JPS58897A - イノシンおよびグアノシンの製造法 - Google Patents
イノシンおよびグアノシンの製造法Info
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- JPS58897A JPS58897A JP56097310A JP9731081A JPS58897A JP S58897 A JPS58897 A JP S58897A JP 56097310 A JP56097310 A JP 56097310A JP 9731081 A JP9731081 A JP 9731081A JP S58897 A JPS58897 A JP S58897A
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- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
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- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明社、イノシンおよびグアノシンの製造法に関する
。
。
イノシンおよびグアノシンは、医薬品中呈昧性゛５′−
リポヌタレオチドなどの合成原料として重要な物質であ
）、これを安価かつ大量に製造することは、工業上きわ
めて意義深いことである一従来、イノシンｉにａ／）よ
びグアノシンの製造法として社、天然物中から抽出単離
する方法、あるいは、微生物によみ発酵法などが知られ
ているが、いずれの方法も、震造工１１が煩雑であった
〕、原料が高価で−うえ）、ｉるいは発酵収率が低かり
たｅｔどの欠Ｊ１１を有し、工業的見地からは必ずしも
満足でき為ものではない。
リポヌタレオチドなどの合成原料として重要な物質であ
）、これを安価かつ大量に製造することは、工業上きわ
めて意義深いことである一従来、イノシンｉにａ／）よ
びグアノシンの製造法として社、天然物中から抽出単離
する方法、あるいは、微生物によみ発酵法などが知られ
ているが、いずれの方法も、震造工１１が煩雑であった
〕、原料が高価で−うえ）、ｉるいは発酵収率が低かり
たｅｔどの欠Ｊ１１を有し、工業的見地からは必ずしも
満足でき為ものではない。
本発明者らは、微生物によるイノシ゛ンまたは／および
グツ２フフＯ発酵生歯において、発酵収率の高いイノシ
ンｔえは／およびグアノシンｏｇｗ造法を確立するため
に、Ｉｉ々検討を重ねた結果、−酵培地の主原料として
用いられる糠質ｔ％従来の初発培地に一括して添加する
方法を改め、黴生物む輪消費達１に勘案しつつ、培養の
進行中に少量ずつ間歇的あるいは連続的に添加すること
によって、イノシンま友は／およびグアノシンの生成収
率が、飛躍的に増大するという新事実を見出し、こむ知
見に基いて鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成し友。
グツ２フフＯ発酵生歯において、発酵収率の高いイノシ
ンｔえは／およびグアノシンｏｇｗ造法を確立するため
に、Ｉｉ々検討を重ねた結果、−酵培地の主原料として
用いられる糠質ｔ％従来の初発培地に一括して添加する
方法を改め、黴生物む輪消費達１に勘案しつつ、培養の
進行中に少量ずつ間歇的あるいは連続的に添加すること
によって、イノシンま友は／およびグアノシンの生成収
率が、飛躍的に増大するという新事実を見出し、こむ知
見に基いて鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成し友。
本発明は、イノシンｔたは／およびグアノシン生ｉｉｌ
能を有する微生物を炭素源として糖質を含む培地に培養
しイノ９ｙまたは／およびグアノシンｉ１：＠養物中に
生成蓄積せしめ培養物からイノシン筐たは／およびグア
ノシンを採取する方法において、該培地中の炭素源とし
ての糖質の濃度が約ｌ嚢以下にある拭態で糖質會閣歇的
あるいは連続的ｔＣａ如し、培地中の糖質Ｏ゛濃度約１
憾を越えないように維持して培養することを特徴とする
イノシンまたは／およびグアノシンの製造法である。
能を有する微生物を炭素源として糖質を含む培地に培養
しイノ９ｙまたは／およびグアノシンｉ１：＠養物中に
生成蓄積せしめ培養物からイノシン筐たは／およびグア
