JPS5889185A - 酵素活性を有する生物触媒の製造方法 - Google Patents
酵素活性を有する生物触媒の製造方法Info
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- JPS5889185A JPS5889185A JP57199862A JP19986282A JPS5889185A JP S5889185 A JPS5889185 A JP S5889185A JP 57199862 A JP57199862 A JP 57199862A JP 19986282 A JP19986282 A JP 19986282A JP S5889185 A JPS5889185 A JP S5889185A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、水性媒体に不溶で流動床式あるいは固定床式
反応槽の使用に特に適した酵素活性を有する主書触媒の
製造方法に関する。
反応槽の使用に特に適した酵素活性を有する主書触媒の
製造方法に関する。
工業的規模で酵素反応を実行することから、水性媒体に
不溶の生物触媒が登場した。この理由は。
不溶の生物触媒が登場した。この理由は。
＃素は一度使用しただけで活性を失なってはいけないた
め、その結果Ｉｌ素は不活性の支持体に結合すなわち「
同定化」することにより、処理丁べ會物質すなわち「基
質」から切部的に分離できるようにさせたからである。
め、その結果Ｉｌ素は不活性の支持体に結合すなわち「
同定化」することにより、処理丁べ會物質すなわち「基
質」から切部的に分離できるようにさせたからである。
ＷＩ素を支持体に結合さる方法がいくつか報告されてい
る。
る。
一＃木なセラｉックス、ガラス、クリ力などのｇ＊賞に
直接吸着させる。酵素の支持体への結合は非常に弱いの
で得られる生産物は不安定であるという短所がある。
直接吸着させる。酵素の支持体への結合は非常に弱いの
で得られる生産物は不安定であるという短所がある。
−ｗＩ本は、ジアルデヒドなどの２官能性試県。
あるいはカルボシイイドなどの１官能性試薬により、合
成高分子（たとえば英Ｉ！ｉｌ特Ｗｆ第１．３５７，３
１７号＠細書のアゼノエチルセルロース］あるいは天然
高分子（たとえば米国４１軒第４．０９４．７４３号明
細書のキト−サン）などの有機支持体に化合的に結合し
ている。
成高分子（たとえば英Ｉ！ｉｌ特Ｗｆ第１．３５７，３
１７号＠細書のアゼノエチルセルロース］あるいは天然
高分子（たとえば米国４１軒第４．０９４．７４３号明
細書のキト−サン）などの有機支持体に化合的に結合し
ている。
合成支持体に固定化された酵素は食品における使用に必
要な性質を有していない。−万有横支持体は圧縮され易
く比較的低９！Ｆｆのため工業的方法にはあま〕適して
いない、またこのために有機支持体は、大量処理用のｆ
ｌｔｗＪ床式あるいは固定床式反応槽に使用することは
不可能ではないにしても困難である。
要な性質を有していない。−万有横支持体は圧縮され易
く比較的低９！Ｆｆのため工業的方法にはあま〕適して
いない、またこのために有機支持体は、大量処理用のｆ
ｌｔｗＪ床式あるいは固定床式反応槽に使用することは
不可能ではないにしても困難である。
さらに＃素と、変換されるべき物質すなわち基質を充分
接触させることが必要である。すなわち酵素は不活性支
持体組織の小孔中にあるのではな（、外表面に固定化さ
れていることが好ましい。
接触させることが必要である。すなわち酵素は不活性支
持体組織の小孔中にあるのではな（、外表面に固定化さ
れていることが好ましい。
反応液が粘性を持っていたり、コロイドやｍ形物質すな
わち不純物、を含有している場合は、実際の応用に影響
する上記の問題や制限条件はさらに厳しくなる。これら
の問題は食品工業が現在直面しているものである。
わち不純物、を含有している場合は、実際の応用に影響
する上記の問題や制限条件はさらに厳しくなる。これら
の問題は食品工業が現在直面しているものである。
本発明者は食品工“業での使用忙適し、上記のいかなる
問題も存在しない有効な酵素同定化方法を見出した。
問題も存在しない有効な酵素同定化方法を見出した。
本発明は硬（て蜜な無機質の粒子な中）−１νの層で被
覆し、被覆した粒子を２官ｌＩｌ！性試県で安定化させ
、このように処理した支持体に＃素を結合させることよ
〕成る。水性１１１１ＫＫ不溶でＩｆ＃に流動床式ある
いは固定床式反応槽の使用に適した酵素活性を有する生
物触媒の製造方法に関する。
覆し、被覆した粒子を２官ｌＩｌ！性試県で安定化させ
、このように処理した支持体に＃素を結合させることよ
〕成る。水性１１１１ＫＫ不溶でＩｆ＃に流動床式ある
いは固定床式反応槽の使用に適した酵素活性を有する生
物触媒の製造方法に関する。
使用すべき中心核の無機質は、好ましくはたとえばシリ
カゲルの微小孔粒子あるいはＴｉｅｓやｚｒＯｓのよう
な金属酸化物あるいはセラぜツクスなどの、多孔性表面
を有する硬くて化学的に不活性な無機質より選ばれる０
粒子の径はふつう０．０５から５ａｍ！で０．１カら０
．２５１１Ｊｌが好ましい。
カゲルの微小孔粒子あるいはＴｉｅｓやｚｒＯｓのよう
な金属酸化物あるいはセラぜツクスなどの、多孔性表面
を有する硬くて化学的に不活性な無機質より選ばれる０
粒子の径はふつう０．０５から５ａｍ！で０．１カら０
．２５１１Ｊｌが好ましい。
中心核は、キチンを高温でアルカリＳ液中で脱アセチル
化することにょ９得られる天然高分子であるキト−サン
で被覆される。キト−サシは硫酸以外の酸が存在する場
合を除くと水に不溶である。
化することにょ９得られる天然高分子であるキト−サン
で被覆される。キト−サシは硫酸以外の酸が存在する場
合を除くと水に不溶である。
