢酸エチルに易溶
性、ヘプタンに難溶性および水に不溶性である。

アエロカピンの生物学的活性 アエロカピンの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を寒天希釈
法で判定する。試験菌を冷凍ストックから準備し、最終
レベルが１０７０　Ｆ　Ｕ／ｍＱ（ＣＦ　Ｕはコロニー
形成単位）になるまで希釈する。アエロモナスを適当な
希釈剤に溶解して濃度を！０００μｇ／ｍ（ｌにする。

酵母ビーフブイヨン（ディフコ）で２倍に希釈をくり返
して、１０００μｇ／　ｍ（ｌから０．５μｇ／ｌｌｌ
Ｉ２の範囲の液体を得る。各希釈液の１．５−のサンプ
ルをそれぞれペトリ皿に入れ、ｋ−１０寒天（ビーフェ
キス１　、５　ｇ、酵母エキス３゜０ｇ、ペプトン６　
、０　ｇ１デキストロース１．Ｏｇ。

寒天１５．０ｇに蒸留水を加えて１０１００Ｏとじたも
の）を加える。寒天中の最終薬剤濃度は１００μｇ／ｍ
Ｑから０．０５μｇ／ｍＩ２の範囲である。寒天のみを
含有する菌成長コントロール平板を用意し、試験平板の
前後に接種する。デンリー・マルチポイント接種器（Ｄ
ｅｎｌｅｙ　ＭｕＨ４ｐｏｉｎｔ　Ｉ　ｎｏｃｕｌａｔ
ｏｒ）（各菌約０．００１＋ｎ（！を接種し得る）で各
平板の表面に菌をつけて、寒天表面の最終接種レベルが
１０’ＣＦ’Ｕになるようにする。

平板を３７℃で１８時間培養し、次いでＭＩＣを判定す
る。ＭＩＣとは菌の成長を阻止する化合物の最低濃度で
ある。

寒天希釈分析の結果は以下に示す通りである。

スタフィロコッカス・アウレウス　　２３９９　　　　
６．３スタフイロコツカス・アウレウス　１００１６　
　　　３．１「テトラサイク・ルＲ］＊＊ スタフィロコッカス・アウレウス　　９５９３　　　　
６．３［ペニシリンＲコ スタフィロコッカス・アウレウス　１０８２０　　　　
３．１［エリスロマイシンＲ］ ［ペニシリン　コ エシェリシア・コリ　　　　　　　　１０８５７　　　
　１２．５＊）ＳＣＮｏ、とはニューシャーシー、プリ
ンストンのイー・アール・スクイブ・アンド・サンズ・
インコーホレイテッドの微生物コレンジョンにおける番
号である。

＊＊）［］は微生物が括弧内に示す抗生物質に対して耐
性を有することを意味する。

実施例２ アエロシアニジンの産生 酵母エキス　　　　　　　　　　　　５，０ｇグルコー
ス　　　　　　　　　　　　　５．０ｇＭｇ５Ｏ，・７
Ｈ，ＯＯ，１ｇ ＦｅＳＯ４・７ＨｔＯＯ，１ｇ 土壌抽出濾液＊　　　　　　　　　２００ｍＱ寒天　　
　　　　　　　　　　　　１７．５ｇ水道水　　　　　
　　　　　　　　８００ＩＩｌｅ＊）土壌抽出濾液は土
壌懸濁水道水を沸騰させ、約６０分間煮沸を続けて調製
する。冷却後、抽出液をチーズクロスを通して濾過し、
次いで遠心分離して大部分の残留固体を除去し、最後に
ワットマンＮｏ、４濾紙で濾過する。得られる液体をオ
ートクレーブ中！２１℃で２０分間殺菌する。

上記の組成の斜面寒天培地にアエロモナス・カビアｚＡ
Ｔｃｃ　Ｎｏ、５３４３４を植付け、２５℃で一夜培養
して、５００ｍ１２エルレンマイヤーフラスコ中の水性
培地１ｏａｄ部に接種する。この培地の組成は以下に示
す通りである。

トリプトン　　　　　　　　　　　　　５．０ｇ麦芽エ
キス　　　　　　　　　　　　３．０ｇグルコース　　
　　　　　　　　　　１０．０ｇ酵母エキス　　　　　
　　　　　　　３．０ｇ蒸留水　　　　　　　　　　　
全ｆｆｉ１０００ｍｆ２培地は使用面に１２１’Ｃ１蒸
気圧１５１ｂｓで１５分間殺菌する。