ノシンを採取する方法において、該培地中の炭素源とし
ての糖質の濃度が約ｌ嚢以下にある拭態で糖質會閣歇的
あるいは連続的ｔＣａ如し、培地中の糖質Ｏ゛濃度約１
憾を越えないように維持して培養することを特徴とする
イノシンまたは／およびグアノシンの製造法である。
本発明方法において、培地に添加される炭素源としてＯ
ｓ質としては、友とえば糖類〔鉤、ダルコース、フラク
トース、マンノース、シェークロー人、１ルトース、糖
蜜、澱粉、＃粉の加水分解物（例、コーンスターチの糖
化液など）など〕、糖アルコール（例、ソルビトールな
ど）などが挙げられるっ 本発明方法にｐいては、培養中に厳１ｇ源としての糖質
の濃度が約１％以下にある軟融で、炭素源として糖質を
間歇的あるいは連続的Ｋｍ加し、培地中の糖質の濃度を
約１９６を越えないように維持して培養を行なう。培養
の初発培地中の炭素源と質濃度が約１４ｉ下になった後
に糖質を添加し始めればよい。また、上記初発培地中の
炭素源としての糖質の仕込濃度は、約４％以下である場
合が好ましい。
ｓ質としては、友とえば糖類〔鉤、ダルコース、フラク
トース、マンノース、シェークロー人、１ルトース、糖
蜜、澱粉、＃粉の加水分解物（例、コーンスターチの糖
化液など）など〕、糖アルコール（例、ソルビトールな
ど）などが挙げられるっ 本発明方法にｐいては、培養中に厳１ｇ源としての糖質
の濃度が約１％以下にある軟融で、炭素源として糖質を
間歇的あるいは連続的Ｋｍ加し、培地中の糖質の濃度を
約１９６を越えないように維持して培養を行なう。培養
の初発培地中の炭素源と質濃度が約１４ｉ下になった後
に糖質を添加し始めればよい。また、上記初発培地中の
炭素源としての糖質の仕込濃度は、約４％以下である場
合が好ましい。
本発明方法においては、培養液中の糖質濃度は上記した
ように釣１％以下の範囲から選ばれ九所定の値に制御さ
れるが、そのように培養液中の糖質濃度を制御する期間
は、培養開始から培養終了までの培養の全期間であって
屯よいが、その中の特定の期間、たとえばイノシンまた
Ｆｉ／およびグアノシン生成の旺盛な培養１２時間目頃
から培養＃ｆｉ でｖｌ）４聞であってもよい。
ように釣１％以下の範囲から選ばれ九所定の値に制御さ
れるが、そのように培養液中の糖質濃度を制御する期間
は、培養開始から培養終了までの培養の全期間であって
屯よいが、その中の特定の期間、たとえばイノシンまた
Ｆｉ／およびグアノシン生成の旺盛な培養１２時間目頃
から培養＃ｆｉ でｖｌ）４聞であってもよい。
また、培養液中の糖質濃度を所定０値に制御するためＫ
は、培養液中Ｏ残存糖量ｔｔＫ把握しておく必要かあ、
るが１、そのような万一としては、たとえば、通、富の
纏Ｉ！ｌ定試薬を用いて、培養液中の着質濃度ｔ−＃Ｌ
ＩＩ知る方法のはかに、各種センナ−Ｓを用いて、培養
液中培養排気Ｉス中の酸素ブス濃度中炭酸ガス濃度を測
定することによって、培養液中の糖質濃度を、間接的に
知る方法などがあけられる。なかでも、後者の方法、す
なわち各種七ンサー楓（用いて培養液中の糖質濃度を知
る方法においては、それらａｉｍ定ｓａｉと糖質ツイー
ド装−とｔａ防させることによって、培養液中の糖質＃
１度【、所定の値に自動的に制御することが可能であ）
−１便宜である。
は、培養液中Ｏ残存糖量ｔｔＫ把握しておく必要かあ、
るが１、そのような万一としては、たとえば、通、富の
纏Ｉ！ｌ定試薬を用いて、培養液中の着質濃度ｔ−＃Ｌ
ＩＩ知る方法のはかに、各種センナ−Ｓを用いて、培養
液中培養排気Ｉス中の酸素ブス濃度中炭酸ガス濃度を測
定することによって、培養液中の糖質濃度を、間接的に
知る方法などがあけられる。なかでも、後者の方法、す
なわち各種七ンサー楓（用いて培養液中の糖質濃度を知
る方法においては、それらａｉｍ定ｓａｉと糖質ツイー
ド装−とｔａ防させることによって、培養液中の糖質＃
１度【、所定の値に自動的に制御することが可能であ）
−１便宜である。
本発明で使用される微生物は、イノシンま友は／お工び
ダアノシン生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い、＃微生物の具体的としては、たとえばバチルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｍｓ）属菌、プレビパクデＶりム（Ｂｒｅｖ
