JPS59143591A - プラスミド - Google Patents
プラスミドInfo
- Publication number
- JPS59143591A JPS59143591A JP58017271A JP1727183A JPS59143591A JP S59143591 A JPS59143591 A JP S59143591A JP 58017271 A JP58017271 A JP 58017271A JP 1727183 A JP1727183 A JP 1727183A JP S59143591 A JPS59143591 A JP S59143591A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmid
- producing
- restriction enzyme
- glutamic acid
- molecular weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
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- Genetics & Genomics (AREA)
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- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
こノ発明は、コリネホルム クルタミン酸生産菌より分
離されるプラスミ臼こ関する。
離されるプラスミ臼こ関する。
コリネホルム・グルタミン酸生産菌は大量のし一グルタ
ミン酸を生産することが知られて℃・る。
ミン酸を生産することが知られて℃・る。
またその変異株はりシン等のアミノ酸、イノノン酸等の
プリンヌクレオチドを生産するものか知られていて、工
業的に有用な微生物である。−力、最近ＤＮＡ組換え技
術による工業微生物の育種、改良が工／エリヒア・コリ
等により試みられて（・るが、コリネホルム・クルタミ
ン酸生ｄａｔこつり）ては、これらの微生物を宿主とす
るに適したベクターが開発されておらず、ＤＮＡ組換え
ｅこよるコリネホルム・グルタミン酸生産菌の育種、改
良ノ妨げとなっていた。
プリンヌクレオチドを生産するものか知られていて、工
業的に有用な微生物である。−力、最近ＤＮＡ組換え技
術による工業微生物の育種、改良が工／エリヒア・コリ
等により試みられて（・るが、コリネホルム・クルタミ
ン酸生ｄａｔこつり）ては、これらの微生物を宿主とす
るに適したベクターが開発されておらず、ＤＮＡ組換え
ｅこよるコリネホルム・グルタミン酸生産菌の育種、改
良ノ妨げとなっていた。
本発明者らはこのような背景ｔこおいて、フリ不ホルム
・バクテリアに適したベクターをｌ５ｆｉ ’５ｂ ｔ
へ＜ 鋭！ 研究Ｌ 、ついシこコリネホルム グルタ
ミン酸生産菌より、ベクターとして用いるのに適した、
あるいはベクターとして加工するに過したプラスミドて
あろ分子量４．２ ｋｂてあって、第１図に示す制限酵
素切断地図を有するプラスミドｐｃｃｌを見い出した。
・バクテリアに適したベクターをｌ５ｆｉ ’５ｂ ｔ
へ＜ 鋭！ 研究Ｌ 、ついシこコリネホルム グルタ
ミン酸生産菌より、ベクターとして用いるのに適した、
あるいはベクターとして加工するに過したプラスミドて
あろ分子量４．２ ｋｂてあって、第１図に示す制限酵
素切断地図を有するプラスミドｐｃｃｌを見い出した。
このプラスミドは、コリネホルム・グルタミン酸’ｌ［
ｍであるフリイバクテリウム・カルナエ（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｃａｌｌｕｎａｅ ） ＮＲＲＬ
Ｂ −２２４４より分離された。
ｍであるフリイバクテリウム・カルナエ（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｃａｌｌｕｎａｅ ） ＮＲＲＬ
Ｂ −２２４４より分離された。
