JPS5911177A - 新規乳酸桿菌 - Google Patents

新規乳酸桿菌

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JPS5911177A
JPS5911177A JP57119890A JP11989082A JPS5911177A JP S5911177 A JPS5911177 A JP S5911177A JP 57119890 A JP57119890 A JP 57119890A JP 11989082 A JP11989082 A JP 11989082A JP S5911177 A JPS5911177 A JP S5911177A
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lactobacillus
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    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853—Lactobacillus

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規なラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）に関するものであり、更に詳しく言えば、Ｎ
α２Ｓ・９Ｈ２０に対して制限された抵抗性を示し、Ｎ
α２Ｓ・９Ｈ２０ないしＮＨ３によっては発育促進は受
けないが特定環境の下では、これら２者を減少する能力
を有する新規なラクトバシラス・クリアランス（Ｌａｃ
ｔｏｂａｃｉｌｌｕ、ｑ　ｃｌｅａｒａｍ　）に関する
。
従来知られている乳酸桿菌の性状は、ダラム陽性、嫌気
性または微好気性、無芽胞桿菌で、菌種によって球桿菌
状、湾曲状、コリネ状、糸秋などの形状を呈する。運動
性はなく、カタラーゼ陰性。
硝酸塩を還元しない。またゼラチンを分解せず、インド
９−ル、硫化水素を産生じない。成る種のものは両端染
色性を示し、蛋白分解性、脂肪分解性はあっても極めて
微弱であり、好気的条件よりも嫌気的ないし微好気的条
件で良く発育し、糖分解性が強く、耐酸性でグルコース
の醗酵により５０チ以上の収率で乳酸を産生じ、酢酸の
添加によって、その発育が促進される。動植物に対する
病原性はない。
またこれらの菌の栄養要求は高く、かなり良い栄養組成
の培地を使用しなければ発育出来ないことも知られてい
る。すなわちアミノ酸、にプチド。
核酸関連物質、ビタミン、塩類、脂肪酸またはそのエス
テル、糖類が必要である。
ところで、此等のラフトノ之シラスの「種」への分類に
関する評価事項は、従来■糖分解能、■ガス産生、■光
の旋光性、■発育温度範囲、■発育ｐＨ域であった。（
７’　５７６〜５７８　、　Ｂｅｒｇｅｙｓ　Ｍａｎｕ
ａｌｏｆ　Ｄ’ｅｔｅｒｍｉｉｘａ−ｔｉｖｅ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、第８版診照）。
しかしながら前記評価事項の内、■の発育ｐＨは、菌の
適応力によって、ある程度可変的なものであり、■の旋
光性は生体内よりもむしろ製品に係る問題であり、強い
て生椿池である腸内１口腔さらに膣内との相関のある評
価事項を求めれば、餌料分解との関係で■の糖分解能が
存在するのみであった。つまり、菌とその生碑地との因
果関係、さらにそこにおける働きとの関係は、高い相関
では示されておらず、腐敗物の充満した、また外敵の侵
入に抗して生接し、かつ５　Ｘ　Ｉ　Ｑ　８ｃｅｌｌｓ
／Ｐも生存する所での働きに基づいた分類とは非常に縁
の遠いものとなっており、その矛盾は今日ラクトバシラ
スの研究自体を著しく拘束する原因となっている。何故
ならば、分類は研究を進展させるための基本と−なるか
らである。従って、此−〇様な現状においてラクトバシ
ラスについては、自然の生体条件が充分に考慮され、か
つその活躍の様相の加味された分類の一日も早く確立さ
れることが望まれていた。
例えば、経口的に投与された食・餌料は腸で分解されて
漸次生体に吸収されながら、一方では腐敗過程をたどり
排泄されて行く。この腐敗物質の形成は腸内の腐敗菌に
負う所犬であるが、この物質は腸管をとりまく血管を通
じて吸収もされ、また腸管や、そこに存在する血管を直
接おびやかしている。例えば腸管内で形成されるアンモ