ｌｂａｃｔｅｒｉｗｍ）属菌、コリネバタデリウム（Ｃ
＠ｒｙｍ＊ｂａｃｔｅｒ愚−膳）属菌な°どが挙けられ
ル、鋏ハナルス属菌としては、たとえばバチルス・プｉ
ｐｖ ｘ （Ｉｌｉｃｉｌｌｍｓ ｐｗｍｉｌｍｓ
） ＊バチルス・ズプテ９ス（Ｂａｃｌｌｌｗｓ ａｍ
ｂｔｉｌｉｓ ） すどＣ１１＃挙ｉｆられ、具体的に
は、バチルス・プ建ルスＮｏ、１５１１−Ａ−１７（ｙ
ｇｉｎ ｍＰ−７，１Ｆ０ １２４７７）。
ダアノシン生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い、＃微生物の具体的としては、たとえばバチルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｍｓ）属菌、プレビパクデＶりム（Ｂｒｅｖ
ｌｂａｃｔｅｒｉｗｍ）属菌、コリネバタデリウム（Ｃ
＠ｒｙｍ＊ｂａｃｔｅｒ愚−膳）属菌な°どが挙けられ
ル、鋏ハナルス属菌としては、たとえばバチルス・プｉ
ｐｖ ｘ （Ｉｌｉｃｉｌｌｍｓ ｐｗｍｉｌｍｓ
） ＊バチルス・ズプテ９ス（Ｂａｃｌｌｌｗｓ ａｍ
ｂｔｉｌｉｓ ） すどＣ１１＃挙ｉｆられ、具体的に
は、バチルス・プ建ルスＮｏ、１５１１−Ａ−１７（ｙ
ｇｉｎ ｍＰ−７，１Ｆ０ １２４７７）。
バチルス・ズプテリスムＴＣＣ１３１１５６（ＩＦ０１
４１！４）などが挙けられ為、上記ＦＩＥｉ１Ｍ Ｉ
ＩＰＩ号は、ブダペスト条約による工業技術院微生物工
業技ｍＪｉｒ究所の寄託番号ｔ、ＡＴＣＣ番号はジ・ア
メリカン・タイデー力〜チャー・コレクシ藺ン（Ｔｈｅ
、＾ｍｅｒｉｃａ鳳 Ｔｙｐｅ Ｃ−ロｗａｒｅ
Ｃ＠１１ｅｃｔｉｅ＋ａ ）（米−）の寄託番号を、Ｉ
ＦＯ番号は財団法人発酵研究所０寄託番号をそれぞれ表
わす、１にお、上記ＩＦ０１２４７７株ａ輪公１１８ｓ
１−４＠Ｊｉ３９号会報に記載されている。
４１！４）などが挙けられ為、上記ＦＩＥｉ１Ｍ Ｉ
ＩＰＩ号は、ブダペスト条約による工業技術院微生物工
業技ｍＪｉｒ究所の寄託番号ｔ、ＡＴＣＣ番号はジ・ア
メリカン・タイデー力〜チャー・コレクシ藺ン（Ｔｈｅ
、＾ｍｅｒｉｃａ鳳 Ｔｙｐｅ Ｃ−ロｗａｒｅ
Ｃ＠１１ｅｃｔｉｅ＋ａ ）（米−）の寄託番号を、Ｉ
ＦＯ番号は財団法人発酵研究所０寄託番号をそれぞれ表
わす、１にお、上記ＩＦ０１２４７７株ａ輪公１１８ｓ
１−４＠Ｊｉ３９号会報に記載されている。
また、上記ムＴＣＣ１３９５６株社、ジ・アメリカン・
タイプ・′ｊＩルテヤー・コレクシ曹ン（ＡＴＣＣ）発
行のカタＵグーオグ・ストレインズ１第１４＠１９８０
１ｆ−（Ｔｈ＠Ａｍｅｒｉｃａｍ Ｔｙｐｅ Ｃｔｓ口
ａｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＣａｔａｌｏｇｕｅ
ｏｆ ５口５ｕｎｓ ｌ Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ
ＩＥｄｉｔｉｏｍ１９８０）Ｋ収載されている。
タイプ・′ｊＩルテヤー・コレクシ曹ン（ＡＴＣＣ）発
行のカタＵグーオグ・ストレインズ１第１４＠１９８０
１ｆ−（Ｔｈ＠Ａｍｅｒｉｃａｍ Ｔｙｐｅ Ｃｔｓ口
ａｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＣａｔａｌｏｇｕｅ
ｏｆ ５口５ｕｎｓ ｌ Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ
ＩＥｄｉｔｉｏｍ１９８０）Ｋ収載されている。
一ブレビバクテリウム属菌としては、たとえばブレビバ
クテリウム・アンモニアガスムＴＣＣ２１４７７、ＡＴ
Ｃに ２１４７ｇ 、 ＡＴＣＣ２１４７１１，ＡＴ
ＣＣ２１４１１０（ＡＴＣＣ＊タログ・オン・ストレイ
ンズ１＠ｉ ４ｆ１９ｓｏ都Ｋ［Ｉｌｌれていり＆ど＃
挙げられる。
クテリウム・アンモニアガスムＴＣＣ２１４７７、ＡＴ
Ｃに ２１４７ｇ 、 ＡＴＣＣ２１４７１１，ＡＴ
ＣＣ２１４１１０（ＡＴＣＣ＊タログ・オン・ストレイ
ンズ１＠ｉ ４ｆ１９ｓｏ都Ｋ［Ｉｌｌれていり＆ど＃
挙げられる。
該培地には炭素源以外には、ｉ１素源等が、通常の培養
におけるき同様の方法で添加される。ｌｌ素―トシては
、コーン・スチートリカー、綿実粕。
におけるき同様の方法で添加される。ｌｌ素―トシては
、コーン・スチートリカー、綿実粕。