コリネホルム グルタミン酸生産菌は、好気性無胞子、
非抗酸性、ダラム陽性、不定性の桿菌である、所謂コリ
ネホルム・バクテリアの内のグルタミン酸を多量に生産
するものであり、以下にその一部を具体的に例示する。
非抗酸性、ダラム陽性、不定性の桿菌である、所謂コリ
ネホルム・バクテリアの内のグルタミン酸を多量に生産
するものであり、以下にその一部を具体的に例示する。
ブレビバクテレ゛ウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ＋３
７４５ ブレビバクテリウム・デイバリカタム ＡＴＣＣ１４０２０ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１３８２６ ブレビバクテリウム・イマリオフイラムＡＴＣＣｌ ４
０６８ ブレビバクテリウム・ケトグルタミクムＡＴＣＣ１５８
８７ ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタムＡＴＣＣＩ
３８６９ ブレビバクテリウム・ロゼウス ＡＴＣＣＩ ３８２５ ブレビバクテリウム・サノ力ロリテイカムＡＴＣＣｌ
４０６６ プレヒハクテリウム・チオゲニタリス ＡＴＣＣ１９２４０ フリ不バクテリウム・アセドア／ドフイラムＡＴＣＣ１
３Ｂ７０ コリネバクテリウム・アセトグルタミクムＡＴＣＣ＋
５８０６ コリネバクテリウム・アルカノリテカムＡＴＣＣ２］
５１１ コリネバクテリウム・カルナエ ＡＴＣＣＩ ５９９１ コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ＋ ３０３２ フリ不バクテリウム・ハイドロヵーボクラスタスＡＴＣ
Ｃ］ ５５９２ コリネバクテリウム・リリウム ＡＴＣＣ］ ５９９０ コリネバクテリウム・メラセコラ ＡＴＣＣ＋７９６５ ミクロバクテリウム アンモニアフイラムＡＴＣＣ］
５３５４ これらのコリネホルム グルタミンｌ１Ｍ菌は、本発明
のプラスミドを安定して細胞内に法っことがてき、本発
明のプラスミドの宿主となることがてきる。
７４５ ブレビバクテリウム・デイバリカタム ＡＴＣＣ１４０２０ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１３８２６ ブレビバクテリウム・イマリオフイラムＡＴＣＣｌ ４
０６８ ブレビバクテリウム・ケトグルタミクムＡＴＣＣ１５８
８７ ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタムＡＴＣＣＩ
３８６９ ブレビバクテリウム・ロゼウス ＡＴＣＣＩ ３８２５ ブレビバクテリウム・サノ力ロリテイカムＡＴＣＣｌ
４０６６ プレヒハクテリウム・チオゲニタリス ＡＴＣＣ１９２４０ フリ不バクテリウム・アセドア／ドフイラムＡＴＣＣ１
３Ｂ７０ コリネバクテリウム・アセトグルタミクムＡＴＣＣ＋
５８０６ コリネバクテリウム・アルカノリテカムＡＴＣＣ２］
５１１ コリネバクテリウム・カルナエ ＡＴＣＣＩ ５９９１ コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ＋ ３０３２ フリ不バクテリウム・ハイドロヵーボクラスタスＡＴＣ
Ｃ］ ５５９２ コリネバクテリウム・リリウム ＡＴＣＣ］ ５９９０ コリネバクテリウム・メラセコラ ＡＴＣＣ＋７９６５ ミクロバクテリウム アンモニアフイラムＡＴＣＣ］
５３５４ これらのコリネホルム グルタミンｌ１Ｍ菌は、本発明
のプラスミドを安定して細胞内に法っことがてき、本発
明のプラスミドの宿主となることがてきる。
本発明のプラスミドは」二記のような宿主微生物内にて
、よく増殖することがてぎるので、このプラスミドのい
ずれかの位首に外来遺伝子が挿入さ遣 れれば、その外来籠伝子の遺伝情報を宿主であるコリネ
ホルム・グルタミン酸生産菌細胞内で発現せしめること
ができ、これら宿主微生物の遺伝形質を変換せしめるこ
とがてきる。
、よく増殖することがてぎるので、このプラスミドのい