ニア唯一つの物質による腸管破損の修復のために、鶏に
おける実験では、飼料の４％のエネルギーが費やされて
いるとの報告もある。
かかる状態におかれている腸内における物質に、直接か
かわりある面を有する菌として、ラクトバシラスの中に
Ｈ２ＳやＮＨ３の如き腸内悪性物質を減少する機能を有
する菌のかなり存在することが、本発明者らによって明
らかＫされたことは、（１）ラフトノ２シラスの有益性
がこれまでの疫学的ないし統計学的検討の見地から離れ
て、実際に物質しばルで証明された極めて画期的な事柄
であり、（ＩＩ）更に細菌学的見地で言えば従来の分類
法の矛盾の根本的解決を迫る有力なる素材となり、分類
基準をする従来のものと全く変えて設定すべきことを強
く示唆するものである。けだしこのことは上記２つの物
質が酪酸と共に腸内有毒物の代表であるのみならず、穐
々の腸内Ｓ、Ｎ、Ｃ−化合物の代替物質であることから
も当然のことである。
これまで屡々述べ来った様にラクトノシラス分類上の評
価事項とその生神地の関係についての従来の研究は充分
ではなく、両者を関連づけるものは上述せる様に少なか
ったが、新しい思想としてラクトノミシラス分類の評価
事項にＮ　ａ　２　Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３を導入し
た所、従来良く知られる菌の性質ひいてはその命名と上
記２物質の間に極めて高い相関のあることが明らかとな
った。すなわち、これらの物質に対する態度を基にして
、ラクトバシラスを次の幾つかの群に分類する事が出来
る。
＠　決して腸内には在）Ｌ出来ないとされる菌群−これ
らはＮａ２Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３に敏感で、かつ両
物質の低減能力はない。
■　腸内に定住性を有すると言はれて来たアシドフィラ
ス（ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　）の様な菌群−これらは
Ｎα２Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３に鈍感であるが両物質
の低減能力はない。
上記のならびに■に属する菌は、何れも先輩たちの分離
した菌株をＮα２Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３に対する態
度から分類し直したものであるが、別途。
本発明者等は既に栄養要求性が低く、かつその低い栄養
要求性の培地の下で醋酸の如き低級脂肪酸によってのみ
ならず、Ｎα２Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３によっても発
育促進される乳酸桿菌の存在することを特許第９３８９
１７号および第９ｉ２１３号さらに特願昭４９−１３４
７７３号で明らかにした。
ところで、今回本発明者等は、従来全く知られなかった
性状を保有する乳酸桿菌の一群の存在することを突き止
めた。この一群の菌は栄養要求の点では従来良く知られ
る市販の乳酸桿菌などと同じ＜　（（Ｓ−Ｗ）＋ビタミ
ン＋カザミノ酸〕培地で発育出来る栄養要求の菌から、
上記特許第９３８９１７号および第９６６２１６号さら
に特願昭４９−１３４９７３号に開示したような低い栄
養要求の菌にまたがり、しかも、それらの菌の性状は前
記した従来の乳酸桿菌に見られる乳酸桿菌の定義にすべ
て一致するものである。
しかしながら、それに加えるにＮ６Ｌ２３・９Ｈ２０お
よびＮＨ３の何れか、または双方の存在によって発育促
進は示さないが、発育生存環境中において上記の何れの
物質をも減少せしめる作用を有する特性がある。また、
従来良く知られるラクトバシラスと栄養要求の点で同じ
く低くないものも多いにも拘らず、有毒物質の消化能力
については、継代による力価の変動が極めて少く、安定
していることから、菌自らに備わった本質的なものであ
ることが確認出来た。
従って本発明者等は、本発明に係る新規な菌を新種とし
ラクトパシラス・クリアランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ｃｌｅａｒａｎｓ　）と命名した。
かつてロシアの天才、メチニコフが （Ｍｅｃｈｎｉｋｏｖ　：　１８４５〜１９１６）　　
人体老化の主因を腸内の腐１酵によって形成される毒物
のためであるとして中毒説をかかげ、その対策としてヨ