酵母エキス、乾−一母、プイッシュミー〜、肉エキス、
ペプトン、カザ７７）酸などの有機物質ヤアン（ニアガ
ス、アンモニア水、硫酸アン毫エウふ、塩化７）毛ニウ
ム、炭酸７ノセニウム、硝酸アン毛ニウム、りンーアく
モニウムなどの無機窒素化合物のほかに、尿素、アイノ
酸などの有機窒１、素化合物が使用される。また培地に
は、上記の脚本−や脅素源のほかに、用いる微生物の生
育やイノシンまたｉｆ ／およびグアノシンの蓄積に必
要な種々の金属、ビタンン、アミノ酸−が適宜添加され
る。
ペプトン、カザ７７）酸などの有機物質ヤアン（ニアガ
ス、アンモニア水、硫酸アン毫エウふ、塩化７）毛ニウ
ム、炭酸７ノセニウム、硝酸アン毛ニウム、りンーアく
モニウムなどの無機窒素化合物のほかに、尿素、アイノ
酸などの有機窒１、素化合物が使用される。また培地に
は、上記の脚本−や脅素源のほかに、用いる微生物の生
育やイノシンまたｉｆ ／およびグアノシンの蓄積に必
要な種々の金属、ビタンン、アミノ酸−が適宜添加され
る。
培養は、娠盪あるいは通気攪拌深部培養などの好気的条
件下に＊總される。培養温度は遥當約２０ないし４５℃
ｅｓｉｓから、用いる微生−〇生育およびイノシンｔｔ
Ｌは／およびグアノシンの蓄積に好。
件下に＊總される。培養温度は遥當約２０ないし４５℃
ｅｓｉｓから、用いる微生−〇生育およびイノシンｔｔ
Ｌは／およびグアノシンの蓄積に好。
適な温度が違択される。ｉた培養液ＯｐＨは約５ないし
９１ｉ度が好適で、培養中０ｐＨｆこのような至適ｐＨ
域に保つために、硫酸、塩酸、アンモニアガス、アン毫
ニア水、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶
液、炭酸カルシウム、生石灰などを適宜添加してもよい
、このような条件下に、通常的４Ｉないし１２０時−培
養すれば培地φに著量９イノシンまたは／およびグアノ
シンが生成基れる。 。
９１ｉ度が好適で、培養中０ｐＨｆこのような至適ｐＨ
域に保つために、硫酸、塩酸、アンモニアガス、アン毫
ニア水、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶
液、炭酸カルシウム、生石灰などを適宜添加してもよい
、このような条件下に、通常的４Ｉないし１２０時−培
養すれば培地φに著量９イノシンまたは／およびグアノ
シンが生成基れる。 。
こシようＫして培養液中に蓄積されたイノシンまたは／
およびグアイシンは、通常の精製中４段１、たとえばイ
、オン交換樹脂や活性炭によるタロマドグラ？イー、沈
澱法、あ為いは廖媒抽出法などによって容易に採取する
ことができる。
およびグアイシンは、通常の精製中４段１、たとえばイ
、オン交換樹脂や活性炭によるタロマドグラ？イー、沈
澱法、あ為いは廖媒抽出法などによって容易に採取する
ことができる。
従来、微生物を利用するイノシンまたは／およびグアノ
シンの発酵生態については、すでにいくつかの報告がな
されているが、それらの報告においては、主嶽素源であ
る糖質を、培養開始時Ｋ 一括して初発培地に添加する
力泳がとられている（伺えば、野上ら；ア建）駿核酸、
１７巻、・・頁。
シンの発酵生態については、すでにいくつかの報告がな
されているが、それらの報告においては、主嶽素源であ
る糖質を、培養開始時Ｋ 一括して初発培地に添加する
力泳がとられている（伺えば、野上ら；ア建）駿核酸、
１７巻、・・頁。
１９６７都。城ら；アし１核酸、１６巻、 １００頁１
９６７都、）、ｔた、すでに一部Ｏ核酸関連物質の発酵
生態においては、培ＩＩＯ途中で糖質【追補添加するこ
とによって、糖質の使用量を増大させる試みもなされて
いる（Ｉｌｌえば、小会らｅ Ａｇ”’−Ｂ！ｏｌ、Ｃ
ｋ暢０．４８巻、１９會頁、１９７８都、）が、このよ
うな場合も、培養液中の糖質濃度が通常の常識的な濃度
域を逸鳳し、微生物の生育が着しく阻害されるなどの事
態ｔｍ避する友め０ものであって、培養液中の糖質濃度
をあらかじめ定められた値に制御しようとするものでは
ない。
９６７都、）、ｔた、すでに一部Ｏ核酸関連物質の発酵
生態においては、培ＩＩＯ途中で糖質【追補添加するこ
とによって、糖質の使用量を増大させる試みもなされて
いる（Ｉｌｌえば、小会らｅ Ａｇ”’−Ｂ！ｏｌ、Ｃ
ｋ暢０．４８巻、１９會頁、１９７８都、）が、このよ
うな場合も、培養液中の糖質濃度が通常の常識的な濃度