ずれかの位首に外来遺伝子が挿入さ遣 れれば、その外来籠伝子の遺伝情報を宿主であるコリネ
ホルム・グルタミン酸生産菌細胞内で発現せしめること
ができ、これら宿主微生物の遺伝形質を変換せしめるこ
とがてきる。
従って、ｐｃｃＩのＤＮＡ鎖中に外来ＤＮＡが挿入され
ている組換えプラスミドであってコリネホルム・グルタ
ミン酸生産菌細胞内に含まれているものも本発明のプラ
スミドに包含される。
ている組換えプラスミドであってコリネホルム・グルタ
ミン酸生産菌細胞内に含まれているものも本発明のプラ
スミドに包含される。
又、ｐＣＣｌのＤＮＡ鎖中の１又は複数のデオキンヌク
レオチドが欠落し若しくは他のデオキノヌクレオチドに
置換されているプラスミドであっもｐｃｃＩのコリネホ
ルム・グルタミン酸生産菌細胞内で自律複製てきるもの
てあれば当然本発明のｐＣＣｌの範１に含めることがで
き、このようなプラスミド及びこのプラスミドがコリネ
ホルム・グルタミン酸生産細胞内に含まれているものも
本発明のプラスミドに含まれる。更にこれらプラスミド
鎖中に外来遺伝子を挿入したもの及びこの組換えプラス
ミドか、コリネホルム・グルタミン酸生産菌細胞内に含
まれているものも本発明のプラスミドに含まれる。
レオチドが欠落し若しくは他のデオキノヌクレオチドに
置換されているプラスミドであっもｐｃｃＩのコリネホ
ルム・グルタミン酸生産菌細胞内で自律複製てきるもの
てあれば当然本発明のｐＣＣｌの範１に含めることがで
き、このようなプラスミド及びこのプラスミドがコリネ
ホルム・グルタミン酸生産細胞内に含まれているものも
本発明のプラスミドに含まれる。更にこれらプラスミド
鎖中に外来遺伝子を挿入したもの及びこの組換えプラス
ミドか、コリネホルム・グルタミン酸生産菌細胞内に含
まれているものも本発明のプラスミドに含まれる。
本発明のプラスミドを宿主微生物細胞内に導入するには
、Ｅ、ｃｏｌｉ Ｋ −１２で報告されているように低
温のもとて菌を塩化カルンウムで処理して菌膜の透過性
を増大せしめ、プラスミドを移入する方法（Ｍａｎｄｅ
ｌ＋Ｍ ａｎｄＨｉｇａ＋Ａ、＋Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏ１
．＋５３＋＋５９（＋９７０））、枯草菌で報告されて
（・るように増殖のある段階で自然にプラスミドを取り
込みやすくなること（いわゆるコンビ−テントな状態）
を利用して、プラスミドを移入する方法（Ｄｕｎｃａｎ
、Ｃ，Ｈ，、Ｗｉｌｓｏｎ、 Ｇ、Ａ、 ａｎｄ Ｙｏ
ｕｎｇ、Ｆ、Ｅ、。
、Ｅ、ｃｏｌｉ Ｋ −１２で報告されているように低
温のもとて菌を塩化カルンウムで処理して菌膜の透過性
を増大せしめ、プラスミドを移入する方法（Ｍａｎｄｅ
ｌ＋Ｍ ａｎｄＨｉｇａ＋Ａ、＋Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏ１
．＋５３＋＋５９（＋９７０））、枯草菌で報告されて
（・るように増殖のある段階で自然にプラスミドを取り
込みやすくなること（いわゆるコンビ−テントな状態）
を利用して、プラスミドを移入する方法（Ｄｕｎｃａｎ
、Ｃ，Ｈ，、Ｗｉｌｓｏｎ、 Ｇ、Ａ、 ａｎｄ Ｙｏ
ｕｎｇ、Ｆ、Ｅ、。
Ｇｅｎｅ、 ］ 、 ＋１５３（＋９７７） ）、更に
は枯草菌、放線菌、酵母の報告にあるようしこ細胞をプ
ロトプラスト又はスフェロプラストにしてプラスミドを
移入する方法（Ｃｈａｎｇ、Ｓ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ、
Ｓ、 Ｎ、＋ Ｍｏ１ｅｃ。
は枯草菌、放線菌、酵母の報告にあるようしこ細胞をプ
ロトプラスト又はスフェロプラストにしてプラスミドを
移入する方法（Ｃｈａｎｇ、Ｓ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ、
Ｓ、 Ｎ、＋ Ｍｏ１ｅｃ。
Ｇｅｎ、 Ｇｅｎｅｔ、、 １６８．１１１ （＋９７
９） ： Ｂｉｂｂ、へ４．Ｊ１〜へ’ａｒｄ、Ｊ、Ｍ
、ａｎｄＨｏｐｗｏｏｄ、Ｄ、Ａ、、Ｎａｔｕｒｅ、２