ーグルトを愛飲することが老化防止に役立つと提唱した
。そして今５本発明者らが明瞭に有毒物質を減少せしめ
る一群の菌を見出すことになったのであり、この事はと
りも直さず本発明菌による食品こそ正にメチニコフの学
説を具現したものと言えよう。しかも本発明の新菌群の
Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３など一連の有毒物質の
減少能力が、本明細書中に示した実験データーからも明
らかなように、極めて温和で、かつ毒物との間での、あ
る種のバランス状態を維持している生体への衝撃度が少
い点は高く評価さるべきものである。
本発明者らは、特許第９３８９１７号および第９３６２
１３号および特願昭４９−１３４７７号においてＮα２
Ｓ・９Ｈ２０およびＮＨ３による発育促進−菌を開示し
た。しかしながら我々は上記の様な歴史的慧木曾よりも
、むしろ該閑の利用の面、さらには強力な力価の保持な
どについて詳細な研究を行った。その後今日まで１０年
近い才力を経たにも拘らず、上記特許に係る菌の周辺に
存在した本発明による産業上高度に有意義な菌群につい
ての活用はおろか、それらに関する文献的報告に全く接
していない。
ところで、本発明菌においてはその分離法が重要であり
、その選択を誤らなければ本発明菌種（Ｌ　、　ｃｌｅ
ａｒａｕｓ　）に属する菌を幾株も短期間に単離するこ
とが可能である。
かくして、本発明によれば、他の点では従来良く知られ
るラクトバシラスと変る所が無いとみなされるにも拘ら
ず、腸内の有毒物質をがなりの高率で減少せしめる機能
を有する菌を容易に分離入手し得ることは特筆すべきこ
とである。
また、本発明菌はラクトバシラスの内、腸内化接菌の中
から分離したのであるから、生来他の腸内細菌とはある
種の共像を行うことにすでに馴されており、従ってこれ
を人体に投与した時もすでに腸内に構築されている菌叢
に動揺を与えることはほとんど無い点もまた犬舎すべき
である。
本発明による新規な菌株の内の４株についての実験デー
ターの一部を以下に示す。肉エキス５１゜ペプトン５ｚ
、酪酸ソーダ３　ｌ、　Ｎａ２Ｓ−９Ｈ２００，５１、
ブトつ糖５　ｙ−、ＧａＣＯ３ろ１粘よび水１１（ＰＨ
中性）より成る培地に、本発明による微工研寄託受理番
号６５８７．６５８８．６５８９．６５９０の４種の菌
株を接種し、３７Ｃで培養し、各２４．４８゜７２時間
目のＮａ２Ｓ・９Ｈ２０の減少を調べた。その結果を第
１表に示す。
第１表の結果かられかるように、Ｎα２Ｓの様にほとん
ど栄養とは思い難いほどの物さえも驚くべき速度で減少
して行くことが良く判る。上記の表の結果はＮα２Ｓ・
９Ｈ２０５００■（０，５？）を添加した場合のもので
あるが、これが１０００〜，１ろｏｏＴｔ９添加の場合
もＮａ２Ｓ・９Ｈ２０の減少量は余り変らない。Ｎα２
Ｓ・９Ｈ２０減少量の測定方法は０．０１％の醋酸鉛の
溶液を滴下することからなり、その滴下量は培地の１％
量が適当である。滴下後直ちによく振盪し、その色調（
黒〜灰〜白色）によりＮα２Ｓの残溜分を吸光光度計で
測定する。
次に、肉エキス５？、イブトン５５４．　Ｎａ−酪酸ろ
１．ブトつ糖５　ｙ、　　ＧａＣＯ３ろｙ−、ＮＨ３０
，５ｍＪ（１００％換Ｋ）および水１ｆｆｌ（ＰＨ中性
）より成る培地に、第１表におけると同じ４菌株を接種
し、６７Ｃで各２４．４８．７２時間培養したときに下
馬がどの程度減少したかを調べた。その結果を次の第２
表に示す。
第　　２　　表 （ 第２表の結果かられかるように、菌株によってＮＨ３の
大きな減少量を示す菌も存在する。この実　　（験は培
地にＮ′）（３を０．５コ添加しているが、これを１．
６ｍｌにしても減少量は上表のそれと余り変らない。Ｎ
Ｈ３減少量の測定方法は市販のネスラー試薬（５丸化第
２水銀−２Ｗ／Ｖ％）の１０％溶液を滴下することから
なり、その滴下量は培地の１％量で、滴下後直ちによ（
振盪し、その色調（橙〜黄）により残溜分を吸光光度計
で測定する。
本発明による新規な菌群の分離方法は次の通りである：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（（１）
培地１１中に■肉エキス５ｙ−、−ニブトン５１゜Ｎａ
２５−ｃ＋）（２００，３Ｆ！−、酪酸ナトリウム６１
．ブトつ糖５　ｔ、　ＧａＣＯ３５ｇ−を含有する組成
のもの、またハ＠ハブ）　７５　ｇ−、Ｎａ２Ｓ−９Ｈ
２ｏ　Ｏ，５’ｉ／−＋　　酪酸ナトリウム５１ｉ’、