域を逸鳳し、微生物の生育が着しく阻害されるなどの事
態ｔｍ避する友め０ものであって、培養液中の糖質濃度
をあらかじめ定められた値に制御しようとするものでは
ない。
これＫｊｌして、本＠＠Ｏ方沫は、イノシンまえは／お
よびグアノシン生成能を有する微生物を、培養液中の職
質温度を、イノシンま友は／およびグアノシンの生禽期
において、約１−以下のあらかじめ定められた値に制御
しつつ、培養を行うもので、上記の方法とは明らかに異
なる新規な方法であり、イノシンまえは／お１びグアノ
シンの対消費纏収亭會向上させることができる。
よびグアノシン生成能を有する微生物を、培養液中の職
質温度を、イノシンま友は／およびグアノシンの生禽期
において、約１−以下のあらかじめ定められた値に制御
しつつ、培養を行うもので、上記の方法とは明らかに異
なる新規な方法であり、イノシンまえは／お１びグアノ
シンの対消費纏収亭會向上させることができる。
したがって、本発明の方法においては、対消費・軸収率
倉向上させることがで負るので、原材料である糖質の使
用量１減らすことができ、本発明は工業上有利な方法で
ある。
倉向上させることがで負るので、原材料である糖質の使
用量１減らすことができ、本発明は工業上有利な方法で
ある。
以下Ｋ１１ｍ！施Ｉ／１４會挙げて、本発明ｔさらに具
体的に説明する。なお、以下においてパーセント■はと
〈Ｋことわ）のないかき゛）、重量／容量パーセント（
ｗ／マ、ＩＩＩ）を貴わす。
体的に説明する。なお、以下においてパーセント■はと
〈Ｋことわ）のないかき゛）、重量／容量パーセント（
ｗ／マ、ＩＩＩ）を貴わす。
９１！−鉤 ｌ
栄養庫天培地上に生育し良バチ〜ス・プミｋＩスＮ１１
５１１−Ａ−１７（ＦＩＲＭ ＢＦ−’７ ；
ＩＦＯ１２４７７）會ンルビトーに／２嚢、 １ｃｍＰ
Ｏ番０．１憾、ＫｇＨＰＯ＋９．３嘔、乾燥酵母 ２１
６からなる減菌され九シード培地に接種し、３７℃でＩ
１１時閣振徴培養し友、５を春ジャーファーメンタ−に
グルコース０ＪＩＩ、（ＮＨ４１ＳＯ４０．４憾、ｒｌ
ｂｙ！ｉｔン酸ンーダ０．５１Ｇ ＩＱＩａＰＯ４６
，０５１Ｇ。
５１１−Ａ−１７（ＦＩＲＭ ＢＦ−’７ ；
ＩＦＯ１２４７７）會ンルビトーに／２嚢、 １ｃｍＰ
Ｏ番０．１憾、ＫｇＨＰＯ＋９．３嘔、乾燥酵母 ２１
６からなる減菌され九シード培地に接種し、３７℃でＩ
１１時閣振徴培養し友、５を春ジャーファーメンタ−に
グルコース０ＪＩＩ、（ＮＨ４１ＳＯ４０．４憾、ｒｌ
ｂｙ！ｉｔン酸ンーダ０．５１Ｇ ＩＱＩａＰＯ４６
，０５１Ｇ。
ＫＣＩ ０．１ ％ 、ＣａＣＩａ・２ＨａＯ（Ｌ２
優、Ｍ儒ＳＯａ・４Ｈｚ００．００３１゜ヒス’ｔ−
シン０．０３１Ｇ、 ヒオｆン２００ｓｆ／ｌ、 Ｍｇ
５Ｏｔ ”？）１２００．２ｓ、 ９ ｌ横峻（純度７
０．３１１） ０．２５１Ｇ、 ：１−ンスティーデ！
＃カー１１からなる滅菌主培地２を倉入れ、上記シード
培養物雪００ｍＬ ｆ移層した。温度３８℃、回転数１
１０００ｒｐｉ 、通気量１．２１７ｍＬａ Ｋて培養
を開始し、培養中は２５−（マ／マ）アンモニア水を自
動的に添加してｐＨｔＬ４に保持し友、なお、縦素源で
あるグルコース溶液の添加は以下に示す）ｆｊ法で行な
り九。
優、Ｍ儒ＳＯａ・４Ｈｚ００．００３１゜ヒス’ｔ−
シン０．０３１Ｇ、 ヒオｆン２００ｓｆ／ｌ、 Ｍｇ
５Ｏｔ ”？）１２００．２ｓ、 ９ ｌ横峻（純度７
０．３１１） ０．２５１Ｇ、 ：１−ンスティーデ！
＃カー１１からなる滅菌主培地２を倉入れ、上記シード
培養物雪００ｍＬ ｆ移層した。温度３８℃、回転数１
１０００ｒｐｉ 、通気量１．２１７ｍＬａ Ｋて培養
を開始し、培養中は２５−（マ／マ）アンモニア水を自
動的に添加してｐＨｔＬ４に保持し友、なお、縦素源で
あるグルコース溶液の添加は以下に示す）ｆｊ法で行な
り九。
万沫Ａ゛、培養開始後、培養液中のダルコース濃度が６
．１−以下になった書時閣目から培養液中Ｏグルコース
濃度がＣＬＯＯｈ％ないし０．１参の範囲に保持される
ように、培養液中Ｏグルコース濃度【、２ＲＸｍＫグル
コース・オキシダーゼを用いる酵ｍ法で一定しながら、
別途滅菌した８Ｇ−グルコース溶液【連続的に添加しつ
つ、′５６時間培養【絨けた。この閾に消費され九ダに
コースＯｉｉ ａｍｔであった。
．１−以下になった書時閣目から培養液中Ｏグルコース
