JPS59162897A - 高純度ラミナリビオ−スの製造法 - Google Patents
高純度ラミナリビオ−スの製造法Info
- Publication number
- JPS59162897A JPS59162897A JP3727683A JP3727683A JPS59162897A JP S59162897 A JPS59162897 A JP S59162897A JP 3727683 A JP3727683 A JP 3727683A JP 3727683 A JP3727683 A JP 3727683A JP S59162897 A JPS59162897 A JP S59162897A
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- Japan
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- glucose
- laminaribiose
- glucan
- solution
- sugar solution
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はβ−１，６−グルカン、例えばラミナリン、或
いにカードランなどに放線菌によって生産されるβ−１
，６−グルカン分解酵素を作用させてβ−１，６−グル
カンを加水分′Ｓさせて得られたグルコースとラミナリ
ビオースとｔ主成分とする糖液にグルコースのみを選択
的に資化しラミナリビオースヲ質化しない酵母を培養し
て該糖液中に混在しているグルコースを除去することに
より、純度の高いラミナリビオースを製造する方法に関
するものである。
いにカードランなどに放線菌によって生産されるβ−１
，６−グルカン分解酵素を作用させてβ−１，６−グル
カンを加水分′Ｓさせて得られたグルコースとラミナリ
ビオースとｔ主成分とする糖液にグルコースのみを選択
的に資化しラミナリビオースヲ質化しない酵母を培養し
て該糖液中に混在しているグルコースを除去することに
より、純度の高いラミナリビオースを製造する方法に関
するものである。
従来、β−１，６−グルカンを酵素−によって糖化する
ことは公知であるが、その糖化液は単に濃縮するだけで
は純度の高いラミナリピオースを得ることは出来なかっ
た。即ち選択的にラミナリピオースのみを生成させる酵
素は未だ知られておらず、それ以外に必ずグルコースや
少糖類をも副生ずる。
ことは公知であるが、その糖化液は単に濃縮するだけで
は純度の高いラミナリピオースを得ることは出来なかっ
た。即ち選択的にラミナリピオースのみを生成させる酵
素は未だ知られておらず、それ以外に必ずグルコースや
少糖類をも副生ずる。
副生物の分離にはカラムクロマトダラ・フィーが用いら
れるが、この方法は実験室的であって設備、工程面、規
模などの点から工業的な方法であると言うことは出来な
い。
れるが、この方法は実験室的であって設備、工程面、規
模などの点から工業的な方法であると言うことは出来な
い。
またβ−１，６−グルカンを酸によって加水分解させる
場合には分解が不充分でめれば少糖類の混合物となるし
、他方過分解となればグルコニスの含量が増加し純度が
低下するので不適当である。
場合には分解が不充分でめれば少糖類の混合物となるし
、他方過分解となればグルコニスの含量が増加し純度が
低下するので不適当である。
本発明は之等の欠点を克服した全く新規な方法に関する
ものであって酵素と酵母との特性全夫々有効に組合わせ
ることによってラミナリビオースを工業的に製造するこ
とを可能ならしめたものである。
ものであって酵素と酵母との特性全夫々有効に組合わせ
ることによってラミナリビオースを工業的に製造するこ
とを可能ならしめたものである。
以下に本発明を詳細説明する。
本発明に、
■ 放線菌によるβ−１，３−グルカンの糖化■ 副生
グルコースの酵母による除去 の２工程に大別される。
グルコースの酵母による除去 の２工程に大別される。
先ず第■工程について述べる。
絃に使用するβ−１，３−グルカンは農林産物、海産物