　　ブトつ糖１０７．　ＧａＣＯ３ろＩを含有する組成
のものを作り、ＰＨを中性に修正し、これに人畜の糞便
を稀釈塗布し、ろ７Ｃで嫌気培養を行う。
２）出現コロニーの内、コロニー周囲に透明感のあるも
のを釣菌する。
３１　　ＬＢＳ培地Ｓ畳拡げ、６７Ｃで２日間培養する
。
※）トリジティカーゼ１０１．酵母エキス５Ｓ４．肉エ
キス１０　ｙ−、ＫＨ２ＰＯ４６ｌｉ’、クエン酸ニア
ンモニウム２？、グ）ｙコ−，１，２Ｏｆ、　　ｔｗｅ
ｅｎ８０１　ｆｉ’ｔ　　酢酸ナトリウム４　Ｑ　９−
、５ｏｌｕｔｉｏｎ　Ｂ　１５−、氷酢酸（９９５％）
３７ｍ、　ｐＨ調整、滅菌不良；　５ｏｌｕｔｉｏｎＢ
　：　ＦｅＳＯ４−７Ｈ２００，５Ｓ’、　Ｍｎ３Ｏ４
−ｎＨ２Ｏ２，４７Ｐｔ　ＮａＣ１Ｏ，５Ｐ、　１Ｊｙ
Ｓｏ、−７Ｉ（２０１０？、水２５０ゴ。
：４）生育コロニーを釣菌し、肉エキス１０　？、はプ
）　ｙ　１０！ｉ’、　ＮａＧ１２ｔ、ブトつ糖１０ｔ
９石灰５ｙ−９寒天１０ｙ−から成る高層培地に穿刺培
養を行ない、ガス非産生菌のみを残す。
（５）乳酸桿菌の性状に合致するかどうかの各種デ。
ストを行ない分類学上乳酸桿菌に入ることを確認する。
（６）　　溶血性テストを行ない、非溶血のもののみを
残す。
ｆ７）　　ＮＩＺ２Ｓ−９Ｈ２０およびＮＨ３を減少せ
しめるや否やを調べる。（使用培地と検査法は前出）。
（８）菌の栄養要求の試験を行う。
（９）上記（７）と（８）とさらに糖分解能を併せ考察
し、分類を行う。
ＯＱ　　高級から低級の栄養に到る種々の培地中でμを
測定する。
θυ　μの低い菌を放棄した後、残った菌株については
各種の動物に投与判定を下す。
※　対数増殖期ｔ。における細菌数ｒＬｏが、ｔｏにお
いてル□になったとすると、μは次式で表わされる： 本発明菌の性状について述べると次の通りである。
■０本発明菌の形態学的性質は次の第６表の通りである
。
（注）上記の形態は、肉汁培地に培養した時の結果であ
るが、肉汁寒天に培養した場合も同型態を示した。（６
７Ｃ培養） ■０本発明菌の各稲培地における生育状態は次の第４表
の通りである。
■１本発明菌の生理学的性質は次の第５表の通りである
。
（注）　７日培養の成績（培養温度６７°）何れもガス
産生はない。
Δ：分解が極めて徐々に行われる。
■０本発明による做上研寄託菌の栄養要求は次の通りで
ある。なお、基礎培地には無機塩とブトつ糖の代表とし
てＳ　ｔｅｐｈｅｎｓｏｎ　−Ｗｅｔｈａｍの培地を用
いた。以下（Ｓ−Ｗ）培地と略す。
（＋：発育する。−二発育しない。） またシスチンは他の金儲アミノ酸に置換しても成績は同
じである。
抛６衣の成績から次のことが判る。
微工研寄託番号６５８９と６５９ｏは無機物＋ブト５つ
糖＋シスチンのみで発育出来ることが判る。
また微工研寄託番号６５８８はその上にビタミンＢ１存
在が必要である。
微工研寄託番号６５８７はビタミンＢ１．Ｃおよびント
テン酸の何れの単独でも発育出来ないが、者の組合せで
発育出来るようになる。
−かし、クリアランスに属する何れの菌株も−Ｗ）＋ビ
タミンでは発育出来ず、（Ｓ−Ｗ）−４−ビン＋カザミ
ノ酸では発育出来る。このろ者で発」来る特性は市販さ
れているラクトバシラスのｔと同じである。
べに従来良く知られている腸内在住性乳酸桿菌玉発明菌
との比較をすれば次の通りである。乳Ｊ菌の内、ブレビ
フイラス（ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕ、ｓ　）　、ブレビイ
ス（ｂｒｅｖｉｓ　）　、ファーメンタム（ｆｅｒｍｅ
ｎｔｕｍ　）等は、通常腸内主１性を有すると言はれて
いる。これらの菌が、Ｎ　ａ　ｚ　Ｓ・９Ｈ２０および
ＮＨ３にどの様な挙動を示すかということはこれら２物
質が（ＮＱ２Ｅ３ｉＮＨ３）腸内汚物の代表と考えられ
るので極めて注目される事柄である。被検菌として、ラ
クトバシラス・アシドフイラ、ｘ、　（Ｌ　、ａｃｉｄ
ｏｐｈｉｌｕｓ）にＡＴＣＣの４３５７゜４９６２．９
８５７．ラクトバシラス・プレビス（Ｌ。
ｂｒ呪Ｓ）にＡＴＣＣ８００３，ラクトパシラス・ファ
ーメンタＡ　（Ｌ、　ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）にＡＴＣＣ
１２ろ６９をそれぞれ選んで実験を行ったが、５００ｍ
９のＮα２Ｓ・９Ｈ２０を培地に投入したとき、これら
の菌はこれに殆んど手をつげないことが明らかとなった
。