濃度がＣＬＯＯｈ％ないし０．１参の範囲に保持される
ように、培養液中Ｏグルコース濃度【、２ＲＸｍＫグル
コース・オキシダーゼを用いる酵ｍ法で一定しながら、
別途滅菌した８Ｇ−グルコース溶液【連続的に添加しつ
つ、′５６時間培養【絨けた。この閾に消費され九ダに
コースＯｉｉ ａｍｔであった。
方法Ｂ 檜養闘始直ｉｌより培養液中のダルコース濃度
がｌ鳴以下に保持されるように、Ａと一橡にしてグｊＭ
−Ｘｔｌ！Ｉ！ＩＩＩ３ＫＩｉｍしつつ、４８時間培養
を続けえ、この１ｆｌＫ消費されたグルコースＯｉｌは
１５０ｔ であっ九。
がｌ鳴以下に保持されるように、Ａと一橡にしてグｊＭ
−Ｘｔｌ！Ｉ！ＩＩＩ３ＫＩｉｍしつつ、４８時間培養
を続けえ、この１ｆｌＫ消費されたグルコースＯｉｌは
１５０ｔ であっ九。
方法Ｃユ培１ｌＩＩｌｌ始直後より培養液中のダルコー
ス濃度が１．８憾ないしＬ２１ＧのＩｌ−に保持される
ように、方法ムと同様にしてグルコースを連続的に添加
し、４０時間培養を１置し良、この閾のグルコース消費
量は１４０１であつえ。
ス濃度が１．８憾ないしＬ２１ＧのＩｌ−に保持される
ように、方法ムと同様にしてグルコースを連続的に添加
し、４０時間培養を１置し良、この閾のグルコース消費
量は１４０１であつえ。
方法Ｄ 培養開始−に１４・ｆＯダにコースを添加し、
培地申Ｄグルコースが消費されてしまう４２時ｉｆｉ目
まで培養ｔａ続しえ。
培地申Ｄグルコースが消費されてしまう４２時ｉｆｉ目
まで培養ｔａ続しえ。
上記のそれヤれの方法で培養を行なりえ各培養物中のイ
ノシンおよびダアノシシ量を高速液体タロ！Ｆグラフィ
ーｔｍいて一定し、Ｊ１１麦に示す結果【傳え。
ノシンおよびダアノシシ量を高速液体タロ！Ｆグラフィ
ーｔｍいて一定し、Ｊ１１麦に示す結果【傳え。
第 １ 表
＊ＪＵＭＪ１−１ 力ｆｆ１Ａ ３
４．４ ２ｌ−ｆｒｌ＊為例１−２ 方
法Ｂ ２８６ １７．９寮
験例１−１ 力泳ＣＩｔ３ １α２ｆ＋
、）イノシンおよびグアノシンの蓄積総量の値は、発酵
終了時ｏｔｔｍｔｓ定し、初発液量に対する値に換算し
て示した。
４．４ ２ｌ−ｆｒｌ＊為例１−２ 方
法Ｂ ２８６ １７．９寮
験例１−１ 力泳ＣＩｔ３ １α２ｆ＋
、）イノシンおよびグアノシンの蓄積総量の値は、発酵
終了時ｏｔｔｍｔｓ定し、初発液量に対する値に換算し
て示した。
１１１！Ｉ緬−２
実施例１と同組成のシード培地に、第２表に示す菌株ｔ
それぞれ接種し、３８℃、１８時間振最培＊恢、実施例
１と同組成の主培地に移植して、寮に鉤１とｌ１ＩＩＩ
の方法で培養した。こＤとき、グルコースの添加方法は
ｉＪ！ａ１ｍＮ１の「方法Ａ」お工び［方法ＤＪＯｊｊ
法で行なった。培養終了後、実施例ＩＫ記載の方法に従
って培養物中のイノシンおよびグアノシンを定態し、対
糖収率を計算して、第２麦に示す結果を得た。
それぞれ接種し、３８℃、１８時間振最培＊恢、実施例
１と同組成の主培地に移植して、寮に鉤１とｌ１ＩＩＩ
の方法で培養した。こＤとき、グルコースの添加方法は
ｉＪ！ａ１ｍＮ１の「方法Ａ」お工び［方法ＤＪＯｊｊ
法で行なった。培養終了後、実施例ＩＫ記載の方法に従
って培養物中のイノシンおよびグアノシンを定態し、対
糖収率を計算して、第２麦に示す結果を得た。
＠ ２ 表
実施例、１と同組成のＶ−ド培地１００ｇを２００１容
Ｖ−）墳費槽に仕込み、常法に従って滅１．冷却した。
Ｖ−）墳費槽に仕込み、常法に従って滅１．冷却した。
これに坂ロフラスコで培養したバチルス・プミルス凪１
５８−ムーｔｙ（ｒＥＲＭ ｌ５ｐ−７、Ｉｒｏ１２
４７７）を接種し、温度３７ｔ、攪拌回転数１８（ｌｒ
ｐｍ、通気量５０ｅ／ｗｉｎの条件で１８時間培養し丸
。
５８−ムーｔｙ（ｒＥＲＭ ｌ５ｐ−７、Ｉｒｏ１２
４７７）を接種し、温度３７ｔ、攪拌回転数１８（ｌｒ
ｐｍ、通気量５０ｅ／ｗｉｎの条件で１８時間培養し丸
。
別に、爽ｆｉＮ１のダμコースＱ、８Ｘｔコーンヌ！−
チ糖化液４Ｘにかえ喪主発酵培地９００１を、２゜００
０５賽発酵槽に仕込み、常法に従って滅菌冷却した後、
これに前記Ｖ−ド培養物ＩＱＯＩを移植して、３８℃、
２４０ｒｐ膳、８００ｊ／ｓｉｎの条件で培養を開始し
丸。培養開始後、２０時間目から、培養液中のグルコー
ス濃度が０．００１％ないしＯ，１％の範＊に＊持され
る１うに、培養液中のグルコース＃ＩＩＬｋＪｒルコＸ
タット法て１時開毎に測定しながら、コーンスターチの
