JPS59125898A - 新規抗生物質ａｍ−６４２４およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規抗生物質ＡＭ−６４２４およびその製造
法に関する。

本発明の新規抗生物質ＡＭ−６４２４の理化学的性質は
、下記の通りである。

（１）元素分析値（％）： 実験値　Ｃ４６，５１，Ｃ６，９０，Ｎ　１４．１５（
２）分子量および組成式； 分子量は３５６（フィールドディソープション質量分析
でＵ″＋　ｌ、　ｍ／ｅ　３５７を与えた）力く求めら
れ１元素分析値およびＣ−１３核磁気共鳴スペクトル（
第４図−）がら分子式Ｃ１５Ｈ２４Ｎ４０６が与えられ
る。

（３）融点： ２８０−２８２℃（分解） （４）比施光度： 〔α〕ρ−−４０．３’　　（Ｃ＝０．５５．水）（５
）紫外線吸収スペクトル： 第１図に示すとおりである（水中）。

（６）赤外線吸収スペクトル： 第２図に示すとおりである（ＫＢｒ法）。

（７）溶剤に対する溶解性： 水、ジメチルスルホキシド ール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム。

ベンゼンには熔解しない。

（８）呈色反応： ニンヒドリン．ライドンスミス反応に陽性であり，パラ
アニシジン、ドラーゲンドルフ反応には陰性である。

（９）酸性，塩基性，中性の区別： 弱塩基性 （１０）物質の色： 白色　。

（１１）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図のとお
りである。

（１２）　Ｃ−　１　３核磁気共鳴スペク１〜ル：第４
図のとおりである。

（１３）　Ｒｒ値： セルロース薄層クロマトグラフィー（メルク社製，厚さ
０．１ｍｍ）を當法にて行ったときのＲｆ値はつぎの通
りである。

（イ）プロパツール／ピリジン／酢酸／水（’１　５／
１　０／３／６）、Ｒｆ＝０．４　７（口）ｎ−ブタノ
ール／酢酸／水 （３／１／１）、　Ｒｒ＝ｏ．４　２ （１４）酸加水分解： ６規定塩酸を用い，減圧下封管１００℃で１２時間加水
分解するとバリン、アラニンを１／１のモル比で検出さ
れる。

上記の理化学的性質から，本抗生物質はペプチド型抗生
物質であることがわかるが，上記の理化学的性質と一致
する抗生物質は従来存在せず，抗生物質ＡＭ−６４２４
は，新規物質である。

つぎに抗生物質ＡＭ−６４２４の生物学的性質を示す。

（１）抗菌性 ＡＭ−６４２４物質１　０　０　０ｍｃｇ　／ｍｌの溶
液でペーパーディスク法を用いたときの，各種被検菌に
対する抗菌作用は，第１表に示す通りである。

栄養寒天培地を用いた場合には抗菌活性は弱いかあるい
は認められないが，合成培地を用いた場合第１表 ダラム陽性菌および陰性菌に対し強い抗菌性を示ず。

（２）植物に対する活性 イネおよびハツカダイコンの種子を用い，植物に対する
活性を検定した。ＡＭ−６４２４物質の所定濃度の水溶
液５ｍｌを，直径７．５ｃｍのシャーレに入れ，これに
イネおよびハツカダイコンの種子を浸し，２５℃の人工
照明下５日間放置し，根長を測定した。第２表に示すよ
うに，ＡＭ−６４２４物質は，イネおよびハツカダイコ
ンの根に対し伸長阻害を示す。

＊阻冨Φ（％ン一 無処理区根長 本抗生物質は代謝拮抗活性を有し、また植物に対しても
活性を有することから、医薬、動物薬、農薬等として使
用しうる物質である。

本抗生物質ＡＭ−６４２４はストレプトミセス属に属し
１本抗生物質ＡＭ−，６４２４を生産する能力を有する
微生物を好気的に培養し、培養液中に本抗生物質ＡＭ’
−６４２４を生成蓄積させ、これを採取することによっ
）て製造される。

使用可能な微生物の例は１本発明者によって土壌から分
離されたストレプトミセス・エスピー・ＡＭ−６４２４
株があげられる。この菌は、工業技術院微生物工業技術
研究所に受託番号・微工研菌寄６７９１号として寄託さ
れている。その菌学的性状は次の通りである。

（Ｉ）形態学的性質 栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し２通當は隔壁を
有しない。気菌糸は、はとんどの培地でよく着生し、ビ
ロード状あるいは粉状を呈する。

顕微鏡下の観察では、胞子量の先端は直線状である。菌
核、胞子量および遊走子は見い出されない。

（ｎ）各種培地上での性状・ イー・ビー・シャーリング（Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ
）とディー・ゴツト′リーブ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　
　）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・
システィマチック・バクテリオロジー、１６巻、３１３
頁１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を次
表に示す。

