JPS59120100A - 水性試料中の細菌の検出方法 - Google Patents
水性試料中の細菌の検出方法Info
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- JPS59120100A JPS59120100A JP58236505A JP23650583A JPS59120100A JP S59120100 A JPS59120100 A JP S59120100A JP 58236505 A JP58236505 A JP 58236505A JP 23650583 A JP23650583 A JP 23650583A JP S59120100 A JPS59120100 A JP S59120100A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、還元性基質を指示薬として用いて細菌の存在
を検出する水性試料の臨床分析に関する・従来技術 特異的で有効な抗体の利用可能性の増大に相応して、よ
シ迅速な感染の臨床的診断方法が要求されている。感染
の標、準的診断方法は、感染している細菌を含むと考え
られる試料を培養するものであるが、この方法は熟練者
でなければできない時間のかかる方法である。このため
、体液中の細菌を検出及び定量するための化学的方法が
探究されている。
を検出する水性試料の臨床分析に関する・従来技術 特異的で有効な抗体の利用可能性の増大に相応して、よ
シ迅速な感染の臨床的診断方法が要求されている。感染
の標、準的診断方法は、感染している細菌を含むと考え
られる試料を培養するものであるが、この方法は熟練者
でなければできない時間のかかる方法である。このため
、体液中の細菌を検出及び定量するための化学的方法が
探究されている。
１つの公矧方法は指示薬として還元性色原体を欧州する
ものである。この方法はウロスクリーンＴＭ（Ｕｒｏｓ
ｃｒｅｅｎＴＭ； トリフェニルテトラゾリウム）とし
て知られる試薬を使用するものであって、［推定的細菌
尿症の簡易な半定量的鑑別方法（ＡＳｉｍｐｌｅ Ｓｅ
ｍ１ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｓ
ｕｍｐｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｕｒｉａ） Ｊ ＋ファ
イザー（Ｐｆｉｚｅｒ） ＋ダイアグノスチイノクス・
ディビジョン（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ＋Ｄｉｖｉｓｉ
ｏｎ ）−ニューヨーク（小冊子）、１９７４年に記載
されている。ウロスクリーンＴＭハ多数ノ細菌の存在下
で４時間のインキュベーション後に還元されてビンクル
赤の子爵性析出物になる緩衝化された乾燥試薬である。
ものである。この方法はウロスクリーンＴＭ（Ｕｒｏｓ
ｃｒｅｅｎＴＭ； トリフェニルテトラゾリウム）とし
て知られる試薬を使用するものであって、［推定的細菌
尿症の簡易な半定量的鑑別方法（ＡＳｉｍｐｌｅ Ｓｅ
ｍ１ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｓ
ｕｍｐｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｕｒｉａ） Ｊ ＋ファ
イザー（Ｐｆｉｚｅｒ） ＋ダイアグノスチイノクス・
ディビジョン（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ＋Ｄｉｖｉｓｉ
ｏｎ ）−ニューヨーク（小冊子）、１９７４年に記載
されている。ウロスクリーンＴＭハ多数ノ細菌の存在下
で４時間のインキュベーション後に還元されてビンクル
赤の子爵性析出物になる緩衝化された乾燥試薬である。
製造業者は、色の濃いまたは血液を含んだ尿では結果が
不鮮明になると注釈している。
不鮮明になると注釈している。
このタイプの方法には重大な問題がある。臨床感染には
著しい数の白血球を伴うことが多く、それが分析のだめ
の試料中にも存在するであろう。
著しい数の白血球を伴うことが多く、それが分析のだめ
の試料中にも存在するであろう。
さらに感染がない場合でさえ、尿のような試料中に著し
い数の白血球が存在することもある。都合の悪いことに
、白血球もまた、ウロスクリーンＴＭのような公昶の色
原体全還元し得るため、白血球による色原体の還元は誤
った陽性の結果を生ずる。
い数の白血球が存在することもある。都合の悪いことに
、白血球もまた、ウロスクリーンＴＭのような公昶の色
原体全還元し得るため、白血球による色原体の還元は誤
った陽性の結果を生ずる。
このため、公知の細菌アッセイは信頼性がなく、定量化
はできない。
はできない。
発明の目的
本発明の目的は細閘アッセイにおける白血球妨害の問題
全解決することにるる。
全解決することにるる。
発明の構成
本発明の目的は、検出可能な最終生成物を形成する還元
性指示薬と試料を接触せしめながらまたは接触せしめる
前に、細菌を溶解せずに白血球を選択的に溶解するのに
充分な量の界面活性剤と試料を接触せしめ、インキュベ
ートし、そして存在する細菌の量全最終生成物の量の関
数として検出することによって達成される。
性指示薬と試料を接触せしめながらまたは接触せしめる
前に、細菌を溶解せずに白血球を選択的に溶解するのに
充分な量の界面活性剤と試料を接触せしめ、インキュベ
ートし、そして存在する細菌の量全最終生成物の量の関
数として検出することによって達成される。
作用
本発明は、細菌もしくは白血球または両者を含む可能性
のある水性試料を分析する方法に関する。
のある水性試料を分析する方法に関する。
このような試料は一般に、尿、血液及び脳を髄液のよう
な体液金倉む。疾病及び感染の診断における手段として
試料の細胞成分を検定するために分析を行なう。本発明
によれば、水性臨床標本中の種々の細胞成分を区別する
ことができる。
な体液金倉む。疾病及び感染の診断における手段として
試料の細胞成分を検定するために分析を行なう。本発明
によれば、水性臨床標本中の種々の細胞成分を区別する
ことができる。
任意の手段によって白血球を溶解すると白血球細胞の還
元能が阻吾されることが判明した。「細胞浴屏」とは細
胞単位の破壊または分解を意味する。還元阻吾は細胞膜
を完全または不完全に溶解すると起こる。
元能が阻吾されることが判明した。「細胞浴屏」とは細
胞単位の破壊または分解を意味する。還元阻吾は細胞膜
を完全または不完全に溶解すると起こる。
本発明は選択的溶解方法、すなわち、細菌全溶解せずに
白血球を溶解する方法を用いるものである。選択的溶解
が可能なのは、２種の細胞の間に構造上の相違があるた
めである。細菌は硬い細胞壁で包まれているのに対し７
、白血球にはこの硬い構造がない。白血球の硬い構造全
破壊するいくつかの化学的及び機械的操作は細胞壁の状
態に影響を与えず、細胞壁は完全な状態に保たれる。
白血球を溶解する方法を用いるものである。選択的溶解
が可能なのは、２種の細胞の間に構造上の相違があるた
めである。細菌は硬い細胞壁で包まれているのに対し７
、白血球にはこの硬い構造がない。白血球の硬い構造全
破壊するいくつかの化学的及び機械的操作は細胞壁の状
態に影響を与えず、細胞壁は完全な状態に保たれる。
白血球を選択的に溶解する手段は、超音波振動による試
料の処理、すなわち、超旨波処理と称される手法を才む
。選択的溶解のだめのこの処理は当業界では公昶である
。一定条件の出刃及び暴露時間を用いて超斤波処理する
ことによって白血球全選択的に溶解し得る。超音波処理
に適当な装置としては、音響変換６に一ホーン集成装置
及びマイクロチップ〔ヒート・システムズーウルトラン
ー二ノクス社（Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ−Ｕｌｔｒａ
ｓｏｎｉｃｓ＋Ｉｎｃ、）＋ニーーヨーク州プレーンビ
ーーから人手可能〕全装着した超音波発振器〔たとえば
、ブランソンＪ−１７Ａ４ （Ｂｒａｎ＋ｏｎ ｍｏｄ
ｅｌ Ｊ−１７Ａ ） ＋プランソン、イオニック・
パワー社（Ｂｒａｎｓｏｎ ＩｏｎｉｃＰｏｗｅｒ Ｃ
ｏ、） 、コネティカット州ダンベリー〕が挙げられる
。白血球の選択的溶解のだめの超音波処理法は、試料を
水浴中に保持しながら１００ワ２トの出力を用いて２０
秒間の超音波処理に２回暴露すること金含んでなる。
料の処理、すなわち、超旨波処理と称される手法を才む
。選択的溶解のだめのこの処理は当業界では公昶である
。一定条件の出刃及び暴露時間を用いて超斤波処理する
ことによって白血球全選択的に溶解し得る。超音波処理
に適当な装置としては、音響変換６に一ホーン集成装置
及びマイクロチップ〔ヒート・システムズーウルトラン
ー二ノクス社（Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ−Ｕｌｔｒａ
ｓｏｎｉｃｓ＋Ｉｎｃ、）＋ニーーヨーク州プレーンビ
ーーから人手可能〕全装着した超音波発振器〔たとえば
、ブランソンＪ−１７Ａ４ （Ｂｒａｎ＋ｏｎ ｍｏｄ
ｅｌ Ｊ−１７Ａ ） ＋プランソン、イオニック・
パワー社（Ｂｒａｎｓｏｎ ＩｏｎｉｃＰｏｗｅｒ Ｃ
ｏ、） 、コネティカット州ダンベリー〕が挙げられる
。白血球の選択的溶解のだめの超音波処理法は、試料を
水浴中に保持しながら１００ワ２トの出力を用いて２０
秒間の超音波処理に２回暴露すること金含んでなる。
選択的白血球溶解の好ましい方法は、細胞を界面活性剤
と充分に接触させることである。これらの界面活性剤は
、組直細胞は溶解しないが白血球細胞を溶解するのに充
分な濃度及び量で用いる。
と充分に接触させることである。これらの界面活性剤は
、組直細胞は溶解しないが白血球細胞を溶解するのに充
分な濃度及び量で用いる。
界面活性剤溶液の濃度は一般に概６０．０１〜１．０％
である。
である。
選択的に白血球を溶解する有用な界面活性剤は中性、す
なわち、ノニオン界面活性剤である。これらの例として
はたとえば、次のものが挙げられる°オクチルフェノキ
シポリエトキシエタノール〔トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）
Ｘ −１００］、］ｎ−ノニルフエノキシボリグリセ
ロールオリーン（Ｏｌｉｎ）１０Ｇ：１１、ｉニアルコ
ールのポリエチレングリコールエーテル〔タージトール
（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） １５−８−１２）、ポリオキシ
エチレン（２３）ラウリルエーテル〔ブリッジ（Ｂｒｉ
ｊ） ３５ Ｊ、及びポリオキ／エチレン（８）ステア
レート〔ミルジ（Ｍｙｒｊ） ４５ ）。
なわち、ノニオン界面活性剤である。これらの例として
はたとえば、次のものが挙げられる°オクチルフェノキ
シポリエトキシエタノール〔トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）
Ｘ −１００］、］ｎ−ノニルフエノキシボリグリセ
ロールオリーン（Ｏｌｉｎ）１０Ｇ：１１、ｉニアルコ
ールのポリエチレングリコールエーテル〔タージトール