糖化液ｉ１０分おきに間歇的に添加して７１ＩＩＩｌ＠
まで培養を継続した。この閾、初発績に対しグに：２−
スに換算して２・嘔の糖化液が消費された。なお培養液
のｐＨは培養の全期間を通じて２５ｇＩＩアン砥ニア水
でｔ３ないし６．５に自動的に調節した。培養終了後、
培養液中のイノシンおよびグアノシンを高速液体タロマ
ドグラフィーで定置した所、それぞれ２９．６ ｔ／ｌ
、および４．２ｆ／／ｌであった。なお、この場合の対
軸収率は＃ｉｉｔの会計で２１．３嘔であった。
チ糖化液４Ｘにかえ喪主発酵培地９００１を、２゜００
０５賽発酵槽に仕込み、常法に従って滅菌冷却した後、
これに前記Ｖ−ド培養物ＩＱＯＩを移植して、３８℃、
２４０ｒｐ膳、８００ｊ／ｓｉｎの条件で培養を開始し
丸。培養開始後、２０時間目から、培養液中のグルコー
ス濃度が０．００１％ないしＯ，１％の範＊に＊持され
る１うに、培養液中のグルコース＃ＩＩＬｋＪｒルコＸ
タット法て１時開毎に測定しながら、コーンスターチの
糖化液ｉ１０分おきに間歇的に添加して７１ＩＩＩｌ＠
まで培養を継続した。この閾、初発績に対しグに：２−
スに換算して２・嘔の糖化液が消費された。なお培養液
のｐＨは培養の全期間を通じて２５ｇＩＩアン砥ニア水
でｔ３ないし６．５に自動的に調節した。培養終了後、
培養液中のイノシンおよびグアノシンを高速液体タロマ
ドグラフィーで定置した所、それぞれ２９．６ ｔ／ｌ
、および４．２ｆ／／ｌであった。なお、この場合の対
軸収率は＃ｉｉｔの会計で２１．３嘔であった。
上記培養液の１．０００Ｌｉと９、苛性ソーダでｐｌｉ
ｔｌＯＫ−節して一過し、この枦＊ Ｉ ００ ｔｋｌ
ｏｏｏｌのアニオン交換−腫アンバーライトＩＲＡ−４
０２（ＣＭ。
ｔｌＯＫ−節して一過し、この枦＊ Ｉ ００ ｔｋｌ
ｏｏｏｌのアニオン交換−腫アンバーライトＩＲＡ−４
０２（ＣＭ。
（０−ム・アンド・ハース社１ｉ１ 、 米ｍ ） ０
＊ ９ムにかけ友後、０．２ＮＨＣｔで５Ｖ＝１０速度
で溶出ヲ行い、イノシンおよびグアノシンの含有区分４
０００ｊ！ｔＩＩ良。次に、これＩａｓｏｚの活性炭の
カラ五に＠着させたのち、５マ／マ、嘔のブタノール・
水を用いて溶出し、見られたイノシンおよびグアノシン
の画分（５１００ｔ）を苛性ソーダで申和後、減圧下で
濃縮し＊（１４０ｔ）。この濃縮？＆を５℃に冷却して
、イノシン（２１０＃４Ｆ）とグアノシン（２９ＡＩＦ
）の混合結晶を得た。
＊ ９ムにかけ友後、０．２ＮＨＣｔで５Ｖ＝１０速度
で溶出ヲ行い、イノシンおよびグアノシンの含有区分４
０００ｊ！ｔＩＩ良。次に、これＩａｓｏｚの活性炭の
カラ五に＠着させたのち、５マ／マ、嘔のブタノール・
水を用いて溶出し、見られたイノシンおよびグアノシン
の画分（５１００ｔ）を苛性ソーダで申和後、減圧下で
濃縮し＊（１４０ｔ）。この濃縮？＆を５℃に冷却して
、イノシン（２１０＃４Ｆ）とグアノシン（２９ＡＩＦ
）の混合結晶を得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （］）イノシンまたは／およびグアノシン生産能を有す
る微生物を炭素源として糖質を含む培地に培養しイノシ
ンまたは／およびグアノ７ンを培養物中に生成蓄積せし
め培養物からイノシン１えは／およびグアノシンを採取
する方法において、該培地中の炭素源としての糖質の濃
度が約１−以下にある状態で糖質ｔｇ歇的あるいは連続
的に添加し、培地中の糖質の濃度ｔ＃１１ｉｔ越えない
ように維持して培養することを特徴とするイノシンまた
は／およびグアノシンの製造法。 （２）培地中の炭素源としての糖質が消費されてその８
度が約ｌ暢以下になった後に糖質を添加し始める特許請
求の範囲第１項記載の製造法。 絨の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097310A JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
| GB08217564A GB2100731B (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing inosine and/or guanosine by fermentation with addition of a carbohydrate |