キチンは無管椎動吻の保饅外皮（甲殻類動物の甲殻ある
いは昆虫の外皮）の主要万機成分であル。
いは昆虫の外皮）の主要万機成分であル。
これはまたある柚の低級植物（たとえは命ノコ）の骨格
−にも見られる。これは筒分子量（約２００．０００ン
でβ（１−４）結合に特徴づけられる１Ｍ−７セチルー
Ｄ−グルヲサイνの直線状高分子である。に−ア七チル
基の除去は国難であり、市販品の説アセチル化は決して
完全ではなくふつう５０から８５％である。キト−サン
という名前で知られているのはこれらの物質である。
−にも見られる。これは筒分子量（約２００．０００ン
でβ（１−４）結合に特徴づけられる１Ｍ−７セチルー
Ｄ−グルヲサイνの直線状高分子である。に−ア七チル
基の除去は国難であり、市販品の説アセチル化は決して
完全ではなくふつう５０から８５％である。キト−サン
という名前で知られているのはこれらの物質である。
無機質粒子の＃！回を中トーサンでＩｌ橿するための謳
１Ｒ＃は、たとえば績酢鍍（１０から８０重量鳴、好ま
しくは６ｏから６０重量優）のような酸の中に、１から
３０ ｆ／ｌ （好ましくは４から １０９／ｌ）のキ
ト−サシを含有する水Ｗ１１ＩＩＬを準備することであ
る１次にこの溶液に、ＩＪＫつき１０から５００Ｆの固
形吻濃［Ｋなるまで、攪拌しながら無機質粒子を加える
０次に真空中で混合物のガスを抜き、浮遊液を数時間静
置し、デカシトしてから被覆粒子をｒ過により回収する
。このようにして回収した粒子上次に水洗し真空中で乾
燥する。このようにして得られた支持体は無機質支持体
とほとんど同じ密匿を持ち、たとえばシリカデルの場合
は０．５５ｆ／−であり、キト−サシ（０，２４ｆ／／
ｄ ）よりも大きい。これはキト−サンのみと比較する
と、工業的応用という観点から明白な長所を有する。す
なわち これはダラム乾燥重量あた〕の酵素単位はふつう中トー
サンのみの場合と同様の活性を有している。これは中）
−１ンの活性部位は粒子の表面全体に分布しているため
充分に利用されるという事実により説明できる。ｌｆｆ
が高いために同じ重量あるいは同じ活性あたりに占める
カラム中の容積はキト−サンだけの場合より小さい。
１Ｒ＃は、たとえば績酢鍍（１０から８０重量鳴、好ま
しくは６ｏから６０重量優）のような酸の中に、１から
３０ ｆ／ｌ （好ましくは４から １０９／ｌ）のキ
ト−サシを含有する水Ｗ１１ＩＩＬを準備することであ
る１次にこの溶液に、ＩＪＫつき１０から５００Ｆの固
形吻濃［Ｋなるまで、攪拌しながら無機質粒子を加える
０次に真空中で混合物のガスを抜き、浮遊液を数時間静
置し、デカシトしてから被覆粒子をｒ過により回収する
。このようにして回収した粒子上次に水洗し真空中で乾
燥する。このようにして得られた支持体は無機質支持体
とほとんど同じ密匿を持ち、たとえばシリカデルの場合
は０．５５ｆ／−であり、キト−サシ（０，２４ｆ／／
ｄ ）よりも大きい。これはキト−サンのみと比較する
と、工業的応用という観点から明白な長所を有する。す
なわち これはダラム乾燥重量あた〕の酵素単位はふつう中トー
サンのみの場合と同様の活性を有している。これは中）
−１ンの活性部位は粒子の表面全体に分布しているため
充分に利用されるという事実により説明できる。ｌｆｆ
が高いために同じ重量あるいは同じ活性あたりに占める
カラム中の容積はキト−サンだけの場合より小さい。
中心核の無機質がこの触媒をより固くしているためキト
−サシよりも圧縮されにくい。
−サシよりも圧縮されにくい。
この触媒は、工業的応用に適合する流動床に使用するの
に適している。流動化処理中。
に適している。流動化処理中。
基質は大量見場で変換される。生物学的流体（たとえは
乳汁やホエイなど）あるいは浮遊コロイドを含む流体の
処理では、固定床置の処理に比ベカラムの詰まる危険性
がずっと少なくなる。キト−サシを流動化する試みもな
されているがうま（いっていない。凝集がおきてキト−
サンに接しないで流れる液も出てくる。同定床にキト−
サンを使用することも問題がある。−トーサンは低密度
のため、処理量゛が増加すると浮いてきてカラムの出口
に集まるようになり晶い、内圧が増加し反応工程に負担
がかρ・つてくる結果、処理量が減少しカラムが詰まっ
てくる。流動化のもうひとつの長所は、触媒粒子は基質
中でたえず攪拌されている状態にあるということである
。このため分散の問題は小さくな９酵素活性は最大にな
る。
乳汁やホエイなど）あるいは浮遊コロイドを含む流体の
処理では、固定床置の処理に比ベカラムの詰まる危険性
がずっと少なくなる。キト−サシを流動化する試みもな
されているがうま（いっていない。凝集がおきてキト−
サンに接しないで流れる液も出てくる。同定床にキト−
サンを使用することも問題がある。−トーサンは低密度
のため、処理量゛が増加すると浮いてきてカラムの出口
に集まるようになり晶い、内圧が増加し反応工程に負担
がかρ・つてくる結果、処理量が減少しカラムが詰まっ
てくる。流動化のもうひとつの長所は、触媒粒子は基質
中でたえず攪拌されている状態にあるということである
。このため分散の問題は小さくな９酵素活性は最大にな
る。
キト−サンよりも取り扱いがはるかに容品である。
キト−サンで被覆した粒子は、好ましくは線状のりアル
デヒドより選んだ２富能性試薬で安定化される。２富能
性試薬にはたと見はマロンアルデヒド、コハク酸アルデ
ヒド、ゲルメールアルデヒド、およびアジピン酸アルデ
ヒドなどがある。ゲルメールアルデヒドが市販品として
入手し易いという点から好んで使用される。この操作の
目的は。
デヒドより選んだ２富能性試薬で安定化される。２富能
性試薬にはたと見はマロンアルデヒド、コハク酸アルデ
ヒド、ゲルメールアルデヒド、およびアジピン酸アルデ
ヒドなどがある。ゲルメールアルデヒドが市販品として