（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） １５−８−１２）、ポリオキシ
エチレン（２３）ラウリルエーテル〔ブリッジ（Ｂｒｉ
ｊ） ３５ Ｊ、及びポリオキ／エチレン（８）ステア
レート〔ミルジ（Ｍｙｒｊ） ４５ ）。
いくつかのアニオン界面活性剤も選択的白血球溶解剤と
して有用である。これらの例はサポニン及びジギトニン
である。
して有用である。これらの例はサポニン及びジギトニン
である。
白血球を選択的に溶解する手段及び白血球を選択的に溶
解するのに充分な界面活性剤の濃度を決定する手段は以
下の試験に従わなければならない。
解するのに充分な界面活性剤の濃度を決定する手段は以
下の試験に従わなければならない。
溶解手段は、その手段の白血球の還元活性に対する効果
を細菌の還元活性に対する効果と比較することによって
試１験する。壱在的白血球赳元阻害剤の選択性を評価す
るこの方法は次の辿シである。
を細菌の還元活性に対する効果と比較することによって
試１験する。壱在的白血球赳元阻害剤の選択性を評価す
るこの方法は次の辿シである。
処理が白血球細胞の溶解に有用〃・否がを決定するため
に、燐酸塩で緩衝化された生理食塩液（ＰＢＳ）（０，
’８５％塩化す１リウム中０．０５Ｍ燐酸カリウム緩＃
液）中の白血球浮遊ｍ（細胞約０．５×１０６ＩＩＩ！
ｉｌ／ｒＴ１１１！？含む）１ｍｅｋ２１１ｉ１のアッ
セイ試験管の谷々にピペットで分注する。特定の超音波
処理法を試験しようとする場合には、試験管の一方を超
音波で処理し、他方は対照として未処理のままにしてお
く。ｐＨ７，０のＰＢＳ １ｒｎｌ全各試験管に加える
。特定の界面活性剤の溶解効果を試験するためには、白
血球浮遊液１祠を２個のアッセイ試験管の各々にピペッ
トで分注する。一方の試験管には界面活性剤全試験濃度
（たとえば０．０１グラムパーセント〜１．０グラムパ
ーセント）で含むＰＢＳ１−を入れ、他方にはＰＢＳ
ｌ−を入れ、対照とする。全試験管に１０チグルコース
５０マイクロリツトル及びＰＭＳ （フェナジンメトス
ルフェート）（Ｉ Ｉｎ９／ｍＪメタノール）５０マイ
クロリツトルを加える。試験管をポルテックス（Ｖｏｒ
ｔｅｘ； Ｖ”ｖへ。
に、燐酸塩で緩衝化された生理食塩液（ＰＢＳ）（０，
’８５％塩化す１リウム中０．０５Ｍ燐酸カリウム緩＃
液）中の白血球浮遊ｍ（細胞約０．５×１０６ＩＩＩ！
ｉｌ／ｒＴ１１１！？含む）１ｍｅｋ２１１ｉ１のアッ
セイ試験管の谷々にピペットで分注する。特定の超音波
処理法を試験しようとする場合には、試験管の一方を超
音波で処理し、他方は対照として未処理のままにしてお
く。ｐＨ７，０のＰＢＳ １ｒｎｌ全各試験管に加える
。特定の界面活性剤の溶解効果を試験するためには、白
血球浮遊液１祠を２個のアッセイ試験管の各々にピペッ
トで分注する。一方の試験管には界面活性剤全試験濃度
（たとえば０．０１グラムパーセント〜１．０グラムパ
ーセント）で含むＰＢＳ１−を入れ、他方にはＰＢＳ
ｌ−を入れ、対照とする。全試験管に１０チグルコース
５０マイクロリツトル及びＰＭＳ （フェナジンメトス
ルフェート）（Ｉ Ｉｎ９／ｍＪメタノール）５０マイ
クロリツトルを加える。試験管をポルテックス（Ｖｏｒ
ｔｅｘ； Ｖ”ｖへ。
ニーーヨーク州ロチェスター）のような攪拌機上で攪拌
する。各試験管にＭＴＴＣ３−（４，５−ジメチル−２
−チアゾリル） −２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムプロミド〕（１０■／ゴメタノール）１５マイ
クロリツトルを加え、溶液を混合し、次いで３７℃で３
０分間インキュベートする。インキュヘート後、試験管
をＭＴＴ還元について調べる。
する。各試験管にＭＴＴＣ３−（４，５−ジメチル−２
−チアゾリル） −２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムプロミド〕（１０■／ゴメタノール）１５マイ
クロリツトルを加え、溶液を混合し、次いで３７℃で３
０分間インキュベートする。インキュヘート後、試験管
をＭＴＴ還元について調べる。
ＭＴＴ還元は赤紫色（パープル）の存在によって示され
る。超音波処理されたまたは界面活性剤で処理された浮
遊液がほとんどまたは全く還元を示さないが対照がかな
りのせ元を示す場合には、溶解手段はこの試験の最初の
部分を満足させる。
る。超音波処理されたまたは界面活性剤で処理された浮
遊液がほとんどまたは全く還元を示さないが対照がかな
りのせ元を示す場合には、溶解手段はこの試験の最初の
部分を満足させる。
阻害剤が選択的か否かまたは白血球と同様に細菌にも影
響を与えるか否かを決定するために、ＰＢＳ中の細菌細
胞浮遊液（細胞約１０９１固／ｍｅ）２．５７ｄ’ｆｆ
１２個のアッセイ試験管の各々にピペットで分注する。
響を与えるか否かを決定するために、ＰＢＳ中の細菌細
胞浮遊液（細胞約１０９１固／ｍｅ）２．５７ｄ’ｆｆ
１２個のアッセイ試験管の各々にピペットで分注する。
浮遊液中の適当な微生物としては次のものが挙げられる
：大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、プロ
テウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉ
ｓ ）１ンユウドモナス・アエルギノーザ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ）、スタフィロコ
ッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ ）、及びストレプトコッカス フェカー
リス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）
。一方の試験管には前述の白血球浮遊液と同様な試験処
理を行なう。すなわち、超音波処理を行なうかまたはＰ
ＢＳ２．５７ｒＬｌ中界面活性剤で処理する。他方は対
照として未処理のままとし、ＰＢＳ ２．５ ｄのみを
加える。各試験管に１０％グルコース、ＰＭＳ （１ｍ
９／ｍＪメタノール）及びＭＴＴ＜−ｘｏｍｇ／ｍ！！
メタノール）を各々１００マイクロリツトル加える。溶
液を混合し、３７℃で１５分間インキュベートした後、
ＭＴＴ還元を目視検査する。前述の通り、還元活性は赤
紫色の形成によって証明される。本発明に包含される、
選択的白血球溶解の手段である超音波処理法及び界面活
性剤は、前述の試験によれば、白血球還元を阻害する（
すなわち、対照では着色するのに対し、試験浮遊液では
ほとんどまたは全く着色が見られない）が細菌還元活性
を阻害しない（試験浮遊液及び対照浮遊液の両方で着色
が見られる）・ものである。
：大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、プロ
テウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉ
ｓ ）１ンユウドモナス・アエルギノーザ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ）、スタフィロコ
ッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ ）、及びストレプトコッカス フェカー
リス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）
。一方の試験管には前述の白血球浮遊液と同様な試験処
理を行なう。すなわち、超音波処理を行なうかまたはＰ
ＢＳ２．５７ｒＬｌ中界面活性剤で処理する。他方は対
照として未処理のままとし、ＰＢＳ ２．５ ｄのみを
加える。各試験管に１０％グルコース、ＰＭＳ （１ｍ
９／ｍＪメタノール）及びＭＴＴ＜−ｘｏｍｇ／ｍ！！
メタノール）を各々１００マイクロリツトル加える。溶
液を混合し、３７℃で１５分間インキュベートした後、
ＭＴＴ還元を目視検査する。前述の通り、還元活性は赤
紫色の形成によって証明される。本発明に包含される、
選択的白血球溶解の手段である超音波処理法及び界面活
性剤は、前述の試験によれば、白血球還元を阻害する（
すなわち、対照では着色するのに対し、試験浮遊液では
ほとんどまたは全く着色が見られない）が細菌還元活性
を阻害しない（試験浮遊液及び対照浮遊液の両方で着色
が見られる）・ものである。
前述の溶解法は、細胞の還元特性に基づくアッセイと組
み合わせて使用される。活発に代謝を行なっている細胞
は、酸化−還元反応の複合系に携わっている。細胞を含
む培地に薬品を添加すると、細胞はその代謝プロセスの
間に薬品に作用する可能性がある。還元アッセイまたは
還元型アッセイは、試験される細胞によって化学的に還
元されて検出可能な最終生成物を生成する還元性指示薬
を試料に加えることを含んでなる。この型の試験の例は
、フォークマン（Ｆｏｒｋｍａｎ）及びグールキスト（
Ｄａｈｌｑｕｉｓｔ）の米国特許第３，４１５，７１８
号に記載されている。
み合わせて使用される。活発に代謝を行なっている細胞
は、酸化−還元反応の複合系に携わっている。細胞を含
む培地に薬品を添加すると、細胞はその代謝プロセスの
間に薬品に作用する可能性がある。還元アッセイまたは
還元型アッセイは、試験される細胞によって化学的に還
元されて検出可能な最終生成物を生成する還元性指示薬
を試料に加えることを含んでなる。この型の試験の例は
、フォークマン（Ｆｏｒｋｍａｎ）及びグールキスト（
Ｄａｈｌｑｕｉｓｔ）の米国特許第３，４１５，７１８
号に記載されている。
細胞によって還元されて比色分析、電位差滴定または螢
光分析のような任意の手段で検出され得る最終生成物を
生成する任意の化合物が還元分析に有用であり、本明細
書中ではこれを「還元性指示薬」と称するものとする。
光分析のような任意の手段で検出され得る最終生成物を
生成する任意の化合物が還元分析に有用であり、本明細
書中ではこれを「還元性指示薬」と称するものとする。
色原体は好ましい還元性指示薬である。本明細書中で用
いる「色原体」なる用語は、還元によって有色の最終生
成物を生成する還元性指示薬を意味する。本発明の還元
分析に適当な指示薬は、細菌及び白血球によって還元さ
れることができ且つ検出され得る最終生成物を生成する
任意の化合物である。
いる「色原体」なる用語は、還元によって有色の最終生
成物を生成する還元性指示薬を意味する。本発明の還元
分析に適当な指示薬は、細菌及び白血球によって還元さ
れることができ且つ検出され得る最終生成物を生成する
任意の化合物である。
本発明の実施に使用する、検出可能な物質に還元され得
る化合物は、還元阻害剤の不存在下においてその［便化
型が微生物によって還元されて検出可能な生成物を生成
できる任意の化合物であることができる。このような検
出はたとえば、電位差滴定手段によって実施できる。好
ましくは、検出可能な物質は輻射線測定手段によって直
接的に検出され得る物質である。本明細書中において用
いる「輻射線測定手段」なる用語は、輻射線を用いて分
析結果を得る種々の分析的検出手段を含むものと定義す
る。