および生化学的方法などにより製造されたものであり、
β−１，６−グルコシド結合量の多いもの程望ましい。
および生化学的方法などにより製造されたものであり、
β−１，６−グルコシド結合量の多いもの程望ましい。
糖化法とじてばβ−１，６−グルカン含有培地に、土壊
より分離した放線菌を育生させ、この培養Ｆ液（酵素液
）全β−１，６−グルカンに作用させて循化液を得る。
より分離した放線菌を育生させ、この培養Ｆ液（酵素液
）全β−１，６−グルカンに作用させて循化液を得る。
酵素生産菌には放線菌の中で酵素生成能が高く、更にβ
−１，６−グルカンからのラミナリビオース生成１の多
い菌株（酵素）を選択して使用することが望ましい。
−１，６−グルカンからのラミナリビオース生成１の多
い菌株（酵素）を選択して使用することが望ましい。
選択の不法としては、例えばカードラン １．５％。
７Ｈ２００，０５％、 ＮＨ４ＮＯｘ ０．２％、
コ−ｙ スｆ （八 一プリカー 〇、５チになる様に水道水に各栄養源を加
えた培地１００ｎ′Ｌｔを５００−を容肩付フラスコに
分圧し、常法に従って殺菌、冷却後、土壌から分離した
放線菌を接種し、ろ５’Ｃにて４日間振盪培養全行ない
、培養後、濾過法により除菌し、得られたＦ液を酵素液
として使用する。次に糖化法としてはカードラン１００
ａｙｔ−Ｌ字管に採ボレ、このものに酵素液１０ＷＬ、
ａ全加え、ｐＨ全６に調整した後５０℃、２４時間振盪
反応全行なわせ、その上面液についてゲンチオビオース
の生成状況全ペーパークロマトグラフィーで観察する。
コ−ｙ スｆ （八 一プリカー 〇、５チになる様に水道水に各栄養源を加
えた培地１００ｎ′Ｌｔを５００−を容肩付フラスコに
分圧し、常法に従って殺菌、冷却後、土壌から分離した
放線菌を接種し、ろ５’Ｃにて４日間振盪培養全行ない
、培養後、濾過法により除菌し、得られたＦ液を酵素液
として使用する。次に糖化法としてはカードラン１００
ａｙｔ−Ｌ字管に採ボレ、このものに酵素液１０ＷＬ、
ａ全加え、ｐＨ全６に調整した後５０℃、２４時間振盪
反応全行なわせ、その上面液についてゲンチオビオース
の生成状況全ペーパークロマトグラフィーで観察する。
なお酵素活性のびｊ定はカードラン ５０−メ、水５九
ｔ、緩衝液（ｐＨ６）４ｍ、ｔ＜Ｌ字管に採取し、酵素
液１ａ７ｆ加えて５０℃、３０分間振盪反応全行なわせ
反応液１０．ｘ７中に生成した還元糖の乳１数を以て表
示する。
ｔ、緩衝液（ｐＨ６）４ｍ、ｔ＜Ｌ字管に採取し、酵素
液１ａ７ｆ加えて５０℃、３０分間振盪反応全行なわせ
反応液１０．ｘ７中に生成した還元糖の乳１数を以て表
示する。
上記の如き測定方法によって測定した結果を次に示す。
菌株番号 １２３４’５６７
酵素活性（ｍ、ｙ） １６．３ １３．３ １２．８８
．８ ６．５２．５ ２．１上記結果から判る如く何れ
も本発明に使用可能ではあるが１．２．３．４．５．６
．７の順に酵素活性に差があることが判定される。
．８ ６．５２．５ ２．１上記結果から判る如く何れ
も本発明に使用可能ではあるが１．２．３．４．５．６
．７の順に酵素活性に差があることが判定される。
次に第■工程について述べる。
使用する酵母トシてはＣａｎｄｉｄａ属、 Ｐｉｃｈｉ
ａ属。
ａ属。
ＣｒｙｐｔＯＣＯＣＯｕｅ属、 ＥｎｄＯｍｙｃｏｐｓ
ｉｓ属、 Ｈａｎｓθｎｕ、／；ａ属。
ｉｓ属、 Ｈａｎｓθｎｕ、／；ａ属。
ｐｈｏａｏｔｏｚｕｚａ属、Ｓ６ｈｊ４０ＳａＣＣｈａ
ｒＯｍ７ＣｅＳ属。
ｒＯｍ７ＣｅＳ属。
ＴｏＡｕｔｏｐｓｉｓ属などの酵母中よりグリコース資
化能が高く、且つラミナリビオース金資化しな′い菌株
を選択して使用する。即ちグルコースおよびラミナリピ
オースを含む培地で酵母を培養し、グルコース貿化、ラ
ミナリビオース非資化の判定をペーパークロマトグラフ
ィーで行なって菌株全選択するのである。
化能が高く、且つラミナリビオース金資化しな′い菌株
を選択して使用する。即ちグルコースおよびラミナリピ
オースを含む培地で酵母を培養し、グルコース貿化、ラ
ミナリビオース非資化の判定をペーパークロマトグラフ
ィーで行なって菌株全選択するのである。
酵母の選択法