入手し易いという点から好んで使用される。この操作の
目的は。
中トーサンを中心核無機質に結合されるために。
および中心核無機質がはがれて来るのを紡ぐために、中
トーサンを「安定化」しおよび／あるいは中トーサン層
のまわ〕に高分子網を形成することである。
トーサンを「安定化」しおよび／あるいは中トーサン層
のまわ〕に高分子網を形成することである。
酵素がゲルメールアルデヒドによって影響を受けない時
、すなわちグルタールアルデとドが存在しても触媒活性
を失わない場合に用いられる方法の最初の実施ｍ様とし
て、２５ム嫌優までの一度のダルタールアルデヒドの水
溶液の中へ支持体を導入する。ゲルメールアルデヒドに
よって影響を受けない酵素には、活性部位にチオール基
を持たないものがある。この見通は好ましくは冨温にお
いて、好ましくは緩衝液中でＰＨ２１３１ら８の範囲で
実施する。見場時間はゲルタールアルデヒドの濃直に依
存するが、ふつう３１分から数時間である。
、すなわちグルタールアルデとドが存在しても触媒活性
を失わない場合に用いられる方法の最初の実施ｍ様とし
て、２５ム嫌優までの一度のダルタールアルデヒドの水
溶液の中へ支持体を導入する。ゲルメールアルデヒドに
よって影響を受けない酵素には、活性部位にチオール基
を持たないものがある。この見通は好ましくは冨温にお
いて、好ましくは緩衝液中でＰＨ２１３１ら８の範囲で
実施する。見場時間はゲルタールアルデヒドの濃直に依
存するが、ふつう３１分から数時間である。
全反応物は好ましくは空気のないところ、たとえは真空
中で反応させ、過剰のゲルタールアルデヒドは水洗によ
り除去する。濃度と反応時間は、支持体の表面がそこに
化学的に結合したアルデヒド基に覆われるようになるべ
きものであり、たとえば支持体がシリカデルの場合は同
定されたグルタールアルデヒＶは支持体重量のＯ，Ｓ１
Ｊ・ら５憾を占める。
中で反応させ、過剰のゲルタールアルデヒドは水洗によ
り除去する。濃度と反応時間は、支持体の表面がそこに
化学的に結合したアルデヒド基に覆われるようになるべ
きものであり、たとえば支持体がシリカデルの場合は同
定されたグルタールアルデヒＶは支持体重量のＯ，Ｓ１
Ｊ・ら５憾を占める。
たとえばリジン結合の有する遊離のアぜノ基のように、
安定化された支持体の遊離のアイノ基と反応することが
できる富簡基を有する＃素の水浴液ｔ−ｒａ性化された
支持体とし・イ接触させて、−素を結合させる。酵素溶
液の−はたとえば適尚な緩衝液を用いて、使用する酵素
の安定域に維持しな次に結合しな、かった酵素は緩衝液
で洗浄して除去する。流動床置で触媒を使用する時く好
ましい。
安定化された支持体の遊離のアイノ基と反応することが
できる富簡基を有する＃素の水浴液ｔ−ｒａ性化された
支持体とし・イ接触させて、−素を結合させる。酵素溶
液の−はたとえば適尚な緩衝液を用いて、使用する酵素
の安定域に維持しな次に結合しな、かった酵素は緩衝液
で洗浄して除去する。流動床置で触媒を使用する時く好
ましい。
特別安定な触媒を得るために、・丁でに＃素の結合した
支持体を好ましくはゲルタールアルデヒドのような２富
能性試薬のたとえば２５重量暢までの濃度の水溶液でさ
らに処理してもよい、この追加処理は触媒を架橋させ、
またＷＩＩ素と支持体間の結合を強化する効果がある。
支持体を好ましくはゲルタールアルデヒドのような２富
能性試薬のたとえば２５重量暢までの濃度の水溶液でさ
らに処理してもよい、この追加処理は触媒を架橋させ、
またＷＩＩ素と支持体間の結合を強化する効果がある。
この方法の２番目の実施態様は、たとえば酸化剤により
影響を受けるチオール基を含有する＃母のラクターゼの
ように、ゲルタールアルデヒドの存在下で触媒活性を失
なう酵素の場合に行なう。
影響を受けるチオール基を含有する＃母のラクターゼの
ように、ゲルタールアルデヒドの存在下で触媒活性を失
なう酵素の場合に行なう。
前記のようにキト−サンで被覆し架橋された支持体は、
０．０１から１重量暢のゲルメールアルデヒドを含有す
る溶液中へ添加し、その遊離のアルデヒド基にグリシン
、アスパｙインあるいはリジンのようなアイノ基を含む
化合物を反応させるρ・。
０．０１から１重量暢のゲルメールアルデヒドを含有す
る溶液中へ添加し、その遊離のアルデヒド基にグリシン
、アスパｙインあるいはリジンのようなアイノ基を含む
化合物を反応させるρ・。
あるいはその遊離のアルデヒド基なたとえば水素化ホウ
素ナトリウムで還元させることにょすＪＩＩＪ１場する
。アルデヒド基な不活性化してから、あらかじめたとえ
ば反応溶液中の＃に度が２０から５０ｑ／−のガラクト
ノ−ｒ−ラクトンまたはグルコノ−ｒ−ラクトンのよう
な競合的阻害化合物で活性部位を保−しておいたたとえ
ば酵母ラクターゼのような＊＊Ｖ支持体に接触させる。
素ナトリウムで還元させることにょすＪＩＩＪ１場する
。アルデヒド基な不活性化してから、あらかじめたとえ
ば反応溶液中の＃に度が２０から５０ｑ／−のガラクト
ノ−ｒ−ラクトンまたはグルコノ−ｒ−ラクトンのよう
な競合的阻害化合物で活性部位を保−しておいたたとえ
ば酵母ラクターゼのような＊＊Ｖ支持体に接触させる。
この保−性の糖は酵素の支持体への吸着に影響を与えず
、過剰のラクトースにより分離させられる。この処理は
適幽な緩衝液中でふつうは低温（たとえば２から１０℃
の範囲）で６０分間から２４時間行なわれ、過剰の＃素
は緩衝液により洗浄そしてつぎに水洗により除去される
。
、過剰のラクトースにより分離させられる。この処理は
適幽な緩衝液中でふつうは低温（たとえば２から１０℃
の範囲）で６０分間から２４時間行なわれ、過剰の＃素
は緩衝液により洗浄そしてつぎに水洗により除去される
。
酵素の安定性を増大させるために、たとえばカルボシイ