る化合物は、還元阻害剤の不存在下においてその［便化
型が微生物によって還元されて検出可能な生成物を生成
できる任意の化合物であることができる。このような検
出はたとえば、電位差滴定手段によって実施できる。好
ましくは、検出可能な物質は輻射線測定手段によって直
接的に検出され得る物質である。本明細書中において用
いる「輻射線測定手段」なる用語は、輻射線を用いて分
析結果を得る種々の分析的検出手段を含むものと定義す
る。
輻射線測定手段によって直接的に検出され得る種々の検
出可能な物質を一部次に挙げる：（ａ）常用の比色分析
検出装置を用いてその存在または濃度を測定するのに使
用できる吸光係数または吸収スペクトルを有する、比色
分析によって検出可能な物質、たとえば、着色剤（すな
わち、染料または顔料）；ならびに（ｂ）その物質から
放射される輻射線全演出し得る装置によって検出され得
る輻射線放射物質、たとえば、螢光物質（螢光グローブ
）・染料または染料前駆体は有用な、検出可能な物質で
ある。染料の使用にはいくつかの可能性がある：（１）
酸化還元反応によって染料の色が別の色に変化する、（
２）有色の染料が無色になる、または（３）無色の物質
、すなわち、染料前駆体が有色の染料になる。発色は色
の消失、よりも一般に容易に検出され得るので、本発明
の実施には前記（３）が好ましい。
出可能な物質を一部次に挙げる：（ａ）常用の比色分析
検出装置を用いてその存在または濃度を測定するのに使
用できる吸光係数または吸収スペクトルを有する、比色
分析によって検出可能な物質、たとえば、着色剤（すな
わち、染料または顔料）；ならびに（ｂ）その物質から
放射される輻射線全演出し得る装置によって検出され得
る輻射線放射物質、たとえば、螢光物質（螢光グローブ
）・染料または染料前駆体は有用な、検出可能な物質で
ある。染料の使用にはいくつかの可能性がある：（１）
酸化還元反応によって染料の色が別の色に変化する、（
２）有色の染料が無色になる、または（３）無色の物質
、すなわち、染料前駆体が有色の染料になる。発色は色
の消失、よりも一般に容易に検出され得るので、本発明
の実施には前記（３）が好ましい。
本発明の実施に使用できる染料の例は、ノチレンブルー
、ジクロロインドフェノール、レゾアズリン、ならびに
還元によって有色のホルマザン染料になる種々のテトラ
ゾリウム化合物、たとえば、３−（４，５−ジメチル−
２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムプロミド、２，３．５−トリフェニル−２Ｈ−
テトラゾリウムクロリド、テトラニトロブルー、テトラ
ゾリウムクロリド及びニトロテトラゾリウムノくイオレ
ットである。
、ジクロロインドフェノール、レゾアズリン、ならびに
還元によって有色のホルマザン染料になる種々のテトラ
ゾリウム化合物、たとえば、３−（４，５−ジメチル−
２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムプロミド、２，３．５−トリフェニル−２Ｈ−
テトラゾリウムクロリド、テトラニトロブルー、テトラ
ゾリウムクロリド及びニトロテトラゾリウムノくイオレ
ットである。
本発明において有用なテトラゾリウム塩は一般式（１）
で表わされるものでら９、次のように一般式（ｎ）のホ
ルマザン染料に還元され得る。
で表わされるものでら９、次のように一般式（ｎ）のホ
ルマザン染料に還元され得る。
以下余白
（１） （ＩＩ）前記式（
Ｉ）及び（ｎ）において、臂はアニオンを表わし；Ｒ１
，Ｒ２及びＲ５は各々、アＩＪ−）しまたは複素環式置
換基（好ましくは５〜６個の原子を含み、好ましいペテ
ロ原子はＮ、Ｓ、０及びＳｅ である）、たとえば、フ
ェニル、置換されたフェニル、ナフチル、置換されたナ
フチル、置換されたもしくは未置換のチアゾリル、ベン
ツ゛チアソ゛１ノル、オキサゾール、ベンゾキサゾール
、セレナソ゛−ルもしくはベンゾセレナゾール基ヲ堀イ
クし−Ｒ２はさらに、アルキル基（たとえ（ハ、メチル
、〕゛チチルキシル、ドデシル等）もしくは置換基（ｅ
置換基金室む）、たとえば、−１（、−ＯＨ，−ＣＯＯ
Ｈ。
Ｉ）及び（ｎ）において、臂はアニオンを表わし；Ｒ１
，Ｒ２及びＲ５は各々、アＩＪ−）しまたは複素環式置
換基（好ましくは５〜６個の原子を含み、好ましいペテ
ロ原子はＮ、Ｓ、０及びＳｅ である）、たとえば、フ
ェニル、置換されたフェニル、ナフチル、置換されたナ
フチル、置換されたもしくは未置換のチアゾリル、ベン
ツ゛チアソ゛１ノル、オキサゾール、ベンゾキサゾール
、セレナソ゛−ルもしくはベンゾセレナゾール基ヲ堀イ
クし−Ｒ２はさらに、アルキル基（たとえ（ハ、メチル
、〕゛チチルキシル、ドデシル等）もしくは置換基（ｅ
置換基金室む）、たとえば、−１（、−ＯＨ，−ＣＯＯ
Ｈ。
−６Ｏ３Ｈｓ −８Ｒ，−ＮＯ２等、またはＣｈｅｍ−
Ｒｅｖ、＋５５．３５５〜４８３（１９５５）において
ホルマザンもしくはテトラゾリウム塩のこの位置に存在
するものとして記載されている他の任意の置換基金表わ
すこともでき；置換基Ｒ１及びＲ２は金属キレートまた
は錯体を形成し得る電子共有基を含むことができる。こ
のようなキレート基または錯体の例は、第一、第二及び
第三アミノ、イミノ、置換されたイミノ、オキシム、チ
オエーテル、ケト、チオケト、ヒドロキシル、メルカプ
ト、カルボキシル、スルホ及びホスホ、アルコキシ基−
または錯体である。
Ｒｅｖ、＋５５．３５５〜４８３（１９５５）において
ホルマザンもしくはテトラゾリウム塩のこの位置に存在
するものとして記載されている他の任意の置換基金表わ
すこともでき；置換基Ｒ１及びＲ２は金属キレートまた
は錯体を形成し得る電子共有基を含むことができる。こ
のようなキレート基または錯体の例は、第一、第二及び
第三アミノ、イミノ、置換されたイミノ、オキシム、チ
オエーテル、ケト、チオケト、ヒドロキシル、メルカプ
ト、カルボキシル、スルホ及びホスホ、アルコキシ基−
または錯体である。
本発明に有用なテトラゾリウム塩としてはさらに一般式
（Ｉｔ）のビス化合物を挙げることかでさる。
（Ｉｔ）のビス化合物を挙げることかでさる。
これは微生物によって還元されて一般式（ＩＶ）のホ／
ｌ／ マｆンを形成できる。
ｌ／ マｆンを形成できる。
以下余白
Ｉ（Ｈ
１
Ｒ２Ｒ２
前記式（１）及び（ＩＶ）において、ｆつはアニオンを
表わし、Ｘはアルキレンまたはアリーレン基を表わし、
Ｒｌｒ Ｒ２及び軸は式（１）及び（、Ｉ［）に関して
前述した置換基を表わす。
表わし、Ｘはアルキレンまたはアリーレン基を表わし、
Ｒｌｒ Ｒ２及び軸は式（１）及び（、Ｉ［）に関して
前述した置換基を表わす。
本発明の実施に有用なテトラゾリウム塩の特定の例は次
の通りである。
の通りである。
ａ） ）リフェニルデトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ
）； ｂ）２．２’−（ｐ−ジフェニレン）−ビス（３゜５−
ジフェニル）テトラゾリウムクロリド（ネオテトラゾリ
ウムクロリドまたはＮＴとしても知られる）； ｃ）ＮＴのメトキシ誘導体（ＢＴ ブルーテトラゾリウ
ムとしても知られる）； ｄ）２−（ｐ−ヨードフェニル）−３−（ｐ−ニトロフ
ェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド（ＩＮ
Ｔ）； ｅ）２．２’−ジ−ｐ−ニトロフェニル−５，５′−ジ
フェニル−３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４
′−ビフェニレン）ンテトラゾリウムクロリドにドロー
ＢＴとしても知られる）； ｆ） ２．２’、５．５’−テトラ−ｐ−ニトロフェ
ニル−３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−
ビフェニレンラージテトラゾリウムクロリド（テトラ−
ニトロｇＴＪたはＴＮＢ Ｔとしても知られる）；ｇ）
３−（４，５−’ジメチルーチアゾリルー２）−２
，５−ジフェニルテトラゾリウムプロミド（ＭＴＴ）； ｈ）２．２’−ジー（３−ニトロフェニル）−５゜５′
−ジメチル−３，３’−（４，４’−ビフェニレン）ジ
テトラゾリウム久ロリド（イエローテトラゾリウムまた
はＹＴとしても知られる）； ｉ）２，３．５−）す（ｐ−ニトロフェニル）−テトラ
ゾリウムプロミド（ＴＮＴＴＣ）；ｊ） ２−フェニ
ル−３−（３−メトキシ−４−フェニル）−５−（ｐ−
二トロフェニル）−テトラゾリウムクロリド（十ニトロ
ＢＴとしても知られる）；及び ｋ） 、２ 、５−ジ（ｐ−ニトロフェニル）−３−
（３−メ）キシ−４−フェニル）−テトラゾリウムクロ
リド（半ＴＮＢＴとしても知られる）。
）； ｂ）２．２’−（ｐ−ジフェニレン）−ビス（３゜５−
ジフェニル）テトラゾリウムクロリド（ネオテトラゾリ
ウムクロリドまたはＮＴとしても知られる）； ｃ）ＮＴのメトキシ誘導体（ＢＴ ブルーテトラゾリウ
ムとしても知られる）； ｄ）２−（ｐ−ヨードフェニル）−３−（ｐ−ニトロフ
ェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド（ＩＮ
Ｔ）； ｅ）２．２’−ジ−ｐ−ニトロフェニル−５，５′−ジ
フェニル−３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４
′−ビフェニレン）ンテトラゾリウムクロリドにドロー
ＢＴとしても知られる）； ｆ） ２．２’、５．５’−テトラ−ｐ−ニトロフェ
ニル−３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−
ビフェニレンラージテトラゾリウムクロリド（テトラ−
ニトロｇＴＪたはＴＮＢ Ｔとしても知られる）；ｇ）
３−（４，５−’ジメチルーチアゾリルー２）−２
，５−ジフェニルテトラゾリウムプロミド（ＭＴＴ）； ｈ）２．２’−ジー（３−ニトロフェニル）−５゜５′
−ジメチル−３，３’−（４，４’−ビフェニレン）ジ
テトラゾリウム久ロリド（イエローテトラゾリウムまた
はＹＴとしても知られる）； ｉ）２，３．５−）す（ｐ−ニトロフェニル）−テトラ
ゾリウムプロミド（ＴＮＴＴＣ）；ｊ） ２−フェニ
ル−３−（３−メトキシ−４−フェニル）−５−（ｐ−
二トロフェニル）−テトラゾリウムクロリド（十ニトロ
ＢＴとしても知られる）；及び ｋ） 、２ 、５−ジ（ｐ−ニトロフェニル）−３−
（３−メ）キシ−４−フェニル）−テトラゾリウムクロ
リド（半ＴＮＢＴとしても知られる）。
これらの化合物に関するよシ詳細な情報は、ヒストケミ
ストリー、セオレティカル・アンド・アプライド（Ｉ（
ｉｓｔｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ＋Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ
ａｎｄＡｐｐｌｉｅｄ） 、 Ａ 、 Ｇ 、 Ｅ
、パース（Ｐｅａｒｓｅ）著、第２巻、第３版、８８０
〜８８３ページ、チャーチル・リビングストン（Ｃｂｕ
ｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）＋ニシンバラ