接種したフラスコを２インチストローク、３０ｒｐｍで
回転する回転振盪機にて２５℃で約２４時間培養する。

これらのフラスコから増殖した菌株を使用して、次に、
５００ｍＣエルレンマイギンマイヤーフラスコ中同組成
の新しい培地１００ｍ（！に接種する。これらのフラス
コを前記と同条件下に回転振盪機にて２５℃で培養する
。この増殖菌を接種源（１，５％、ｖ／ｖ％）とし、３
００１２ステンレススチール容器中の培地２５０１２に
接種する。該培地の組成は以下に示す通りである。

トリプトン　　　　　　　　　　　　　５．０ｇ麦芽エ
キス　　　　　　　　　　　　３．０ｇセルロース水和
物　　　　　　　　１１．０ｇニーコン（Ｕｃｏｎ）Ｌ
８６２５　　　　　０．５ｍ（！蒸留水　　　　　　　
　　　全量１０００ｍ１２培地は使用前に１２１’Ｃ１
蒸気圧１５１ｂｓで３０分間殺菌する。

撹拌速度１３０　ｒｐｍ、空気流１１００Ｆ、圧力１０
ｐｓｉｇの条件下、２５℃で２４時間発酵を継続する。

発酵完了後、培養液を収集する。３Ｍリン酸を加えてｐ
Ｈ’６に調整し、１１℃まで冷却し、遠心分離して細胞
や他の粒状物質を除去する。透明な上澄液を酢酸エチル
！２５Ｑの入った容器に撹拌しながら速やかに加える。

遠心分離して有機相と水性相を分離せしめ、透明な上澄
液５８＆を２０℃以下で２１２になるまで減圧濃縮する
。濃縮中に形成した固体を濾去する。次いで透明な濾液
をｌ）Ｈ６、０の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液２Ｑ
１次いで８００ｍ（ずつの水で３回洗浄する。得られた
酢酸エチル層１．６ｅを減圧濃縮して残渣８７ｇを得、
ヘキサン：トルエン：メタノール：水＝３・３：　４　
：　２　（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）　８５０　ｍＱ／相にて、
下相を移動相として、分液ロート２個を用い、移し換え
操作３回の方式による向流分配を行う。分配完了後、下
相をプールし、減圧濃縮してメタノールを除去する。得
られる水溶液を酢酸エチル３５０ＩＩｌ（２で抽出し、
有機相を分離し、次いで減圧濃縮して残渣４．１ｇを得
る。この残渣をヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水
＝　Ｉ　：　Ｉ　：　１　：　ｌ　（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）
からなる分配系の上相と下相それぞれ１０ｄに溶解し、
この溶媒系において、容量３３０ｍρの多層テフロンチ
ューブコイル（１、６ｍｍ、　ｉ、ｄ、）を用いた８０
０ｒｐｍで回転する高速向流クロマトグラフ（Ｐ、Ｃ，
インコーホレイテッド、ポトマック、Ｍｄ、）にてクロ
マトグラフィーに付す。この系では、上相が１分間に４
ｍＱ流出する。アエロシアニジンは２５０〜３５０ｍ１
２の間に現れる。アエロシアニジンを含有する画分を合
せ、等量の水で洗浄し、水性相を酢酸エチルで逆洗浄す
る。有機溶媒プール２５０ｍＱを減圧下に濃縮して残渣
６６９ｘ９を得る。この残渣をアセトニトリル：水＝３
ニア（ｖ／ｖ）１０ｎ＋Ｉ２と混合し、得られる濁った
混合物をアセトニトリル：水＝３ニア（ｖ／ｖ）に溶解
して、２．５Ｘ２０ｃｍのＭＣＩ　　ＧＥＬ　　ＣＨＰ
２０Ｆ樹脂（マクロ網状スチレン−ジビニルベンゼン共
重合体、王菱化成工業（株）、日本国）カラムに通す。

アセトニトリル／水を３０〜７０％の範囲の直線勾配で
２．２１２以上、流速２　ｍＱ／分でカラムに通し溶出
する。アエロシアニジンは７００〜７６０＋ｎ２の間に
溶出する。

活性画分をプールし、６０ｍｆｆの水で希釈する。希釈
プールを酢酸エチルで２回抽出する。２つの酢酸エチル
抽出物を合せ、水で２回洗浄する。得られる酢酸エチル
溶液１７０ｍｆ２中には１３８．４ｉ９のアエロシアニ
ジンが含まれる。抗生物質は固体状態で安定度が低くな
るため、アエロシアニジンは、この溶液中で４℃にて保
存する。少量のサンプルを窒素気流中で濃縮乾燥すると
結晶残渣が得られ、５９から６２℃で融解する。上記の
工程で得られる物質の最高融点は６３．５〜６５．５℃
であった。