結論として、本発明の菌群は、Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０およ
びＮＨ３またはそれらの延長線上の物質とも見なし得る
硫化水素、砒化アンモニウム、メチルメルカプタン、エ
チルメルカプタン、ジメチルサルファイド、ジエチルサ
ルファイ白アセトアルデヒド９．スカトール、メチルア
ミン、エチルアミン。
ジエチルアミン、トリエチルアミン（実施例２参照）な
どを減少せしめる能力を有する点で、従来良く知られて
いる菌株とは著しく異るが、なおラクトバシラスの緒特
性はすべて備えており、現在のところでは上述の点以外
での相違はこれを認め（ハ） ることか出来ない。
以上の事実を実験によって示せば次の通りである。
基礎培地として肉エキス１０ｙ、はプトン１０１゜Ｎａ
Ｃｊｌ　２　ｔ、　／ｙ＝＋　−、ｘ、　１　ｇ−、Ｃ
ａＣＯ３１ｇ−、酵母エキス０．１１よりなる培地（７
７Ｈ６，Ｏ〜７．０）１１にＮａ２Ｓ・９Ｈ２０をそれ
ぞれ０．３　、０．５　、０．７　、０゜９゜１．１　
、１．５　、１．７　、１．９　、２．１，２．ろ、２
．５Ｐ、またＮＦ（３をそれぞれ１．０　、１．３　、
１．７　、２．０　、３．０　、４．０　、５．１１　
。
５．５　、６．ＯＳ’添加して３７Ｃで７２時間培養し
、各画のＮａ　Ｓ、９ＨＯおよびＮＨ３に対する抵抗性
を調２ べた。その結果は次の第７表の通りである。
有し発育することができるという点で従来公知のラクト
バシラスと明確に区別されるものであり、またＮＨ３に
対しても適度の抵抗性を有するので、適当な飲食物と共
に服用して人体の整腸、健康促進のために極めて有用な
用途をもっている。なお、本発明菌が特願昭４９−１３
４７７３号の菌よりもＮａ２Ｓ・９Ｈ２０に対し抵抗性
の少いことは、服用に際し人体への急激な影響がなく、
反って好ましい結果の得られることは驚くべきことであ
る。
以下の実施例によって本発明の詳細な説明する。
実施例　１ 本来腐敗し易いクリームに本発明菌を投与、ないしは投
与後発酵増菌せしめた場合、如何程、腐敗への時間を延
ばす事が出来るか、またその時の菌数との関係はどうな
っているかを検べた。
実験に用いたクリームとその成分は次の通りである。■
カスタードクリーム：小麦粉７５　ｙ−、砂糖１２５１
ｉ’、牛乳５ＱＱｗＬｌ、卵黄４個、無塩バター５ｉ；
■ホイップクリーム：生クリーム１本、砂糖１（Ｉｎ。
菌と識別名：従来良く知られるラクトバシラス・アシビ
フイラス、ラクトバシラス・プレプイス。
ラクトバシラス・ファーメンタムなどをＨＷダルーゾ、
市販に供されている大量生産に適する様に充分に練り上
げられている菌をＣグループ、そして本発明菌群をＴＩ
グループの名称で以下記述する。
上記ＨＷグループ、Ｃ−グループおよびＴＩグループに
属する菌を、無菌化したカスタードクリーム１？当りそ
れぞれ５０００万細胞注入し、６７Ｃに放置した時の４
８．７２．９６時間後の菌の増殖の程度を第１図にグラ
フで示した。
第１図のグラフから明らかなように、ＴＩグループの菌
数の増加が他のグループに較べて非常に大きいことが良
く判る。菌株によって異なるが、培養７２時間では１０
９個を越える菌株も多々、存在する。また添加菌量５０
００万細胞という数字であるが、この数は製造時の最適
添加量を横開した結果、得られたものである。しかしな
がら本発明を実施するに当っては必らずしも此の数字に
拘束されるものではない。
実験（Ｂ）：雑菌がクリーム中に混入、それが増殖した
時の菌数 従来、大腸菌、ブトつ球菌および枯草菌を以って一般雑
菌ないし腐敗菌の内の強力なるものの代表と見做し得る
ことが判っているので、この６者のクリーム中での発育
を調べることにより腐敗の進行ひいてはクリームの保存
性の如何を検剖した。
ブトつ球菌２０９Ｐ、大腸菌ＡＴＣＣ２５９２２ならび
に枯草菌ＡＴＣ（３６６３３をカスタード９クリーム１
？当りそれぞれ５細胞、１万細胞および５千万細胞添加
して増殖せしめた時の増殖の様子を調べた。
その結果は第２図（１）、（Ｉｆ）、（１１０通りであ
る。
第２図のグラフからも明らかな様に、最も増殖力の強い
のはブドウ球菌であり、また１万細胞。
さらに５千万細胞の感染では破壊的なまでの菌の増殖が
認められ、ホイップクリームに於いて、１日以上の保存
が危険なことが実験データは教えている。
（イ）クリーム製造開始時、（ロ）増殖の途上、（ハ）
製造後に雑菌を人為的に混入せしめた場合の夫々の菌の