イドあるいはウッドワード試薬、 ３−（２−工ｆｋ−
５−イｙ＋＋ｆ口）−ベンゼンスルフォネートのような
、＃素のカルボキシル基を活性化しキト−サンの遊離の
アゼノ基と反応させることのできるカップリング剤によ
り１ｗＩ素はキト−サンに化学的に結合していることが
好ましい０反応は１−Ｄ・ら４８時間にわたって２ρ１
ら２５℃の温度で−を４から６．５に維持して反応１１
１１［１−あたり１０から５０ＭＩＱカルポゾイゼドを
用いて行な−う。反応終了後直ちに過剰の試薬と１反応
によ）生成する尿素を、適尚な緩衝［Ｋよる洗いと次に
水洗によ〕除去する。もうひとつの方法としては。
イドあるいはウッドワード試薬、 ３−（２−工ｆｋ−
５−イｙ＋＋ｆ口）−ベンゼンスルフォネートのような
、＃素のカルボキシル基を活性化しキト−サンの遊離の
アゼノ基と反応させることのできるカップリング剤によ
り１ｗＩ素はキト−サンに化学的に結合していることが
好ましい０反応は１−Ｄ・ら４８時間にわたって２ρ１
ら２５℃の温度で−を４から６．５に維持して反応１１
１１［１−あたり１０から５０ＭＩＱカルポゾイゼドを
用いて行な−う。反応終了後直ちに過剰の試薬と１反応
によ）生成する尿素を、適尚な緩衝［Ｋよる洗いと次に
水洗によ〕除去する。もうひとつの方法としては。
段階的に反応させるかわりに支持体、阻瞥化合物。
＊Ｓそしてカルざシイイドを一回で同時に接触させても
よい・ 本発明の方法により得られる化合物は、対応する遊−の
酵素の活性に近い酵素活性を有している。
よい・ 本発明の方法により得られる化合物は、対応する遊−の
酵素の活性に近い酵素活性を有している。
これは従来の結合方法ではめったに保持できない性質で
ある。さらにこの化合物は数か月間安定で。
ある。さらにこの化合物は数か月間安定で。
対応する遊ｍ＊素よりも高い不活性止置ＩＩＬを有して
いる。
いる。
前記したように本発明の方法により得られる生産物は、
対応する遊離酵素のかわりに固定床（カラム）鑞あるい
は好ましくは流動床置で＃素反応に使用できる。キト−
ナノは天然有機物のため食品型巣において使用しても問
題は起きないはずである。
対応する遊離酵素のかわりに固定床（カラム）鑞あるい
は好ましくは流動床置で＃素反応に使用できる。キト−
ナノは天然有機物のため食品型巣において使用しても問
題は起きないはずである。
本発明による方法′ｔ′以下のガにおいてｉｉｌ！明す
る。
る。
ここで時に指示がなげれば菫やパーセントは重量で示し
である。
である。
例１
支持体へのキト−サンの結合
中トーサン８Ｐｔ−濃ＷＰ酸３００−と水４０〇−に溶
か丁。混合液ｔ−４０℃で１時゛間攪拌し１次に布のｒ
紙（１０６μｍ） ｔ−用いて溶解していない残渣を除
去する。キトーサシ浴敵をデシケータ中に入れ、シリカ
ゲル（粒子径ａｐ １００−１２５ ｐｍａ孔体積１．
２ｓｄ／Ｐｓ比表面積３２０ｍ”／Ｐ）１２０ｙを加え
静かに攪拌する（少し泡が出る）。泡が消えるまで、生
成し−た浮遊ｔを真空中に放置する。
か丁。混合液ｔ−４０℃で１時゛間攪拌し１次に布のｒ
紙（１０６μｍ） ｔ−用いて溶解していない残渣を除
去する。キトーサシ浴敵をデシケータ中に入れ、シリカ
ゲル（粒子径ａｐ １００−１２５ ｐｍａ孔体積１．
２ｓｄ／Ｐｓ比表面積３２０ｍ”／Ｐ）１２０ｙを加え
静かに攪拌する（少し泡が出る）。泡が消えるまで、生
成し−た浮遊ｔを真空中に放置する。
混合液を一晩放置してから、液体をデカントしキト−サ
ンでｌ１４１したシリカゲルを１過により回収する。シ
リカゾルを水で靜ρ・に洗ってρ・ら、支持体を真空下
で７０℃の炉で一晩乾燥させる。
ンでｌ１４１したシリカゲルを１過により回収する。シ
リカゾルを水で靜ρ・に洗ってρ・ら、支持体を真空下
で７０℃の炉で一晩乾燥させる。
安定化した固定化支持体の１１１ｍ
上記支持体（キト−サン被覆シリカ？ｋ）１２０ｔを、
２５ｓゲルタ一ルアルデヒド２ＱＯｓｇｔ’含有する水
−液１６００−のはいったデシケータ−中に加える。浮
遊液を静かに攪拌し次に真空中に置く。ガスを除去した
後浮遊筺ｔ２時間大気圧中に静置し、その間定期的に静
かに攪拌する。このようにして支持体は活性化されるが
、これは色が白から黄橙色にかわるという色の変化に現
われる・支持体は濾過によｎｍ収し次に注意深く水洗す
る。
２５ｓゲルタ一ルアルデヒド２ＱＯｓｇｔ’含有する水
−液１６００−のはいったデシケータ−中に加える。浮
遊液を静かに攪拌し次に真空中に置く。ガスを除去した
後浮遊筺ｔ２時間大気圧中に静置し、その間定期的に静
かに攪拌する。このようにして支持体は活性化されるが
、これは色が白から黄橙色にかわるという色の変化に現
われる・支持体は濾過によｎｍ収し次に注意深く水洗す
る。
転化＃素の安定化支持体への固定化
水１００−に１５ｑの転化ｒｌ＃素（Ｍａｘｌｎｖｅｒ
ｔ２００ｅＯ００＊ Ｇ１５ｔ−Ｂｒｏａａａｅ−社（
卑パｌ州）の製品）溶液を調製しＱ、１ＭＩＩ（ｊ浴液
で−を４に調整する。この＃ｌ［３０−に、前記した方
法で調製した湿った活性化支持体５ｆｉｔ−混合する・
浮遊液ｔｌ−２時間静かに攪拌してから、濾過により触
媒を回収する。活性酵素の量は蔗糖に対する加水分解能
を測定して求める。最初の溶液６０−は転化酵Ｘな−４
，５岬、結合後のＰｌｌＬは０．４８ｑおよび触媒は４
．０２１１１１を含む。固定化収率は８９囁であり。
ｔ２００ｅＯ００＊ Ｇ１５ｔ−Ｂｒｏａａａｅ−社（
卑パｌ州）の製品）溶液を調製しＱ、１ＭＩＩ（ｊ浴液
で−を４に調整する。この＃ｌ［３０−に、前記した方
法で調製した湿った活性化支持体５ｆｉｔ−混合する・
浮遊液ｔｌ−２時間静かに攪拌してから、濾過により触
媒を回収する。活性酵素の量は蔗糖に対する加水分解能
を測定して求める。最初の溶液６０−は転化酵Ｘな−４
，５岬、結合後のＰｌｌＬは０．４８ｑおよび触媒は４