及びロンドン、１９７２年力・ら得られる。
ストリー、セオレティカル・アンド・アプライド（Ｉ（
ｉｓｔｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ＋Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ
ａｎｄＡｐｐｌｉｅｄ） 、 Ａ 、 Ｇ 、 Ｅ
、パース（Ｐｅａｒｓｅ）著、第２巻、第３版、８８０
〜８８３ページ、チャーチル・リビングストン（Ｃｂｕ
ｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）＋ニシンバラ
及びロンドン、１９７２年力・ら得られる。
水性試料中の細菌の溶液式アッセイは、選択的溶解Ｖこ
よる白血球阻害及びそれに続く還元分析という前述の手
法を用いるものである。尿のような体液の試料を試験用
に入手する。試料は新鮮で均質であることが好ましい。
よる白血球阻害及びそれに続く還元分析という前述の手
法を用いるものである。尿のような体液の試料を試験用
に入手する。試料は新鮮で均質であることが好ましい。
好ましい白血球阻害手段は、前述の中性またはアニオン
界面活性剤の１つを利用するものであシ、これは細菌を
溶解せずに白血球を選択的に溶解するのに有効な濃度で
加える。検出可能な最終生成物を生成する還元性基質、
好ましくは、色原体を指示薬として加える。
界面活性剤の１つを利用するものであシ、これは細菌を
溶解せずに白血球を選択的に溶解するのに有効な濃度で
加える。検出可能な最終生成物を生成する還元性基質、
好ましくは、色原体を指示薬として加える。
ここで好ましい色原体指示薬はＭＴＴで、その好ましい
使用濃度は５Ｘ１０−５Ｍ〜５Ｘ１０’Ｍｆある。
使用濃度は５Ｘ１０−５Ｍ〜５Ｘ１０’Ｍｆある。
細胞から基質に電子を移動させることによって還元反応
を速めることのできる電子移動剤を加えるのが好ましい
。染料の還元峨位と細胞の遺元亀位との中間の還元電位
を有する、適当に置換されたフェナジン類、ベンゾキノ
ン類及びナフトキノン類が有用である。有用なら子移動
剤の例はフェナジンノドスルフェート（ＰＭＳ）でらり
、７×１０−５Ｍ〜４Ｘ１０ Ｍで使用するのが好ま
しい。他の有用な電子移動剤としては、フェナジンエチ
ルスルフェート、メルトラブル−、メナジオン、トリメ
チルベンゾキノン等が挙げられる。
を速めることのできる電子移動剤を加えるのが好ましい
。染料の還元峨位と細胞の遺元亀位との中間の還元電位
を有する、適当に置換されたフェナジン類、ベンゾキノ
ン類及びナフトキノン類が有用である。有用なら子移動
剤の例はフェナジンノドスルフェート（ＰＭＳ）でらり
、７×１０−５Ｍ〜４Ｘ１０ Ｍで使用するのが好ま
しい。他の有用な電子移動剤としては、フェナジンエチ
ルスルフェート、メルトラブル−、メナジオン、トリメ
チルベンゾキノン等が挙げられる。
アッセイへの他の有用な添加剤としては、細胞反応にエ
ネルギー源を提供するグルコースまたは他の代謝され得
る化合物が挙げられる。
ネルギー源を提供するグルコースまたは他の代謝され得
る化合物が挙げられる。
色原体還元の量は、精度の必要性に応じていくつかの方
法で検出できる。発色の目視検査によって充分な情報が
得られる場合には、試料を混合し、次いで好ましくは３
０分間またはそれ以下、２０〜４５℃においてインキユ
ベートシ、然る後に目視検ＩＥ ｆ ル。パーキン−エ
ルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）５７２のような分
光光度計で吸光度を測定することによって、結果のより
正確で定量的だ読みが得られる。色原体還元の量は３７
℃における５ ４０ ｎｍの吸光度の１０分間の変化と
して定義する。吸光度法においては標準曲線が有用であ
る。
法で検出できる。発色の目視検査によって充分な情報が
得られる場合には、試料を混合し、次いで好ましくは３
０分間またはそれ以下、２０〜４５℃においてインキユ
ベートシ、然る後に目視検ＩＥ ｆ ル。パーキン−エ
ルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）５７２のような分
光光度計で吸光度を測定することによって、結果のより
正確で定量的だ読みが得られる。色原体還元の量は３７
℃における５ ４０ ｎｍの吸光度の１０分間の変化と
して定義する。吸光度法においては標準曲線が有用であ
る。
この曲線は、既知量の細菌を含む浮遊液に前述の還元ア
ッセイ法を行なうことによって得られた吸光度値をプロ
ットすることによって作製する。次いで、臨床試料から
の吸光度値を標準曲線と比較して存在する細菌数を読み
取る。
ッセイ法を行なうことによって得られた吸光度値をプロ
ットすることによって作製する。次いで、臨床試料から
の吸光度値を標準曲線と比較して存在する細菌数を読み
取る。
細菌の存在を検出することは臨床診断において有効な手
段であるが、言まれる微生物の同定もまた必要であろう
。微生物の主要な特性の１つは、よく知られたダラム染
色法に対する反応である・細菌は、グラム陽性及びグラ
ム陰性として知られる２群に類別される。これらの２つ
の型の識別は、抗菌療法及びＴａ菌のより詳細な同定法
の選択に影響を与える有用な決定である。
段であるが、言まれる微生物の同定もまた必要であろう
。微生物の主要な特性の１つは、よく知られたダラム染
色法に対する反応である・細菌は、グラム陽性及びグラ
ム陰性として知られる２群に類別される。これらの２つ
の型の識別は、抗菌療法及びＴａ菌のより詳細な同定法
の選択に影響を与える有用な決定である。
前述の白血球還元阻害法とダラム陽性菌の選択的阻害と
を組み合わせることによる、ダラム型を区別する細菌ア
ッセイは有用でらる。溶液中で実施する分析は、３，９
−ジエチルトリデカノール硫酸ナトリウム［タージトー
ル（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） ７ ］のような第２の界面活
性剤を添加して、既に前述した方法を用いて行なう。ク
ーシト−ルアは約０．１〜１０％（ｖ／ｖ ）の濃度で
用いる場合にはグラム陽性細菌の還元活性阻害剤である
。最適用範囲は７〜８．５である。還元性基質、好まし
くは色原体を前述のようにして加える。好ましい添加剤
は電子移動剤、フェナジンメトスルフェート、グルコー
ス、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ） Ｘ −１００及びター
シト−ルアである。色原体還元は試料中にダラム陰性細
菌が存在することを示す゛この方法は、高濃度の塩のよ
うなダラム陰性菌の阻害剤と組み合わせるとグラム陽性
細菌の検出Ｖこも有用である。
を組み合わせることによる、ダラム型を区別する細菌ア
ッセイは有用でらる。溶液中で実施する分析は、３，９
−ジエチルトリデカノール硫酸ナトリウム［タージトー
ル（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） ７ ］のような第２の界面活
性剤を添加して、既に前述した方法を用いて行なう。ク
ーシト−ルアは約０．１〜１０％（ｖ／ｖ ）の濃度で
用いる場合にはグラム陽性細菌の還元活性阻害剤である
。最適用範囲は７〜８．５である。還元性基質、好まし
くは色原体を前述のようにして加える。好ましい添加剤
は電子移動剤、フェナジンメトスルフェート、グルコー
ス、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ） Ｘ −１００及びター
シト−ルアである。色原体還元は試料中にダラム陰性細
菌が存在することを示す゛この方法は、高濃度の塩のよ
うなダラム陰性菌の阻害剤と組み合わせるとグラム陽性
細菌の検出Ｖこも有用である。
アッセイ組成物は、１０−’ Ｍ〜１０−６Ｍの濃度の
還元性指示薬、好ましくは色原体、選択的溶解を惹起す
るのに適当な量の、細菌を溶解せずに白血球を選択的に
溶解する界面活性剤、ならびに白血球及び／または細菌
を含むと考えられる水性試料を含んでなる３、このよう
な組成物の好ましい一範囲は７．５〜８．２で、との−
は無機燐酸塩のような緩衝剤によって保持される。さら
に、前に有用であると述べた他の添加剤、たとえば、電
子移動剤（１０−４Ｍ〜１０−６Ｍ ）及びグルコース
（０，１〜１、ｆ１％）ｅ含むことが好ましい。
還元性指示薬、好ましくは色原体、選択的溶解を惹起す
るのに適当な量の、細菌を溶解せずに白血球を選択的に
溶解する界面活性剤、ならびに白血球及び／または細菌
を含むと考えられる水性試料を含んでなる３、このよう
な組成物の好ましい一範囲は７．５〜８．２で、との−
は無機燐酸塩のような緩衝剤によって保持される。さら
に、前に有用であると述べた他の添加剤、たとえば、電
子移動剤（１０−４Ｍ〜１０−６Ｍ ）及びグルコース
（０，１〜１、ｆ１％）ｅ含むことが好ましい。
前述のアッセイは、プルツィビログイノツ（Ｐｒｚｙｂ
ｙ ｌ ｏｗｉ ｃｚ ）及びミリカン（Ｍｉ ｌ ｌ
１ｋａｎ）の米国特許第３，９２２，１５８号及びパ
ース（Ｐｉｅｒｃｅ）及びフランク（Ｆｒａｎｋ）の米
国特許第４，２５８，００１号に記載されたような試験
要素を用いて乾式でも実施できる。このような要素は、
支持体、好ましくは塗布層及び試薬層から成る。試薬層
は試薬／塗布混合層であってもよいし、別個の塗布層を
試薬層上に塗ってもよい。支持体は、前述の特許に記載
された任意の適当な材料、たとえば、ポリ（エチレンテ
レフタレート）から成る。
ｙ ｌ ｏｗｉ ｃｚ ）及びミリカン（Ｍｉ ｌ ｌ
１ｋａｎ）の米国特許第３，９２２，１５８号及びパ
ース（Ｐｉｅｒｃｅ）及びフランク（Ｆｒａｎｋ）の米
国特許第４，２５８，００１号に記載されたような試験
要素を用いて乾式でも実施できる。このような要素は、
支持体、好ましくは塗布層及び試薬層から成る。試薬層
は試薬／塗布混合層であってもよいし、別個の塗布層を
試薬層上に塗ってもよい。支持体は、前述の特許に記載
された任意の適当な材料、たとえば、ポリ（エチレンテ
レフタレート）から成る。
支持体と試薬層の間に下塗９層を設けることもできる。
下塗り層として有用な材料の例は、ポリ（アクリルアミ
ド−ｃｏ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）−またはポリ
（アクリルアミド）のようなポリマー及びゾニル（Ｚｏ
ｎｙ ｌ ） ＦＳＮのような界面活性剤である。
ド−ｃｏ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）−またはポリ
（アクリルアミド）のようなポリマー及びゾニル（Ｚｏ
ｎｙ ｌ ） ＦＳＮのような界面活性剤である。
試薬層はＭＴＴのような還元性色原体味り０．１ｇ／ｍ
２〜０．２９／ｍ２）及びＰＭＳのような成子移動剤（
約０．０１〜０．１ ｌ／ｍ２）を含む。特定のアッセ
イに使用される要素には、試薬層中に阻害剤として種々
の界面活性剤全混合しなければならないこともある。全
ての細菌をアッセイできるように設計された要素は白血