増減、つまり干渉を調べ１食品として何れ力１優れてい
るかを横側した。
実験は、ラクトバシラスの添加量としてを１５０００万
細胞とし、雑菌は実験（Ｂ）の如く添加量として５細胞
、１万細胞、５千万細胞の場合につ（・て行なったが、
これらの全てを示すことは唯混乱をイ音カロするのみと
思われ、また今日の食品製造技術の進歩からみて不必要
の面もあると思われるので、そのうちの代表高データー
を記載し、他は必要に応じて触れることにする。
（１）　　１４菌により本発明のラフトノ勧うスの受け
る影響 大腸菌５細胞／ｆｉ−の場合：ＨＷ、ＣおよびＴＩグル
ープの何れのラクトパシラ、スも何ら増殖に影響を受け
なかった。１万細胞／？添加の場合：ＨＷおよびＣグル
ープのラクトハシラスは１０〜６０チ減の菌数であった
。これに対してＴＩグループは影響を受けなかった。
（２）　　ラクトハシラスにより大腸菌の受ける影響 ラクトハシラスの存在しない場合に較べ。
大腸菌５細胞／２の場合に増殖菌数はＨＷグループ処よ
りＡ〜％、Ｃグループによりイ〜″Ａｏ、　　ＴＩグル
ープによりイ。〜１／’；　ｏ。
（菌により相異る）に減することが明らかとなった。
大腸菌１万細胞の場合は総じて５細胞の場合の２倍の値
、つまり、Ｈ，Ｗグループによっては変わらず、Ｃグル
ープによってはμ〜済０．ＴＩグループにより”Ａｏ〜
”Ａ５０の増殖菌数となった。
響 ラフトノ之シラスの増殖に及ぼす大腸菌の影響は、５細
胞、１万細胞の何れの添加の場合でも殆んどないことが
明らかとなった。
（２）　　大腸菌の受ける影響 ５細胞のものに於ては同時添加の場合に較べて捧〜馳の
菌数になっており、特にＴＩグループの菌を先行培養し
ている時には、僅かに１×１０　個ないしそれ以下であ
った。１万細胞添加の場合も同時添加のμ〜オ０程度で
あった。
（ハ）乳酸発酵終了後、大腸菌を添加した場合（１１ラ
クトハシラスの受ける彰響 何れのグループのラクトハシラスも殆んど影響を受けな
いことが明らかとなった。
（２）大腸菌の受ける影響 ＨＷおよびＣグループの菌の場合、仲）−（２）の場合
と余り変わらないがＴＩグループに於ては、５細胞の添
加では全く増殖が認められず、１万細胞の場合も３７Ｃ
保存で１×１０５〜２　Ｘ　１０”個、つまり、１０倍
から２０倍程度に増殖するに過ぎないことが明らかとな
った。
■　枯草菌およびブトつ球菌との関係で見た実験上記大
腸菌に於けると同様の実験を行なった所、枯草菌の場合
はラクトハシラスの増殖により受ける干渉によって、枯
草菌の菌数は大腸菌の場合のほぼ５０％程度となり、ま
たブトつ球菌の場合は大腸菌の１４０チ前後であった。
以上の実験結果から明らかなように、本発明菌のＴＩグ
ループの添加増殖によって雑菌の増殖は強く抑えられ、
保存期間を延長することが可能なことが明らかである。
ことに今日、製造技術の進歩によって雑菌の侵入を極端
に少なくすることが可能になりつつあり、従って、ＴＸ
Ｉ）ｖ−プの菌の添加と相俟って、従来不安がられて来
たクリームの腐敗防止に大きく役立つものである。
さらに、クリームの種類についてであるが、ホイップク
リームの場合の増殖菌数はカスタードクリームの７割前
後であった。
実施例　２ スキムミルクｉ　ｏ　ｇ−、砂糖１ｇ−１寒天０．２１
ｉ’。
水ｉｏｏ罰を素材として、これを滅菌し、本発明による
菌（微工研寄託番号６５８７，６５８８．６５８９゜６
５９０）を無菌的に投与し、２４時間醗酵せしめて作っ
たヨーグルトを１日２個（朝、夕）、計約４０００億細
胞を投与した時の菌と人体との関係を調べた。その結果
を第９表および第１０表に示す。
１つの菌株によるヨーグルトは夫々５人の成人に投与し
たが、極端に異なる成績を示すものは見当らなかったの
で、総合的結果を表中に纏めて記入した。
上表にも示した様に、４株ともこれを大量かつ長期間投
与しても、生体への悪影響は全くない。
それのみでなく、すべての実験者から連続帯下開始６日
日頃からすでに疲労感の減少と一層の快便の症状が得ら
れた。
第１０表 ※　測定方法については、吸光光度法、ガスクロマトグ
ラフ法（ＣＣ分析法）、ＧＯ−オルファクトメーター法
（ＧＣ−０Ｍ法）、ＣＣ−マススはクトロメーター法（
Ｇｏ−ＭＳ分析法）等に依った。測定対象物質は硫化水
素、アンモニア、メチルメルカプタン。
、エチルメルカプタン、ジメチルサルファイド９．アセ
トアルデヒ白スカトール、プロピオン酸、酪酸、トリエ
チルアミンであり、測定物質の減少量は値で示しである