．０２１１１１を含む。固定化収率は８９囁であり。
この操作中活性の損失は全く認められない。
１２
転化酵素の再処理
ｆｉｌの方法で調製し、活性転化酵素１６ηを含む湿っ
た触ａｌ１１５Ｐ’にゲルタールアルデヒドの１ｖＩ＃
ｌ′ｆＩＩＬで２時間静かに攪拌しながら処理し、濾過
によ〕触媒を回収する。洗浄後例１の方法で測定した触
媒活性は、活性転化酵素１４ｑに対応し。
た触ａｌ１１５Ｐ’にゲルタールアルデヒドの１ｖＩ＃
ｌ′ｆＩＩＬで２時間静かに攪拌しながら処理し、濾過
によ〕触媒を回収する。洗浄後例１の方法で測定した触
媒活性は、活性転化酵素１４ｑに対応し。
収率は８７慢である。
類ラクターゼの 体への固定化９１１の方法に
従い活性化した湿った支持体２８２を、直径２．５ ａ
ｍおよび高さ２０αのガラスカラムに添加する。カラム
は、ａ動可能なペリスタポンプとその内容物を磁気攪拌
子で攪拌する容器を備えた循環装置の一部な成丁。ポン
プの入９０は容器に接続してお９、出口はカラムの底に
位置している。カラムの上部にある出口は溶液を容器に
もど丁。この装置にはＰ＆（４の酸性水溶液１２〇−が
はいっている。支持体がカラム中で最大１５ａａの高さ
になるまでボンデを調節する。 ムｓｐ・ｒｇｉｕｕｎ
ｉｇ＠ｒのラクターゼ（フランスのＲａｐｉａａｓ＠社
・２００．０００単位／ｆ）０．６１！を、循ｍａｔを
運転中の容器の中へ溶解し、支持体を２時間ｆＩＬｗｊ
Ｊｆヒ状態に保つ０例１の方法により活＊ｔ−測定する
と。
従い活性化した湿った支持体２８２を、直径２．５ ａ
ｍおよび高さ２０αのガラスカラムに添加する。カラム
は、ａ動可能なペリスタポンプとその内容物を磁気攪拌
子で攪拌する容器を備えた循環装置の一部な成丁。ポン
プの入９０は容器に接続してお９、出口はカラムの底に
位置している。カラムの上部にある出口は溶液を容器に
もど丁。この装置にはＰ＆（４の酸性水溶液１２〇−が
はいっている。支持体がカラム中で最大１５ａａの高さ
になるまでボンデを調節する。 ムｓｐ・ｒｇｉｕｕｎ
ｉｇ＠ｒのラクターゼ（フランスのＲａｐｉａａｓ＠社
・２００．０００単位／ｆ）０．６１！を、循ｍａｔを
運転中の容器の中へ溶解し、支持体を２時間ｆＩＬｗｊ
Ｊｆヒ状態に保つ０例１の方法により活＊ｔ−測定する
と。
濾過および触媒の水洗後、活性の７２嘔は支持体上に存
在し２０９６はＦ液に存在する。
在し２０９６はＦ液に存在する。
１４
固定化菌類ラクターゼの再ｌ＆通
１ＰＩ１６に従い１ｉ１ｉｉ１１！Ｌだ湿ったラクター
ゼ触媒１０ＰＫ、５畳ゲルタールアルデヒドを含む水溶
液５０−を混合し−を４に合わせる。混合液を定期的に
攪拌し、２４間後ｆ過によ〕触媒を回収する。
ゼ触媒１０ＰＫ、５畳ゲルタールアルデヒドを含む水溶
液５０−を混合し−を４に合わせる。混合液を定期的に
攪拌し、２４間後ｆ過によ〕触媒を回収する。
再処理前の（ラクトースの加水分解による）触媒の活性
は湿った触媒１Ｆあたりラクターゼ（フランスのＲａｐ
ｉａａｓａ社、２００．０００単位／Ｐ）２１ηに相当
し、再処理後は湿った触媒１Ｐあた９１９ｑに相当して
いゐ、これは活性が９０１６保持されていることに相当
する。
は湿った触媒１Ｆあたりラクターゼ（フランスのＲａｐ
ｉａａｓａ社、２００．０００単位／Ｐ）２１ηに相当
し、再処理後は湿った触媒１Ｐあた９１９ｑに相当して
いゐ、これは活性が９０１６保持されていることに相当
する。
ａ５
ｒル１！ｉ１に２０−の酢酸ナトリウム緩衝液（０，５
ｍ５ｐＨ６，０）に浮遊させる。次に、前もって１司じ
緩衝液で１：１に希釈しにゲルタールアルデヒド（２５
悌水溶＠）を５−加える。この活性ｆヒ処理は冨温（２
５℃）で静かに攪拌しなうｔら６０分間続は飛。このよ
うに活性化した後蒸留水で数回洗イ残存するゲルタール
アルデヒドを除去する。牛の結晶トリプシン（メルク）
５０ｑｋ、塩ｆヒカルシウム（２０ｍＭ）１に含むホウ
酸ナトリウム緩衝液（０，１Ｍ；ｐＨ８，０）２０−に
溶解させる。矢にこのトリデシン溶液を先に調製したキ
トーサン被覆シリカｒルに加える。混合物全体を４℃で
一晩静かに攪拌（ロータリーシェーカー）する。次に遠
心分離あるいは濾過により＃素被覆支持体を浴液より分
離し、洗浄水の２’ｆ３ Ｑ ｎｍ （ＵＶ分元元１ｆ
＋わでの吸光度がゼロになるまで、ａ）塩ｆヒナトリウ
ム（０，１５Ｍ）を含むホウ酸ナトリウム緩衝液（０，
１１′Ｘ４８．０ ） 、 ｂ）ホウ酸ナトリウム緩衝
液（０，Ｉ Ｍ ｆｐＨ８，ｏ ）およびＣ）蒸留水の
臘で数回洗う、（トリス−ヒトＷｅジメチルーアイツメ
タフ）−Ｈ（ｊ緩衝液（５０ｔｎＭ ｓ ｐＨ８，０ン
中１−濃度の塩酸Ｎ−α−ベンゾイル−Ｌ−アルイニン
ーニトロアニリド（Ｌ−ＢＡｌｆム）を基質として２５
℃で可溶性トリプシンの酵素活性ｔ＠ｌ定する・酵素加
水分解により放出されるｐ−ニトロアニリンを４０５
ｎｍでＶＶ分光光度針で定量する。１単位のトリプシン
活性（１１Ｕ）は、ふつうの動作で１分間につき１マイ
クロモルのｐ−ニトロアニリνを放出させる酵素の量に
相当する。固定化トリプシンの活性は、 （”ｌｌ＠ｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ ｌｎｓｙｍｏｌｏｇｙＪ Ａｉ。
ｍ５ｐＨ６，０）に浮遊させる。次に、前もって１司じ
緩衝液で１：１に希釈しにゲルタールアルデヒド（２５
悌水溶＠）を５−加える。この活性ｆヒ処理は冨温（２
５℃）で静かに攪拌しなうｔら６０分間続は飛。このよ
うに活性化した後蒸留水で数回洗イ残存するゲルタール
アルデヒドを除去する。牛の結晶トリプシン（メルク）
５０ｑｋ、塩ｆヒカルシウム（２０ｍＭ）１に含むホウ
酸ナトリウム緩衝液（０，１Ｍ；ｐＨ８，０）２０−に
溶解させる。矢にこのトリデシン溶液を先に調製したキ