゛グルコースおよびラミナリビオースを各々２チ。
ペプトン ０．２％、酵母エキス ［３，３％。
ＫＨ２ＰＯ４０，１チ、 ＭｐＳＯＡ・７Ｈ２００，０
５％およびＣａＣ０Ｂ ｏ、２！条になる様に調製し
た培地６ｒｎ、ｔを試験管に分注し常法通り殺菌、冷却
後、酵母を接種し２８℃、４日間振盪培養を行ない１．
得られた培養液の遠心上澄液につきグルコース資化およ
びラミナリビオース非資化性の検定をペーパークロマト
グラフィーで行なう。
５％およびＣａＣ０Ｂ ｏ、２！条になる様に調製し
た培地６ｒｎ、ｔを試験管に分注し常法通り殺菌、冷却
後、酵母を接種し２８℃、４日間振盪培養を行ない１．
得られた培養液の遠心上澄液につきグルコース資化およ
びラミナリビオース非資化性の検定をペーパークロマト
グラフィーで行なう。
例えば使用し得る菌株として
Ｒ−１−２−１； Ｒｈｏｄｏｔｏ／！、ｕｒａ ｆｔ
ａｖａ 工ｉｏ ０００３Ｒ−１−２−３；Ｒｈｏｄｏ
、ｔｎｔｕｒａ ｆ、４ａｖａ 工ＦＯ０８９３Ｒ−ｉ
−２−４：Ｒｈｏｄｏｔｏ、４ｕｒａ ｆ７ａｖａ Ｉ
ＦＯＱ９ＱＱＲ−１−２−５；Ｒｈｏａｏｔｏ、３ｕｒ
ａ、 ｆ、／、ａｖａ 工Ｉ’００９１５Ｒ−１−２−
６；Ｒｈｏｄｏｔｏ７ｕｒａ ｆ７ａｖａ 工ＦＯ０９
１８６１−３−１−１；Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂθ工Ｆ００３５８ Ｓ−３−１−２； Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ ｐｏｍｂｅ工Ｆ００３４２ Ｓ；上からグルコースとラミナリビオースの標準品′Ｍ
；培地 などが挙げられる。
ａｖａ 工ｉｏ ０００３Ｒ−１−２−３；Ｒｈｏｄｏ
、ｔｎｔｕｒａ ｆ、４ａｖａ 工ＦＯ０８９３Ｒ−ｉ
−２−４：Ｒｈｏｄｏｔｏ、４ｕｒａ ｆ７ａｖａ Ｉ
ＦＯＱ９ＱＱＲ−１−２−５；Ｒｈｏａｏｔｏ、３ｕｒ
ａ、 ｆ、／、ａｖａ 工Ｉ’００９１５Ｒ−１−２−
６；Ｒｈｏｄｏｔｏ７ｕｒａ ｆ７ａｖａ 工ＦＯ０９
１８６１−３−１−１；Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂθ工Ｆ００３５８ Ｓ−３−１−２； Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ ｐｏｍｂｅ工Ｆ００３４２ Ｓ；上からグルコースとラミナリビオースの標準品′Ｍ
；培地 などが挙げられる。
以下に本発明全実施例によって説明する。しかしなから
本発Ｉ３Ａは実施例によって限定されるもの実施例 カードラン ４５ｙ、ペプトン ２１ｙ、酵母エキス
６ｆｌ ＋ ＫＨ２ＰＯ４３０ノ、ＭｙＳｏ４・７
Ｈ２０１−５ｆ＋ＮＨ４ＮＯ４６ｙ＋コーンステイープ
リカー １５１及び水道水３ｔから成る培地ヲ調製し、
これｔ−５を容ミニジャー培養槽に仕込み、常法により
殺菌した後、６５℃葦で冷却した。これに放線菌Ｗ１７
−１の前培養液１００−Ａを植菌し、３５℃、通気量０
．５ｆｌ分、９００回転の条件下で２日間培養した。培
養液中の菌体全濾過法で除去し、清澄酵素液２６００
ｙを得友。
本発Ｉ３Ａは実施例によって限定されるもの実施例 カードラン ４５ｙ、ペプトン ２１ｙ、酵母エキス
６ｆｌ ＋ ＫＨ２ＰＯ４３０ノ、ＭｙＳｏ４・７
Ｈ２０１−５ｆ＋ＮＨ４ＮＯ４６ｙ＋コーンステイープ
リカー １５１及び水道水３ｔから成る培地ヲ調製し、
これｔ−５を容ミニジャー培養槽に仕込み、常法により
殺菌した後、６５℃葦で冷却した。これに放線菌Ｗ１７
−１の前培養液１００−Ａを植菌し、３５℃、通気量０
．５ｆｌ分、９００回転の条件下で２日間培養した。培
養液中の菌体全濾過法で除去し、清澄酵素液２６００
ｙを得友。
尚、前培養液は、実施例と同組成の培地１００−７を、
５００ ｍ、ｔ”容肩付フラスコに分注し、殺菌、冷却
後、放線菌Ｗ１７−１株を植菌し、６５℃にて２日間振
盪培養したものである。
５００ ｍ、ｔ”容肩付フラスコに分注し、殺菌、冷却
後、放線菌Ｗ１７−１株を植菌し、６５℃にて２日間振
盪培養したものである。
次にカードランの糖化は、カードラン５０ｙ（純カード