。
滞溜時間については、排泄菌量が投与菌量の〃にまで減
少するに要する期間を以て示した。この場合も糞便排泄
量を１日３００１として計算した。
例えば６５８７菌においては、連日４０００億細胞投与
し、連日１５００億細胞排泄にしていたものが、投与中
止して後４００億細胞以下の排泄量に落ちるまでの日数
が、５人の実験者におい【、２日から６日の間であった
事を示している。
腸内在住菌については、被検者に固有のラクトバシラス
を含めて８種類の正常腸内細菌叢の菌属を逐一追跡調査
した。結果は第１０表に示す如く、投与中、投与中止後
にかけて変動は認められなかった。
ラクトバシラスについてはかつて無害性、非病原である
ことの証明に精一杯であったが、今日では、ある量販上
のラクトバシラスが生体の、ことに粘膜部に生律するこ
とが健康の維持に必要不可欠であることが明らかとなっ
て来た。この様な知見を踏えて、本発明菌によれば、非
常に腐敗し易いものとして現在も取扱いに最大の注意を
払っている食用クリームに９本発明閑の様に自己増殖力
。
排他力が共に強い菌を注入し、あるいはさらにそこで増
菌せし７めることは、クリームの腐敗延長に役立つのみ
でなく、これを飲食することにより、腸内にお（づ゛る
腐敗物の減少その他整腸作用などに有効であることがわ
かる。
また最近開発されつつある抗生物質は、効果も極めて犬
でありかつ抗菌スはクトルも広く、従って人体に投与す
るときに腸内細菌叢のかなりの動揺も時として生ずるこ
とに）Ｉる。このような場合にＡ・〜発明菌を多蘇投与
すれば、薬物投与停止後の菌叢の修復、およ−び健康体
えの恢復に役立ち１本発明は産業上極めて大きな有用性
を有している。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明菌および比較菌をクリーム中で培養した
ときの増殖曲線：ｔ６よび培地ｐＨの変化を示すグラフ
であり、第２図（Ｉｌ、（ｎ）、（１）はブトつ球菌。 大腸菌、枯草菌のクリーム中での増殖曲線を示す（ほか
３名） 第　　２　　図 吋閏　　　　　　　　　β手間 ・←７・・ト・・つ諌′ゐ２ｏ’Ｊ　Ｐ、　　　・−一
一一１人庄易莞ＡＴＣ（×−ズナに草畝ハＲχＥ＆３３ ４２３− （ｍ） β手間 ：２鉾２２゜ 手続補正書 １．　事件の表示 昭和５７年特許願第１１９８９０号 ２、　発明の名称 新規乳酸桿菌 ３、　補正をする者 事件との関係：特許出願人 名称　　財団法人　　成研会 ４、　代理人 （２）　　発明の詳細な説明を下記の如く補正する、。 ４　　　　５　　　光の旋光性、　旋光性。 ４　　　下から４　　生棲　　　　　生棲６　　　　３
　　　実際に物ｐ　　￥際に糞便物ａの８　　　　　　
４　　　　１３４９７３　　　１３４７７６９　　　　
　３　　　　Ｍｅｃ）＋ｎ１ｋｏｖ　　Ｍｅｃｈｉｎｊ
ｋｏｖ９　　　下から３　　１３４７７　　１３４７７
３１０　　　　’　１０　　　　ｃｌｅａｒａｕｓ　　
　ｃｌｅａｒａｎｓｌｏ　　　下から３　　接菌　　　
　　凄菌日　　　酬　０．０）　ｇ　　　ｏ、（１［υ
瀾（１ｖ）の画　　　イ■　　　　補正前　　　　　補
正後−　　　　　　　　　　　　７−１−１１−−リー
８，０．エ　−−−−−−−−−−。 １２　　下から７〜６　　ＮｃＬ−顛）ｊ４８　Ｆ！　
　削除する。 １シ　　下から６　　　　５ＩＩＩｇ 同　　　　　　　同　　　　　３．！ｉ’　　　　　　
　　１．９１４　　下から７　　　　不良　　　　　不
要１９　　　　（背は、ｒｑン　　　　　　−一−−＋
−十＋丹 １９　　第５表内　　　Ｎｏ、　　　　　　ＮＯ３−１
９第５表内　　　Ｎｌｌ４−ＮＴ−１４＋明細店の頁　
　　行　　　　補正前　　　　　補正後２６　　　　　
８　　　殆んど　　　　削除する３０　　　　１　　　
ことが　　　　ことを３４　　　　６　　　砂糖１ｇ　
　　砂糖１０ｇ変動１丁余り一 ０明Ｉｖｌｌｌ狽第３８自１〜２行目、［役立ち、本発
明は産業上・・・・−１を ［役立つ。以上に述べた詳細な説明を要約すれば本発明
乳酸桿菌は、従来長く知られる■ハｌ、、Ｂ４１ｇａｒ
ｉｃｕ、Ｓなどよりも生体内での活動力は強く、反対に
Ｌ　、　ｄｅｏｄｏｒａｎｓよりも弱い、そのためＬ　
、　ｄｅｏｄｏｒａｎｓでは強過ぎるが、従来菌では心
もとないような局面での活用が存する。すなわち保健用
として口腔用、内腹用、生薬（婦人用を含む）、さらに