トーサン被覆シリカｒルに加える。混合物全体を４℃で
一晩静かに攪拌（ロータリーシェーカー）する。次に遠
心分離あるいは濾過により＃素被覆支持体を浴液より分
離し、洗浄水の２’ｆ３ Ｑ ｎｍ （ＵＶ分元元１ｆ
＋わでの吸光度がゼロになるまで、ａ）塩ｆヒナトリウ
ム（０，１５Ｍ）を含むホウ酸ナトリウム緩衝液（０，
１１′Ｘ４８．０ ） 、 ｂ）ホウ酸ナトリウム緩衝
液（０，Ｉ Ｍ ｆｐＨ８，ｏ ）およびＣ）蒸留水の
臘で数回洗う、（トリス−ヒトＷｅジメチルーアイツメ
タフ）−Ｈ（ｊ緩衝液（５０ｔｎＭ ｓ ｐＨ８，０ン
中１−濃度の塩酸Ｎ−α−ベンゾイル−Ｌ−アルイニン
ーニトロアニリド（Ｌ−ＢＡｌｆム）を基質として２５
℃で可溶性トリプシンの酵素活性ｔ＠ｌ定する・酵素加
水分解により放出されるｐ−ニトロアニリンを４０５
ｎｍでＶＶ分光光度針で定量する。１単位のトリプシン
活性（１１Ｕ）は、ふつうの動作で１分間につき１マイ
クロモルのｐ−ニトロアニリνを放出させる酵素の量に
相当する。固定化トリプシンの活性は、 （”ｌｌ＠ｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ ｌｎｓｙｍｏｌｏｇｙＪ Ａｉ。
３４４−３４５（１９７６）に記載のものと類似の断続
的測定装置を用い、攪拌床中で前記と同様の方法で定量
する。支持体く結合した酵素の量は。
的測定装置を用い、攪拌床中で前記と同様の方法で定量
する。支持体く結合した酵素の量は。
ＦＯｌｌｎ−Ｉ＋ＯＷ！’７法（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、Ｏｈ
ａｍ、、 １ｉｉ６２６５８１９５１）で求めたたん日
量を基準にして、はじめに加えた酵素量と結合せずに残
っている酵素量の羅を計算することにＬり間接的に求め
られる。
ａｍ、、 １ｉｉ６２６５８１９５１）で求めたたん日
量を基準にして、はじめに加えた酵素量と結合せずに残
っている酵素量の羅を計算することにＬり間接的に求め
られる。
調製された１質は支持体１ｔあたり６５．２岬のトリプ
シンを含有し、支持体１ｙあた６７２！ｉｔ一単位（Ｉ
ｌｌｒ）の＃嵩活性な有する。結合収率は６３，７嘩に
なる。固定化トリゾシνの比活性は固定＃累１キあたＤ
２．０４工Ｕとなり、−万可溶性酵素の比活性は２．
２６ ＸＵ／キとなる。
シンを含有し、支持体１ｙあた６７２！ｉｔ一単位（Ｉ
ｌｌｒ）の＃嵩活性な有する。結合収率は６３，７嘩に
なる。固定化トリゾシνの比活性は固定＃累１キあたＤ
２．０４工Ｕとなり、−万可溶性酵素の比活性は２．
２６ ＸＵ／キとなる。
ｌ１６
例１の方法に従いキト−サンで＊［した支持体４０Ｆを
リン酸カリウム緩衝液（’ ５０ ｔＭ Ｘ ６．５
）１５０ｍｇＫ分散させる。１．５−のグルタールアル
デにド（２５僑水ｉ１ ＲＩ Ｆｌｕｋａ社、化学用）
ヲ加え、混合液な電電で６０分静かに回転攪拌して反応
させる。次に１通（５０μｍメツシュの金属性の網）あ
るいは遠心分離＃Ｃより支持体を溶液から分離し１次Ｋ
Ｍ留水で何度も洗う。支持体を再び上記の緩１１［１５
０−に浮遊させる。同体の水素化ホウ素ナトリウム５０
０ｑ′４を何回ρ１にわけて加見る０次にこのＳ液を同
様の動作で３０分間反応させる。支持体をｒ過によ〕回
収し、蒸留水で洗い、遠心分離をし、そして次に例７と
例８（下記）に記載したように酵素の固定化に用いる。
リン酸カリウム緩衝液（’ ５０ ｔＭ Ｘ ６．５
）１５０ｍｇＫ分散させる。１．５−のグルタールアル
デにド（２５僑水ｉ１ ＲＩ Ｆｌｕｋａ社、化学用）
ヲ加え、混合液な電電で６０分静かに回転攪拌して反応
させる。次に１通（５０μｍメツシュの金属性の網）あ
るいは遠心分離＃Ｃより支持体を溶液から分離し１次Ｋ
Ｍ留水で何度も洗う。支持体を再び上記の緩１１［１５
０−に浮遊させる。同体の水素化ホウ素ナトリウム５０
０ｑ′４を何回ρ１にわけて加見る０次にこのＳ液を同
様の動作で３０分間反応させる。支持体をｒ過によ〕回
収し、蒸留水で洗い、遠心分離をし、そして次に例７と
例８（下記）に記載したように酵素の固定化に用いる。
Ｌ
中性酵母ラクターゼの吸着による固定化９１６の方法に
従い安定化させた支持体４０ ｆ／ ｔ−。
従い安定化させた支持体４０ ｆ／ ｔ−。
０．１−の塩化！ンガンと０．０２ ％アジ化ナトリウ
ム′を含むりシ酸カリウム緩衝液（５０ｄ ｔ ｐＨ６
，５）１５０ｍｇＫ分散させる。Ｄ−ガラクトノ−ｒ−
ラクトν（］Ｃｏａｈ−Ｌｉｇｈｔ ｘＡａｂ、社）を
最＊員度が０．１舅になるように加える。公費であれば
溶液の−を６．５に調整するａＲに酵母ラノＩ−ゼ（Ｍ
ａｘｉｌａｏｔＬＸ ５ Ｑ Ｑ Ｑ 、 Ｇ１５ｔ−
Ｂｒｏｏａａｅ−社（ネパｌ州）の製品）溶液を６−加
え、その後酵素と支持体を含む溶液を１６時間攪拌する
。濾過により支持体上Ｗ！Ｉ液より分離し１次にリン酸
カリウム緩衝液（５０ａＭｉｐＨ６，５）と０．１ ｔ
Ｍ塩塩化フシガン５０〇１塩化カリウム５０ｔＩＬＭ余
分に含む同じ緩衝液５０口―、そして蒸留水（３Ｘ５０
０ｍｇ）で願書に洗う、ラクターゼ活性を有する支持体
をはじめに述べた緩衝液（リン酸−マンがンーアジド）
に保存する・ ５ＷＬＭのＯ−二トロフエエルーβ−ガラクトピラノシ
ド（０ＮＰＧ ） ｆｆｊ＊を基質として用い３０℃で
ＵＶ吸光元度針で、町Ｓ性および固定化酵素の活性を一
定する。酵素により放出されるＯ−ニトロフェノールを
４１−δｎｍ （Ｆｌ ６．５でａｍ ＯＮ’Ｘ” ：
１０９７「ｌ儂−１）で定量する。上記の基質を用い
ガ５に記載した方法で、固定化酵素の活性を測定する。
ム′を含むりシ酸カリウム緩衝液（５０ｄ ｔ ｐＨ６
，５）１５０ｍｇＫ分散させる。Ｄ−ガラクトノ−ｒ−
ラクトν（］Ｃｏａｈ−Ｌｉｇｈｔ ｘＡａｂ、社）を