ラン含量４２ｙ）’！ｒｌＡ容の糖化槽に入れ、５０℃
に保ち、実施例の酵素液７００−ｔ、’を加え、ｐｌ（
全５．７にａ１１整しつつ、攪拌しながら２７時間行な
った。糖化液を遠心分離し、清澄糖液６５０Ｆ（グルコ
ース換算の全糖量３９Ｆ含有）を得た。これに、終濃度
としてペプトン°０．２％’、酵母エキス０．１ 。
ラン含量４２ｙ）’！ｒｌＡ容の糖化槽に入れ、５０℃
に保ち、実施例の酵素液７００−ｔ、’を加え、ｐｌ（
全５．７にａ１１整しつつ、攪拌しながら２７時間行な
った。糖化液を遠心分離し、清澄糖液６５０Ｆ（グルコ
ース換算の全糖量３９Ｆ含有）を得た。これに、終濃度
としてペプトン°０．２％’、酵母エキス０．１ 。
ＫＨ２ＰＯ４Ｑ、１％＋ ＭｙＳＯ４・７Ｈ２００，０
５％及びＣａｃｏ３０．２係になる様に各栄養源を添加
し、常法にて殺菌、冷却後、グルコース資化性酵母５ｃ
ｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏ −ｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ
工ＦＯ０３５８の前培養液５０ｍ、／−，’に植菌し、
ろ０℃で２２時間通気培養した。遠心分離法で除菌し、
上溌液５９０Ｆ７Ｉ−１を倚（グルコース換算の全糖量
２０ ｊｌ’を含む）、これに活性炭を加えて脱色した
。脱色糖液につき、常法に従い陽イオン及び陰イオン交
換樹脂塔を通して脱塩し、無色のラミナリビオース水溶
液を得た。次にシロップ状態まで減圧濃縮し、これに熱
エタノール音訓えて溶解した後、ラミナリビオースの結
晶母を接種した。
５％及びＣａｃｏ３０．２係になる様に各栄養源を添加
し、常法にて殺菌、冷却後、グルコース資化性酵母５ｃ
ｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏ −ｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ
工ＦＯ０３５８の前培養液５０ｍ、／−，’に植菌し、
ろ０℃で２２時間通気培養した。遠心分離法で除菌し、
上溌液５９０Ｆ７Ｉ−１を倚（グルコース換算の全糖量
２０ ｊｌ’を含む）、これに活性炭を加えて脱色した
。脱色糖液につき、常法に従い陽イオン及び陰イオン交
換樹脂塔を通して脱塩し、無色のラミナリビオース水溶
液を得た。次にシロップ状態まで減圧濃縮し、これに熱
エタノール音訓えて溶解した後、ラミナリビオースの結
晶母を接種した。
シミナリピオースの結晶゛が析出され、遠心濾過法によ
り、結晶１５．５Ｆを得た。この再結晶製品は融点１９
６〜１９８℃、〔α）Ｄ＋１９．５°であり、メチル化
分析の結果１，２，４．６−テトラ−０−メチルーＤ−
グルコースと１．２，３，４．６−ペンタ−０−メチル
−Ｄ−グルコース換算り。
り、結晶１５．５Ｆを得た。この再結晶製品は融点１９
６〜１９８℃、〔α）Ｄ＋１９．５°であり、メチル化
分析の結果１，２，４．６−テトラ−０−メチルーＤ−
グルコースと１．２，３，４．６−ペンタ−０−メチル
−Ｄ−グルコース換算り。
手 続 補 正 書
昭和５８年４月１日
′特許庁長官 若 杉 和 夫 殿
１、事件の表示
特 願 昭 ５８−３７２７６ 号２、発明の
名称 高純度ラミナリビオースの製造法 ６、補正をする者 事件との関係 特許出願人 任 所 東京都千代田区丸の内１−４−５名 称 （
２３４） 山陽国策ノ（ルプ株式会社取締役社長 那
須 忠 己 ４、代理人Ｔ”１００ 住所 東京都千代田区丸の内１−４’−５氷楽ビル２６
４号室 電話２１４−２８６１番（代］６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。
名称 高純度ラミナリビオースの製造法 ６、補正をする者 事件との関係 特許出願人 任 所 東京都千代田区丸の内１−４−５名 称 （
２３４） 山陽国策ノ（ルプ株式会社取締役社長 那
須 忠 己 ４、代理人Ｔ”１００ 住所 東京都千代田区丸の内１−４’−５氷楽ビル２６