球の還元活性の選択的阻害剤としてアニオンまたは中性
界面活性剤を含む（約１ｇ／ｍ２〜１０．９層ｍ２）。
２〜０．２９／ｍ２）及びＰＭＳのような成子移動剤（
約０．０１〜０．１ ｌ／ｍ２）を含む。特定のアッセ
イに使用される要素には、試薬層中に阻害剤として種々
の界面活性剤全混合しなければならないこともある。全
ての細菌をアッセイできるように設計された要素は白血
球の還元活性の選択的阻害剤としてアニオンまたは中性
界面活性剤を含む（約１ｇ／ｍ２〜１０．９層ｍ２）。
グラム識別アッセイに使用される要素は２種の界面活性
剤、すなわち、白血球を選択的に阻害する界面活性剤（
約１ｇ／ｍ２〜１０ｇ／ｍ２）及び一方のグラム型の細
菌を選択的に阻害する界面活性剤（約１ ｊｉ７ｍ２〜
１０９７ｍ２）を含む。塗布／試薬混合層は米国特許第
４．２５８，００１号に記載された高分子構造、たとえ
ば、ポリ（ビニルトルエン−ｃｏ−ｐ−ｔ−ブチル−ス
チレン−ｃｏ−メタクリル酸）を含むことができる。試
薬層は要素内のどの位置にあってもよく、試薬は塗布層
に混合することができる。
剤、すなわち、白血球を選択的に阻害する界面活性剤（
約１ｇ／ｍ２〜１０ｇ／ｍ２）及び一方のグラム型の細
菌を選択的に阻害する界面活性剤（約１ ｊｉ７ｍ２〜
１０９７ｍ２）を含む。塗布／試薬混合層は米国特許第
４．２５８，００１号に記載された高分子構造、たとえ
ば、ポリ（ビニルトルエン−ｃｏ−ｐ−ｔ−ブチル−ス
チレン−ｃｏ−メタクリル酸）を含むことができる。試
薬層は要素内のどの位置にあってもよく、試薬は塗布層
に混合することができる。
これらの乾燥試験要素の使用法は試料を好ましくは１０
マイクロリットル試薬層茨而にスポットすることを含ん
でなる。スポットする直前に試料にグルコース０．２ｇ
％を加えるのが好ましい。色原体還元の検出は、反射濃
度計で約５４０ｎｍで反射濃度（ＤＲ）’に測定するこ
とによって行なう。次いで、ブランク対照要素に、ＰＢ
Ｓ及びグルコースを含むが細胞を含まない液をスポット
する。インキュベーシヨン及び検出の方法は少なくとも
２つある。第一の方法では、５５０ｎｍにおけるＤＲを
３７℃において１０分間測定する。１０分間の反射濃度
の変化（ΔＤＲ１０分）を、１層分後におけるＤＲから
０分におけるＤＲＩ差し引いてがら対照のΔＤＲＩＯ分
を差し引くことによって算出する。
マイクロリットル試薬層茨而にスポットすることを含ん
でなる。スポットする直前に試料にグルコース０．２ｇ
％を加えるのが好ましい。色原体還元の検出は、反射濃
度計で約５４０ｎｍで反射濃度（ＤＲ）’に測定するこ
とによって行なう。次いで、ブランク対照要素に、ＰＢ
Ｓ及びグルコースを含むが細胞を含まない液をスポット
する。インキュベーシヨン及び検出の方法は少なくとも
２つある。第一の方法では、５５０ｎｍにおけるＤＲを
３７℃において１０分間測定する。１０分間の反射濃度
の変化（ΔＤＲ１０分）を、１層分後におけるＤＲから
０分におけるＤＲＩ差し引いてがら対照のΔＤＲＩＯ分
を差し引くことによって算出する。
第二の方法では、乾燥要素にスポラｌ−した後、水分平
衡室中で適当な時間、２０〜４５℃においてインキュベ
ートする。インキュベートした後、ＤＲを測定する。試
験試料の１５分後に３けるＤＲから細胞を含まない対照
の１５分後に２けるＤＲを差し引くことによって、１５
分後におけるΔＤＲを算出する。
衡室中で適当な時間、２０〜４５℃においてインキュベ
ートする。インキュベートした後、ＤＲを測定する。試
験試料の１５分後に３けるＤＲから細胞を含まない対照
の１５分後に２けるＤＲを差し引くことによって、１５
分後におけるΔＤＲを算出する。
反射濃度を、存在するＡ胞の量と関連づける標準曲線を
作製できる。既知量の白血球及び細菌を“含む浮遊ＷＬ
ヲ調製し、前記方法に従って測定する。
作製できる。既知量の白血球及び細菌を“含む浮遊ＷＬ
ヲ調製し、前記方法に従って測定する。
このように、乾式アッセイは迅速で定量的である。
以下余白
実施例
以下の実施例は本発明をさらに詳細に説明するものであ
る。
る。
以下の材料を実施例子で用いた。
白血球浮遊液はヒトの血ＩＸ力・ら調製した。
細菌浮遊液はメリーランド州ロックビルのアメリカン・
タイプ・カルテア−・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）
から入手した微生物から調製した。
タイプ・カルテア−・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）
から入手した微生物から調製した。
フェナジンメトスルフェート（ＰＭＳ） 、サポニン、
ジギトニン、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモ
ノオレエート〔トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ） ８０ ：］
、ナトリウム３．９ジエチルトリデカクールサルフェー
ト〔タージトール（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） ７ ）、第二
アルコールのポリエチレンクリコールエーテル（タージ
トール１５−’Ｓ−１２）、及びオクチルフェノキシポ
リエトキシエタノール〔トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−
１００）はミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル
社（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）から購入
した０ ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル〔プリジ
（Ｂｒｉｊ） ３５］及びポリオキシエチレン（８）ス
テアレート〔ミルジ（Ｍｙｒｊ ） ４５ ）はプラウ
エア州つィルミントンのＩＣＩアメリカ社（ＩＣＩ Ａ
ｍｅｒｉｃａｓ ｒ Ｉｎｃ、 ）から入手した。
ジギトニン、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモ
ノオレエート〔トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ） ８０ ：］
、ナトリウム３．９ジエチルトリデカクールサルフェー
ト〔タージトール（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ） ７ ）、第二
アルコールのポリエチレンクリコールエーテル（タージ
トール１５−’Ｓ−１２）、及びオクチルフェノキシポ
リエトキシエタノール〔トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−
１００）はミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル
社（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）から購入
した０ ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル〔プリジ
（Ｂｒｉｊ） ３５］及びポリオキシエチレン（８）ス
テアレート〔ミルジ（Ｍｙｒｊ ） ４５ ）はプラウ
エア州つィルミントンのＩＣＩアメリカ社（ＩＣＩ Ａ
ｍｅｒｉｃａｓ ｒ Ｉｎｃ、 ）から入手した。
フルオロケミカル界面活性剤ソ＝ ／ｌ／ （Ｚｏｎｙ
、ｌ ）ＦＳＮはプラウエア州つィルミントンのＥ’、
１．デュポン・ド°ネモアース社（Ｅ、１．Ｄｕｐｏｎ
ｔ ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓａｎｄ Ｃｏ、 ）から入手
した。
、ｌ ）ＦＳＮはプラウエア州つィルミントンのＥ’、
１．デュポン・ド°ネモアース社（Ｅ、１．Ｄｕｐｏｎ
ｔ ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓａｎｄ Ｃｏ、 ）から入手
した。
Ｎ−ノニルフェノキシポリグリセロール〔オリーン（０
１１ｎ）１０ Ｇ ）はコネクティカット州スタンフォ
ードのオリン社（Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐ、）から入手した
。
１１ｎ）１０ Ｇ ）はコネクティカット州スタンフォ
ードのオリン社（Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐ、）から入手した
。
他の全ての薬品は試薬用でろって、ニューヨーク州ロチ
ニスターのイーストマン・コダック社（Ｅａｓｔｍａｎ
Ｋｏｄａｋ Ｃｏｍｐａｎｙ ）から人手した。
ニスターのイーストマン・コダック社（Ｅａｓｔｍａｎ
Ｋｏｄａｋ Ｃｏｍｐａｎｙ ）から人手した。
溶液式アッセイは、５−セルプログラマー及び温夏調節
器を装宥したパーキン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌ
ｍｅｒ） ５７２分光光度計全用いて実施した。
器を装宥したパーキン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌ
ｍｅｒ） ５７２分光光度計全用いて実施した。
乾燥要素アッセイにぐま、常用の反射＃：度計を変形し
たものを用いた。
たものを用いた。
多層乾燥試験要素は次の構成で調製した。
■、塗布／試薬層
ポリマービーズ及び結合剤、
界面活性剤、
３− （４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５
−ジフェニル−２■−テトラゾリウムプロミド（ＭＴｒ
）（ｏ、１１９／ｍ２）ならびに電子移動剤０ ■、下塗９層 ■、支持体層 ポリ（エチレンテレフタレート） 実施例１〜７ 細胞溶解による白血球の還４元活性の選択的阻害ヒトの
血液から調製した、ｐｉ（７，０のＰＢＳ中に白血球を
含む溶液をアニオンもしくは中性界面活性剤または超音
波によって処理した。顕微鏡検査によ、て細胞が完全に
溶解したことが示された。次いで′、爵液を還元活性に
ついてアッセイした。
−ジフェニル−２■−テトラゾリウムプロミド（ＭＴｒ
）（ｏ、１１９／ｍ２）ならびに電子移動剤０ ■、下塗９層 ■、支持体層 ポリ（エチレンテレフタレート） 実施例１〜７ 細胞溶解による白血球の還４元活性の選択的阻害ヒトの
血液から調製した、ｐｉ（７，０のＰＢＳ中に白血球を
含む溶液をアニオンもしくは中性界面活性剤または超音
波によって処理した。顕微鏡検査によ、て細胞が完全に
溶解したことが示された。次いで′、爵液を還元活性に
ついてアッセイした。
白血球浮遊液１ｄをアッセイ試験管中にピペットで分注
した。ｐＨ７，０のＰＨ１１ｍｌまたは界面活性剤を含
むｐＢ３１ｍｌこのアッセイ試験管に加えた。
した。ｐＨ７，０のＰＨ１１ｍｌまたは界面活性剤を含
むｐＢ３１ｍｌこのアッセイ試験管に加えた。
全試験管に１０ｇ％グルコース５０μｅ及びＰＭＳ（１
〜／ｍｌメタノール）５０ｍ”ｅ加えた。試験管の内容