色調は標準色として、カラーハーモニー・マニュアルｆ
ｆ１４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメ
リカ・シカゴ、　１９５８年）を用いて決定し１色票名
とともに括弧内にそのコードを併せて記した。肋下は特
記しない限り２７℃、２週間目の各培地における観察の
結果である。

７０シエクト虐疋の増進 （ＩＩＩ）生理的諸性質 （１）メラニン色素の形成 イ、チわシン寒天　　　　　　　　　陰性口、ペプトン
・イースト鉄寒天　　　陰性ハ、グルコース・ペプトン
・ゼラチン 培養穿刺（２１−２３℃）　　　　　陰性二、トリプト
ン・イースト液　　　　陽性（２）チロシナーゼ反応　
　　　　　　陰性（３）硫化水素の生産　　　　　　　
　陰性（４）硝酸塩の還元　　　　　　　　　陰性（５
）ゼラチンの液化（２ｉ２３℃）　　陰性（グルコース
・ペプトン・ゼラチン 培地） （６）スターチの加水分解　　　　　　陽性（７）脱脂
乳の凝固（３７°Ｃ）　　　　　陰性（８）脱脂乳のペ
プトン化（３７℃）　　陽性（９）炭素源の利用性 （ブリドハム・ゴドリーブ寒天培地） 利用する；Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース。

Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニトール１１　Ｄ−フラクト
ース、メリビオース、ｉ−イノシトールやや利用する；
ラフィノース 利用しない；ラムノース、シュークロース。

セルロース （１０）セルロースの分解　　　　　　　陰性（ＩＶ）
細胞壁組成 ディアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、アラビノース
、ガラクトースは認められない。

以上２本閑の菌学的性状を要約すると１次の通りになる
。細胞壁組成はＬＬ−ディアミノピメリン酸を有する。

また形態的には、直線上の胞子柄を生成し、培養上の諸
性質としては栄養菌糸は、ゴールドあるいはブラウンの
色調を呈し、気菌糸はホワイトあるいはアイポリ−の色
調を呈する。各種培地でイエローあるいはゴールドの色
素を生産する。トリプトン・イースト液でメラニン色素
を生産する。

これらの結果から１本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、ブリドハムとトレスナーの分類（バーシ
ス・マニュアル・オブ・デターミネーティブ・ハクテリ
オロジー第８版、７４８〜８２９頁（１９７４年）によ
るホワイトシリーズに属する菌種と考えられる。

本発明において使用する菌は、上記したストレプトミセ
ス・エスピー・ＡＭ−６４２４および本菌株を変異処理
した変異株だりでなく、ストレプトミセス属に属し抗生
物質ＡＭ−６４２４を生産する菌であれはずバーご用い
ることができる。

本発明において使用する培地としては、炭素源。

窒素源１無機物、必要に応してその他の栄養物をほどよ
く含有Ｊる培地であればいずれの種類でもよい。炭素源
としては、たとえばグルコース、グリセロール、フラク
トース、マルトース、ガラク１〜−ス、ラクト−ス、澱
粉またはその加水分解液等の種々の炭水化物が使用でき
る。また窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウ
ム１硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硫酸アン
モニウム等の各種の無機および有機のアンモニウム。

塩類、尿素、ペプトン、肉エキス、乾燥酵母、酵母エキ
ス、きな粉等が単独または組合せて使用可能である。

無機物としては、各種リン酸塩、硫酸マグネシウム等、
さらに微量の重金属塩が使用されるが。

天然物を含む培地では必ずしも添加を必要としない。培
養は１通常振盪または通気攪拌培養の好気的条件下で行
われる。培養温度は１５−４０°Ｃ１培養期間は通常１
−５日である。なお、これらの培養条件は１使用する抗
生物質ＡＭ−６４２４生産微生物の特性に応じてそれぞ
れの最適条件を選択すればよい。

抗生物質ＡＭ−’６４２４は主として培養液中に生成蓄
積される。培養悔からの抗生物質ＡＭ−６４２４の採取
および精製は、一般の抗生物質の採取およびＩｉｉ製の
手段に準じて行うことができる。