ナプキンやタンポンとの共存や混在なども有用〒ある。 この事を更に簡略に述べれば、Ｌ　、　ｄｅｏｄｏｒａ
ｎｓは菌の交代力な有するが故に医薬的活用面が適して
いるのに対し、Ｌ、　ｃｌｅａｒａｎｓ　　は生体内〒
の交代力まではなく、１１ｆ（同棲的↑、その間本菌特
有の仕事を行う故、保健的ない、し健康指向の面〒の活
用が適切である。よって本発明は保健ならびに産業上・
」と抽圧する。 ２、特許請求の範囲 肉エキス５Ｑ、ペプトン５ｇ、Ｎａ　２Ｓ　・９１」、
、ＯＯ，５ｇ、ブドウ糖１ｇ、ＣａＣ０１ｇ、水ｉｆ　
　（Ｐｌ−１中性）より成る培地、−３− および肉エキス５ｇ、ペプトン５ｇ、ブドウ糖１Ｑ、Ｃ
ａＣ０？　ＩＱ、ＮＨ１０，５ｍ（１００％アンモニア
として）、水１□％（ＰＨ中性）より成る培地に接種、
培養したときにＮａ２Ｓ・９Ｈ、、ＯとＮＨ３の双方を
減少せしめることができて、またステファンソンーウエ
サム呵地〔以下（Ｓ−Ｗ＞と略す：ＫＨ２Ｐ０，１（］
７７ＭＳｏ　・７１−１０　ｏ、７ｇ、　ＮａＣｌ　Ｉ
Ｑ、　（ＮＨ，）、ＨＰｏ。 ２ ４Ｇ＝　Ｆｅ５ｏ　　４　・７Ｈ，Ｏ□、ｏ３Ｑ　、ブ
ドウ糖５Ｑ）＋ヴイタミン（Δ：９００国際単位、　Ｂ
　、：ＩＩＬｒｇ、　Ｂ、、＋１＃、　Ｂ、　：１屹Ｂ
１．、：５’ｒ、ニコチン酸アミド　１６■、パントテ
ン酸カルシウム゛８■、Ｃ：６４す、Ｄ、、：１２０国
際国際下十カザミノ酸より成る唱地に該菌を鴫養し、そ
の対数増殖期にＮａ２Ｓ・９Ｈ２００５ｑおよび／又は
ＮＨ，０，５ｍ（１００％換算）を投入して特性を示す
新規ラクトバシラス・クリアランス。 １）　発育に要する栄養は以下■、Φカ問にまたがり、
核酸関連物質や脂肪酸を必要としない ■　（Ｓ−Ｗ）十含鴎アミノ酸。 ■　（Ｓ−Ｗン＋ビタミン　＋カザミノ酸；１１）　ダ
ラム陽性、桿菌、運動性なく、カタラーゼ陰性、硝１ｉ
ｆｔ塩還元せず、ゼラチンを分解せず、インドール、硫
化水素を生成せず。 ブドウ糖、乳糖よりの乳酸形成能力は高く、酢酸の添加
によって発育促進される性質。 ４２５

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 肉エキス５Ｊ、ペプトン５？、酪酸ソーダろ１゜Ｎ（１
    ２Ｓ　・９Ｈ２００−５Ｆ　、ブ１１糖５　！ｉ’＋　
    ＣａＣＯ３３Ｓ’　。 水１１（ｐＨ中性）より成る培地、および肉エキス５？
    、ペプトン５？、酪酸ソーダ３？。 ブト１糖５　Ｆ、　ＣａＣＯ３３Ｌ　ＮＨ３０，５１ｎ
    ｌ（１００％アンモニアとして）、水１１（ｐＨ中性）
    より成る培地に接種、培養したときにＮα２Ｓ・９Ｈ２
    ０とＮＨ３の双方を減少せしめることができて、またス
    テファ÷ツンーウエサムの培地〔以下（Ｓ−Ｗ）と略す
    ；　ＫＨ２ＰＯ４１Ｓ’＋　ＭｐＯ４−７Ｈ２００，７
    ｔ、　ＮａＧｌＩ　Ｓ’、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４４１，
    ＦｅＳＯ４−，７Ｈ２００，０３ｔ。 ブドウ糖５Ｆ）＋ヴイタミン（Ａ：９００国際単位。 Ｂ、：１ｒｎ９．　Ｂ２：１ｍｐ、　Ｂ６：１〜．　Ｂ
    １□：５ｒ、　＝コチン酸アミｒ：１６帖パントテン酸
    カルシウム：８Ｔｎ９゜Ｃ：６４■、Ｄ２：１２０国際
    単位）十カザミノ酸−より成る培地に該菌を培養し、そ
    の対数増殖期にＮ　Ｇ２　ｂ　・９　Ｈｚ　ＵＯ−ｂ　
    ｆＦおよび／又はＮＨ３［１，５ｍＪ　（１００％換算
    ）を投入しても何ら発育促進作用を示さず、かつ、肉エ
    キス１０１．ペプトンＩ　Ｑ　Ｓ’＋　ＮａＧ１２ｆ。 グルコース１　ｆ、　ＧａＣｒＯ３１Ｓ’＋　酵母エキ
    ス０．１ｉ。 水１１より成る培地ニおいて、Ｎａ２Ｓ−９Ｈ２０１，
    ５ｆ以下の濃度域で抵抗性を有し、かつ下記の特性を示
    す新規ラクトバシラス・クリアランス：１）発育に要す
    る栄養は以下■、■の間にまたがり核酸関連物質や脂肪
    酸を必要としない■（ｓ−ｗ）十含硫アミノ酸。 ■（ｓ−ｗ）＋ビタミン、十カザミノ酸；Ｉ）ダラム陽
    性、桿菌、運動性なく、カタラーゼ陰性、硝酸塩還元せ
    ず、ゼラチンを分解せず。 インド−ル、硫化水素を生成せず、ブトつ糖。 乳糖よりの乳酸形成能力は高く、酢酸の添加によって発
    育促進される性質。
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