最＊員度が０．１舅になるように加える。公費であれば
溶液の−を６．５に調整するａＲに酵母ラノＩ−ゼ（Ｍ
ａｘｉｌａｏｔＬＸ ５ Ｑ Ｑ Ｑ 、 Ｇ１５ｔ−
Ｂｒｏｏａａｅ−社（ネパｌ州）の製品）溶液を６−加
え、その後酵素と支持体を含む溶液を１６時間攪拌する
。濾過により支持体上Ｗ！Ｉ液より分離し１次にリン酸
カリウム緩衝液（５０ａＭｉｐＨ６，５）と０．１ ｔ
Ｍ塩塩化フシガン５０〇１塩化カリウム５０ｔＩＬＭ余
分に含む同じ緩衝液５０口―、そして蒸留水（３Ｘ５０
０ｍｇ）で願書に洗う、ラクターゼ活性を有する支持体
をはじめに述べた緩衝液（リン酸−マンがンーアジド）
に保存する・ ５ＷＬＭのＯ−二トロフエエルーβ−ガラクトピラノシ
ド（０ＮＰＧ ） ｆｆｊ＊を基質として用い３０℃で
ＵＶ吸光元度針で、町Ｓ性および固定化酵素の活性を一
定する。酵素により放出されるＯ−ニトロフェノールを
４１−δｎｍ （Ｆｌ ６．５でａｍ ＯＮ’Ｘ” ：
１０９７「ｌ儂−１）で定量する。上記の基質を用い
ガ５に記載した方法で、固定化酵素の活性を測定する。
ラクターゼ活性の１国際単位（工Ｕ）は、ここに示した
東件下で１分間当カ１マイクロモルの０−ニトロフェノ
ールの放出に相当する。固定化されたラクターゼは乾燥
支持体１Ｆあたり４２３工Ｕの活性を有する。
東件下で１分間当カ１マイクロモルの０−ニトロフェノ
ールの放出に相当する。固定化されたラクターゼは乾燥
支持体１Ｆあたり４２３工Ｕの活性を有する。
例８
例７の方法に１ｔｔい吸着させた酵素は、さらにカルボ
シイイドで処理すればもつと強固に支持体に結合させる
ことができる。ラクターゼとその支持体をｆ１７に記載
した条件で３０分間接触させた畿。
シイイドで処理すればもつと強固に支持体に結合させる
ことができる。ラクターゼとその支持体をｆ１７に記載
した条件で３０分間接触させた畿。
−を６．５に維持して最初の２時間は電電で久の１６時
間は４℃で、カルＭシイくド（メトーｐ−メルイジシス
ルホシ酸の１−ｙ／ａヘキシル−５−（２−モルホリノ
エチルンーカルポジイイド］（シグマケイカル社） ２
．５ ｆ／を攪拌＜−一タリーシェーカー）しながら少
量ずつ加える・次に例７と同じ方法で洗浄する。Ｈ５と
同じ方法で一定した支持体のラクターゼ活性は乾燥支持
体１ｔあたり２８５ ｘｕとなる。
間は４℃で、カルＭシイくド（メトーｐ−メルイジシス
ルホシ酸の１−ｙ／ａヘキシル−５−（２−モルホリノ
エチルンーカルポジイイド］（シグマケイカル社） ２
．５ ｆ／を攪拌＜−一タリーシェーカー）しながら少
量ずつ加える・次に例７と同じ方法で洗浄する。Ｈ５と
同じ方法で一定した支持体のラクターゼ活性は乾燥支持
体１ｔあたり２８５ ｘｕとなる。
例９
−ｍｏｍ＊＋房
除たん白したホエイを５０℃で１例４の方法で再処理し
た触媒を充填した例６のカラムに通してボンで上方へ上
げる。最初の、１２時間で触媒ｍ性の１８嚢の低下が見
られる。この初期の活性低下ののち、１週間後の測定で
上記の処理条件下では触媒活性は安定であることがわか
った。
た触媒を充填した例６のカラムに通してボンで上方へ上
げる。最初の、１２時間で触媒ｍ性の１８嚢の低下が見
られる。この初期の活性低下ののち、１週間後の測定で
上記の処理条件下では触媒活性は安定であることがわか
った。
例１０
例８の生物触媒浮遊液９ｏ−を直径２．５−のカラムに
供給する。＃木床の高さは１８．３ｃｌＬである。
供給する。＃木床の高さは１８．３ｃｌＬである。
滅菌（超高温）した脱脂乳を１時間１８０−の這藏でポ
ジ！でカラムのところまで上げる。この条件下でＷ／Ｉ
ＩＡ床は流動下され２５．５ｃｍの高さに達する。装置
の温度は６．２℃に保つ。ラクトースの加水分解度は９
２優に達する。２７５時間の連続運転（２，３日おきに
適当な洗剤で数時間洗浄することを除く）の後、触媒の
残存活性は初期の活性の８５１である。
ジ！でカラムのところまで上げる。この条件下でＷ／Ｉ
ＩＡ床は流動下され２５．５ｃｍの高さに達する。装置
の温度は６．２℃に保つ。ラクトースの加水分解度は９
２優に達する。２７５時間の連続運転（２，３日おきに
適当な洗剤で数時間洗浄することを除く）の後、触媒の
残存活性は初期の活性の８５１である。
代理人 浅 村 皓
外４名
Claims (9)
- （１） 硬くて密な無機質の粒子をΦトー！ンの層で
被覆し、被−した粒子を２富乾性試粂で安定化させ、こ
のように処理した支持体に＃素を結合させることを特徴
とする。水性媒体に不溶で＊ＩＩＣＲ動床式あるいは固
足床式反応槽の使用に適した連索活性を有する生物触媒
の製造方法。 - （２）２官能性試薬はゲルメールアルデヒドである。 特許請求の範８纂１項に記載の方法。
- （３） 無機質はシリカゲル、金属酸化物あるいはセ
ラゼツクスの多孔性粒子であ、４．ｗ軒請求の範囲１１
１項あるいは第２項に記載の方法。 - （４） 酵ｌはグルタールアルデにドによｎｇｅｓｔ
−受けず、キト−サンで被覆した支持体はゲルメールア
ルデヒド処理により活性化され、遊離のアルデヒド基と
ｗＩ累の持つ遊離アイノ基との閾の化学結合によＩｉＩ
素が支持体に結合している。特許請求の範囲畠１項より
第６項までのいずれカゝ１項に紀載の方法。 - （５） 酵素を結合させた後、支持体をグルタールア
ルデにドで再処理して安定性を増大させる。４軒請求の
範囲ｌ１４項に記載の方法。 - （６） 酵素がゲルタールアルデヒドに対して一影響
を受け、ゲルタールアルデヒドで安定化させた触媒を還
元剤で処理し、酵素を支持体に吸着させる。 特許請求の範囲！１項よシ第３項までのいずれか１項に
記載の方法。 - （７） ｍ１元剤は水素化ホウ素ナトリウムである、
特許請求の範囲ＩＩ／Ｌ６項に記載の方法。 - （８） 吸着した酵素はカルボシイばドあるいはウッ
ドワード試薬などのカップリング剤にょシ支持体に化学