物を攪拌した。各試；験管にＩＶＩＴＴ （１０ｌｎ９
／ｒｎｌメタノール）５０μｌ′ｆ：加え、試験・ａの
内容物を再び攪拌し、そして３７℃で３０分間インキ−
ベートした。
〜／ｍｌメタノール）５０ｍ”ｅ加えた。試験管の内容
物を攪拌した。各試；験管にＩＶＩＴＴ （１０ｌｎ９
／ｒｎｌメタノール）５０μｌ′ｆ：加え、試験・ａの
内容物を再び攪拌し、そして３７℃で３０分間インキ−
ベートした。
インキュベートした後、溶液をＭＴＴｌｌｔ元について
目視検査した。ＭＴＴ趙元は赤紫色（パープル）の存在
によって示される。還元の度合を、１託験を績ん疋観測
者の主覗的評Ｉ［ｌＩｉし℃よってＯ（無色、還元なし
）から４＋（濃赤紫色、極めて強い還元）まで等級付け
した。１．２及び３は発色の中間的な讃さと中間的な還
元量を表わす。
目視検査した。ＭＴＴ趙元は赤紫色（パープル）の存在
によって示される。還元の度合を、１託験を績ん疋観測
者の主覗的評Ｉ［ｌＩｉし℃よってＯ（無色、還元なし
）から４＋（濃赤紫色、極めて強い還元）まで等級付け
した。１．２及び３は発色の中間的な讃さと中間的な還
元量を表わす。
結果を第１表に示す。病院の患者の血液から調製した白
血球の試料から無作為に抽出したものには、少量からか
なりの量まで対照溶ＷＬｖｃおいて常に若干の検出され
得る還元が見られた。この反応における可変性は、存在
する白血球数及び細胞の活性レベルに患者間で差がある
ためである。この予知できない可変性は剋菌アッセイに
おける白血球妨害を相殺しようとする場合に問題の一部
になる。しかしながら、試験された材料全てについて、
妨害の大きさと無関係に、全ての場合に白血球反応をゼ
ロまで減少させた。
血球の試料から無作為に抽出したものには、少量からか
なりの量まで対照溶ＷＬｖｃおいて常に若干の検出され
得る還元が見られた。この反応における可変性は、存在
する白血球数及び細胞の活性レベルに患者間で差がある
ためである。この予知できない可変性は剋菌アッセイに
おける白血球妨害を相殺しようとする場合に問題の一部
になる。しかしながら、試験された材料全てについて、
妨害の大きさと無関係に、全ての場合に白血球反応をゼ
ロまで減少させた。
細菌によるＭＴＴ還元の溶液アッセイを、阻害効果が選
択的であるか否かを測定するために前述の白血球の研究
で用いられたのと同一の界面活性剤を添加して実施した
。ＰＢＳ中の細菌細胞浮遊液（細胞〜１０９個／ｍ１）
２．５ｍ７に表に示された阻害剤を含むＰＨ１２，５ｍ
ｌを那えた。浮遊液ＶＣ１０％グルコース、ｐＭｓ （
１ｍｙ／ｍｌ！メタノール）及びＭＴＴ（１０１ｎ９／
ｍｌメタノール）全各々１００１Ｌｌ加えた。
択的であるか否かを測定するために前述の白血球の研究
で用いられたのと同一の界面活性剤を添加して実施した
。ＰＢＳ中の細菌細胞浮遊液（細胞〜１０９個／ｍ１）
２．５ｍ７に表に示された阻害剤を含むＰＨ１２，５ｍ
ｌを那えた。浮遊液ＶＣ１０％グルコース、ｐＭｓ （
１ｍｙ／ｍｌ！メタノール）及びＭＴＴ（１０１ｎ９／
ｍｌメタノール）全各々１００１Ｌｌ加えた。
試験管の内容物を攪拌し、３７℃で１５分間インキ−ベ
ートした後、目視検査した。
ートした後、目視検査した。
第１表に示した結果は、界面活性剤は白血球の還元活性
を阻害するが細菌の還元活性を阻害しないことを示して
いる。このことは、界面活性剤の存在下における白血球
の反応がゼロであるのに対し、界面活性剤の存在下にお
ける細菌の反応カニ４ブたは４＋である事実によって示
される。従って、臨床試料が未知量の両方の型の試料を
含む場合、これらの溶解剤は還元に基づくａ菌アッセイ
カニら白血球妨害を除く。
を阻害するが細菌の還元活性を阻害しないことを示して
いる。このことは、界面活性剤の存在下における白血球
の反応がゼロであるのに対し、界面活性剤の存在下にお
ける細菌の反応カニ４ブたは４＋である事実によって示
される。従って、臨床試料が未知量の両方の型の試料を
含む場合、これらの溶解剤は還元に基づくａ菌アッセイ
カニら白血球妨害を除く。
以下全白
第１表
１ トリトンＸ −１０００，０５ｃＩ）（ｖ／
ｖ） ０２ タージトール１５−８−１
２ ０．１ ％（ｖ／ｖ） ０３ プ
リン３５ １．Ｏｇ ％ ０４
ミルジ４５ １．０ 、！７ 係
０５ サポニン ０．１．９ 係
０６ ジギトニン ０．０２５ｇ％ ０７
超音波処理 ＣＪＭ用さｎ−ｆ） ０対照
な し （適用されず） １−３
十細菌還元 ０．０５％（ｖ／ｖ） ４＋ ４ ｊ
４１．０ ％（ｖ／ｖ） ４ ４ ４ ４
１．０１％ ４ ４ ４ ４ １．０ｙ％ ４ ４ ４ ４ １．０１％ ４ ４ ４ ４ ０．２５ ＆％ ４ ４ ４ ４ （適用されず）４４４４ 実施例８ ＭＴＴの細菌及び白血球の両者による還元に対する’ｒ
ｘ−ｉｏｏの濃度効果を調べだ。細匿ｉｆ！ｄ胞浮遊液
及び白血球細胞浮遊ｉを調製した。細胞のｍ液ハトウィ
ーン８０及びグルコース各々０．３９６、ＭＴＴ４．Ｏ
Ｘｌｏ−４ＭＸＰＭＳ５．４Ｘ１０−５Ｍならびに種々
の濃度のＴＸ−１ｔ）Ｏｆ：含んでいた。ＴＸ−１００
の各濃度Ｖこついて細胞を含まない対照溶液を調製した
。
ｖ） ０２ タージトール１５−８−１
２ ０．１ ％（ｖ／ｖ） ０３ プ
リン３５ １．Ｏｇ ％ ０４
ミルジ４５ １．０ 、！７ 係
０５ サポニン ０．１．９ 係
０６ ジギトニン ０．０２５ｇ％ ０７
超音波処理 ＣＪＭ用さｎ−ｆ） ０対照
な し （適用されず） １−３
十細菌還元 ０．０５％（ｖ／ｖ） ４＋ ４ ｊ
４１．０ ％（ｖ／ｖ） ４ ４ ４ ４
１．０１％ ４ ４ ４ ４ １．０ｙ％ ４ ４ ４ ４ １．０１％ ４ ４ ４ ４ ０．２５ ＆％ ４ ４ ４ ４ （適用されず）４４４４ 実施例８ ＭＴＴの細菌及び白血球の両者による還元に対する’ｒ
ｘ−ｉｏｏの濃度効果を調べだ。細匿ｉｆ！ｄ胞浮遊液
及び白血球細胞浮遊ｉを調製した。細胞のｍ液ハトウィ
ーン８０及びグルコース各々０．３９６、ＭＴＴ４．Ｏ
Ｘｌｏ−４ＭＸＰＭＳ５．４Ｘ１０−５Ｍならびに種々
の濃度のＴＸ−１ｔ）Ｏｆ：含んでいた。ＴＸ−１００
の各濃度Ｖこついて細胞を含まない対照溶液を調製した
。
３７℃で１０分間、分光光度計で５４０ｎｍにおける吸
光度を測定した。第■表に示した結果（ΔＡ）Ｑま、１
０分後の５４０ｎｍに２ける吸光度から０分の５４０ｎ
ｍにおける吸光度と適当な対照のΔＡ５４０ｎｍ’ｉ差
し引いたものを表わす。試験された細菌によるＭＴＴ逮
元はｏ、ｉ、０．５−または１．０係のＴＸ−１００の
存在下では阻害さノシなかったが白血球によるＭＴＴの
還元は試験されたＭＴＴの全濃度で阻害された。０．１
％のＴＸ−１００の存在下で白血球に関して得られた大
きな負の値は、細胞が徐々に溶解する時に溶液の濁９度
の減少が測定されるためであった。これよシ高濃度のＴ
Ｘ−１００の場合には、細胞溶解は速かであシ、０分に
おいてほとんど完全であるため、濁シ度の減少は瞬間的
に起こシ、測定されなかった。
光度を測定した。第■表に示した結果（ΔＡ）Ｑま、１
０分後の５４０ｎｍに２ける吸光度から０分の５４０ｎ
ｍにおける吸光度と適当な対照のΔＡ５４０ｎｍ’ｉ差
し引いたものを表わす。試験された細菌によるＭＴＴ逮
元はｏ、ｉ、０．５−または１．０係のＴＸ−１００の
存在下では阻害さノシなかったが白血球によるＭＴＴの
還元は試験されたＭＴＴの全濃度で阻害された。０．１
％のＴＸ−１００の存在下で白血球に関して得られた大
きな負の値は、細胞が徐々に溶解する時に溶液の濁９度
の減少が測定されるためであった。これよシ高濃度のＴ
Ｘ−１００の場合には、細胞溶解は速かであシ、０分に
おいてほとんど完全であるため、濁シ度の減少は瞬間的
に起こシ、測定されなかった。
以下余白
１冒Ｑ 苦
実施例９
溶液中に訃ける細菌及び白血球によるＭＴＴの還元に対
するノニオン界面活性剤オリーンＩＯＧの効果を調べた
。グルコース０．２係、ＭＴＴ ２．４ Ｘ１０−４Ｍ
、ＰＭＳ２．０Ｘ１０ Ｍ及びオリーンＩＯＧをきむ
細菌溶液及び白血球溶液をＡｍした。試験するオリーン
ＩＯＣの谷濃度について細胞を含まない対照溶液をＡ製
した。前記実施例８と同様にして１０分間の５４Ｑｎｍ
におけるΔＡｉ測定した・第■表に示した結果は、白血
球によるＭＴＴ還元は０．１．０．５及び１．０％（ｖ
／ｖ）のオリーンＩＯＧで阻害されるが大腸ｍｖｃよる
ＩＶＩＴＴ還元は試験した全濃度のオリーンＩＯＧで阻
害ざ７′ＬＺかったことを示している。
するノニオン界面活性剤オリーンＩＯＧの効果を調べた
。グルコース０．２係、ＭＴＴ ２．４ Ｘ１０−４Ｍ
、ＰＭＳ２．０Ｘ１０ Ｍ及びオリーンＩＯＧをきむ
細菌溶液及び白血球溶液をＡｍした。試験するオリーン
ＩＯＣの谷濃度について細胞を含まない対照溶液をＡ製
した。前記実施例８と同様にして１０分間の５４Ｑｎｍ
におけるΔＡｉ測定した・第■表に示した結果は、白血
球によるＭＴＴ還元は０．１．０．５及び１．０％（ｖ
／ｖ）のオリーンＩＯＧで阻害されるが大腸ｍｖｃよる
ＩＶＩＴＴ還元は試験した全濃度のオリーンＩＯＧで阻
害ざ７′ＬＺかったことを示している。
以ト迩ミ白
第■表
１０分間のΔＡ５４０ｎｍ
オリーン１０Ｇｌ１７）濃度 大腸−白血球１（ｖ
／ｖ） ５Ｘ１０７／ｍｌ ２．３ＸｉＯ
６／ａ／！Ｕ、１％ ０．５３
０，０１０．５％ ０．６２
−０．ｔ、１１ｉ、ｏ％ ｌＪ、６９
０．０２対照 ０．３２
０．２２（界面活性剤なし） ＊無作＝ ＶＣ抽出した４個の試料の平均実施例１０ わせ効果 無作為に抽出した３１固の白血球の試料（平均濃度、細
胞４．９ Ｘ １０６１１／ｙ ＰＢＳ ） ｆｆ：、
り／ｌ／ コー ス０．２％、 ＰＭＳ ０．２ｍＭ及
びＭＴＴ ０．２４ｍＭ ’ｉ含む溶液中で３７℃にお
いて１ｏ分間インキュベートした。溶ｒｉ、はさらに、
グラム陽性細菌の還元活性を阻害する界面活性剤、ター
シト−ルアを０．１％及び／またはＴＸ−１００’！ｒ
０．５％含んでいた。対照溶液は界面活性剤以外の前記
成分全全て含んでいた。５４０ｎｍにおける吸光度を０
分及び１０分において測定した。各溶液について１０分
間のΔＡを前述と同様にして算出した。
／ｖ） ５Ｘ１０７／ｍｌ ２．３ＸｉＯ
６／ａ／！Ｕ、１％ ０．５３
０，０１０．５％ ０．６２
−０．ｔ、１１ｉ、ｏ％ ｌＪ、６９
０．０２対照 ０．３２
０．２２（界面活性剤なし） ＊無作＝ ＶＣ抽出した４個の試料の平均実施例１０ わせ効果 無作為に抽出した３１固の白血球の試料（平均濃度、細
胞４．９ Ｘ １０６１１／ｙ ＰＢＳ ） ｆｆ：、
り／ｌ／ コー ス０．２％、 ＰＭＳ ０．２ｍＭ及
びＭＴＴ ０．２４ｍＭ ’ｉ含む溶液中で３７℃にお
いて１ｏ分間インキュベートした。溶ｒｉ、はさらに、
グラム陽性細菌の還元活性を阻害する界面活性剤、ター
シト−ルアを０．１％及び／またはＴＸ−１００’！ｒ
０．５％含んでいた。対照溶液は界面活性剤以外の前記
成分全全て含んでいた。５４０ｎｍにおける吸光度を０
分及び１０分において測定した。各溶液について１０分
間のΔＡを前述と同様にして算出した。
第Ｖ衣に示した結果は、白血球による■ゴ還元を阻害す
るＴＸ−１００の能力をターシト−ルアが妨害しないこ
とを示している。従って、これら２種の界面活性剤は組