４号室 電話２１４−２８６１番（代］６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。
Ｚ 補正の内容
明細書中の下記の諸点を補正致し筐す。
（１）第４頁下から８行目
「ゲンチオビオース」とあるを
「ラミナリピオース」と補正致し１す。
（２）第５頁第１行目〜第２行目
「菌株番号 １ ２ ３４５ ６７酵素活性（島
ｙ＋ １６．３１３，３１２．８８；８６．５２．３２
．Ｉ Ｊとお池を 「菌株番号 １２３４５ 酵素活性（島ｙ）９．９１０．２５，６１０，５１０．
６Ｊと補正致し筐す。
ｙ＋ １６．３１３，３１２．８８；８６．５２．３２
．Ｉ Ｊとお池を 「菌株番号 １２３４５ 酵素活性（島ｙ）９．９１０．２５，６１０，５１０．
６Ｊと補正致し筐す。
（３）第５頁第４行目
ｒｌ 、２，３，４，５，６，７Ｊとあるをｒ５．４．
．２．１．３Ｊと補正致し１す。
．２．１．３Ｊと補正致し１す。
（４）第５頁第９行目
「ＰｈｏｄｏｔｏＡｕｔａ属、」とあるを「Ｒｈｏｄｏ
ｔｏ、／、ｕｔａ属、」と補正致し１す。
ｔｏ、／、ｕｔａ属、」と補正致し１す。
（５）第５頁第１０行目
「グリコース」とあるを
「グルコース」と補正致します。
（６）第６頁第８行目〜第１５行目
「Ｒ−１−２−１；
Ｒ−１−２−３；
Ｒ−１−２−４；
Ｒ−１−２−５； とあるを削除致し壕す。
Ｒ−１−２−６：
Ｓ−３−１−１；
５−３−１−２；Ｊ
（７）第６頁第１７行目〜第１８行目
「Ｓ；上からグルコースとラミナリビオースの標準品Ｍ
；培地 」とある全削除致し１す。
；培地 」とある全削除致し１す。
Claims (1)
- １ 放線菌から生産されたβ−１，６−グルカン分解酵
素をβ−１，６−グルカンに作用させて加水分解させグ
ルコースとラミナリビオースとを主成分とする糖液を調
製し、更にグルコースのみを選択的に資化する酵母を該
糖液中で培養することによって該糖液中のグルコースの
みを除去すること全特徴とする高純度ラミナリビオース
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3727683A JPS59162897A (ja) | 1983-03-09 | 1983-03-09 | 高純度ラミナリビオ−スの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3727683A JPS59162897A (ja) | 1983-03-09 | 1983-03-09 | 高純度ラミナリビオ−スの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59162897A true JPS59162897A (ja) | 1984-09-13 |
Family
ID=12493158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3727683A Pending JPS59162897A (ja) | 1983-03-09 | 1983-03-09 | 高純度ラミナリビオ−スの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59162897A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6214792A (ja) * | 1985-07-10 | 1987-01-23 | Meiji Seika Kaisha Ltd | フラクトオリゴ糖高含有物の製造法 |
-
1983
- 1983-03-09 JP JP3727683A patent/JPS59162897A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6214792A (ja) * | 1985-07-10 | 1987-01-23 | Meiji Seika Kaisha Ltd | フラクトオリゴ糖高含有物の製造法 |
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