たとえば、培養物からの菌体その他を除去した培養濾液
から２活性炭などに本抗生物質を吸着させ。

含水アセトン等で溶出する。溶出液を濃縮した後。

セルロースカラムクロマトグラフィー、セファデックス
Ｌｌ＋２０カラムクロマトグラフィー等によって本抗生
物質を単離することができる。

つぎに本発明の新規抗生物質へＭ−６４２４の製造例を
示すが、この実施例は本発明をなんら限定するものでは
ない。

実施例１゜ ストレプトミセス・エスピー・ＡＭ−６４２４（微工研
菌寄第６７９１号）菌株の斜面培地から１白金耳を、　
１００　ｍｌの種培地（グルコース２．０％。

肉エキス０．５％、ペプトン０．５％１乾燥酵母０．３
％２食塩０．５％、　ｐＨ７，０）を入れた５００　ｍ
ｌ容の坂ロフラスコに接種し、２７℃で２日間振盪培養
して種培養を得た。この種培養を、３９１の醗酵培地（
澱粉２．０％、グリセリン０．５％１大豆粉０．２５％
。

Ｎ１１ｒＣＩ　０．５％、ＫｚｌｌＰＯｙ−０，１％、
　Ｃａ３（ＰＯ＋　）ｚＯ，１５％。

ｐｈ　６．８）を入れた５０１容のジャーファーメンタ
−に１．０％の割合で接種し、２７℃で４２時間通気攪
拌培養を行った。

培養液３０１を遠心分離し、菌体を除去した培養上澄（
２８１）を２Ｎ水酸化ナトリウムでｐｈ　１．２に調節
した。これに弱塩基性イオン交換樹脂アンバーライト　
ＩＲＣ−５０（Ｎａ　＞　５００　ｍｌを加え、よ（攪
拌したのち、濾過によりこの樹脂を除去した。

樹脂を１．５１の脱イオン水で洗浄し、先の濾液と合わ
せ、活性炭カラム（２０Ｘ９　ｃｍ）に通した。５Ｉの
脱イオン水で洗浄後、　４０％アセトン水溶液で溶出し
た。バチルス・ズブチリスを被検菌とし１合成培地を用
いて作製した寒天平板を用い、ペーパーディスク法によ
り溶出液の活性を測定し、活性を有する両分を合わせ、
減圧下で約３００　ｍｌまで濃縮した。この濃縮液を凍
結乾燥し、ＡＭ−６４２４物質の粗粉末４１．６　ｇを
得た。この粗粉末をあらかじめメタノールｇ４させたセ
ルロースを充填したカラム（４５Ｘ　６　ｃｍ　）に付
し、メタノール−水（６：ｌ）の溶媒で展開した。活性
を有する両分を合わせ、減圧下で１００　ｍｌまで濃縮
後。

凍結乾燥し８２０　ｍｇの淡褐色粉末を得た。この粉末
を１ｍｌの水に溶解し、あらかじめ水を用いて充填した
セファデックスＬ１１２０カラム（９０Ｘ　３ｃｍ）に
イ１し、水で展開した。活性を有する両分を合わ一已、
減圧下で１０　ｍｌまで濃縮後、凍結乾燥し。

４０．９　ｍｇの淡黄色粉末を得た。この粉末よりプレ
パラティグり層クロマドグかフィー〔セルロース／ブタ
ノール：酢酸：水（３：１：１）で展開〕を行い、　Ｒ
ｆ＝０．４２・の活性区分を水で抽出し、抽出液を減圧
下１ｍｌまで濃縮後、凍結乾燥し、　１６．６ｍｇの淡
黄色粉末を得た。この粉末を０．５　ｍｌの水に溶解し
、あらかじめ水を用いて充填したセファデックスＬ１１
２０カラム（７０Ｘ１．５　ｃｍ）に付し、水で展開し
た。活性画分を減圧下１ｍｌ　まで濃縮後。

凍結乾燥しＡＭ−６４２４の精製標品５．５　ｍｇを得
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＡＭ−６４２４の水中での紫外線吸収
スペクトルを示し、第２図は同物質のＫＢｒ法による赤
外線吸収スペクトルを示し、第３図は同物質の重水中で
のプロトン核磁−気共鳴スベクトルを示し、第４図は同
物質の重水中でのＣ−１３核磁気共鳴スペクトルを示す
。 特許出願人　日産化学工業株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有することを特徴とする新
   規抗生物質ＡＭ−６４２４ ■元素分析：Ｃ，Ｈ，Ｎおよび０からなる■比施光度：
   　〔αず−−４０，３°　（Ｃ＝０．５５．水）■紫外
   線吸収スペクトル：第１図のとおり■赤外線吸収スペク
   トル：第２図のとおり■Ｃ−１３核磁気共鳴スペクトル
   ：第４図のとおり
2. （２）ストレプトミセス属に属し、新規抗生物質ＡＭ−
   ６４２４を生産する能力を有する微生物を培地に好気的
   に培養し、新規抗生物質ＡＭ−６／１２４を生成蓄積せ
   しめ、ごれを採取することを特徴とする特許請求の範囲
   第１項記載の新規抗生物質Ａ、Ｍ−６４２４の製造法。