７４゜３９８ （＋９７８）； Ｈｉｎｎｅｎ、 Ａ、
、 Ｈｉｃｋｓ、 Ｊ、 Ｂ、 ａｎｄＦｉｎｋ、 Ｇ
、 Ｒ，＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ５
ｃｉ−＋ ＵＳＡ＋ひ、 １９２９ （１９７８） ）
等がある。
９） ： Ｂｉｂｂ、へ４．Ｊ１〜へ’ａｒｄ、Ｊ、Ｍ
、ａｎｄＨｏｐｗｏｏｄ、Ｄ、Ａ、、Ｎａｔｕｒｅ、２
７４゜３９８ （＋９７８）； Ｈｉｎｎｅｎ、 Ａ、
、 Ｈｉｃｋｓ、 Ｊ、 Ｂ、 ａｎｄＦｉｎｋ、 Ｇ
、 Ｒ，＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ５
ｃｉ−＋ ＵＳＡ＋ひ、 １９２９ （１９７８） ）
等がある。
本発明のプラスミドンこ外来遺伝子を挿入するには、制
限酵素により切断さる個所に挿入するのが便利であるが
、その内、特に同じ制限酵素による被切断個所が１カ所
であるような個所に挿入するのが望ましい。外来遺伝子
を挿入するには、プラスミド及び外来遺伝子源となるゲ
ノムＤＮＡをそれぞれと同じ制限酵素て、部分的又は完
全に分解。
限酵素により切断さる個所に挿入するのが便利であるが
、その内、特に同じ制限酵素による被切断個所が１カ所
であるような個所に挿入するのが望ましい。外来遺伝子
を挿入するには、プラスミド及び外来遺伝子源となるゲ
ノムＤＮＡをそれぞれと同じ制限酵素て、部分的又は完
全に分解。
し、これを適当な条件下に接続せしめればよい。
外来遺伝子としてコリネホルム・グルタミン酸生産菌の
ゲノムＤ Ｍ Ａ ７Ｊ′−最も効率よく、その遺伝情
報が発現される。
ゲノムＤ Ｍ Ａ ７Ｊ′−最も効率よく、その遺伝情
報が発現される。
本発明のプラスミドは、細胞内でのコピー数が多く、従
って外来遺伝子を組み換えた時に、多量の遺伝子増ｒｌ
Ｊが期待てぎる。
って外来遺伝子を組み換えた時に、多量の遺伝子増ｒｌ
Ｊが期待てぎる。
実施例
］、 １）ＣＣＩ ＤＮＡ０単離
フリネハクデリウム・カルナエ（Ｃｏｒｇｎｃｂａｃｒ
ｅ −ｒｉｕｍ ｃａｌｌｕｎａｅ ） ＮＲＲＬ Ｂ
−２２４４株をトリブテイケース・ソイ・ブロス（＋、
Ｓ％カゼイノペプトン、０．５％大豆ペプトン、０，５
％Ｎａｃｌ、 ｐＨ７，０）にて、３０℃で対数中期ま
て培養しく０Ｄ＝０．６）、ペニシリンＧを最終濃度０
．３ｕ／ｍｔで添加したのちさらにｊ８ｈｒ培養した。
ｅ −ｒｉｕｍ ｃａｌｌｕｎａｅ ） ＮＲＲＬ Ｂ
−２２４４株をトリブテイケース・ソイ・ブロス（＋、
Ｓ％カゼイノペプトン、０．５％大豆ペプトン、０，５
％Ｎａｃｌ、 ｐＨ７，０）にて、３０℃で対数中期ま
て培養しく０Ｄ＝０．６）、ペニシリンＧを最終濃度０
．３ｕ／ｍｔで添加したのちさらにｊ８ｈｒ培養した。
遠心分離により集菌し、リノ゛チーム（１ｏｍｇ７ｍｇ
）、Ｓ Ｄ Ｓ （ＩＯ＋Ｉ１％ｍｊりを加えて溶菌さ
せ、高速遠心して上清を得た。
）、Ｓ Ｄ Ｓ （ＩＯ＋Ｉ１％ｍｊりを加えて溶菌さ
せ、高速遠心して上清を得た。
ポリエチレン・グリコールを添加してＤＮＡを濃縮し、
遠心して沈澱を集め、ＴＥ、Ｎパンファーにけんだくし
た。このＤＮＡＭをセ／ウムクロライド・エチジウムブ
ロマイドの密度勾配遠心にかけ、ｃｃｃ ＤＮＡ部分
を分取し、イソアフルアルコールでエチジウムブロマイ
ドを除き、透析によりセ／ウムクロライドを除いた。
遠心して沈澱を集め、ＴＥ、Ｎパンファーにけんだくし
た。このＤＮＡＭをセ／ウムクロライド・エチジウムブ
ロマイドの密度勾配遠心にかけ、ｃｃｃ ＤＮＡ部分
を分取し、イソアフルアルコールでエチジウムブロマイ
ドを除き、透析によりセ／ウムクロライドを除いた。
２、ｐＣＣｌの分子量の決定
アカロースゲル電気泳動距離から分子量を計算した。す
なわち、／ヤープらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ｉ 、 ３０５５ （＋９７３） ）に従し・、Ｅ、
ｗｌｉ Ｖ ５１７株のもつ種々のプラスミドＤＮＡ
を分子量測定用標準物質としく Ｍａｃｒｉｎａ Ｆ、
Ｌ。