的に結合している。ｔ＃許請求の範囲ｇｓ項に記載の方
法。 - （９）酵素の活性部位が競合阻害剤の添加により保−さ
れている、特許請求の範囲第８項に紀載り方法・ （１１１１合阻害剤がグリコノーｒ−ラクトンあるいは
ガラクトノ−１ｒ−ラクトνである、特許請求の範囲［
８９項に記載の方法。 １υ 水性媒体に不溶の酵素−活性を有する生物触媒で
、キト−サシの層で被覆され、２實能性試薬で安定化さ
れその上＃Ｃ＠素の結合している。硬くて密な無機質の
粒子より成る流動床式あるいは固定床式反応槽の使用に
特に適した。ＷＩＩＩ凧活性を有する生物触媒。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH7375/81A CH653363A5 (fr) | 1981-11-17 | 1981-11-17 | Procede de preparation de biocatalyseurs doues d'activite enzymatique et produits obtenus. |
| CH7375/81-2 | 1981-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5889185A true JPS5889185A (ja) | 1983-05-27 |
| JPS6216637B2 JPS6216637B2 (ja) | 1987-04-14 |
Family
ID=4324137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57199862A Granted JPS5889185A (ja) | 1981-11-17 | 1982-11-16 | 酵素活性を有する生物触媒の製造方法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4918016A (ja) |
| EP (1) | EP0079595B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5889185A (ja) |
| AU (1) | AU551149B2 (ja) |
| CH (1) | CH653363A5 (ja) |
| DE (1) | DE3263162D1 (ja) |
| ES (1) | ES517408A0 (ja) |
| IE (1) | IE53983B1 (ja) |
| NZ (1) | NZ202314A (ja) |
| ZA (1) | ZA827728B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0319687A (ja) * | 1989-06-16 | 1991-01-28 | Kyoritsu Yuki Co Ltd | 固定化酵素の製造法 |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK8700430A (ja) * | 1985-04-02 | 1988-07-28 | ||
| GB8526096D0 (en) * | 1985-10-22 | 1985-11-27 | Robinson E | Microcarrier |
| DK427987A (da) * | 1987-08-17 | 1989-02-18 | Vnii Biotekhnologii | Fremgangsmaade til immobilisering af fungal beta-galactosidase |
| EP0371408B1 (de) * | 1988-11-28 | 1994-06-22 | Ciba-Geigy Ag | Biokatalysatoren und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| US6093558A (en) * | 1991-07-25 | 2000-07-25 | Edge Biosystems, Inc. | Binding protein of biologically active compositions to an adhesive formulation on a substrate |
| AU6029998A (en) * | 1997-01-17 | 1998-08-07 | Regents Of The University Of Minnesota | Dna molecules and protein displaying improved triazine compound degrading ability |
| US6013491A (en) * | 1997-08-06 | 2000-01-11 | Martinez; Leticia | Fibrous cellulose support containing adhered yeast for converting sucrose to glucose and fructose |
| JPH11164699A (ja) | 1997-12-05 | 1999-06-22 | Kdk Corp | トリプシンの安定化方法およびトリプシンの酵素活性向上方法並びにトリプシン酵素活性測定用キット |
| US6673582B2 (en) | 2000-01-25 | 2004-01-06 | Regents Of The University Of Minnesota | Microbes and methods for remediation |
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