み合わせて使用することがでさ、グラム陰性細菌のアッ
セイを提供できる。このアッセイは、白血球全阻害する
ためにグルコース、ＰＭＳ 、 ＭＴＴ 、 ＴＸ−１
００をそしてグラム陽性区ヲ阻害するためにターシト−
ルアを、前述したような臨床標本に添加することを含ん
でなる。インキュベートした後、赤紫色（バーグル）に
よって示される還元は、グラム陰性細菌の尺度である。
るＴＸ−１００の能力をターシト−ルアが妨害しないこ
とを示している。従って、これら２種の界面活性剤は組
み合わせて使用することがでさ、グラム陰性細菌のアッ
セイを提供できる。このアッセイは、白血球全阻害する
ためにグルコース、ＰＭＳ 、 ＭＴＴ 、 ＴＸ−１
００をそしてグラム陽性区ヲ阻害するためにターシト−
ルアを、前述したような臨床標本に添加することを含ん
でなる。インキュベートした後、赤紫色（バーグル）に
よって示される還元は、グラム陰性細菌の尺度である。
以下余白
第Ｖ衣
ターシト−ルア ０．１％（Ｖ／Ｖ） ０
．１３７ＴＸ−１０００，５％（ｖ／ｖ） −０，０
８４ターシト−ルア ０，１％ −０，
０２１＋ＴＸ−１０００，５％ 対照（界面活性剤なし） ０．１２
５実施例１１ 前述の手法に従って乾燥要素を調製した。試験要素は試
薬層中に５．３８ｇ／ｍ２のＴＸ−１０ＣＩ−含み、対
照要素は０．２２ｊｊ／ｍ２のゾニルＦＳＮ ｋ含んで
いた。
．１３７ＴＸ−１０００，５％（ｖ／ｖ） −０，０
８４ターシト−ルア ０，１％ −０，
０２１＋ＴＸ−１０００，５％ 対照（界面活性剤なし） ０．１２
５実施例１１ 前述の手法に従って乾燥要素を調製した。試験要素は試
薬層中に５．３８ｇ／ｍ２のＴＸ−１０ＣＩ−含み、対
照要素は０．２２ｊｊ／ｍ２のゾニルＦＳＮ ｋ含んで
いた。
グラム陰性細菌である大腸菌及びプロテウス・プルノブ
リスならびにグラム陽性歯であるスタフイロコンカスー
アウレウス及びストレフトコツカス・フェカーリス全各
々含む４個の細菌浮遊ｉ’ｋｐＨ７，５の燐酸カリウム
緩衝液中に細胞ｌＸｌ０９個／ｍｌ！の濃度で調製した
。無作為に抽出した４個の白血球試料をｐＨ７，５の０
．０５ＭＰＢＳ中に細胞７．３．９．４．１１．６及び
１３．８Ｘ１０６個／威の濃度で浮遊せしめた。各試料
にグルコースを加えて最終濃度を０．２チとした。
リスならびにグラム陽性歯であるスタフイロコンカスー
アウレウス及びストレフトコツカス・フェカーリス全各
々含む４個の細菌浮遊ｉ’ｋｐＨ７，５の燐酸カリウム
緩衝液中に細胞ｌＸｌ０９個／ｍｌ！の濃度で調製した
。無作為に抽出した４個の白血球試料をｐＨ７，５の０
．０５ＭＰＢＳ中に細胞７．３．９．４．１１．６及び
１３．８Ｘ１０６個／威の濃度で浮遊せしめた。各試料
にグルコースを加えて最終濃度を０．２チとした。
各要素に各試料１０μｌをスポットした。１０分間、５
４０ｎｍで反射濃度、（ＤＲ）’ｌｉ：監視した０緩衝
液ブランクについても測定し、前述のようにして算出し
た全ΔＤＲ１直を適当な緩＃液フ゛ランクのノくノクグ
２ウンド濃度で補正した。
４０ｎｍで反射濃度、（ＤＲ）’ｌｉ：監視した０緩衝
液ブランクについても測定し、前述のようにして算出し
た全ΔＤＲ１直を適当な緩＃液フ゛ランクのノくノクグ
２ウンド濃度で補正した。
第Ｖ衣に示した結果は、乾燥要素形式においてＴＸ −
１００は白血球による色原体還元全阻害するがグラム陰
性細菌またはグラム陽性；ｍ面に上る色原体還元は阻害
しないこと金示してい゛る。乾燥ノ杉式の細菌アッセイ
は、白血球阻害剤を含む前述の試験要素を使用す込こと
を含んでなる。要素に細菌及び／または白血球を含む０
Ｊ罷性のある試料液ｔスポットし、前述の手法に従って
処理するＯΔＤＲは試料中に存在する細菌を光わす。
１００は白血球による色原体還元全阻害するがグラム陰
性細菌またはグラム陽性；ｍ面に上る色原体還元は阻害
しないこと金示してい゛る。乾燥ノ杉式の細菌アッセイ
は、白血球阻害剤を含む前述の試験要素を使用す込こと
を含んでなる。要素に細菌及び／または白血球を含む０
Ｊ罷性のある試料液ｔスポットし、前述の手法に従って
処理するＯΔＤＲは試料中に存在する細菌を光わす。
以下丘白
細菌を溶解せずに白血球を選択的に溶解するのに充分な
量の界面活性剤を還元性指示薬と共に試料に接触せしめ
、そして還元によって形成された最終生成物の量の関数
として細菌を検出することによって水性試料中の細菌を
検出することを含んでなる本発明の方法は、細菌アッセ
イにおける白血球による妨害を有利に減少させる。
量の界面活性剤を還元性指示薬と共に試料に接触せしめ
、そして還元によって形成された最終生成物の量の関数
として細菌を検出することによって水性試料中の細菌を
検出することを含んでなる本発明の方法は、細菌アッセ
イにおける白血球による妨害を有利に減少させる。
特許出１願人
イーストマン コダ、り カンパニー
特許出願代理人
弁理士 育 木 朗
弁理士 西 舘 和 之
弁理士 石 １） 敬
弁理士 山 口 昭 之
弁理士 西 山 雅 也
一
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、水性試料中の細菌を検出する方法であって、Ａ 該
試料を１．細菌を溶解せずに白血球を選択的に溶解する
のに充分な量の界面活性剤と接触せしめ； Ｂ、前記工程Ａの試料を、検出可能な最終生成物全形成
する還元性指示薬と接触せしめ↓Ｏ前記工程Ｂの試料を
インキュベートし；そして Ｄ 存在する細菌の量を、前記工程Ｃにおいて還元によ
って形成された最終生成物の量の関数として検出する ことを含んでなる検出方法。
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|---|---|---|---|
| US06/453,033 US4610961A (en) | 1982-12-27 | 1982-12-27 | Inhibition of reduction activities of leukocytes |
| US453033 | 1982-12-27 |
Publications (2)
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|---|---|
| JPS59120100A true JPS59120100A (ja) | 1984-07-11 |
| JPH0468920B2 JPH0468920B2 (ja) | 1992-11-04 |
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Country Status (5)
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61172063A (ja) * | 1984-10-05 | 1986-08-02 | アボツト ラボラトリ−ズ | 腹膜炎又は腹膜感染の検出法 |
| JPS61182576A (ja) * | 1985-02-07 | 1986-08-15 | イーストマン コダツク カンパニー | 置換キノン電子移動剤の分析測定への使用 |
| JPWO2003035899A1 (ja) * | 2001-10-23 | 2005-02-10 | デンカ生研株式会社 | 血液中の血球と菌の分離方法および血液中の菌の検出方法 |
| JP2013512685A (ja) * | 2009-12-08 | 2013-04-18 | バイオカルティス、ソシエテ、アノニム | 細胞の選択的溶解 |
| JP2021518543A (ja) * | 2018-03-22 | 2021-08-02 | アイデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッドＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． | 生体試料中の細菌の測定方法 |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4693972A (en) * | 1984-01-16 | 1987-09-15 | Becton, Dickinson And Company | Composition and method for rapid detection of microorganisms in clinical samples |
| US5141855A (en) * | 1986-07-28 | 1992-08-25 | Eastman Kodak Company | Signal amplifying cobalt (III) redox reagents and methods for the determination of analytes in aqueous fluids |
| US4912035A (en) * | 1987-06-11 | 1990-03-27 | Eastman Kodak Company | Method for minimizing interference by reductants when detecting cells in biological fluids |
| US5171669A (en) * | 1987-05-04 | 1992-12-15 | Eastman Kodak Company | Cobalt(III) reagents in combination with water soluble polymers |
| EP0255679B1 (en) * | 1986-07-28 | 1993-01-13 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Composition and method using substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations |
| US4885240A (en) * | 1986-09-04 | 1989-12-05 | Eastman Kodak Company | Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods |
| JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
| US5108903A (en) * | 1988-07-05 | 1992-04-28 | Eastman Kodak Company | Reducible compounds which provide leuco dyes for analytical compositions, elements and methods of using same |
| US5108902A (en) * | 1988-07-05 | 1992-04-28 | Eastman Kodak Company | Reducible compounds which provide aniline dyes for analytical compositions and methods of using same |