なわち、／ヤープらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ｉ 、 ３０５５ （＋９７３） ）に従し・、Ｅ、
ｗｌｉ Ｖ ５１７株のもつ種々のプラスミドＤＮＡ
を分子量測定用標準物質としく Ｍａｃｒｉｎａ Ｆ、
Ｌ。
ｅＩ＋ａｌ＋ Ｐｌａｓｕｒｉｄ上４１７ （１９７８
） ）、ｐｃｃＩの分子量を測定した。
） ）、ｐｃｃＩの分子量を測定した。
その結果、分子量は４．２１±０．２３ ｋｂと算出さ
れた。
れた。
さらに、Ｈｉｎｄ ＩＩＩ ＋ Ｋｐｍ Ｉ ＋ Ｓｍ
ａ ｒおよびＢａ１Ｉなどの制限酵素で開裂させたＤＮ
Ａにっいても、ラムダファージＤＮＡのＨｉｎｄ川分解
用子凰標準品を対照として、アガロースゲル電気泳動し
て分子量＆１４．２７±０．０５ ｋｂと算出された。
ａ ｒおよびＢａ１Ｉなどの制限酵素で開裂させたＤＮ
Ａにっいても、ラムダファージＤＮＡのＨｉｎｄ川分解
用子凰標準品を対照として、アガロースゲル電気泳動し
て分子量＆１４．２７±０．０５ ｋｂと算出された。
３、 ｐｃｃＩ ＤＮＡの制限酵素による切断ｐｃ
ｃｌの純化ＤＮＡを各種の制限酵素て切断し、第１表に
示す結果を得た。
ｃｌの純化ＤＮＡを各種の制限酵素て切断し、第１表に
示す結果を得た。
第 １ 表
４．９ＣＣ１の制限酵素切断地図
３で述べた制限酵素感受性パターンから第１図に示すよ
うな制限酵素切断地図を作成した。
うな制限酵素切断地図を作成した。
５、ｐＣＣｌのコピー数の測定
コリネバクテリウム・カルナエ ＮＲＲＬＢ−２２４４
をトリチウム・チミン７ １００／ｉＣｉを含む最少培
地で培養し、ＤＮＡにう７オアイソトープラベルした、
菌体をリノ゛チーム、ＳＤＳ法て溶解し、全ＤＮＡを含
む画分をＣ５ｃｌ−ＥｔＢｒ平衡密度勾配遠心処理し、
ｃｃｃ ＤＮＡ部分と染色体ＤＮＡ部分の放射能の比
からｐｃｃＩプラスミドのコピー数を算出した。すなわ
ち、染色体ＤＮＡの分子量を８． ＯＯＯｋ ｂとし、
ｐｃｃｌ ＤＮＡの分子量を４．２ ｋｂ として
、コピー数が３０と算出された。
をトリチウム・チミン７ １００／ｉＣｉを含む最少培
地で培養し、ＤＮＡにう７オアイソトープラベルした、
菌体をリノ゛チーム、ＳＤＳ法て溶解し、全ＤＮＡを含
む画分をＣ５ｃｌ−ＥｔＢｒ平衡密度勾配遠心処理し、
ｃｃｃ ＤＮＡ部分と染色体ＤＮＡ部分の放射能の比
からｐｃｃＩプラスミドのコピー数を算出した。すなわ
ち、染色体ＤＮＡの分子量を８． ＯＯＯｋ ｂとし、
ｐｃｃｌ ＤＮＡの分子量を４．２ ｋｂ として
、コピー数が３０と算出された。
第１図は、ｐｃｃＩ制限酵素切断地図を示す。
特許出願人 味の素株式会社
手わ“Ｃ袖止店（万代）
８目ＩＢ
昭和５８１シ禮−−１−
４ｉｒ ；ｉ’ｒ庁艮官 ン−杉 和 人 殿１、 ｋ
Ｊｌ’ｌの大小 １１１１和Ｌ）８イロ、旨′［顆第１７２７１号２、ヅ
を明の名称 ブワスミＩ− ３、？１ｉｉＴイ一りくＳデ１ 事イ′１どの関係 特ｘｉ出願人 １１ｉ１ｉ 東京都中央［メ京橋−丁［１；〕番
８；）（発ｍ口 ［１ｉｊ和、’＋
８］１−５月３１Ｅｌ ）５、補正により増加りる発明
の故 なしＯ１抽ｉｆの対イ！ １ｉ１１ｉ
、（＋の発明省の（閑く住所）および明キ１０書の発
明の詳細な説明の欄（第９頁） いても、ラムダファージＤＮＡのＨｉ ｎ ｄ Ｉｌ１
分解分子量標準品を対照として、アガロースゲル上気泳
動して分子是は４．２７±０．０５ ｋｂと算出された
。 ３、 ｐｃｃ］ ＤＮＡの制限酵素による切断ｐｃ
ｃ］の純化ＤＮＡを各種の制限酵素で切断し、第１表に
示す結果を得た。 第 １ 表
Ｊｌ’ｌの大小 １１１１和Ｌ）８イロ、旨′［顆第１７２７１号２、ヅ
を明の名称 ブワスミＩ− ３、？１ｉｉＴイ一りくＳデ１ 事イ′１どの関係 特ｘｉ出願人 １１ｉ１ｉ 東京都中央［メ京橋−丁［１；〕番
８；）（発ｍ口 ［１ｉｊ和、’＋
８］１−５月３１Ｅｌ ）５、補正により増加りる発明
の故 なしＯ１抽ｉｆの対イ！ １ｉ１１ｉ
、（＋の発明省の（閑く住所）および明キ１０書の発