| US06/389,459 US4452889A (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing inosine and/or guanosine |
| FR8210828A FR2508061A1 (fr) | 1981-06-22 | 1982-06-21 | Procede de production d'inosine et/ou de guanosine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097310A JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58897A true JPS58897A (ja) | 1983-01-06 |
| JPH0339679B2 JPH0339679B2 (ja) | 1991-06-14 |
Family
ID=14188910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56097310A Granted JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4452889A (ja) |
| JP (1) | JPS58897A (ja) |
| FR (1) | FR2508061A1 (ja) |
| GB (1) | GB2100731B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0211241A3 (de) * | 1985-07-06 | 1989-06-28 | Forschungszentrum Jülich Gmbh | Verfahren zur Exoenzymgewinnung durch Bakterienkultur |
| US5204245A (en) * | 1991-05-15 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Extraction of thymidine and other nucleosides |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1001452B (it) * | 1965-06-11 | 1976-04-20 | Ajinomoto Kk | Metodo per produrre inosina mediante fermentazione |
| JPS5545198B2 (ja) * | 1973-09-22 | 1980-11-17 | ||
| JPS533580A (en) * | 1976-06-29 | 1978-01-13 | Mitsubishi Oil Co Ltd | Preparation of yeast cells |
-
1981
- 1981-06-22 JP JP56097310A patent/JPS58897A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-17 US US06/389,459 patent/US4452889A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-06-17 GB GB08217564A patent/GB2100731B/en not_active Expired
- 1982-06-21 FR FR8210828A patent/FR2508061A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2100731A (en) | 1983-01-06 |
| FR2508061A1 (fr) | 1982-12-24 |
| GB2100731B (en) | 1985-07-17 |
| JPH0339679B2 (ja) | 1991-06-14 |
| FR2508061B1 (ja) | 1984-12-21 |
| US4452889A (en) | 1984-06-05 |
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