| US5196519A (en) * | 1988-07-05 | 1993-03-23 | Eastman Kodak Company | Reducible compounds which provide aniline dyes, and analytical compositions, elements and methods using same |
| US5707820A (en) * | 1991-09-19 | 1998-01-13 | Boehringer Mannheim Corporation | Reagent and assay methods including a phenazine-containing indicator |
| US5550032A (en) * | 1994-05-27 | 1996-08-27 | George Mason University | Biological assay for microbial contamination |
| GB9510262D0 (en) * | 1995-05-22 | 1995-07-19 | Nat Blood Authority The | Detection method |
| FR2735579B1 (fr) * | 1995-06-13 | 1997-09-19 | Hycel Groupe Lisabio | Procede de discrimination et d'isolement de sous-populations de leucocytes a partir d'echantillons sanguins par traitement par du polyoxyethylene 9-lauryl ether, et reactif pour sa mise en oeuvre |
| JP2001161354A (ja) * | 1999-12-09 | 2001-06-19 | Tsukasa Matsumoto | 培養白血球より成分を取り出す方法 |
| US7541166B2 (en) * | 2003-09-19 | 2009-06-02 | Microfluidic Systems, Inc. | Sonication to selectively lyse different cell types |
| WO2005028635A2 (en) * | 2003-09-19 | 2005-03-31 | Microfluidic Systems Inc. | Microfluidic differential extraction cartridge |
| US8133451B2 (en) * | 2008-08-28 | 2012-03-13 | Microfluidic Systems, Inc. | Sample preparation apparatus |
| US10584370B2 (en) | 2014-12-16 | 2020-03-10 | Soft Cell Biological Research, Llc | Screening for L-form bacteria |
| EP4252629A3 (en) * | 2016-12-07 | 2023-12-27 | Biora Therapeutics, Inc. | Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems |
| GB201715704D0 (en) * | 2017-09-28 | 2017-11-15 | Microbiosensor Ltd | Methods and devices |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3415718A (en) * | 1965-04-09 | 1968-12-10 | Forkman Anders Carl Gunnar | Composition and process for detecting bacteria in urine |
| JPS53139785A (en) * | 1977-01-19 | 1978-12-06 | Nasa | Detecting of bacteria in blood |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3928139A (en) * | 1973-02-12 | 1975-12-23 | Wadley Res Inst & Blood Bank | Detection of microbial pathogens |
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| CA1019228A (en) * | 1974-03-12 | 1977-10-18 | International Diagnostic Products Ltd. | Nitroblue tetrazolium test and reagent |
| US3971703A (en) * | 1974-05-31 | 1976-07-27 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Method of detecting and counting bacteria |
| US4026767A (en) * | 1975-11-19 | 1977-05-31 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Test procedure for microorganisms in blood |
| DE2826965A1 (de) * | 1978-06-20 | 1980-01-17 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene |
| DE2836644A1 (de) * | 1978-08-22 | 1980-03-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene |
| US4212948A (en) * | 1978-10-18 | 1980-07-15 | J. K. And Susie L. Wadley Research Institute And Blood Bank | Apparatus for detecting microbial pathogens employing a cushioning agent |
| DE2850603A1 (de) * | 1978-11-22 | 1980-06-19 | Merck Patent Gmbh | Haemolysierloesung und verfahren zur haemolyse von blut |
| FR2443679A1 (fr) * | 1978-12-08 | 1980-07-04 | Vitatect Corp | Procede pour la determination de la concentration bacterienne par luminescence |
| US4258001A (en) * | 1978-12-27 | 1981-03-24 | Eastman Kodak Company | Element, structure and method for the analysis or transport of liquids |
| GB2059990B (en) * | 1979-07-24 | 1984-07-25 | Kolehmainen S | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of atp and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media |
| SE454278B (sv) * | 1982-06-09 | 1988-04-18 | Lennart Nilsson | Forfarande for forbehandling av prover innehallande mikroorganismer och annat biologiskt material |
| US4525453A (en) * | 1982-10-26 | 1985-06-25 | Eastman Kodak Company | Process for rapidly differentiating between gram-negative and gram-positive microorganisms |
-
1982
- 1982-12-27 US US06/453,033 patent/US4610961A/en not_active Expired - Fee Related
-
1983
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3415718A (en) * | 1965-04-09 | 1968-12-10 | Forkman Anders Carl Gunnar | Composition and process for detecting bacteria in urine |
| JPS53139785A (en) * | 1977-01-19 | 1978-12-06 | Nasa | Detecting of bacteria in blood |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61172063A (ja) * | 1984-10-05 | 1986-08-02 | アボツト ラボラトリ−ズ | 腹膜炎又は腹膜感染の検出法 |
| JPS61182576A (ja) * | 1985-02-07 | 1986-08-15 | イーストマン コダツク カンパニー | 置換キノン電子移動剤の分析測定への使用 |
| JPWO2003035899A1 (ja) * | 2001-10-23 | 2005-02-10 | デンカ生研株式会社 | 血液中の血球と菌の分離方法および血液中の菌の検出方法 |
| JP2013512685A (ja) * | 2009-12-08 | 2013-04-18 | バイオカルティス、ソシエテ、アノニム | 細胞の選択的溶解 |
| JP2021518543A (ja) * | 2018-03-22 | 2021-08-02 | アイデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッドＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． | 生体試料中の細菌の測定方法 |
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