明の詳細な説明の欄（第９頁） いても、ラムダファージＤＮＡのＨｉ ｎ ｄ Ｉｌ１
分解分子量標準品を対照として、アガロースゲル上気泳
動して分子是は４．２７±０．０５ ｋｂと算出された
。 ３、 ｐｃｃ］ ＤＮＡの制限酵素による切断ｐｃ
ｃ］の純化ＤＮＡを各種の制限酵素で切断し、第１表に
示す結果を得た。 第 １ 表
Claims (1)
- １ 分子量４．ｚｋｂであって、第１図ｅこ示す制限酵
素切断地図を有するプラスミド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58017271A JPS59143591A (ja) | 1983-02-04 | 1983-02-04 | プラスミド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58017271A JPS59143591A (ja) | 1983-02-04 | 1983-02-04 | プラスミド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59143591A true JPS59143591A (ja) | 1984-08-17 |
| JPS6225038B2 JPS6225038B2 (ja) | 1987-06-01 |
Family
ID=11939302
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58017271A Granted JPS59143591A (ja) | 1983-02-04 | 1983-02-04 | プラスミド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59143591A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5158891A (en) * | 1984-08-21 | 1992-10-27 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Plasmid containing a gene for tetracycline resistance and DNA fragments derived therefrom |
| CN115135767A (zh) * | 2020-02-12 | 2022-09-30 | 大象株式会社 | 具有提高的l-谷氨酸生产能力的谷氨酸棒状杆菌突变体菌株，以及用于使用其生产l-谷氨酸的方法 |
-
1983
- 1983-02-04 JP JP58017271A patent/JPS59143591A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5158891A (en) * | 1984-08-21 | 1992-10-27 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Plasmid containing a gene for tetracycline resistance and DNA fragments derived therefrom |
| CN115135767A (zh) * | 2020-02-12 | 2022-09-30 | 大象株式会社 | 具有提高的l-谷氨酸生产能力的谷氨酸棒状杆菌突变体菌株，以及用于使用其生产l-谷氨酸的方法 |
| CN115135767B (zh) * | 2020-02-12 | 2024-03-15 | 大象株式会社 | 具有提高的l-谷氨酸生产能力的谷氨酸棒状杆菌突变体菌株，以及用于使用其生产l-谷氨酸的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6225038B2 (ja) | 1987-06-01 |
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