アエロシアニジンは無色の酸性物質であり、以下に述べ
るような物理化学的性質を有する。

［αコ１１＝　２０°（Ｃ＝０．５．メタノール）、’
ＨＮＭＲ（ＣＤ　Ｃｌ２３）δ１．２〜１．７５（１６
Ｈ）、１．７６（３Ｈ，ｓ）、２．３４（２Ｈ，ｔ、Ｊ
＝７．３，７゜３Ｈｚ）、２．８４（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８
．ＩＨ２）、３．６６（ｌＨ，ｔｄ、Ｊ＝８．０，８．
０．４．５Ｈｚ）、生６゜８ｐｐｍ（２Ｈ，ブロード）
；１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣＱｓ）δ２２．１，２４．６，
２４．６，２９．０，２９．１．２９゜２．２９．３，
２９．３，３４．０，３４．６，６４．８゜６５．２（
ブロード）、６９．６，１６１．０．＋　７９゜６ｐｐ
ｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）２９７１，２９３４，２９１６゜２
８５３．２１４２，１７１２．Ｉ　ｌ　１４．＋０８６
゜８８６．８１０ｃｍ−’；質量スペクトル（ＦＡＢ）
２８４．＋８６６［計算値Ｃ＋５ＨｔｓＮＯ＊（Ｍ＋Ｈ
）：２８４．１８６２］、ＵＶ（メタノール）端吸収。

アエロシアニジンの生物学的活性 アエロカピンの生物学的活性測定の際に述べた方法を用
いて、アエロシアニジンの生物学的活性スタフィロコッ
カス・アウレウス　　１２７６　　　＜０．０５スタフ
イロコツカス・アウレウス　　２３９９　　　＜０．０
５スタフイロコツカス・アウレウス　　２４００　　　
＜０．０５ニジエリシア・コリ　　　　　　　　８２９
４　　　＞５０．０ニジエリシア・コリ　　　　　　　
　１０８９６　　　２５．０エンエリシア・コリ　　　
　　　　　１０９０９　　　　１．６特許出願人　イー
・アール・スクイブ・アンド・サンズ・インコーホレイ
テッド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、約［α］＾２＾２＿Ｄ＝＋２５．１°（Ｃ＝０．９
   、メタノール）の旋光度を有する［３Ｅ、６Ｅ、９Ｅ、
   １２α、１４β（Ｒ＾＊）−１２−ヒドロキシ−１４−
   （２−ヒドロキシウンデシル）−１０−メチル−２−オ
   キソオキサシクロテトラデカ−３，６，９−トリエン−
   ４−酢酸もしくはその医薬的に許容しうる塩。 ２、アエロモナス・カビアエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｃ
   ａｂｉａｅ）ＳＣ１４０３０（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．５３４
   ３４）を、同化しうる炭素および窒素源を含有する水性
   栄養培地にて通気撹拌条件下、該培地に実質的な抗生物
   質活性が付与されるまで培養し、目的化合物を単離する
   ことを特徴とする、約［α］＾２＾２＿Ｄ＝＋２５．１
   °（Ｃ＝０．９、メタノール）の旋光度を有する［３Ｅ
   、６Ｅ、９Ｅ、１２α、１４β（Ｒ＾＊）］−１２−ヒ
   ドロキシ−１４−（２−ヒドロキシウンデシル）−１０
   −メチル−２−オキソオキサシクロテトラデカ−３，６
   ，９−トリエン−４−酢酸の産生方法。 ３、微生物アエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０を約
   ２５℃で培養する前記第２項記載の方法。 ４、約［α］＾２＾３＿Ｄ＝−２０°（Ｃ＝０．５、メ
   タノール）の旋光度を有する［２α（Ｒ＾＊）、３α］
   −κ−ヒドロキシ−３−イソシアノ−３−メチルオキシ
   ランウンデカン酸もしくはその医薬的に許容しうる塩。 ５、アエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０（ＡＴＣＣ
   　Ｎｏ．５３４３４を、同化しうる炭素および窒素源を
   含有する水性栄養培地にて通気撹拌条件下、該培地に実
   質的な抗生物質活性が付与されるまで培養し、目的化合
   物を単離することを特徴とする、約［α］＾２＾３＿Ｄ
   ＝−２０°（Ｃ＝０．５、メタノール）の旋光度を有す
   る［２α（Ｒ＾＊）、３α］−κ−ヒドロキシ−３−イ
   ソシアノ−３−メチル−オキシランウンデカン酸の産生
   方法。 ６、微生物アエロモナス・カビアエＳＣ１４０３０を約
   ２５℃で培養する前記第５項記載の方法。